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TECNICAS BASICAS D EBIOLOGIA MOLECULAR APLICADAS A LA MEDICINA

La estructura que conocemos hoy como ADN (cido desoxirribonucleico) fue


descrita por Watson y Crick en el ao 1953. Tras este hecho confluyeron ideas y
nuevos enfoques experimentales que condujeron a lo que ha sido denominado
como dogma central de la gentica molecular, que establece que la informacin
gentica fluye del ADN al ARN (cido ribonucleico) y de este a la protena, y por
tanto es el ADN el material que almacena la informacin gentica en unidades de
informacin hereditaria denominadas genes. Aun cuando este enunciado es cierto
para la mayora de los seres vivientes; se ha comprobado que en determinados
virus la informacin gentica se almacena en forma de ARN y esta puede ser
transferida del ARN al ADN a travs de un proceso de transcripcin inversa
Al igual que en las protenas, el ADN y el ARN estn compuestos por repeticiones
de pequeos bloques, pero con la diferencia de que en lugar de aminocidos, se
trata de molculas ms complejas conocidas como nucletidos. Los nucletidos,
en el ARN, estn dispuestos en una sola cadena resultante de la copia del ADN en
forma complementaria; en cambio, en el ADN, los nucletidos se sitan formando
dos cadenas orientadas en direcciones opuestas y enrolladas alrededor de un eje
imaginario formando una doble hlice
El genoma es la informacin gentica con que cuentan los seres vivos, la cual est
almacenada en los genes y estos a su vez en los cromosomas. Los cromosomas
estn compuestos por ADN y un grupo de protenas llamadas histonas. El genoma
humano contiene cerca de 3 billones de nucletidos (pares de bases, pb)
En las ltimas dcadas la tecnologa de recombinacin del ADN tambin conocida
como ingeniera gentica, o ms acertadamente recombinacin gentica in vitro,
ha revolucionado la Biologa. El campo de la salud es, uno de los ms
beneficiados con el desarrollo de esta tecnologa. Las investigaciones que se
realizan en esta rea estn enfocadas a un diagnstico oportuno de
enfermedades, as como su posible tratamiento a travs de la terapia con
molculas recombinantes e introduccin de genes. Adems, la manipulacin de
genes proporciona una herramienta fundamental para la eliminacin futura de
enfermedades mortales para el hombre. Por estas razones resulta til que el
mdico de asistencia est familiarizado con conceptos bsicos sobre biologa
molecular, su aplicacin en la investigacin biomdica, y en especial con sus
posibles aplicaciones clnicas, conceptos estos que aparecen cada vez con mayor
frecuencia en toda la literatura biomdica, tanto bsica como clnica.



Principios de clonacin molecular

La denominacin "ADN recombinante" se refiere a combinaciones muevas de
ADN creadas entre secuencias o fragmentos de esta molcula (los cuales son de
inters por alguna razn) y molculas de ADN bacteriano (o de otra clase)
capaces de duplicarse indefinidamente en el laboratorio (Freifelder, 1983). En este
proceso, primero se obtiene un fragmento del ADN de inters denominado inserto,
el cual se une a otra molcula de ADN (generalmente de mayor tamao) llamado
vector. Posteriormente se lleva a cabo el proceso de clonacin molecular en s, en
el cual se introduce el ADN recombinante en una clula receptora y esta
finalmente al multiplicarse da lugar a nuevas clulas con similares caractersticas a
ella; obtenindose de esta manera lo que se denomina un clon. Por consiguiente
un clon no es ms que un grupo grande de clulas, molculas de ADN o bacterias
que surge de una clula o molcula ancestral y son idnticas a esta; y clonacin
es el proceso que le da origen
Las clulas receptoras del ADN hbrido pueden ser tanto procariotas como
eucariotas y el proceso de introduccin del mismo se denomina transformacin
para las primeras y transfeccin para las segundas

Para llevar a cabo la clonacin molecular se requiere lo siguiente:

a) Una fuente adecuada de ADN: Las fuentes ms importantes de ADN para
clonacin son el ADN genmico (cromosmico) que contiene los genes completos
y lo que se conoce como ADN complementario (ADNc) que se obtiene a partir del
ARN mensajero (ARNm) bajo la accin de la enzima transcriptasa reversa o
transcriptasa inversa. Esta enzima es capaz de sintetizar ADN a partir del ARN el
cual le sirve como molde. El empleo de una u otra fuente depende de los objetivos
que se persigan con el estudio a realizar.

