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Biologa Celular y Molecular2011

Departamento de Bioqumica Departamento de Bioqumica


Protenas: plegamiento y Protenas: plegamiento y
degradacin
Plegamiento y modificacin de las
t protenas
U li tid i t t i t ti d d b l Un polipptido recientemente sintetizado debe plegarse y
a menudo se modifica qumicamente (modificaciones
post-traduccionales) para generar la protena final p ) p g p
Todas las molculas correspondientes a una especie
t i d t i f i ( t d ti ) proteica adoptan una nica conformacin (estado nativo),
el cual corresponde a la forma plegada ms estable
La mayora de las protenas se pliega y adopta su
conformacin nativa en condiciones fisiolgicas.
La informacin para el plegamiento proteico
est codificado en la secuencia
Principles that govern the folding of protein chain
Anfinsen, C. (1973) Science 181, 223-230.
Cintica del plegamiento
El pasaje de la forma desplegada a la forma nativa tiene diferentes
etapas:
1- Nucleacin Nucleacin: formacin inicial de algunos segmentos de -hlice y
hojas Formacin de dominios
2- Consolidacin Consolidacin estructural estructural: plegado terciario
3- Reordenamientos finales
La paradoja de Levinthal
Levinthal Cyrus (1968) Are there pathways for protein folding? Journal de Chimie Levinthal,Cyrus(1968).Aretherepathwaysforproteinfolding?.JournaldeChimie
PhysiqueetdePhysicoChimie Biologique 65: pp. 4445
Debidoalgrannmerodegradosdelibertadenunacadenapolipeptdica
desplegada la molcula tiene un nmero astronmico de posibles desplegada,lamolculatieneunnmeroastronmicodeposibles
conformaciones
La estimacin es de 3
100
= 5 10
47
conformacions La estimacin es de 3
100
= 5 10
47
conformacions.
Los movimientos ms rpidos son de 10
- 15
s por lo que
probar todas las conformaciones posibles llevara
5 10
32
s
60 60 24 365 = 31536000 segundos en un ao
Ensayar todas las conformaciones llevara 16 10
25
Ensayar todas las conformaciones llevara 1.6 10
aos, cifra mucho mayor que la edad del universo
La resolucin de la paradoja pasa por la aceptacin de Laresolucindelaparadojapasaporlaaceptacinde
laexistenciadeestadosdeplegamientointermedios
Existe una cintica del plegamiento
Entre la Entre la formacin formacin de de estructuras estructuras 2ria y 3ria 2ria y 3ria existen existen estados estados
intermedios intermedios, , cuya cuya ltima ltima etapa etapa es es la de la de GLOBULO FUNDIDO GLOBULO FUNDIDO
Estructura de un glbulo fundido del citochromo b562 (A) , y su forma final (B).
Termodinmica del plegamiento
G (-) 0 (+)
--TTSS
HH
Entropa conformacional Entropa conformacional
--TTSS
Interacciones internas Interacciones internas
--TTSS
Efecto hidrofbico Efecto hidrofbico
GG
NETO NETO::
Plegamiento Plegamiento
El plegamiento proteico usualmente se
realiza en etapas definidas
El plegamiento proteico usualmente se
realiza en etapas definidas
Protein Protein
Folding
Exploring the
Folding
Landscape
Protenas accesorias para el plegamiento p p g
1. 1. Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) Proten Disulfuro Isomerasas (PDI)
2. 2. Peptidil Prolil cis Peptidil Prolil cis- -trans isomerasas trans isomerasas
(PPI) (PPI) (PPI) (PPI)
33 Chaperonas Chaperonas 3. 3. Chaperonas Chaperonas
Protenas accesorias para el plegamiento Protenas accesorias para el plegamiento
1. 1. Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) Proten Disulfuro Isomerasas (PDI)
Enzima eucaritica
homodimrica que
t li i t bi d cataliza intercambios de
enlaces disulfuro en
protenas.
Protenas accesorias para el plegamiento
Las peptidil prolil cis-trans isomerasas facilitan la formacin de
2. 2. Peptidil Prolil cis Peptidil Prolil cis- -trans isomerasas (PPI) trans isomerasas (PPI)
p p p
enlaces peptdicos cis precediendo una prolina
Se las conoce tambin como rotamasas
La interconversin cis-trans acelera el plegamiento de las protenas.
Las inmunofilinas pertenecen a esta familia, y en particular la
ciclofilina, que al ser inhibida por ciclosporina A, produce un efecto
inmunosupresor
Protenas accesorias para el plegamiento
3. 3. Chaperonas Chaperonas
Previenen o revierten asociaciones impropias principalmente
sobre protenas multi dominio o con estructura cuaternaria
Reconocen regiones hidrofbicas expuestas a la superficie, las
unen y permiten su plegamiento correcto
Tienen actividad ATPasa, ya que este proceso consume energa.
Protenas accesorias para el plegamiento
3. 3. Chaperonas Chaperonas: Clasificacin : Clasificacin
HSP70: Previenen la desnaturalizacin por temperatura. Se unen a
algunas protenas nacientes
Chaperoninas: son grandes molculas multimricas muy
extendidas en la escala evolutiva. Forman 2 grandes grupos:
1- HSP60: Gro-EL tiene 14 subunidades que forman 2 anillos.
2- HSP10: GroES tiene 7 subunidades que forman un anillo
