2.) iniciacin 3.) elongacin 4.) terminacin y liberacin 5.) plegamiento y procesamiento post-traduccional Actores: - amino cidos - tRNAs - amino-acil-tRNA-sintetasas - mRNA - Ribosomas - Varios factores proteicos - ATP y GTP Ribosomas se componen de rRNA y protenas Amino acil tRNA sintetasa tRNA + ATP ! tRNA-AMP + PPi
tRNA-AMP + aa ! tRNA-aa + AMP Unin del amino acido al 3 del tRNA ! activacin del precursor Solamente 1 error por 10 4 aa La mayora de las clulas tiene una amino acil tRNA sintetasa por amino cido Amino-acil-tRNA sintetasa Amino-acil-tRNA sintetasa tRNA anticodon amino cido la enzima tRNA sintetasa Concept 21 y 22, dnaftb.org CODIGO GENETICO cdigo de una letra 4 1 ! 4 4 nt para determinar 20 aa cdigo de dos letras 4 2 ! 16 cdigo de tres letras 4 3 ! 64 El cdigo gentico es un cdigo de tripletes El cdigo gentico tiene 4 bases para determinar 20 amino acidos Sistema de traduccin in vitro: Leder, Nierenberg, Khorana Cdigo gentico sol naciente Decifre el cdigo gentico utilizando el esquema del cdigo gentico sol naciente UUUUUUUUUUUUU AAAAAAAAAAAAA CCCCCCCCCCCCCC UCUCUCUCUCUCUC AUAUAUAUAUAUAU UUCUUCUUCUUCUUC AAGAAGAAGAAGAAG CCACCACCACCACCA GUAGUAGUAGUAGUA UAUCUAUCUAUCUAUC " El codigo genetico es DEGENERADO " hay ms que un codon por amino cido 64 codones para 20aa PERO NO AMBIGUO Como y donde varan los codones? Apareamiento del codon (mRNA) con anticodon (tRNA) hay un wobble en el apareamiento de la tercera base del codon 5 3 mRNA tRNA Primera base del anticodon tercera base del codon " El codigo genetico es DEGENERADO " hay ms que un codon por amino cido Posicin wobble val ala tyr gly val ala ser arg val pro thr asp val ser his gly El cdigo gentico no es ambiguo El cdigo gentico no tiene comas Hay tres codones que no codifican para un aa UAA, UAG, UGA codones STOP El cdigo gentico tiene puntos Hay 61 codones para 20aa, cuantas amino acil transferasas hay? EXPRESION GENICA DNA ! RNA ! protena Cada secuencia tiene seis posibles marcos de lectura 5-A C T G T C T A G A G C T G A-3 3-T G A C A G A T C T C G A C T-5 -1 -2 -3 +1 +2 +3 MARCO DE LECTURA ABIERTA = open reading frame, ORF ORF El cdigo gentico es universal DNA recombinante, ingeniera gentica En virus: tienen un genoma muy pequea ! codifican varios proteinas con una hebra de acido nucleico Hasta en las dos hebras, es decir utilizan los seis marcos de lectura Ej. en un retrovirus En plantas: Editar el mensajero ! codificar ms proteinas con el mismo gen ACTIVADO AMINO-ACIDO en el 3 del tRNA Amino acido en el 3 del tRNA BIOSINTESIS de PROTEINAS Ribosoma sitio P Ribosoma sitio A BIOSINTESIS de PROTEINAS 1.) activacin del precursor
tRNA + aa + ATP ! tRNA-aa + AMP + PPi 2.) iniciacin
3.) elongacin formacin del enlace peptdico
4.) terminacin energa por activacin del precursor para formar el enlace peptdico y se cataliza por la subunidad grande, se necesita energa para los movimientos de la ribosoma, Cadena amino acdica crece de amino ! carboxilo En procariotas: Iniciacin mRNA subunidad 30S fmet-tRNA, factores de iniciacin IF1, IF2, IF3, GTP finalmente la subunidad grande En el 5 del mRNA hay una secuencia para la unin de la ribosoma (ribosomal entry site) aparea con el 3 del rRNA 16S de la subunidad pequea Ej. distintos mRNAs Secuencia Shine-Dalgarno codon de inicio de