Tema: Anlisis Farmacutico

de Impurezas
Garanta de Calidad de Medicamentos
rea Anlisis de Medicamentos - FCByF-UNR
Preparado por la Dra. Patricia M. Castellano
~ Ao 2014 ~
1-PRUEBAS LMITE
DEFINICIN:
Son pruebas semicuantitativas o cuantitativas diseadas para
identificar y controlar pequeas cantidades de impurezas.
Hay diferentes factores a tener en cuenta para implementar
una prueba lmite y son
Especificidad
Sensibilidad
Control de errores personales

1-PRUEBAS LMITE
Especificidad: Cualquier prueba usada como prueba lmite debe dar
alguna forma de reaccin selectiva con trazas de impureza. Una alta
especificidad es fcilmente lograda con pruebas lmite basados en
cromatografa en capa delgada, gaseosa o de lquidos, en las que las
impurezas son rpidamente separadas e identificadas por sus valores
caractersticos de Rf, tiempos de retencin o elucin.
Sensibilidad: El grado de sensibilidad requerido vara ampliamente de
acuerdo al criterio o norma de pureza exigido por la monografa. La
sensibilidad de la mayora de las pruebas es dependiente de un nmero
de factores variables, los cuales pueden ajustarse de manera de obtener
resultados reproducibles.
Control de errores personales: Trminos tales como por ejemplo
precipitados ligeros o escasos o color rosa plido deberan ser
evitados.
1.1- PRUEBAS LMITE PARA IMPUREZAS METLICAS
1.1.1- LMITE DE HIERRO
Se basa en el desarrollo de un color rojo por formacin de un complejo
entre el Fe
+3
y el tiocianato de amonio, se agrega persulfato de amonio
para oxidar el Fe
+2
S
2
O
8
-2
+ 2Fe
+2
2SO
4
-2
+ 2Fe
+3
FeCl
3
+ NH
4
SCN
-1
Fe(SCN)
+2
+ 3Cl
-
+ NH
4
+
La determinacin se realiza mediante la comparacin visual con un
control preparado a partir de una solucin estndar de hierro. El color de
la solucin muestra no debe ser ms intenso que el color de la solucin
estndar para que cumpla con el ensayo.

1.1-PRUEBAS LMITE PARA IMPUREZAS METLICAS
1.1.2- LMITE DE METALES PESADOS
Se emplea para establecer que el contenido de impurezas metlicas que
reaccionan con el in sulfuro, bajo las condiciones especificadas, no
excede el lmite de Metales pesados especificado en la monografa
correspondiente, expresado como porcentaje (en peso) de plomo
determinado mediante comparacin visual con un control preparado a
partir de una solucin estndar de plomo.
Se utilizan tres mtodos: Mtodo I para sustancias que dan soluciones
lmpidas en las condiciones de la prueba; Mtodo II para sustancias que
no dan soluciones lmpidas o incoloras en las condiciones de la prueba y
el Mtodo III es un mtodo digestivo por va hmeda que se aplica
cuando no se pueden usar ni el Mtodo I ni el Mtodo II.
1.1-PRUEBAS LMITE PARA IMPUREZAS METLICAS
1.1.3- LMITE DE ARSNICO
Fundamento: Es un anlisis fotomtrico basado en la reaccin de arsina
con etiltiocarbamato de plata y se emplea para demostrar que el
contenido de arsnico no excede el lmite especificado en una dada
monografa.
AsH
3
+ 6DAg + 3Py AsAg
3
.3DAg + 3D
-
+ 3PyH
+
AsAg
3
.3DAg 6Ag + AsD
3
Py
Plata coloidal (Rojo)