Nucleoplasmina: ensamblaje de nucleosomas
Chaperonas: Familia Hsp70 Chaperonas: Familia Hsp70
Reconocen pequeos sectores con aminocidos hidrofbicos
en la superficie de una protena.
Son ayudadas por hsp40. So ayudadas po sp 0
Se hidroliza una molcula de ATP.
Chaperoninas: Familia Hsp60 Chaperoninas: Familia Hsp60
Estructura y funcin: catlisis del re-plegamiento Estructura y funcin: catlisis del re plegamiento
L l l d d i i hid fbi L l l d d i i hid fbi La protena mal plegada es capturada por interacciones hidrofbicas La protena mal plegada es capturada por interacciones hidrofbicas
por el barril de la Hsp60. por el barril de la Hsp60.
Aproximadamente 15 segundos despus la hidrlisis del ATP libera la Aproximadamente 15 segundos despus la hidrlisis del ATP libera la p g p p g p
protena correctamente plegada. protena correctamente plegada.
Si la protena no acab de plegarse, el ciclo se repite. Si la protena no acab de plegarse, el ciclo se repite.
Estructura de GroEL unida a su tapa GroES Estructura de GroEL unida a su tapa GroES
Degradacin de protenas en el Citosol
Elimina protenas incompletamente p p
ensambladas
Elimina protenas mal plegadas o
daadas daadas
Reduce la concentracin celular de
protenas sintetizadas en respuesta a
una seal (off switch)
Proteasoma Proteasoma
Estructura del Proteasoma
Enfermedades
Conformacionales
Anemia Falciforme
Obstruccin de capilares. Dolor
Anemia por ruptura de glbulos rojos
Aumento de las infecciones
EfectodeMutacionesenlasecuencia
primariadelahemoglobina
1:500 African American
Anemia
Deoxyhemoglobin SPolymerStructure
A)DeoxyhemoglobinS
14strandedpolymer
( l i h)
C)Hydrophobicpocket
for6 Val
B)Pairedstrandsof
deoxyhemoglobinS
( l ) (electronmicrograph) (crystalstructure)
D)Chargeandsizeprevent
6 Glu from binding. 6 Glufrombinding.
Dykes, Nature 1978; J MB 1979
Crepeau, PNAS 1981 Wishner, J MB 1975
Enfermedades neurodegenerativas:
sustancia amiloide sustancia amiloide
Enfermedad deAlzheimer:depsito betaamiloide (pptido
de40kDa)
N t il idti f ili d it d Neuropata amiloidticas familiares:depsitos de
transtirretina,protena involucrada entransporte deretinol
Otras enfermedades amiloidticas,que presentan
depsitos deinmunoglobulinas,queratina,beta2
i l b li t microglobulina,etc.
Placa amiloide en enfermedad de Alzheimer
Encefalopatas espongiformes: los priones Encefalopatas espongiformes: los priones
Todas Todas son son enfermedades enfermedades ne rodegenerati as ne rodegenerati as poco poco Todas Todas son sonenfermedades enfermedades neurodegenerativas neurodegenerativas poco poco
frecuentes frecuentes ((demencia demencia yataxia). yataxia).
Usualmente Usualmente caracterizadas caracterizadas por por una una degeneracin degeneracin
espongiforme espongiforme del delcerebro cerebro acompaadas acompaadas por por la laaparicin aparicin de de
astrocitos astrocitos activados activados y la y la acumulacin acumulacin de de agregados agregados de de PrP PrP astrocitos astrocitos activados activados yla ylaacumulacin acumulacin de deagregados agregados de dePrP PrP
proteasa proteasa resistentes resistentes. .
Las Las enfermedades enfermedades por por priones priones son son transmisibles transmisibles por por Las Lasenfermedades enfermedades por por priones priones son sontransmisibles transmisibles por por
inoculacin inoculacin o oingestin ingestin de detejidos tejidos infectados infectados. .
Enfermedad Enfermedad Mecanismo patognico Mecanismo patognico
Humana:
Kuru Infeccin por canibalismo ritual en
Nueva Guinea
Enfermedad de Creutzfeldt-J akob Infeccin por hormona de crecimiento
(CJ D) iatrognica humana contaminada con priones,
etc.
CJ D familiar Mutaciones germinales en el gen PrP
Enfermedad de Gerstmann-Strussler-
Scheinker e
Mutaciones germinales en el gen PrP
Insomnio familiar fatal Mutaciones germinales en el gen PrP
CJ D espordica Mutaciones somticas o conversin
espontnea de PrPC en PrPSc?
CJ D variante Infeccin con priones de BSE?
Animal:
Scrapie (oveja) Infeccin en ovejas genticamente
susceptibles p
Encefalopata bovina espongiforme
(BSE) (vacas locas)
Infeccin a partir de raciones de carne
y hueso contamidas con priones
Los priones
Derivan de la protena normal PrP que se expresa en sistema nervioso e
inmune. Probable funcin antioxidante.
El nombre prin deriva de Proteinaceous Infectious only p y
La forma infecciosa de la protena prinica (PrPsc) es insoluble y tiene
caractersticas de un amiloide.
El mecanismo de accin es por entrada a la clula, actuando sobre la PrP
normal, induciendo su precipitacin y la muerte celular
El rasgo distintivo de las enfermedades prinicas es que pueden ser
trasmitidas, heredadas o espordicas
La enfermedad de las vacas locas
Encefalitis espongiforme bovina

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