CRECIMIENTO MICROBIANO (O DE MICROORGANISMOS) EN NUTRIENTES LIMITANTES

MULTIPLES, ESPECIALMENTE LA LIMITACIN DOBLE POR SUSTRATOS DE CARBONO Y

NITROGENO

OBJETIVO
En este trabajo (contribucin) se evaluara la existencia de regmenes de crecimiento con mltiple-sustrato
limitante bien definido.
Se examinara la influencia que tiene el carbono y nitrgeno en la limitacin simultanea del crecimiento
microbiano, composicin y fisiologa celular; se presentara una hiptesis de trabajo para el crecimiento de
microrganismos en medios con mltiples nutrientes limitantes.
METODOLOGIA
El fenmeno del crecimiento en nutrientes limitantes mltiples
Los Primeros indicios de que el crecimiento del fitoplancton debe ser limitado por varios factores al mismo tiempo fue
informado por los sistemas de agua dulce oligotrficos (que se resumen en Pearl 1977) . Con respecto a los
microorganismos, los datos preliminares experimentales sugirieron la aparicin de una limitacin simultnea de
crecimiento por dos nutrientes heterlogos, para el nitrgeno y el fsforo , para el carbono y el nitrgeno y para el
carbono y potasio y para nutrientes gaseosos , y por Egli ( 1982 ) para el carbono y el nitrgeno .
Sin embargo, fue slo recientemente, que la existencia de una doble limitacin del crecimiento por carbono/nitrgeno
se demostr claramente bajo el rgimen de cultivo en quimiostato tanto para bacterias y levaduras, sobre la base tanto
de los parmetros del cultivo y las caractersticas fisiolgicas de las clulas en crecimiento ( Egli y Quayle , 1984; Egli
y Quayle , 1986; Gr ~ izer - Lampert et al , 1986; . . Minkevich et al 1988 ; Duchars y Attwood 1989 ; . Rutgers et al
1990) .
Prediccin del rango de un crecimiento de doble-sustrato limitante

La aceptacin de la existencia del fenmeno nos lleva a preguntarnos si el rango donde el crecimiento est limitado por
las restricciones en la disponibilidad de dos (o ms) nutrientes al mismo tiempo puede predecirse. A partir de sus datos
experimentales, Egli y Quayle (1986) demostraron que los lmites de los tres regmenes de crecimiento a una tasa de
crecimiento fijo determinado se podran predecir cundo se conocen los rendimientos de crecimiento de los sustratos
individuales. La ecuacin emprica para la concentracin de biomasa en el cultivo (x), como primera propuesta por Egli
y Quayle (1986) para dos nutrientes: el carbono y el nitrgeno, se puede deducir del esquema conceptual.
Uno de los ejemplos mejor documentados en la literatura fue que para K. pneumoniae que crece en un medio sinttico
con glicerol y amonaco como las nicas fuentes de carbono y nitrgeno, respectivamente. Aunque los datos se
obtuvieron a partir de diferentes fuentes (Tempest et al 1967; Su-Bert 1976; Tempest y Neijssel 1978) y, en algunos
casos, requiere de nuevo clculo y transformacin, que demuestren claramente la influencia de la tasa de crecimiento
y la naturaleza de la limitacin de crecimiento en los coeficientes de rendimiento de biomasa basado en carbono y
nitrgeno. Los datos de Yx/c (glicerol) eran escasos durante crecimiento limitado por NH4+, especialmente a altas
tasas de crecimiento mostraron una dispersin considerable. Sin embargo, debido a la tasa de crecimiento especfico
mxima Yx/c (n-lim) es tericamente idntica a Yx/c (c-lim), los valores de Yx/c para el crecimiento limitado en
nitrgeno pueden ser interpolados para las tasas de dilucin superiores a 0,2 h -1.