b) Vectores de clonacin (ADN recombinante): Un vector de clonacin es una
molcula pequea de ADN que puede replicarse de manera autnoma en un
husped (clulas bacterianas o de levaduras), a partir de las cuales es posible
aislarlo en forma pura para el anlisis. Los vectores se utilizan para clonacin
porque pueden seguir su desarrollo normal a pesar de que secuencias adicionales
de ADN sean incorporadas en su material gentico; se autorreplican utilizando la
maquinaria enzimtica de la clula husped, y en este proceso, no se mezclan con
el ADN genmico de la clula


Debido a que los vectores de clonacin pueden generar un gran nmero de copias
por clula, ya que los huspedes bacterianos o de levaduras pueden crecer
indefinidamente en el laboratorio, es posible obtener grandes cantidades de
secuencias del ADN de inters. Cierto nmero de vectores se utiliza de modo
comn para este propsito, cada uno con ventajas y limitaciones y dentro de ellos
tenemos:

Plsmidos: Son molculas circulares de ADN de doble cadena que se replican de
modo extracromosmico en bacterias, o menos comnmente en levaduras. En
ellos se encuentran genes que le confieren al organismo que los posee resistencia
a algunos antibiticos, as como genes involucrados en la produccin de toxinas y
la degradacin de productos naturales

Bacterifagos: Son virus que infectan a las bacterias y estn constituidos, segn
su clase, por un ncleo de ADN o ARN y una cubierta proteica; algunos presentan
una cola, y son incapaces de replicarse autnomamente por lo que necesitan
infectar a la clula para poder hacerlo. Dentro de los fagos ms utilizados como
vehculos moleculares de clonacin, se encuentran el lambda (l ) y sus derivados
Csmidos: Son bsicamente plsmidos que emplean la habilidad de las
partculas infecciosas del bacterifago l para "empaquetar" de manera eficiente
grandes piezas lineales de ADN e introducirlas en las clulas bacterianas. Estos
vectores se reproducen de igual manera que los plsmidos en las bacterias
"Cromosomas artificiales" de levadura: Adems de los vectores anteriormente
mencionados, existe otro tipo que permite clonar hebras de ADN de gran tamao y
que se conocen como cromosomas artificiales de levadura (YAC, del ingls yeast
artificial chromosome). Este tipo de vector es capaz de replicarse en el husped
Saccharomyces cerevisiae (levadura comn usada en panadera) y tiene la
estructura semejante a los cromosomas de levadura normales

c) Enzimas que permitan la escisin o corte en sitios especficos del
fragmento de ADN a clonar y su posterior fusin con el vector: Existe un
grupo de enzimas con funciones diferentes que tienen gran aplicacin en
ingeniera gentica; de ellas ya se ha mencionado a la transcriptasa inversa. Nos
referiremos con ms detalle ahora a las endonucleasas de restriccin o enzimas
de restriccin y a la ADN ligasa como tiles herramientas en el proceso de
clonacin de genes.

Endonucleasas de restriccin: Las endonucleasas son enzimas que cortan al
ADN en secuencias especficas dentro de la molcula (contrario a las
exonucleasas, que digieren a las molculas de ADN por sus extremos) Estas
enzimas se encuentran en una amplia variedad de especies bacterianas y su
funcin biolgica consiste en reconocer y romper el ADN ajeno que puede
penetrar en la clula (por ejemplo, ADN procedente de bacterifagos) De esta
forma estas endonucleasas restringen el funcionamiento de los fagos en el interior
de la bacteria, motivo por el cual originalmente se les llam enzimas de restriccin
El ADN propio, sin embargo, no es digerido porque las bacterias cuentan con un
mecanismo que impide que esto ocurra. As, al conferir la naturaleza este sistema
de defensa a las bacterias, otorg tambin a los cientficos un arsenal de enzimas
altamente especfico para manipular el ADN