1.1.3- Lmite de Arsnico
Aparato
A-Generador de Arsina
C-Tubo Lavador
E-Tubo de Absorcin
B y D-Juntas Esmeriladas
1.1.3- Lmite de Arsnico
Preparacin de la muestra
Si la muestra es inorgnica, prepararla de acuerdo a las
indicaciones dadas en la monografa.
Si el compuesto es orgnico preparar la muestra
directamente en el frasco generador y hacer una digestin
oxidativa con cido sulfrico y perxido de hidrgeno.
Si hay compuestos halogenados en muestras orgnicas
utilizar una temperatura menor al calentar con cido sulfrico
y agregar el perxido de hidrgeno lentamente para evitar
prdidas de arsnico trivalente.
1.1.3- Lmite de Arsnico
Procedimiento
Agregar a la muestra y al estndar 20 mL de H
2
SO
4
7N, 2 mL de KI
(SR), 0,5 mL de SnCl
2
concentrado (SR) y 1mL de alcohol isoproplico.
As
+5
+ 2 I
-
As
+3
+ I
2
I
2
+ Sn
+2
2 I
-
+ Sn
+4
Mezclar y dejar reposar 30 minutos.
Colocar en el tubo lavador o depurador algodn impregnado con
solucin saturada de acetato de plomo.
Pb
+2
+ H
2
S PbS + 2 H
+
Colocar 3 mL de dietiditiocarbamato de plata (SR) en el tubo de
adsorcin.
1.1.3- Lmite de Arsnico
Procedimiento
Agregar 3 g de cinc granulado (malla N20) a la mezcla contenida en
el generador de arsina e inmediatamente colocar el tubo lavador, el cual
ya tiene el tubo de adsorcin. Colocar el sistema en un bao de agua a
25 C y permitir la generacin de hidrgeno y el desarrollo de color por
45 minutos.
Zn + 2 H
+
Zn
+2
+ 2 H
.
As
+3
+ 3 H
.
AsH
3
AsH
3
+ 6DAg + 3Py AsAg
3
.3DAg + 3D
-
+ 3PyH+
AsAg
3
.3DAg 6Ag + AsD
3
Comparar el color producido con el producido con el estndar, si es
necesario medir la absorbancia entre 535 y 540 nm (utilizar la solucin
de dietiditiocarbamato de plata como blanco).

1.1.3- Lmite de Arsnico
Interferencias
Metales y sales de metales como Cr, Co, Cu, Mo, Pd, Ni,
Hg, Ag, todos interfieren con la liberacin de AsH
3
Sb forma SbH
3
produce el mismo color (interferencia
positiva)
1.1-PRUEBAS LMITE PARA IMPUREZAS METLICAS
1.1.4- LMITE DE PLOMO
El mtodo utiliza la propiedad de formacin de complejo del plomo con
ditizona en cloroformo. Es un mtodo semicuantitativo de comparacin
visual frente a una cantidad conocida de plomo. El color del complejo es
violceo y para esta prueba se deben usar frascos de vidrios para los
reactivos y se debe realizar bajo campana.
1.1.5- LMITE DE MERCURIO
El mercurio es una sustancia txica y sus efectos son acumulativos. Se
utiliza un mtodo especfico para su determinacin, el cual consiste en
una titulacin directa con ditizona en presencia de hidroxilamina en
cloroformo. Se calcula el contenido de mercurio empleando el
equivalente en g de mercurio por mL de solucin de ditizona
determinado en la normalizacin de la solucin de ditizona.

1.1-PRUEBAS LMITE PARA IMPUREZAS METLICAS
1.1.7-DETERMINACIN DE ALUMINIO
Este procedimiento se emplea para demostrar que el
contenido de Al no es mayor al lmite especificado en la
monografa correspondiente de una sustancia indicada para
emplearse en hemodalisis.
1.1.8- LMITE DE SELENIO
Determinacin espectrofotomtrica a 380 nm.
1.1.6- LMITE DE CALCIO, POTASIO Y SODIO
Se determinan por fotometra de llama.
1.2-PRUEBAS LMITE DE RADICALES CIDOS
1.2.1- LMITE DE CLORURO
Esta prueba se emplea para controlar cloruros como
impurezas. Est basado en la precipitacin del anin cloruro
con nitrato de plata en medio de cido ntrico y comparacin
de la opalescencia de la solucin resultante con la de un
estndar que contiene una cantidad conocida de iones cloruro.
AgNO
3
+ Cl
-
AgCl (ppdo blanco) + NO
3
-
La muestra se debe neutralizar para evitar la precipitacin de
otras sales.
HNO
3