RESULTADOS
Se calcularon desde este conjunto de relaciones c0/n0 los datos y los lmites correspondientes de las zonas para
crecimiento obtenidos se muestran como una funcin de la tasa de crecimiento. Como se predijo, la extensin del
carbono /nitrgeno- rgimen de crecimiento limitado para un cultivo de K. pneumoniae es fuertemente dependiente a
la tasa de crecimiento impuesta.
La ecuacin (1) implica que con el fin de obtener
una zona de crecimiento de doble sustrato limitante
con sustratos s1 y s2, los coeficientes de
rendimiento de crecimiento Yx/s1 y/o Yx/s2 tienen que ser diferentes bajo las condiciones de crecimiento
de S1 limitante y S2 limitante, respectivamente.
La zona de la doble limitacin no solo se vuelve mas amplia con la disminucin de las tasas de crecimiento, pero es ,
en elmismo tiempo, se movi hacia una mayor razn C:
N . Como consecuencia, si la bacteria se cultiv en un
medio con una relacin C: N superior a
aproximadamente 5.5 , el crecimiento debe convertirse
en nitrgeno limitado ms altas tasas de dilucin . Con
el mismo medio , el cultivo seria de carbono limitado -
en las tasas de crecimiento inferior a aproximadamente
0,5 h -1 .
En contraste, para el crecimiento de C. validacin con etanol y amonaco los clculos predijo una zona de doble
limitacin comparablea la de K. pneumoniae .
Segn los resultados evidenciados, se puede prever que las zonas de crecimiento de doble sustrato limitado - tambin
se producir para el crecimiento de quimiostato, microorganismos con otras combinaciones de sustrato de carbono y
nitrgeno. Desafortunadamente, pocos datos fiables se encuentran en la literatura sobre el crecimiento de coeficientes
de rendimiento a diferentes tasas de crecimiento de combinaciones de sustrato tales como , e.g ., carbono / magnesio
carbono / fsforo o carbono / azufre . Especialmente los datos sobre los coeficientes de rendimiento de crecimiento
para el carbono bajo condiciones de exceso de carbono simples, raramente en la literatura fue examinada . El mejor
documento ejemplo es el de crecimiento de K. pneumoniae con glicerol y de magnesio tanto en virtud de carbono y
limitacin de magnesio ( Strange & Hunter 1967 ; Tempest y Dicks 1967 ; Tempest y Neijssel 1982 ) y los lmites de
la zona de carbono de doble ( crecimiento de magnesio) limitada predecir a partir de los datos se muestra en la figura .
6. Desafortunadamente, en este ejemplo el lmite de carbono / magnesio limitado - a las condiciones de crecimiento de
magnesio limitada est documentado en una tasa de dilucin solamente nica y ms datos son claramente necesarios.
Sin embargo, el emergente contorno de la forma de doble sustrato limitado lazona puede ser predicha a ser an ms
prolongado que el de carbono / nitrgeno limitado -el crecimiento de esta bacteria.


CONCLUSIONES
Con respecto a los dos nutrientes bajo consideracin, se puede concluir a partir de la informacin presentado
aqu ,que la posicin y forma del carbono / nitrgeno limitado el rgimen de crecimiento principalmente es
influenciado por dos parmetros : el rendimiento de crecimiento coeficiente y la plasticidad de la composicin
de clulas con respecto a los componentes celulares carbonosos y nitrogenados .
La influencia de rendimiento de crecimiento implica que para sustratos altamente oxidados , es decir ,
sustratos que dan los coeficientes de crecimiento de bajo rendimiento ( Linton y Stephenson 1978 ) este
rgimen ser desplazado hacia una mayor relacin C: N y razones medias .
Los resultados aqu presentados con respecto a los dos macro-nutrientes, carbono y nitrgeno , claramente
demuestran que el crecimiento de microbios en cultivo continuo es frecuente, no slo se limita por un solo
nutriente en cualquier momento en particular , pero tambin puede ser limitado por dos ( o ms ) nutrientes
simultneamente .
La zona de la limitacin doble de nutrientes depende en la relacin C: N del medio de cultivo y la lmites de
las dos independiente - sustrato sola - regmenes de crecimiento limitado pueden predecirse a partir de los
coeficientes de rendimiento de crecimiento basados en carbono y nitrgeno, respectivamente , mide durante
un solo crecimiento sustrato limitado.
El concepto presentado aqu en crecimiento del doble sustrato limitante permite distintas conclusiones para ser
elaborado en relacin de crecimiento de microorganismos bajo ambos laboratorios y condiciones ambientales.
Primero, con respecto al crecimiento con carbono y fuentes de nitrgeno, uno puede predecir que estudios
en crecimiento de nitrgeno-limitante a velocidad baja de crecimiento deben requerir altas relaciones de C:N
en el medio que son cmodamente usados, i.e., la ms baja la velocidad de dilucin, la mas alta la relacin
del medio C:N que necesit para asegurar distintamente las condiciones de crecimiento nitrgeno-limitante.
Adicionalmente, esto puede ser concluido que la prueba para confirmar que el crecimiento es carbono-
limitante debe ser realizada para altas velocidades de dilucin, mientras bajas velocidades de dilucin deben
ser empleadas cuando se prueben por limitacin de nitrgeno. Tambin, las razones que el ejemplo
presentada en la Fig. 1 A el peso seco en el cultivo todava incrementa linealmente en la zona del
carbono/nitrgeno limitante indica que el procedimiento tradicional de evaluar el factor limitante en una va
de mediano crecimiento de biomasa producida puede llevar a resultados ambiguos.