ADN ligasa: La ADN ligasa es una enzima que tiene la capacidad de formar
enlaces fosfodister en una cadena de ADN rota, pudiendo unir covalentemente
ADNs de diferentes orgenes para formar molculas hbridas. Existen diversos
mtodos en los que se aprovecha la accin de esta enzima para la unin del
fragmento a clonar con el vector; la seleccin de uno u otro depende de las
caractersticas de los extremos de ambas molculas de ADN

d) Mtodos de transformacin o transfeccin celular: Una vez obtenido el ADN
recombinante, el prximo paso es introducirlo dentro de una clula husped que le
ofrezca la maquinaria necesaria para su autorreplicacin. Como no es objetivo de
este trabajo explicar en detalles cada uno de los mtodos que existen para estos
fines, nos limitaremos slo a mencionar algunos de los ms empleados que son:
electroporacin, transfeccin mediada por calcio-fsforo o DEAE-dextrn, empleo
de polibreno, fusin de protoplastos, empleo de liposomas, microinyeccin directa
al ncleo, uso de virus

e) Mtodos para analizar los clones resultantes hasta la identificacin del
que contiene el gen de inters: Un importante paso en el proceso de clonacin
es la identificacin de aquel clon o clones que contienen el ADN recombinante.
An en las mejores condiciones los plsmidos se mantienen de forma estable slo
en una minora de la poblacin bacteriana. Para identificar estos transformantes se
emplean varios mtodos, los cuales tambin solamente sern mencionados. As
tenemos los ensayos de hibridacin, los mtodos inmunolgicos (anticuerpos
radiactivos, inmunoprecipitacin el empleo de marcadores de seleccin etc.


Mtodos de anlisis de cidos nucleicos.

Hibridacin molecular.
La hibridacin molecular es uno de los pilares de la mayor parte de las
metodologas que se utilizan en el laboratorio de biologa molecular. Un grupo de
estas tcnicas se ha diseado para identificar determinadas secuencias en los
cidos nucleicos.
La hibridacin se refiere al apareamiento especfico que ocurre entre cadenas de
cidos nucleicos con secuencias complementarias, proceso que es anlogo a la
reaccin antgeno-anticuerpo, pero con la diferencia de que en la hibridacin en
lugar de anticuerpos se emplean las llamadas sondas. Las sondas no son ms
que fragmentos cortos de ADN o ARN sintetizados in vitro y que se marcan con
sustancias radiactivas fluorescentes o de otro tipo a fin de hacer posible su
posterior deteccin y de esta manera la identificacin de la secuencia de ADN o
ARN de inters
A continuacin se sealan diferentes procedimientos de laboratorio que utilizan el
principio de hibridacin y en los que la variacin est dada por el tipo de cido
nucleico utilizado, el soporte en que se lleva a cabo la hibridacin y la forma de
colocar los cidos en la membrana.
Southern blot: Es una tcnica empleada para detectar secuencias especficas de
ADN. Para llevar a cabo hibridaciones de este tipo, se asla el ADN de un tejido o
lnea celular, luego se purifica, y se digiere con enzimas de restriccin especficas.
Los fragmentos generados se separan mediante electroforesis y despus son
transferidos a la membrana que sirve de soporte (gel de agarosa). Este proceso se
lleva a cabo colocando el gel de agarosa sobre papel filtro previamente remojado
en una solucin llamada de transferencia (solucin salina concentrada). A
continuacin se sita la membrana sobre el gel y encima de esta una pila de papel
filtro seca, y por capilaridad la solucin de transferencia es atrada a la pila de
papel filtro, arrastrando consigo al ADN hacia la membrana, donde queda
inmovilizado conservando la misma posicin relativa que ocupaba en el gel.
Luego, el ADN puede ser hibridado en la membrana con una sonda marcada

Debido a que la transferencia del ADN del gel a la membrana se produce por
capilaridad, con el mismo principio utilizado por aos para limpiar manchas con
papel secante, el proceso se conoce en ingls como blotting; Southern propuso
utilizar el trmino blot (secado) o blotting para referirse a esta tcnica y
actualmente se conoce como Southern blot

Esta tcnica se ha empleado para el diagnstico y caracterizacin de diversas
inmunodeficiencias, la distrofia muscular de Duchenne, la hipoplasia adrenal
congnita, la deficiencia de glicerol-quinasa, la distrofia miotnica severa y en
anlisis de mutaciones de genes en clulas B de leucemia linfoblstica crnica,
entre otras enfermedades

