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5.

MARCO TERICO
5.1 El Mango (Mangifera indica L.): es una de las frutas tropicales ms
importantes que se consumen en forma fresca o procesada a nivel mundial. El
mango es rico en pectina, celulosa, hemicelulosa, lpidos, protenas, polifenoles y
carotenoides con excelentes propiedades funcionales. Dado que existe una fuerte
evidencia que los radicales libres son responsables de los daos en lpidos,
protenas y cidos nucleicos en las clulas que conduce a varias anomalas
fisiolgicas y patolgicas, tales como la inflamacin, las enfermedades
cardiovasculares y el envejecimiento, estudios recientes indican que el consumo
frecuente de frutas se asocia con un menor riesgo de accidente cerebrovascular y
el cncer. Este efecto protector se relaciona con micronutrientes tales como los
antioxidantes presentes en la plantas. Diferentes frutas presentan diferentes
capacidades antioxidantes de acuerdo a su contenido en polifenoles, vitamina C,
E, carotenoides y flavonoides. En los ltimos tiempos, una considerable atencin
se ha centrado en los polifenoles y flavonoides de diferentes fuentes de plantas.
Los flavonoides son un tipo de polifenoles considerados como el mayor grupo de
los fenoles presentes en la naturaleza y se estima que el 2% de todo el carbono
fotosintetizado por las plantas se convierte en flavonoides. Los flavonoides se
encuentran ampliamente distribuidos en el reino vegetal con una gran diversidad
de estructuras
5
. El proceso asistido por microondas produce extractos de semilla
de mango con alta capacidad antioxidante.

Las sustancias oxidativas presentes en los alimentos pueden atacar biomolculas
insaturadas produciendo daos y modificaciones qumicas indeseables, siendo las
de mayor frecuencia los daos a la estructura del DNA y la peroxidacin lipdica de
membranas celulares (Alvis et al., 2012; Olaya et al., 2009; Rojano et al., 2007).
La mayora de estos compuestos han sido estudiados como parte de la
composicin qumica y nutricional o como sustancias aisladas, por ejemplo, la
accin de la vitamina E como reductor de perturbaciones oxidativas (Martnez et
al., 2012).
El oxgeno est directamente asociado a las condiciones de vida aerobia,
representa la fuerza motriz para el mantenimiento del metabolismo y viabilidad
celular, al mismo tiempo que involucra un peligro potencial debido a las
caractersticas paramagnticas de este gas, responsable de la formacin de
intermediarios parcialmente reducidos y dotados de una alta reactividad conocidas
como Especies Reactivas de Oxgeno (ERO) (Gil del Valle, 2011). Entre las ERO
se encuentran los radicales libres (RL) [cualquier especie molecular con uno o
ms electrones desapareados, (Ziech et al., 2011)] y molculas derivadas del
oxgeno que posean alta capacidad reactiva (Li et al.,2011).

5.2 Principales fuentes o mecanismos generadores de especies Reactivas de
Oxgeno (ERO)

Los mecanismos fundamentales por los que se genera EROS son:

5.2.1. Cadena de transporte electrnico mitocondrial ; La mitocondria cumple
con la mayora de los requerimientos energticos de la clula a travs del
metabolismo oxidativo (Carneiro et al., 2012), la cual es considerada como la
mayor fuente de ERO (Li et al., 2011), aproximadamente entre el 1-5% del
oxgeno total consumido por la mitocondria es convertido en EROS por reduccin
parcial del oxgeno al anin radical superxido (O2-) (Brawek et al., 2010), como
se describe en la figura 2 .

Fig 2: produccion del anion radical superoixido por la cadena de transporte
electronico mitocondrial (leon de fernandez , 2004)




2. Iones de metales de transicin (figura 3)



Figura 3. Reacciones de Fenton y Haber-weiss


3. Reacciones bioqumicas redox dependientes de O2 que tienen lugar en el
Metabolismo celular Monoamino-oxidasa (MAO).

4. Exceso de ejercicio fsico El consumo de O2 por el organismo durante el
ejercicio fsico aumenta 20 veces y en el msculo esqueltico hasta casi 100
veces, para incrementar la produccin de ATP por la fosforilacin oxidativa
mitocondrial (Pepe et al., 2009). EL aumento en la utilizacin del O2 trae consigo
un incremento en la generacin de (O2-).

5. La radiacin ionizante proveniente de la atmsfera o de la radioterapia es
absorbida fundamentalmente por el H2O (por su abundancia), producindose un
gran nmero de especies reactivas (H, OH, H2O2,H2O y H3O+) en
aproximadamente 10-9 segundos luego de la exposicin.

6. Pesticidas, contaminantes, humo de cigarrillo y algunos medicamentos
(Tawaha et al., 2007).
5.2.2 Las ERO ms representativas y sus caractersticas :
5.2.1.1 Especies radicalarias: Dentro de las especies radicalarias de mayor
inters desde el punto de vista biolgico estn el radical anin superxido (O2),
hidroxilo (OH), xido ntrico (NO), hidroperoxilo (HO2 ), peroxilo (RO2),
alcoxilo (RO) (Carocho et al., 2013).