1.2-PRUEBAS LMITE DE RADICALES CIDOS
1.2.2- LMITE DE SULFATO
Esta prueba se emplea para controlar sulfatos como
impurezas. Se fundamenta en la precipitacin del sulfato de
bario. Los sulfatos se ponen en evidencia por agregado de una
solucin de cloruro de bario a una solucin clorhdrica de la
muestra. A pesar que el sulfato de bario es insoluble tanto en
medio cido como en medio bsico, la solucin debe estar
cida con el objeto de evitar la precipitacin de algunas sales
bsicas que interfieren con el ensayo.
BaCl
2
+ SO
4
=
BaSO
4
(ppdo. Blanco) + 2Cl
-
HCl
1.3-PRUEBA LMITE PARA IMPUREZAS
INDETERMINADAS
1.3.1PRUEBA DE SUSTANCIAS FCILMENTE CARBONIZABLES
Esta prueba se utiliza para limitar impurezas que por accin del cido
sulfrico concentrado sufren procesos de carbonizacin. La tcnica
consiste en colocar la muestra en un tubo de comparacin adecuado, en
el que se agrega un volumen determinado de cido slfurico y se agita
hasta disolucin, dejar en reposo 15 minutos y comparar el color con una
solucin obtenida con el lquido de comparacin especificado en la
monografa.
Los lquidos de comparacin se preparan a partir de las siguientes
soluciones colorimtricas: CoCl
2
, FeCl
3
y CuSO
4
, stas segn el lquido
de comparacin deseado se mezclan en las proporciones establecidas en
particular, completando a volumen final con agua. Hay 20 lquidos de
comparacin de concentraciones diferentes que se identifican cada uno
con una letra del alfabeto en mayscula.

1.3-PRUEBAS DE IMPUREZAS INDETERMINADAS
1.3.2-DETERMINACIN DEL RESIDUO DE IGNICIN
La prueba de residuo por ignicin es generalmente aplicada a
sustancias que sufren descomposicin dejando un residuo de
composicin conocida. La prueba debe realizarse con la
cantidad de muestra indicada en la monografa, colocndola
en un crisol de porcelana que previamente fue sometido a
ignicin, enfriado y tarado.
2-DETERMINACIN DE AGUA
2.1-CAUSAS QUE MOTIVAN LA DETERMINACIN
Todas las sustancias pueden contener agua, ya sea como vapor, en los
gases, en emulsin o solucin en los lquidos o como agua libre (no
enlazada) o de cristalizacin (enlazada qumicamente) en los slidos.
Muchas sustancias contenidas en las Farmacopeas son hidratos
cristalinos.
Un exceso (o defecto) de agua puede derivar en problemas de
estabilidad
ACUAMETRA con este nombre se designan los procedimientos que se
emplean para determinar la cantidad de agua presente en una muestra.