Northern blot: Es una variante del mtodo anterior en el que en lugar de utilizar
ADN como sustrato de estudio, se emplea ARN. El procedimiento que se sigue es
similar al Southern blot y por analoga con este se le conoce como Northern blot.
Esta tcnica se ha aplicado en estudios de la modulacin de la sntesis de
interleucina 6 en pacientes con artritis reumatoide, en el anlisis de expresin de
receptores que participan en la sntesis de molculas en cultivos celulares, en
anlisis de mutaciones y alteraciones del RNAm de enzimas, y en la regulacin de
la expresin gnica de marcadores moleculares de clulas leucmicas humanas y
molculas del reconocimiento inmunolgico

Western blot: No es un mtodo de anlisis directo de los cidos nucleicos, sino
del producto de la expresin de los genes, o sea las protenas. Aunque difiere de
los anteriores en cuanto a que no existe hibridacin, sino que la identificacin de
las protenas se realiza con anticuerpos marcados, s se mantiene el principio de
la transferencia a la membrana que sirve de soporte posterior a la electroforesis y
previo a la identificacin, y por lo cual siguiendo el juego de palabras ha sido
denominado de esta manera
Esta tcnica permite el desarrollo de pruebas para diferenciar tipos de virus que
infectan a clulas, se ha aplicado en estudios de la variabilidad individual de los
niveles de determinadas enzimas, en la caracterizacin molecular de genes
(Cerezo & Madrid), etc.

Dot blot y slot blot: Son procederes similares al Northern con la diferencia de que
el ARN no es sometido a electroforesis sino que se sita directamente sobre la
membrana. Este tipo de anlisis requiere de un molde asociado a succin con
vaco para colocar el ARN que puede producir crculos o puntos (dot blot) o
hendiduras (slot blot). Este tipo de prueba es muy til cuando se quieren estudiar
gran nmero de muestras, pero tienen la limitante de no ofrecer informacin sobre
el tamao de las bandas del ARN hibridado

Hibridacin de colonias bacterianas: Es un mtodo empleado para identificar
colonias bacterianas que contengan determinada secuencia de cidos nucleicos
de inters. La metodologa consiste en sembrar los clones sobre placas de Petri
con agar para despus de crecidos transferirlos a membranas de nylon o
nitrocelulosa y luego realizar la hibridacin

Hibridacin in situ: Es un mtodo histoqumico que emplea a la biologa
molecular de la misma manera que la inmunohistoqumica utiliza los mtodos de la
inmunologa. La especificidad de la hibridacin in situ (HIS) se basa en la unin
recproca de una secuencia de oligonucletidos (la sonda), con una secuencia
complementaria de nucletidos presente en las molculas de ARN o ADN dentro
del tejido

Entre las ventajas de esta tcnica estn su alto grado de resolucin espacial que
permite la localizacin de secuencias gnicas a escala cromosmica, con lo que
se pueden detectar translocaciones y otras alteraciones, as como tambin el
estudio de expresin gnica a escala celular y subcelular. Otra de sus ventajas es
que se puede realizar en material fijado e incluido en parafina lo que permite
realizar estudios retrospectivos en material de archivo. Por otra parte la cantidad
de tejido requerido para realizar un estudio de HIS es mnima en comparacin con
otras tcnicas de biologa molecular

Entre las principales aplicaciones de la HIS tenemos la deteccin de ARN o ADN
de origen viral, el anlisis de la expresin gnica (deteccin de ARNm) y los
anlisis cromosmicos

La HIS con fluorescencia (FISH) es una importante herramienta de uso rutinario
en investigacin y con grandes posibilidades de aplicacin en el diagnstico de
enfermedades neoplsicas, genticas, estudios a nivel cromosmico, etc. En ella
la sonda se marca con sustancias fluorescentes que se visualizan despus
mediante microscopa.






Mapas de restriccin.

