ASFC J ourne du 5 Dcembre 2000 - Valencia 2000 "Ombres et Lumires" - Thme Reproduction

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Reproduction et Physiologie de la Reproduction
au 7me Congrs Mondial de Cuniculture

Thierry JOLY , Michle THEAU-CLMENT
(*)


ISARAFESIA, 31 place Bellecour - 69288 Lyon Cdex 02
* INRA-Station d'Amlioration Gntique des Animaux, BP 27, 31326 Castanet-Tolosan Cdex



La session de reproduction, prside par J os Vicente (Professeur lUniversit
Polytechnique de Valencia, Espagne) a permis de faire le point sur les connaissances acquises ces
dernires annes afin de poursuivre le dveloppement de lutilisation de linsmination artificielle
(IA) et de faciliter la mise en oeuvre de cette technique dans les levages. Au total, 3 articles de
synthse et 30 publications (8 communications orales et 22 posters) ont t prsents portant sur
3 axes principaux :
- les performances de reproduction du mle (1/3 des articles) ;
- la matrise de la fcondation chez la lapine : biostimulation, induction de lovulation,
antagonisme lactation-reproduction (1/3 des articles) ;
- les biotechnologies de la reproduction et leurs perspectives dapplication chez le lapin (1/4 des
articles).


1- Performances de Reproduction du Mle

Une des caractristiques de la semence de lapin est la faible concentration spermatique de
ljacult et sa variabilit (500 millions/ml en moyenne) ce qui permet en pratique linsmination
de 10 30 femelles par mle et par jour de collecte. Ce coefficient de diffusion, faible par rapport
aux autres espces domestiques insmines, reprsente un frein un plus large dveloppement de
linsmination artificielle dans lespce lapin. Cependant, bien que linsmination soit la base
des modifications de la conduite des levages rationnels, peu de travaux portent sur la conduite
des mles, sur les facteurs dinfluence de la production de la semence, ni sur la recherche de
mthodes plus objectives de son valuation. Les principales publications de ces 10 dernires
annes sont prsentes et analyses dans larticle de synthse dAlvarino J .M.R (Universit
Polytechnique de Madrid).


Quels sont les facteurs dinfluence de la composition de la semence?

Le type gntique et lge
Les caractristiques biologiques de la semence (volume, concentration, motilit,
altrations morphologiques...) sont trs variables entre et intra races, mais en moyenne les valeurs
de ces paramtres augmentent avec lge des mles collects (de 5 mois 24 mois) ainsi que les
rsultats de fertilit et de prolificit des femelles insmines.

Lenvironnement physique
La spermatogense du lapin montre une variation saisonnire lie la photopriode et la
temprature externe, lactivit tant maximale au printemps et minimale lautomne. Pour des
tempratures comprises entre 13C et 26C, peu de variations sont observes sur les
caractristiques de la semence daprs Nizza A. Par contre, pour des tempratures leves
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suprieures 30C, temprature frquente en t pour des levages en semi plein air, la
supplmentation en zinc dans la ration alimentaire (245 mg ZnSO
4
, soit 100 mg Zn/kg) permet de
limiter la baisse de production de spermatozodes observe en automne (+31 10
6
spermatozodes
par rapport au tmoin) daprs Moc E. Le zinc est un oligo-lment qui influence directement la
synthse des hormones gonadotropes de laxe hypothalamo-hypophysaire et strodiennes
(androgne et testostrone). Cependant, bien que les mles semblent capables de sadapter en
quelques semaines un stress thermique (tous les jours : 22 heures 32C et 2 heures 25C), la
quantit et la qualit de la semence produite sont extrmement sensibles de fortes chaleurs
couples une forte hygromtrie (85 % pendant 6 semaines, daprs Finzi A.). En effet, les
caractristiques de la semence ne retrouvent jamais leurs valeurs initiales.

Lalimentation
Lalimentation des mles est un facteur important matriser car les caractristiques de la
semence et la libido sont affectes lorsque le niveau des apports nutritionnels est insuffisant. En
effet, un rgime alimentaire ne contenant que 13% de protines brutes entrane une diminution du
volume de ljacult, de la concentration en spermatozodes ainsi quun abaissement des
performances de reproduction des femelles insmines (daprs Nizza A.). La supplmentation en
vitamines liposolubles de type A, D
3
, E dun aliment standard couvrant les besoins des mles ne
permet pas damliorer la quantit et la qualit de la semence produite (nombre de
spermatozodes, volume, concentration, anomalies morphologiques) (daprs Moc E.), ni le
comportement sexuel du jeune mle (daprs Lavara R.). Par contre, lassociation des 2 vitamines
C et E modifie le statut oxydatif des mles et les caractristiques de la semence. La
supplmentation en alpha tocophrol (200 mg/kg) et en acide ascorbique (1 g/litre de boisson)
devrait permettre une meilleure rsistance aux stress osmotiques et oxydatifs et en consquence,
une meilleure aptitude la conglation de la semence (daprs Castellini C.).