2-DETERMINACIN DEAGUA
2.2-MTODOS PARALA DETERMINACIN DE AGUA
2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Fundamento
Se basa en la reaccin fundamental descrita por Bunsen 1853
involucrando la reduccin del yodo por el SO
2
en presencia de agua:
2H
2
O + SO
2
+ I
2
H
2
SO
4
+ HI
La reaccin fue modificada por Karl-Fischer para incluir metanol y
piridina en un sistema de cuatro componentes para disolver el yodo y el
SO
2
2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
C
5
H
5
N I
2
+ C
5
H
5
N SO
2
+ C
5
H
5
N + H
2
O
2C
5
H
5
N HI + C
5
H
5
N SO
3
C
5
H
5
N SO
3
+ CH
3
OH C
5
H
5
N(H)SO
4
CH
3
Estas reacciones muestran que: para cada mol de agua se utilizan 1 mol
de yodo, 1 mol de SO
2
, 3 moles de piridina y 1 mol de metanol.
La piridina u otra amina terciaria es indispensable para el
funcionamiento del reactivo de Karl-Fischer, el metanol no lo es,
actuando simplemente como diluyente que ayuda a desplazar el
equilibrio hacia la derecha. Puede reemplazarse por otros alcoholes o
por mezclas con dioxano, cloroformo, tetracloruro de carbono, etc.

2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Valoracin volumtrica
Valoracin coulombimtrica
2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Valoracin coulombimtrica
El compartimento principal de la celda de valoracin contiene en el
nodo el valorante (reactivo de Karl Fischer) ms la solucin del
analito. La celda de valoracin consta tambin de un pequeo
compartimento con un (nodo) sumergido en la solucin del nodo del
compartimento principal. Los dos compartimentos estn separados por
una membrana permeable a los iones. El nodo de platino genera I
2
cuando se proporciona corriente elctrica al circuito.
Valoracin volumtrica
La valoracin volumtrica se basa en los mismos principios que la
valoracin coulombimtrica salvo que la solucin del nodo anterior
ahora se utiliza como la solucin titulante.

2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Estandarizacin del reactivo
Se puede establecer con:
Agua pura. Tiene el inconveniente de su bajo peso equivalente
Estndar de agua en metanol
Tartrato de sodio dihidratado. Se recomienda porque es muy estable y
contiene 15,66% de agua
RKFeq(mg H
2
O/mL)= S x 36 x1000/236 x A
Siendo S peso del tartrato de sodio dihidratado y A mL de reactivo de
Karl-Fischer necesarios para la titulacin del tartrato de sodio
dihidratado.
2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Determinacin del Punto Final (Valoracin volumtrica)
Visual: se basa en el hecho que el reactivo posee un color marrn
rojizo, propio del yodo mientras que el reactivo consumido presenta una
coloracin amarillo. Si la muestra es incolora la apreciacin es fcil. No
es la mejor deteccin.
Fotocolorimtrica: midiendo la absorbancia de la solucin a 525 nm,
donde el reactivo no consumido absorbe. Graficando A en funcin de
volumen agregado, se obtienen dos rectas cuya interseccin da el
volumen del punto final. Mayor sensibilidad que el mtodo visual.
Deteccin electromtrica: se sumergen dos electrodos de platino en la
solucin a valorar, a los que se aplica un potencial tal que la aguja de un
galvanmetro conectado en serie marca cero. El potencial se ajusta de
modo tal que la aguja del instrumento siga marcando cero durante la
titulacin. Al menor exceso de reactivo se observar una fuerte deflexin
de la aguja del galvanmetro.

2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Interferencias e incompatibilidades
Toda muestra cuyas propiedades redox afecten al sistema yodo-ioduro
no podr ser valorada.
Los aldehdos y cetonas interfieren por formacin de acetales y cetales
que libera agua (la transformacin de la muestra en la cianhidrina
elimina este inconveniente).
Muestras complejas cuya reaccin con el reactivo no pueda predecirse.
2.2.1-Mtodo de Karl-Fischer
Ejemplos:
Lidocana clorhidrato: entre 5,0 y 7,0 %. Titulacin volumtrica
directa
Leucovorina clcica: no ms de 17,0 %. Titulacin volumtrica directa
Manitol: no ms de 0,5 %. Titulacin volumtrica directa
Mefloquina clorhidrato: no ms de 3,0 %. Titulacin volumtrica
directa
Meropenem: entre 11,4 y 13,4 %. Titulacin culombimtrica
Metildopa: entre 10,0 y 13,0 %. Titulacin volumtrica directa
Metoclopramida clorhidrato: entre 4,5 y 6,5 %. Titulacin volumtrica
directa
Metotrexato: no ms de 12,0 %. Titulacin volumtrica directa
Mitomicina: no ms de 2,5 %. Titulacin volumtrica directa
Morfina sulfato: entre 10,4 y 13,4 %. Titulacin volumtrica directa
Mupirocina: no ms de 1,0 %. Titulacin volumtrica directa
Ondansetrn clorhidrato: entre 9,0 y 10,5 %. Titulacin volumtrica
directa