Esta tcnica se basa en el principio de la enzimologa de restriccin donde de una
molcula de ADN dada se obtendrn siempre los mismos fragmentos cada vez
que sea expuesta a una enzima de restriccin particular. La complejidad del mapa
depende del tamao de la molcula (a mayor nmero de bases ser mayor el
nmero de sitios de restriccin) y del nmero de enzimas utilizadas. De esta
forma, dos molculas de ADN del mismo tamao pueden ser fcilmente
diferenciadas por los mapas de restriccin que producen al tratarlas con las
mismas enzimas

Este mismo principio lo utiliza el procedimiento denominado anlisis de
polimorfismos de longitud de fragmentos de restriccin (RFLP), pero
aprovechando el hecho de la existencia de variaciones en la constitucin gentica
de la poblacin (polimorfismo gentico), que hace que se observen diferencias
entre los individuos en cuanto al nmero y longitud de los fragmentos producidos.
La existencia de los RFLPs es la base de la tcnica que se ha denominado huellas
digitales del ADN y que permite establecer inequvocamente la relacin padres e
hijos, entre otras aplicaciones.

Reaccin en cadena de la polimerasa.

La reaccin en cadena de la polimerasa o PCR como comnmente se conoce (del
ingls polymerase chain reaction) es un mtodo enzimtico de amplificacin de
secuencias especficas de ADN, concebido por Kary Mullis y sus colaboradores a
principios de los aos 80. Este mtodo permite la sntesis in vitro de un fragmento
de ADN de forma tal que, en cada ciclo del proceso, se duplica el nmero de
molculas

El principio del PCR consiste en determinar la secuencia de inters y seleccionar
pequeos segmentos de nucletidos llamados iniciadores o cebadores,
complementarios con la secuencia de nucletidos de los extremos opuestos de las
cadenas que flanquean a dicha secuencia, a partir de los cuales se inicia la
elongacin o sntesis de nuevas cadenas en el extremo 3' de cada iniciador

En esta tcnica se consideran importantes los siguientes parmetros: un
suministro abundante de iniciadores y de desoxinucletidos trifosfatados (dNTPs);
una fuente renovada de ADN polimerasa (enzima encargada de la sntesis de las
cadenas complementarias); y los ciclos peridicos de cambios de temperatura.
Estos ltimos consisten en: desnaturalizacin del ADN a 100 C, alineamiento de
los iniciadores con las secuencias de inters entre 50 y 60 C y sntesis del ADN a
72 C. Estas temperaturas pueden variar de acuerdo con las condiciones de la
reaccin

Cuando se comenz a utilizar la PCR, el empleo de la ADN polimerasa I de E. coli
haca el proceso muy tedioso, pues esta enzima perda su funcin al incrementar
la temperatura, lo que obligaba a agregar ADN polimerasa en cada ciclo. Con la
introduccin de la llamada Taq polimerasa, una ADN polimerasa aislada de la
bacteria Thermus aquaticus que vive en aguas termales y tiene una temperatura
ptima entre 70 y 75 C, la PCR se hizo ms eficiente, ms accesible e incluso fue
posible automatizarla

El poder de la amplificacin con PCR es tan alto que los ms pequeos
contaminantes pueden dar resultados falsos positivos, por lo que el material y las
soluciones a emplear deben ser escrupulosamente controlados.

Las aplicaciones de la PCR son mltiples y parecen estar slo limitadas por la
imaginacin de los cientficos. Entre ellas tenemos: la amplificacin de fragmentos
de genes como rpida alternativa de la clonacin, la modificacin de fragmentos
de ADN, la deteccin sensible de microorganismos seguido de una segura
genotipificacin, si se desea, el anlisis de muestras arqueolgicas y estudios
antropolgicos, la deteccin de mutaciones importantes en enfermedades
hereditarias, transformacin maligna o tipaje de tejidos, el anlisis de marcadores
genticos para aplicaciones forenses, pruebas de paternidad y para el mapeo de
rasgos hereditarios, el estudio de expresin de genes, entre otras









Secuenciacin nucleotdica del ADN.

La consecuencia inmediata de clonar un fragmento de ADN es la posibilidad de
secuenciarlo. El entendimiento a fondo de la estructura, funcin y mutacin de un
fragmento de ADN depende en primera instancia de conocer la estructura primaria
de sus nucletidos; es decir, la secuencia de nucletidos.

Bsicamente existen dos mtodos para la secuenciacin del ADN, uno qumico y
otro enzimtico, desarrollados en la dcada de los 70 por Maxam y Gilbert y
Sanger y colaboradores, respectivamente.