Comment maximiser le production de paillettes de semence ?

Il est regrettable quil ny ait pas plus de travaux portant sur la conduite des mles et sur
les conditions influenant la production spermatique dans ses aspects quantitatifs et qualitatifs.

La frquence des collectes
Bien que la production de sperme soit trs variable entre les mles et selon les jaculats
pour un mme mle, la frquence des collectes influence directement la quantit et la qualit de
la semence, donc le nombre thorique de femelles insmines par jacult, et les performances de
reproduction. Un rythme de collecte trop intense altre la spermatogense (augmentation du
nombre de spermatozodes immatures) et diminue les rsultats de fertilit. Arroita Z. confirme
que la concentration et le nombre de doses dinsmination produites (sur la base de 0,5 ml
contenant 15 millions de spermatozodes) par jacult dcrot quand la frquence de collectes
augmente (1 jour, 2 jours, 3 jours de collecte de 2 jacults successifs). Si le nombre de doses
produites par semaine est plus lev pour les rythmes intensifs, lauteur ne conclue pas sur la
meilleure adquation entre la production de semence hebdomadaire et la quantit de travail pour
lobtenir.





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Le taux de dilution
Gnralement, les doses dinsmination diffuses contiennent entre 20 et 30 millions de
spermatozodes. Il semble cependant possible de rduire le nombre de spermatozodes jusqu 8
millions par dose dans 2 dilueurs commerciaux sans affecter la fertilit (66%) ni la prolificit
(10,2) des lapines. Cet essai a port sur plus de 2100 femelles, leves dans des conditions de
terrain. Ces lapines taient gnralement rceptives, (observation de la couleur de la vulve 48
heures avant linsmination et injection de 12 UI de PMSG pour les non-rceptives) (daprs
Lavara R.). Le nombre optimal de spermatozodes par dose varie selon les types gntiques des
mles. En effet, une insmination avec une dose faible de 6 millions de spermatozodes entrane
pour certaines lignes de mle une diminution des caractristiques de la semence et une
diminution de la prolificit des femelles multipares (9,4 vs 10,9, daprs Vicente J .).


2- Matrise de la fcondation chez la lapine

La matrise de la fcondation est laspect prpondrant qui conditionne la russite de
linsmination artificielle chez la lapine. Contrairement aux autres espces domestiques, une
lapine qui nest pas en oestrus (non-rceptive) au moment de linsmination est quand mme
capable de se reproduire. Cependant son niveau de performances est trs altr : respectivement
4,1 vs 11,0 ufs segments par insmination ralise (Theau-Clment M.). De nombreux travaux
ont t mens avec succs afin dinduire et de synchroniser loestrus des lapines en utilisant des
mthodes hormonales (principalement PMSG). Cependant, afin de rpondre aux attentes des
consommateurs et lvolution prvisible de la rglementation europenne concernant les
hormones exognes, la filire cunicole doit sorienter de plus en plus vers des pratiques dlevage
qui excluent lutilisation des hormones gonadotropes. Lobjectif est de prsenter aux
consommateurs la viande de lapin comme une production saine et naturelle respectant le
bien-tre de lanimal mme sil semble trs difficile aujourdhui de proposer des mthodes
permettant de quantifier le bien-tre du lapin. Ces mthodes alternatives lutilisation
dhormones permettant dinduire et de synchroniser la rceptivit des lapines au moment de
linsmination, sont appeles les biostimulations .

Depuis le dernier Congrs Mondial de Cuniculture Toulouse (1996), les principales
publications concernant les biostimulations tudies chez la lapine sont rapportes dans larticle
de synthse de M. Theau-Clment (INRA-SAGA, Toulouse). Il faut souligner le travail important
ralis ces dernires annes par lInternational Rabbit Reproduction Group autour de ce thme.


Quelles sont les approches de biostimulation applicables en levage?

La manipulation des animaux
La manipulation des animaux (changement de cage, regroupement de plusieurs femelles
dans une mme cage avant linsmination...) namliore pas toujours la productivit des lapines.
En effet, les conclusions de diffrents auteurs utilisant les mmes mthodes peuvent tre
opposes. Cependant, au cours de ce congrs, Rodriguez de Lara R. a montr que le
regroupement des femelles dans une mme cage durant 8 heures avant linsmination permet
damliorer la prolificit des femelles nullipares. Il reste que ces mthodes sont trs
consommatrices en temps de travail et difficiles mettre en oeuvre dans les levages.