la traduccin El primer amino cido que se utiliza es el N-formil-metionina - Subunidad 30S une IF1 y IF3 - 30S une el mRNA: Interaccin de la secuencia Shine Dalgarno en el 5 del mRNA con secuencia en el 3 del 16S rRNA y posiciona el AUG en el sitio P - Se une la subunidad grande 50S - Entra el fmet-tRNA que esta con IFGTP en el sitio P, sale IF3 - Sale IF-2, GDP, Pi, sale IF1, la f-met-tRNA esta en el sitio P Sito P Sito A Sito E Exit del tRNA sin aa tRNA con peptido creciendo tRNA con aa entrando Elongacin Necesita el 70S complejo de iniciacin, aa-tRNAs, factores de elongacin (EF-Tu, EF-Ts, EF-G) y GTP - Entrada de un aa-tRNA (codon/anticodon) al sitio A - Formacin del enlace peptdico - translocacin " Cada ciclo elongcin: 2 GTPs Cada aa-tRNA esta con el factor EF-Tu-GTP, entra y sale EF-Tu-GDP,Pi; se recupera el EF-Tu-GTP por interaccin con EF-Ts El grupo amino del aa-tRNA que entra al sitioA ataca al carbono carbonil del aa(n)-tRNA en el sitioP, formacin del enlace catalizada por 23S rRNA en la subunidad grande El ribosoma se mueve por un codon en direccin 5-3 en el mRNA, necesita EF-G yGTP (similar EF-Tu-GTP) Formacin del enlace peptdico Terminacin - hasta que un codon STOP en el sitio A Como no entra una tRNA, es atacada por un factor de liberacin RF=releasing factor RF-1: reconoce UAG y UAA RF-2: reconoce UGA y UAA El RF parece un tRNA y estimula que se hidroliza la unin del aa(n)-tRNA y asi se libera el pptido, despus se libera el tRNA descargada y los subunidades desagregan (se piensa que eso es estimulado por RF-3) Iniciacin Elongacin Terminacin El mRNA se lee del 5 al 3 y la protena se sintetiza del amino hacia al carboxilo terminal Polirribosomas en el citoplasma En procariotas: Inhibidores de la Transcripcin
Rifampicina: Inhibe a la RNA polimerasa in vitro y bloquea la sntesis de mRNA, rRNA y tRNA in vivo.
!-Amanitina: Se usa para discriminar entre las 3 RNA polimerasas eucarioticas. RNA pol II es muy sensible a esta toxina.
Actinomicina D: Bloquea transcripcin por su capacidad de unirse al DNA entre pares C-G.
Para acordar: Inhibidores de la biosntesis de protenas Streptomicina, neomicina, eritromicina, (procariotas)
Tetraciclina, puromicina (pro- y eucariotas)
Cicloheximide (eucariotas) Interfiere con el apareamiento normal entre el aa-tRNA y los codones, generando protenas aberrantes Pro Subunidad 30S Eritromicina: se une a un lugar especfico en el rRNA 23S y bloquea la elongacin al interferir la translocacin del ribosoma.
Puromicina: causa liberacin prematura de la cadena polipeptdica porque una parte de la molcula se parece al extremo 3 del tRNA aminoacilado. Entra en el sitio A y se une a la cadena polipeptidica en crecimiento generando liberacin prematura de la protena.
*Penicilina: Inhibe crecimiento bacteriano por interferir con la formacin de la pared bacteriana. Pro+Eu Pro Puromicina inhibe la traduccin Tetracilina inhibe la unin del aa-tRNA a la ribosoma En eucariotas: mRNA en citoplasma con factores de iniciacion En eucariotas se reconoce el CAP y se mueve hasta encontrar el primer AUG codn de iniciacin de traduccin eIF eucariotic initiation factor Polirribosoma Reticulo endoplasmatico rugoso Caracteristica de las ribosomas de las mitocondrias parecidos a las de procariotas ! hipotesis endosimbionte