Conocer la secuencia de un segmento de ADN que ha sido clonado, representa
una gran ventaja para su caracterizacin ya que, a travs de la secuencia es
posible determinar las diferentes regiones que conforman un gen, deducir la
secuencia de aminocidos para la sntesis de una protena y la formacin de sus
estructuras secundarias. En medicina la secuenciacin del ADN tiene importantes
implicaciones en la comprensin de los mecanismos fisiopatolgicos que se
generan por la inferencia en la secuencia y homologa entre genes. El
conocimiento de genes responsables de enfermedades hereditarias hace posible
mediante secuenciacin, identificar a individuos portadores asintomticos o en
fase preclnica. La secuenciacin del genoma de determinados agentes biolgicos
patgenos por ejemplo Haemophilus influenzae y Helicobacter pilory permite,
adems de comprender los mecanismos de produccin de la enfermedad,
desarrollar nuevos mtodos diagnsticos y teraputicos.

Proyecto del Genoma Humano

El Proyecto del Genoma Humano (PGH), esfuerzo internacional considerado por
muchos como una de las empresa ms grandes emprendidas por el hombre en
todos los tiempos, dirigido a entender, fundamentalmente, nuestro genoma,
comenz en Estados Unidos en 1990 cuando al Instituto Nacional de Salud y al
Departamento de Energa se unieron otras instituciones del resto del mundo para
descifrar la masiva cantidad de informacin contenida en l. Su ejecucin tom
como base el arsenal de conocimientos y herramientas aportados por la biologa
molecular y la computacin hasta ese momento. Este proyecto en sus inicios se
traz un grupo importante de ambiciosas metas las cuales han sido sobrepasadas
en su mayora. Su conclusin estaba prevista para el ao 2005, sin embargo, ya el
14 de abril de 2003, algo ms de dos aos antes y coincidiendo con el 50
aniversario de la descripcin por James Watson y Francis Crick de la doble hlice
del ADN; el Consorcio Internacional para la Secuenciacin del Genoma Humano
anunciaba su culminacin exitosa, la cual alcanz una exactitud del 99,99 %, lo
que equivaldra a slo un error por cada 10000 pb

La secuenciacin del genoma humano es slo el comienzo de lo que ha sido
denominado era genmica y el conocimiento que de ello se derive permitir arrojar
luz sobre un amplio espectro de cuestiones bsicas tales como, cuntos genes
tenemos, cmo trabajan las clulas, como evolucionaron los seres vivientes, cmo
una simple clula se desarrolla en complejas criaturas, qu sucede exactamente
cuando enfermamos. Adems de responder innumerables preguntas sobre
nuestra individualidad molecular. Las aplicaciones directas en medicina incluyen el
diagnstico, pronstico y prevencin de diversas enfermedades, as como su
tratamiento efectivo. En 1990, por ejemplo, se tenia idea de la existencia de
alrededor de 100 genes involucrados en determinadas enfermedades; hoy se han
identificado ms de 1400 y la lista contina incrementndose. Muchas de estas
enfermedades sern blanco de disciplinas que se han desarrollando en los ltimos
aos, como la farmacogenmica y la terapia basada en los genes
Campos de aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante