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Effet du mle
Dans diffrentes situations physiologiques, la prsence du mle influence lquilibre hormonal et
le comportement des femelles des espces ongules : lintroduction du mle dans un troupeau
peut tre une mthode efficace de contrle de la reproduction. Chez la lapine, ce pourrait tre une
mthode alternative aux mthodes hormonales pour induire la rceptivit. Dans un travail
prliminaire, lintroduction dun mle parmi des femelles, 4 jours avant linsmination na
modifi ni la rceptivit ni la fertilit des femelles (Kustos K).

La sparation mre - porte
Une sparation courte de 36 48 heures entre la mre et ses lapereaux (fermeture de la
bote nid) pourrait tre une alternative intressante aux traitements hormonaux de
synchronisation de lstrus. En effet, quand cette stimulation est applique juste avant
linsmination, dans les conditions dun allaitement libre de la porte avant et aprs la stimulation
et linsmination, la fertilit est amliore, ce qui entrane un gain de productivit au sevrage de
+9 +28 % (gain de poids de lapereaux sevrs/ insmination, en comparaison avec un tmoin
non stimul). En effet, Bonnano a dmontr que lallaitement libre est plus efficace que
lallaitement contrl, avant et aprs 48 heures de sparation mre-lapereaux, pour amliorer la
productivit au sevrage (28 % vs 7 %, respectivement). Ubilla observe quune sparation
ponctuelle de la mre et ses produits, augmente le pourcentage de lapines rceptives, et augmente
le taux plasmatique des oestrognes. Par contre, vraisemblablement li des effectifs danimaux
faibles (14 femelles par lot), Rebollar P.G. ne retrouve pas leffet positif dun traitement
hormonal (25 UI PMSG) ni dune sparation mre-porte pendant 48 heures.

Lalimentation
Le flushing consiste augmenter le niveau alimentaire (ou niveau nergtique) juste avant
la saillie ou linsmination. Le flushing est trs utilis pour amliorer les performances de
reproduction despces dintrt zootechniques telles que : brebis, cochettes, ...
Cependant chez le lapin, peu de travaux ont t mens pour tudier les consquences du dficit
nergtique sur les performances de reproduction, particulirement pour les femelles multipares
en lactation.

Les travaux de Luzi F. ont permis de comparer un traitement hormonal classique (25 UI
PMSG, 60 heures avant IA) avec un flushing nergtique bas sur lincorporation du 1,2
propanediol dans leau de boisson (2% dans leau pendant 5 jours avant linsmination). Les
rsultats nont montr aucune diffrence significative sur la fertilit des femelles et le taux de
mortalit des lapereaux au sevrage; cependant les lapines traites avec le propanediol taient en
meilleur tat physique (poids, gain moyen quotidien, ...). Mieux matrise, cette biostimulation,
base sur un court flushing nergtique pourrait reprsenter une voie alternative lutilisation
dhormone pour induire lstrus. De plus, cette mthode peu coteuse est facile mettre en
oeuvre en levage et semble compatible avec le notion de bien tre animal chez le lapin.
Lutilisation de vitamines et doligo-lments permettrait de surmonter lantagonisme
entre le dbut de lactation et la fonction de reproduction. Linjection dun complexe vitaminique
(B
1
, B
2
, B
6
, B
12
) et de minraux (K, Mn, Fe) 2 jours avant linsmination ne modifie pas les
performances de reproduction mais permet damliorer les conditions physiques des lapines et le
poids des lapereaux au sevrage (daprs Maertens L.).

La photopriode
Lactivit sexuelle de la lapine, espce naturellement saisonne, est lie la dure de la
lumire du jour. Cependant, on peut regretter labsence de travaux utilisant des modifications de
programmes lumineux comme stimulation avant linsmination. En effet, les programmes
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lumineux sont faciles dapplication et ne demandent pas de main duvre importante. Ils seraient
dautant plus efficaces dans le cadre dune conduite en bande, dans la mesure o dans une mme
cellule dlevage, toutes les lapines sont au mme stade physiologique.

Comment dclencher lovulation chez la lapine?

La lapine est une espce ovulation induite par le cot. Cette stimulation naturelle doit
tre remplace dans le cas de linsmination par une injection dhormone (GnRH ou hCG). La
dose de Rceptal (Labo HOECHST Roussel Vet) jusque ici conseille est de 0,2 ml (0,4 g
busrline). Perrier G a montr quune injection de 0,1 ml nentrane pas de diminution de
performances de reproduction des primipares et des multipares.

Cependant, dautres mthodes alternatives peuvent tre proposes : lutilisation dun
mle vasectomis au moment de linsmination (Khalifa RM) ou une injection intraveineuse
dactate de cuivre capable dinduire une dcharge de LH (Kishk W).
Il convient de prciser que ces mthodes ne sont pas vulgarisables car respectivement trop
chronophages ou insuffisamment testes.