2.2.2-Destilacin Azeotrpica
Fundamento
Existen sustancias que forman mezclas de punto de ebullicin constante
con el agua. El punto de ebullicin de las mismas es menor que el de
cualquiera de sus componentes y destilan sin cambio en el punto de
ebullicin, como si fuera una sustancia pura. Para este mtodo un
componente del azotropo debe ser inmiscible con el agua para que el
destilado se separe en sus fases componentes (por ej. benceno, tolueno,
xileno, etc.) facilitando la lectura de la cantidad de agua presente en la
muestra.
Aplicacin
IFAs de origen vegetal
Cremas
Pastas
Muestras complejas
2.2.2-Destilacin Azeotrpica
Equipo

2.2.2- Destilacin Azeotrpica
Ejemplos
Ans fruto: Tomar 10 g de muestra y el contenido de agua no debe ser
mayor del 7,0 %.
Eucalipto hoja: Tomar 20 g de eucalipto previamente reducido a polvo
fino, no debe tener ms de 10 % de agua.
2.2.3.-Prdida por Secado
Es un mtodo gravimtrico
Se basa en las tcnicas convencionales de secado de sustancias slidas
por accin del calor y/o los agentes desecantes, ayudados a menudo por
presin reducida (vaco).
Las condiciones especificadas para cada sustancia dependen de sus
propiedades y de su estabilidad al calor
No es especfico
La cantidad de muestra a emplear es un 1 g a menos que se especifique
otra cantidad
Las condiciones de terminacin de la prueba estn especificadas en
cada monografa y en general puede ser por tiempo o hasta peso
constante.
Si la sustancia es termolbil deben adoptarse condiciones particulares
de presin y temperatura.
El secado a presin reducida puede efectuarse a temperatura ambiente
en desecadores y con temperatura en estufa de vaco o pistola
desecadora de Abderhalden.

2.2.3-Prdida por Secado
Ejemplos
Acetilcistena: Secar a una presin de 50 mm de Hg a 70 C durante 4
horas, no debe perder ms de 1,0 % de su peso.
Tartrato cido de adrenalina: Secar al vaco durante 18 horas, no debe
perder ms de 0,5 % de su peso.
Almidn de papa: Secar a 130C durante 90 minutos, no debe perder
ms de 20 % de su peso.
Dipropionato de Beclometasona: Secar a 105 C durante 3 horas, la
forma anhidra no debe perder ms 0,5 % y la forma monohidrata debe
perder entre 2,8 y 3,8 % de su peso.
Valerato de metabetasona: Secar 200 mg a 105 C durante 3 horas, no
debe perder ms de 0,5 % de su peso.
cido brico: Secar sobre gel de slice durante 5 horas, no debe perder
ms de 0,5 % de su peso.
Maleato de enalapril: Secar al vaco a una presin no mayor de 5 mm
de Hg, a 60 C durante 2 horas, no debe perder ms de 1,0 % de su peso.
3-OTRAS DETERMINACIONES
3.1-Determinacin de cinc
Se determina espectrofotomtricamente por formacin de un
complejo con ditizona midiendo la absorbancia a 530 nm. Se
utiliza una curva de calibracin preparada con estndares de
cinc.