Uno de los principales objetivos de la ingeniera gentica ha sido la produccin de
grandes cantidades de protenas, las cuales por dems pueden ser difciles de
obtener de sus fuentes naturales (bien porque son producidas en baja
concentracin por la clula o porque su manipulacin es demasiado peligrosa).
La importancia de obtener tales protenas por esta va estriba, entre otros
aspectos, en su bajo costo de produccin y en que algunas de ellas como la
insulina, el interfern y la hormona del crecimiento (somatotropina), concebidas
para terapia en humanos por otros medios, pueden inducir reacciones alrgicas
La fuente principal de protenas va recombinacin gentica in vitro son los
microorganismos, aunque los animales y plantas tambin son empleados en
ensayos para obtener protenas de inters; as por ejemplo investigadores de la
misma compaa que clon la oveja Dolly en Escocia a mediados de los aos 90,
lograron la obtencin de una oveja transgnica que produce en su leche la
protena de la coagulacin humana factor IX
La hemoglobina humana recombinante ha sido sintetizada en cultivos de
bacterias, levaduras y en clulas animales transfectados, sin embargo, las plantas
transgnicas parecen ofrecer, a juicio de los investigadores, un nmero de
ventajas que incluyen la reduccin de los problemas del envejecimiento de la
sangre de banco, as como la exclusin de contaminantes derivados de fuentes
bacterianas o animales
Se trabaja, por otra parte, en la produccin de animales transgnicos y clonados
que expresaran inmunoglobulinas y otros productos biofarmacuticos para el
tratamiento de enfermedades autoinmunes
Son tambin ejemplos del poder de la ingeniera gentica en el terreno de la
medicina la identificacin de genes sin conocer la funcin de sus productos en
procesos patolgicos como la ataxia telangiectasia, la poliquistosis renal y el
subtipo infantil de lipofuscinosis ceroide
En otras enfermedades se ha podido profundizar en su fisiopatologa, tal es el
caso de la fibrosis qustica y la enfermedad de Alzheimer
La recombinacin gentica in vitro ha permitido, adems, encontrar los genes
responsables de enfermedades como la distrofia miotnica, la enfermedad de
Huntington, la hemocromatosis hereditaria) y algunos tipos de inmunodeficiencias

Uno de los grandes retos que tiene la medicina actual es llegar a conocer con
certeza los mecanismos y procesos involucrados en la gnesis del cncer y poder
actuar en consecuencia. La clonacin de genes ha revelado la existencia de dos
categoras gnicas que se caracterizan por la presencia de mutaciones
especficas y que tienen un importante papel en la expresin de clulas
cancerosas, estas categoras corresponden a los oncogenes y a los genes
supresores del cncer. Se ha agregado a estas una nueva categora cuyas
mutaciones se vinculan especficamente con el cncer colorectal, se trata de los
genes de la reparacin de errores de apareamiento del ADN

Un enfoque no menos importante en la utilizacin de la tecnologa del ADN
recombinante en medicina es la terapia gnica. Como concepto la terapia gnica
consiste en la transferencia de material gentico a las clulas de un enfermo,
producindole efectos teraputicos benficos. En principio se podran tratar
enfermedades hereditarias como la inmunodeficiencia severa combinada, la
anemia falciforme, la distrofia muscular, la fibrosis qustica, etc, aunque de modo
general cualquier afeccin en la que se pudiese demostrar una alteracin gnica
como factor involucrado en su fisiopatologa; sera susceptible de recibir esta
teraputica.

Aun cuando hasta el momento no se dispone de un vector que permita una
transferencia de genes directamente dentro del paciente, que sea eficiente,
efectiva y estable, la terapia de genes es fuente de esperanzas para
investigadores, mdicos, pacientes y familiares
Los vectores virales aunque han sido los ms empleados no satisfacen las
expectativas iniciales. Ahora se prueba con otros vectores no virales como los
liposomas (Ramsey, 1996) y se piensa incluso en usar las clulas indiferenciadas
y con alta capacidad para multiplicarse de la mdula sea, para modificarlas
genticamente en el exterior y luego tratar con ellas no slo trastornos
hematolgicos, sino tambin, afecciones del colgeno, hueso y msculo; dada su
capacidad de distribuirse por todo el organismo despus de madurar
CONCLUSIONES

Hoy prcticamente no existen dudas de que la Biologa Molecular con sus
mtodos, unido a los conocimientos derivados del Proyecto del Genoma Humano
afectar el curso de la ciencia y la medicina a lo largo del siglo 21. La
fisiopatologa de ms y ms enfermedades ser comprendida hasta el nivel
molecular, se desarrollarn nuevas drogas dirigidas contra las causas
subyacentes de las enfermedades, las pruebas genticas antes de prescribir una
droga asegurarn que cada individuo reciba aquellos medicamentos que traten
sus malestares efectivamente sin efectos colaterales, aumentar nuestro
conocimiento sobre cuestiones bsicas de Biologa, los cientficos entendern
mejor los componentes esenciales de la vida y cmo funcionan las clulas y
organismos; sin embargo, el reto fundamental estar en mantener un balance
saludable que evite los daos potenciales derivados de estos avances, y permita
preservarlos slo para darle un uso adecuado.