5.2.1.2 Especies no radicalarias Las especies no radicalarias de mayor inters
biolgico son: cido hipocloroso (HOCl), peroxinitrito (ONOO)-, perxido de
hidrgeno (H2O2) y el oxgeno singlete (1O2) (Carocho et al., 2013).


Son diversos los mtodos establecidos para la extraccin de los polifenoles. Estos
mtodos varan en disolventes y las condiciones utilizadas. El mtodo de
extraccin es esencial para la cuantificacin precisa del contenido y capacidad
antioxidante
9,10
.
5.3 MEDICION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Los antioxidantes se definen como aquellas sustancias, que presentan bajas
concentraciones respecto al sustrato oxidable (biomolculas), retarda o previene
significativamente la oxidacin de este
13
.

Diversos mtodos se ha desarrollado
pata determinar el potencial antioxidante de extractos naturales y de alimentos.
Entre ellos se encuentran los mtodos del ABTS, FRAP, DPPH, ORAC, TRAP Y
PCL
11,12
. Los antioxidantes pueden reducir los radicales por dos posibles
mecanismo: por transferencia de electrones y por transferencia de tomos de
hidrgeno.
La actividad antioxidante de una muestra no puede ser determinada basndose
solo en un ensayo de prueba. En la prctica se realizan muchos modelos de test in
vitro (tabla 1) para evaluar la actividad antioxidante de la muestra de inters; Con
base a las reacciones qumicas, la gran mayora de los ensayos para determinar
de capacidad antioxidante pueden ser divididos en dos categoras: (1) Ensayos
basados en la reaccin por transferencia de tomos de hidrgeno (HAT) y (2)
Ensayos basados en la reaccin por transferencia de electrones (ET) (Huang et
al., 2005).

Tabla 1. Clasificacin de los modelos de ensayo in vitro segn su modo de
Reaccin ET o HAT (Huang et al., 2005).
Los ensayos basados en la transferencia de electrones (ET) involucran una
reaccin redox con el oxidante como un indicador del punto final de reaccin. La
mayora de los ensayos basados en HAT monitorean una reaccin cintica
competitiva, generalmente estn compuestos de un generador de radical libre
sinttico, una prueba molecular oxidable y un antioxidante. Los ensayos basados
en HAT y ET fueron desarrollados para medir la capacidad de atrapar radicales
libres, en lugar de la capacidad preventiva antioxidante de una muestra (Huang et
al., 2005).

Figura 7. Mecanismos de reaccin por transferencia de electrones y
transferencia de tomos de hidrgeno (Huang et al., 2005).
Entre los ensayos de captacin de radicales libres, el mtodo DPPH es el ms
rpido, es simple (no incluye muchos pasos) y de menor costo en comparacin
con otros modelos. Por otro lado, el ensayo de decoloracin ABTS+ se puede
aplicar a antioxidantes hidroflicos y lipoflicos (Alam et al., 2012).

5.4 METODO DEL DPPH (1,1-difenil-2-pricrilhidrazil)


El compuesto 1,1-difenil-2-pricrilhidrazil (DPPH) es un radical estable que presenta
una intensa coloracin violeta y que absorbe radiacin a 517 nm, de forma que su
concentracin se puede determinar mediante mtodos espectrofotomtricos
13
. En
el ensayo se determina la concentracin inicial de DPPH y la concentracin
resultante una vez que se ha aadido el posible antioxidante, de forma que una
disminucin de la absorcin de radiacin se traduce en una disminucin de la
concentracin de DPPH debida a la cesin de electrones de la especie
antioxidante.

5.5 METODO DEL cido 2,20-azinobis-3-etil-benzotiazolina-6-sulfnico
(ABTS) El radical derivado de cido 2,20-azinobis-3-etil-benzotiazolina-6-sulfnico
(ABTS) es muy utilizado para la evaluacin de la eficacia antioxidante de
compuestos puros y mezclas complejas. La extensin y la rapidez con la que los
polifenoles inhiben el radical ABTS son los criterios para evaluar su capacidad
antioxidante relativa en comparacin con un antioxidante estndar
14
.
Uno de los restos orgnicos ms utilizados para la evaluacin de la eficacia
antioxidante de los compuestos puros y mezclas complejas es el catin radical
derivado de cido 2,20-azinobis-3-etil-benzotiazolina-6-sulfnico (ABTS).
13
Estos
cationes radicales podran ser generados por actividad enzimtica, qumica,
electroqumica.
14
Los polifenoles han atrado recientemente gran interspor los
efectos beneficiosos para la salud como antioxidantes y su abundancia en algunas
frutas frescas, extractos vegetales, y bebidas.
15
La extensin y la rapidez con la
que los polifenoles apagan los cromforos radicales ABTS son los criterios para
evaluar su capacidad antioxidante relativa en comparacin con un antioxidante
estndar.
16


5.6 ACTIVIDA ANTIRADICALES LIBRE : Existe correlacin entre el contenido
de fenoles totales y la actividad de captura de radicales libres. Los compuestos
fenlicos capturan las especies reactivas del oxgeno, tales como radicales anin
superxido y radicales lpidos peroxi (de Freitas et al, 1998). Los antioxidantes
pueden ser naturales o sintticos y estn ampliamente distribuidos en los
alimentos frescos o procesados, siendo las mayores fuentes los alimentos de
origen vegetal y sus productos, por presentar un alto contenido de vitamina E,
vitamina C, carotenoides y compuestos fenlicos, especficamente flavonoides
(Ercigli et al., 2008; Stipanuk, 2000; Sokol, 1997; Rodrguez, 1997).

