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Protenas: plegamiento y Protenas: plegamiento y degradacin Plegamiento y modificacin de las t protenas U li tid i t t i t ti d d b l Un polipptido recientemente sintetizado debe plegarse y a menudo se modifica qumicamente (modificaciones post-traduccionales) para generar la protena final p ) p g p Todas las molculas correspondientes a una especie t i d t i f i ( t d ti ) proteica adoptan una nica conformacin (estado nativo), el cual corresponde a la forma plegada ms estable La mayora de las protenas se pliega y adopta su conformacin nativa en condiciones fisiolgicas. La informacin para el plegamiento proteico est codificado en la secuencia Principles that govern the folding of protein chain Anfinsen, C. (1973) Science 181, 223-230. Cintica del plegamiento El pasaje de la forma desplegada a la forma nativa tiene diferentes etapas: 1- Nucleacin Nucleacin: formacin inicial de algunos segmentos de -hlice y hojas Formacin de dominios 2- Consolidacin Consolidacin estructural estructural: plegado terciario 3- Reordenamientos finales La paradoja de Levinthal Levinthal Cyrus (1968) Are there pathways for protein folding? Journal de Chimie Levinthal,Cyrus(1968).Aretherepathwaysforproteinfolding?.JournaldeChimie PhysiqueetdePhysicoChimie Biologique 65: pp. 4445 Debidoalgrannmerodegradosdelibertadenunacadenapolipeptdica desplegada la molcula tiene un nmero astronmico de posibles desplegada,lamolculatieneunnmeroastronmicodeposibles conformaciones La estimacin es de 3 100 = 5 10 47 conformacions La estimacin es de 3 100 = 5 10 47 conformacions. Los movimientos ms rpidos son de 10 - 15 s por lo que probar todas las conformaciones posibles llevara 5 10 32 s 60 60 24 365 = 31536000 segundos en un ao Ensayar todas las conformaciones llevara 16 10 25 Ensayar todas las conformaciones llevara 1.6 10 aos, cifra mucho mayor que la edad del universo La resolucin de la paradoja pasa por la aceptacin de Laresolucindelaparadojapasaporlaaceptacinde laexistenciadeestadosdeplegamientointermedios Existe una cintica del plegamiento Entre la Entre la formacin formacin de de estructuras estructuras 2ria y 3ria 2ria y 3ria existen existen estados estados intermedios intermedios, , cuya cuya ltima ltima etapa etapa es es la de la de GLOBULO FUNDIDO GLOBULO FUNDIDO Estructura de un glbulo fundido del citochromo b562 (A) , y su forma final (B). Termodinmica del plegamiento G (-) 0 (+) --TTSS HH Entropa conformacional Entropa conformacional --TTSS Interacciones internas Interacciones internas --TTSS Efecto hidrofbico Efecto hidrofbico GG NETO NETO:: Plegamiento Plegamiento El plegamiento proteico usualmente se realiza en etapas definidas El plegamiento proteico usualmente se realiza en etapas definidas Protein Protein Folding Exploring the Folding Landscape Protenas accesorias para el plegamiento p p g 1. 1. Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) 2. 2. Peptidil Prolil cis Peptidil Prolil cis- -trans isomerasas trans isomerasas (PPI) (PPI) (PPI) (PPI) 33 Chaperonas Chaperonas 3. 3. Chaperonas Chaperonas Protenas accesorias para el plegamiento Protenas accesorias para el plegamiento 1. 1. Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) Proten Disulfuro Isomerasas (PDI) Enzima eucaritica homodimrica que t li i t bi d cataliza intercambios de enlaces disulfuro en protenas. Protenas accesorias para el plegamiento Las peptidil prolil cis-trans isomerasas facilitan la formacin de 2. 2. Peptidil Prolil cis Peptidil Prolil cis- -trans isomerasas (PPI) trans isomerasas (PPI) p p p enlaces peptdicos cis precediendo una prolina Se las conoce tambin como rotamasas La interconversin cis-trans acelera el plegamiento de las protenas. Las inmunofilinas pertenecen a esta familia, y en particular la ciclofilina, que al ser inhibida por ciclosporina A, produce un efecto inmunosupresor Protenas accesorias para el plegamiento 3. 3. Chaperonas Chaperonas Previenen o revierten asociaciones impropias principalmente sobre protenas multi dominio o con estructura cuaternaria Reconocen regiones hidrofbicas expuestas a la superficie, las unen y permiten su plegamiento correcto Tienen actividad ATPasa, ya que este proceso consume energa. Protenas accesorias para el plegamiento 3. 3. Chaperonas Chaperonas: Clasificacin : Clasificacin HSP70: Previenen la desnaturalizacin por temperatura. Se unen a algunas protenas nacientes Chaperoninas: son grandes molculas multimricas muy extendidas en la escala evolutiva. Forman 2 grandes grupos: 1- HSP60: Gro-EL tiene 14 subunidades que forman 2 anillos. 