Antagonisme lactation-reproduction, pseudogestation

Theau-Clment a confirm linfluence du stade de lactation sur les capacits
reproductives des lapines primipares 24 heures aprs linsmination et plus gnralement,
lantagonisme entre les fonctions de lactation et de reproduction. Il faut souligner que 20 % des
primipares taient pseudogestantes au moment de linsmination et avaient en consquence des
niveaux levs de progestrone. Cette observation suggre des ovulations spontanes qui
nempchent pas une nouvelle ovulation mais bloque compltement la fcondation. En effet,
aucune des lapines ayant un niveau lev de progestrone au moment de linsmination na t
fconde. Cette observation est nouvelle, la frquence et les causes de ce phnomne doivent tre
tudies car ces lapines sont incapables de produire tant quelles scrtent de la progestrone.
Tout traitement hormonal ou biostimulation demeurent inefficaces.

Fortun-Lamothe a prsent une tude sur linfluence de lintensit de la lactation (4, 7 et
10 lapereaux allaits) sur les performances de reproduction de la femelle conduite en rythme
intensif (primipares accouples 1 jour aprs la parturition ; intervalle mise bas de 37 jours sur 4
cycles de reproduction). Lallaitement dune porte nombreuse de 10 lapereaux entrane une
diminution de la fertilit des femelles, du poids des lapereaux au sevrage et de la composition
corporelle en tissu adipeux des femelles au sevrage, mais par contre augmenterait la taille de
porte aux mises basses suivantes.


3- Biotechnologies de la reproduction et perspectives dapplication dans la filire lapin

Le lapin est la seule espce tre considre la fois comme animal domestique, animal
de compagnie et animal modle de recherche. Cette situation lui confre un statut particulier,
notamment dans le domaine des biotechnologies de la reproduction, o lessentiel des travaux
sont pris en charge par le monde de la recherche mdicale et de lindustrie pharmaceutique
depuis plus dun sicle (premier transfert embryonnaire ralis en 1896 ; premier succs de
fcondation in vitro en 1954). Ltat des connaissances actuelles sur la production dembryons, la
conglation des cellules germinales, la multiplication et les transformations gntiques des
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embryons est prsent dans larticle de synthse de U. Besenfelder (Institut de biotechnologie
animale, Tlln, Autriche).

Mme si linsmination est dsormais largement applique en levage, la matrise de la
conglation de semence constitue un enjeu stratgique pour favoriser le dveloppement de
linsmination artificielle. La mthode de conglation en pellets permet de diminuer les cots de
la cryoconglation par rapport lutilisation classique des paillettes, sans modifier les aptitudes
fcondantes de la semence congele (Awad MM.). Cependant, cette mthode doit tre utilise
avec prcaution en raison de laugmentation des risques sanitaires et une traabilit peu fiable.

Depuis prs de 30 ans, la conglation des embryons de lapins est une technique bien
matrise. Cette dissociation spatio-temporelle entre la collecte et la remise en place des
embryons facilite les changes de matriel gntique avec un maximum de scurit sur le plan
sanitaire, mais aussi permet de prserver les ressources gntiques chez le lapin. Dans 2 articles,
Garcia ML rapporte la recration de 2 lignes synthtiques espagnoles partir dembryons
vitrifis exports en Uruguay et montre lintrt des programmes de cryoprservation pour
recrer des populations tmoins de diffrentes gnrations de slection.

Les perspectives futures portent essentiellement sur le clonage et la transgnse. Ds
prsent, il est important de considrer ces biotechnologies en association avec les connaissances
de la cartographie du gnome lapin, afin d'envisager les perspectives dapplication de ces
nouveaux outils dans les schmas de slection du lapin.


4- Conclusion et perspectives
Face une pression croissante des consommateurs, la scurit alimentaire et le bien tre
animal sont des nouvelles exigences citoyennes importantes prendre en compte par la filire
cunicole.
De plus, lvolution prvisible de la rglementation europenne sur lutilisation des hormones
nous engage rechercher de nouvelles approches non hormonales pour induire loestrus. Ainsi,
de nombreux travaux sur la biostimulation ont t publis depuis le dernier congrs mondial de
cuniculture Toulouse en 1996, et la recherche sur ce thme devrait tre activement poursuivie
au niveau europen.

Une dernire remarque concerne la ncessaire ouverture des acteurs de la reproduction du
lapin dautres disciplines scientifiques et humaines mais aussi dautres acteurs de la recherche
dans le monde mdical et pharmaceutique. Le programme COST 848 devrait favoriser les
collaborations entre disciplines. En effet, lEurope a souhait encourager une approche
pluridisciplinaire (pathologie, nutrition, reproduction, bien tre, qualit de la viande et scurit
alimentaire) dont lobjectif est de garantir une production de lapins rgulire, saine, conomique
afin de diffuser une viande de qualit produite en respectant le bien tre animal.

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