FolinCiocalteu (FC) es el mtodo utilizado regularmente para determinar
polifenoles totales. Este mtodo espectrofotomtrico creado para detectar
polifenoles totales en las frutas y verduras fue desarrollado por Folin y Ciocalteu
(1927) y luego modificado por Singleton y Rossi (1965)
15
. Este mtodo se basa en
la reaccin de fosfomolibdato y fosfotungstenato con compuestos fenlicos y
polifenlicos. Una limitacin importante del mtodo es su falta de especificidad, ya
que otros productos de oxidacin pueden interferir con las mediciones. Aunque
este mtodo colorimtrico "aparente", no es muy fiable, se utiliza de forma rutinaria
en diversos laboratorios para las determinaciones de compuestos fenlicos
16
. Los
compuestos polifenlicos de la familia de los flavonoides estn presentes
abundantemente en los productos naturales ( Natsume et al., 2000 ).



5.7 EXTRACCION DEL ACEITE: Hay varios mtodos establecidos para la
extraccin de los poli fenoles a partir de materiales de plantas. Estos mtodos
varan en disolventes y las condiciones utilizadas. El mtodo de extraccin es
esencial para la cuantificacin precisa del contenido y capacidad antioxidante.
10

La extraccin con disolventes sigue siendo una de las tcnicas de preparacin de
muestras ms ampliamente utilizados para el anlisis cromatogrfico
17,18
. .Las
tcnicas ms utilizadas para la extraccin de aceites esenciales son arrastre con
vapor (AV), destilacin-extraccin con solvente (DES), head space (HS), fluidos
supercrticos (FSC) y radiacin microondas (MO), para los cuales se utilizan hojas
frescas y al composicin de los aceites se hace por cromatografa de gases
11
, de
acuerdo con la literatura, en la mayora de los casos, la tcnica que mostr una
mejor extraccin fue la DES

a juzgar por el mayor nmero de compuestos
obtenidos.
12
En 1879, von Soxhlet desarrollado un nuevo sistema de extraccin (extractor
Soxhlet), que durante mucho tiempo ha sido la tcnica de lixiviacin ms
ampliamente utilizado.

La extraccin por solvente de muestras slidas, que se conoce comnmente como
la extraccin slido-lquido, pero que debe hacerse referencia, en un uso ms
correcto de la terminologa fisicoqumicas, como filtracin o lixiviacin, es una de
las formas ms antiguas de tratamiento previo de la muestra slida. Entre las
tcnicas utilizadas para la aplicacin de este paso, Soxhlet ha sido la tcnica de
lixiviacin sobre todo utilizado durante mucho tiempo. Esta afirmacin est
respaldada por el hecho de que Soxhlet ha sido una tcnica estndar durante ms
de un siglo y, en la actualidad, es la referencia principal a la que se compara el
rendimiento de otros mtodos de lixiviacin. En Soxhlet convencional, utilizado
originalmente para la determinacin de la grasa en la leche
19
, la muestra se coloca
en un dedal-soporte, y durante la operacin llena gradualmente con disolvente
fresco condensado a partir de un matraz de destilacin. Cuando el lquido alcanza
el nivel de desbordamiento, un sifn aspira el soluto del dedal titular y lo descarga
de nuevo en el matraz de destilacin, llevando los analitos extrados en el lquido a
granel. Esta operacin se repite hasta que se consigue la extraccin completa.
Esto hace que el rendimiento de Soxhlet una tcnica continua-discontinua hbrido.
Puesto que los actos de disolvente por etapas, el conjunto puede ser considerado
como un sistema por lotes, sin embargo, ya que el disolvente se recircula a travs
de la muestra, el sistema tambin tiene un carcter continuo.
Las ventajas ms destacadas de Soxhlet convencional son las siguientes: la
muestra se pone en contacto repetidamente con las porciones frescas del
disolvente, lo que ayuda a desplazar el equilibrio de transferencia. La temperatura
del sistema se mantiene relativamente alta ya que el calor aplicado al matraz de
destilacin llega a la cavidad de extraccin en cierta medida. No se requiere la
filtracin despus de la etapa de lixiviacin. Rendimiento de la muestra se puede
aumentar mediante la extraccin simultnea en paralelo, ya que el equipo bsico
es de bajo costo. Es una metodologa muy sencilla que necesita poca formacin
especializada, tiene la posibilidad de extraer ms masa de la muestra que la
mayora de los mtodos ms modernos (microondas-extraccin, los fluidos
supercrticos, etc), y es no dependiente de la matriz. Hay una amplia variedad de
mtodos oficiales que implican una etapa de preparacin de la muestra sobre la
base de la extraccin Soxhlet
(19,20,21,22,23,24)
.