2- HSP10: GroES tiene 7 subunidades que forman un anillo Nucleoplasmina: ensamblaje de nucleosomas Chaperonas: Familia Hsp70 Chaperonas: Familia Hsp70 Reconocen pequeos sectores con aminocidos hidrofbicos en la superficie de una protena. Son ayudadas por hsp40. So ayudadas po sp 0 Se hidroliza una molcula de ATP. Chaperoninas: Familia Hsp60 Chaperoninas: Familia Hsp60 Estructura y funcin: catlisis del re-plegamiento Estructura y funcin: catlisis del re plegamiento L l l d d i i hid fbi L l l d d i i hid fbi La protena mal plegada es capturada por interacciones hidrofbicas La protena mal plegada es capturada por interacciones hidrofbicas por el barril de la Hsp60. por el barril de la Hsp60. Aproximadamente 15 segundos despus la hidrlisis del ATP libera la Aproximadamente 15 segundos despus la hidrlisis del ATP libera la p g p p g p protena correctamente plegada. protena correctamente plegada. Si la protena no acab de plegarse, el ciclo se repite. Si la protena no acab de plegarse, el ciclo se repite. Estructura de GroEL unida a su tapa GroES Estructura de GroEL unida a su tapa GroES Degradacin de protenas en el Citosol Elimina protenas incompletamente p p ensambladas Elimina protenas mal plegadas o daadas daadas Reduce la concentracin celular de protenas sintetizadas en respuesta a una seal (off switch) Proteasoma Proteasoma Estructura del Proteasoma Enfermedades Conformacionales Anemia Falciforme Obstruccin de capilares. Dolor Anemia por ruptura de glbulos rojos Aumento de las infecciones EfectodeMutacionesenlasecuencia primariadelahemoglobina 1:500 African American Anemia Deoxyhemoglobin SPolymerStructure A)DeoxyhemoglobinS 14strandedpolymer ( l i h) C)Hydrophobicpocket for6 Val B)Pairedstrandsof deoxyhemoglobinS ( l ) (electronmicrograph) (crystalstructure) D)Chargeandsizeprevent 6 Glu from binding. 6 Glufrombinding. Dykes, Nature 1978; J MB 1979 Crepeau, PNAS 1981 Wishner, J MB 1975 Enfermedades neurodegenerativas: sustancia amiloide sustancia amiloide Enfermedad deAlzheimer:depsito betaamiloide (pptido de40kDa) N t il idti f ili d it d Neuropata amiloidticas familiares:depsitos de transtirretina,protena involucrada entransporte deretinol Otras enfermedades amiloidticas,que presentan depsitos deinmunoglobulinas,queratina,beta2 i l b li t microglobulina,etc. Placa amiloide en enfermedad de Alzheimer Encefalopatas espongiformes: los priones Encefalopatas espongiformes: los priones Todas Todas son son enfermedades enfermedades ne rodegenerati as ne rodegenerati as poco poco Todas Todas son sonenfermedades enfermedades neurodegenerativas neurodegenerativas poco poco frecuentes frecuentes ((demencia demencia yataxia). yataxia). Usualmente Usualmente caracterizadas caracterizadas por por una una degeneracin degeneracin espongiforme espongiforme del delcerebro cerebro acompaadas acompaadas por por la laaparicin aparicin de de astrocitos astrocitos activados activados y la y la acumulacin acumulacin de de agregados agregados de de PrP PrP astrocitos astrocitos activados activados yla ylaacumulacin acumulacin de deagregados agregados de dePrP PrP proteasa proteasa resistentes resistentes. . Las Las enfermedades enfermedades por por priones priones son son transmisibles transmisibles por por Las Lasenfermedades enfermedades por por priones priones son sontransmisibles transmisibles por por inoculacin inoculacin o oingestin ingestin de detejidos tejidos infectados infectados. . Enfermedad Enfermedad Mecanismo patognico Mecanismo patognico Humana: Kuru Infeccin por canibalismo ritual en Nueva Guinea Enfermedad de Creutzfeldt-J akob Infeccin por hormona de crecimiento (CJ D) iatrognica humana contaminada con priones, etc. CJ D familiar Mutaciones germinales en el gen PrP Enfermedad de Gerstmann-Strussler- Scheinker e Mutaciones germinales en el gen PrP Insomnio familiar fatal Mutaciones germinales en el gen PrP CJ D espordica Mutaciones somticas o conversin espontnea de PrPC en PrPSc? CJ D variante Infeccin con priones de BSE? Animal: Scrapie (oveja) Infeccin en ovejas genticamente susceptibles p Encefalopata bovina espongiforme (BSE) (vacas locas) Infeccin a partir de raciones de carne y hueso contamidas con priones Los priones Derivan de la protena normal PrP que se expresa en sistema nervioso e inmune. Probable funcin antioxidante. El nombre prin deriva de Proteinaceous Infectious only p y La forma infecciosa de la protena prinica (PrPsc) es insoluble y tiene caractersticas de un amiloide. El mecanismo de accin es por entrada a la clula, actuando sobre la PrP normal, induciendo su precipitacin y la muerte celular El rasgo distintivo de las enfermedades prinicas es que pueden ser trasmitidas, heredadas o espordicas La enfermedad de las vacas locas Encefalitis espongiforme bovina