14

TrabajoPrcticoN1
ANLISISDECROMOSOMASENMITOSIS

Lamitosisesunprocesodedivisincelular,Constituyeunmecanismoestableque
tienen las clulas para distribuir de forma exacta la informacin gentica entre las
clulas hijas. La divisin celular consta de dos procesos fundamentales: la mitosis o
divisin del ncleo y la citocinesis o divisin del citoplasma. Ambos procesos son
independientes pero deben ocurrir sincronizadamente. El resultado son dos clulas
hijasconigualdotacincromosmicaentreseigualaladelaclulamadre.Elperodo
entredosdivisionescelularesdefinealciclocelular(Fig.1).

Figura1Ciclocelular.

Cuandounaclulanoseestdividiendosedicequeesteninterfase(Fig.2A),lo
que corresponde al lapso de tiempo que transcurre entre dos mitosis sucesivas.
Durante este perodo la cromatina est descondensada y existe mucha actividad
metablicaporqueescuandolamayorpartedelosgenesseexpresan,aunqueencada
tipo celular lo harn solo los necesarios para que desarrolle su funcin especfica. Un
suceso importante de la interfase es la replicacin del ADN que ocurre en el perodo
denominado S, tras la cual los cromosomas ya tienen dos rplicas idnticas
denominadas cromtidas hermanas. Esta fase va antecedida por el perodo G
1
y
seguidadelperodoG
2
enlosquehaycrecimientocelular,actividadtranscripcionalyla
clula se prepara para dividirse. A continuacin se iniciara la mitosis. Si despus de
unamitosislaclulanovaadividirsedenuevo,sequedaenloquellamamosfaseG
0
.
SiindicamoscomoMalamitosis,elciclocelularesunasucesincclicadelosdistintos
perodos.
Unavezqueseinicia,elprocesomitticotranscurredeformacontinuasinque
haya interrupciones, pero ocurren una serie de acontecimientos que son clave para
queelrepartodelainformacingenticaseacorrectoyenlosquenosbasamospara
distinguircuatroetapas:

C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
15

Figura2 Mitosisen clulasde la puntade la razdeLiliumregale.A)Interfase.B)

Profasetemprana.C)Profasetarda.D)Metafase.E)Anafase.F)Telofase(Extradode
McLeish&Noad,1958).

Profase (Fig. 2 B y C). Durante este perodo la fibra de cromatina, que ha ido
organizndose en plegamientos cada vez ms complejos, aparece como cromosomas
visiblesquevancondensndosegradualmente.Hay2ncromosomasenlaclulaycada
uno de ellos consta de dos cromtidas hermanas con igual informacin y morfologa.
stasaparecenunidasaniveldelcentrmeroyalolargodelosbrazoscromosmicos
gracias a complejos proteicos. Al final de la profase se desorganizan los nuclolos y
desparecelamembrananuclearcuyoscomponentesquedandispersosenelncleo.
Metafase (Fig. 2 D). Los cromosomas se encuentran ahora libres en el
citoplasma y los centrmeros de cada cromosoma contactan con las fibras del huso,
que se organizan en el centro organizador de microtbulos (MTOC), formado por los
centrolos (en clulas animales), que actan como centro de atraccin de los
cromosomas hacia los polos, y la masa amorfa pericentriolar. La intervencin de las
fibras del huso y de otras protenas de movimiento cromosmico permite a los
cromosomas organizarse en la llamada placa metafsica. Cada cromtida hermana se
orientahaciaunpolodistintoloquegarantizaelrepartodelainformacingenticade
cada cromosoma a las dos clulas hijas. Ahora los cromosomas alcanzan su mximo
gradodecondensacinysumorfologasehaceevidente(Fig.3).
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
16

Figura3Morfologacromosmica.

El centrmero es la constriccin primaria que aparece en todos los

cromosomasydondeseasocianloscinetocorosoestructuraproteicaalaqueseunen
lasfibrasdehusomittico.Suposicindefineelnmerodebrazosdeuncromosoma.
Si est situado en un extremo del cromosoma, ste tendr un solo brazo y si est en
otraposicinveremoscromosomascondosbrazos.Elcinetocorofuncionaamodode
un interfaz entre el centrmero y las fibras del huso. En algunos cromosomas
aparecenconstriccionessecundarias,normalmenteasociadasalareginorganizadora
nucleolar(NOR)dondeseencuentranlosgenesparaARNribosmico.Elfragmentode
cromosomaquevadesdela constriccinsecundaria al telmerosedenominasatlite
cromosmico.Eltelmeroconstituyeelextremocromosmicopor lo quehayunoen
cada brazo cromosmico y juega un papel fundamental en el mantenimiento de la
integridaddelcromosoma.
Anafase (Fig. 2 E). Esta fase es, en general, la etapa ms corta de la mitosis.
Cada centrmero se divide en dos y se desorganizan las protenas que mantenan
unidasalascromtidashermanas,loquelespermitemigrarapolosopuestos.Encada
polocelularveremosungrupodecromosomas(2n)conunasolacromtidaorientados
haciaelpolocorrespondiente.
Telofase (Fig. 2 F). Los cromosomas agrupados en cada polo comienzan a
descondensarse y los nucleolos y la membrana nuclear vuelven a organizarse a partir
dematerialpreexistenteydenuevasntesis.Ladivisincelularsecompletaalfinalde
esta etapa con la citocinesis, donde hay tambin un reparto de los orgnulos y
componentes citoplsmicos a las dos clulas hijas, aunque no se realiza de forma tan
precisacomodurantelamitosis.Elresultadofinaldelprocesomitticosondosclulas
con2ncromosomas.

La caracterizacin cromosmica se realiza en metafase mittica debido a que, en

esta fase, los cromosomas han alcanzado su mximo grado de condensacin y sus
lmites estn perfectamente definidos. En esta fase, los cromosomas tambin
muestranlasmejorescondicionesdetincin.Estohacequepodamosconocereneste
momento cuntos cromosomas tieneunaespecie,dndeselocalizael centrmero(o
constriccin primaria), el nmero de brazos cromosmicos que presentan o la
existencia de constricciones secundarias y satlites, identificar homlogos y
confeccionaruncariotipoorealizarestudioscomparativosentreespeciesyconocerla
evolucincariotpicaocurridadentrodeuntaxn.
Para este anlisis generalmente se emplean tejidos que presentan un alto ndice
mittico.
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
17
ndicemittico(IM)=N de clulas en di visin / N total de clulas observadas
Para poder analizar la morfologa cromosmica, los tejidos son pretratados con
diversas sustancias que inhiben la formacin del huso mittico (colchicina, 8
hidroxiquinolena, paclosol, etc.) a los efectos de acumular metafases, dispersar los
cromosomas enel citoplasma y producir una mayor condensacin delos mismos. Los
materiales se fijan y luego se tien con colorantes nucleares (fucsina bsica, orcena,
carmn, giemsa, etc.). Con estos mtodos de tincin, los cromosomas metafsicos
observadosconunmicroscopiopticoaparecenuniformementeteidos,exceptoenel
centrmero(constriccinprimaria)yenalgunasconstriccionesmenores(secundarias).

Objetivos
Reconocerlasdistintasfasesdelamitosis.
Comprender la importancia de determinar el ndice mittico para el anlisis de los
cromosomasenmitosis,
Analizarlasdiferenciasentrelosmtodosdeobtencindepreparados.

Materiales
Guadetrabajosprcticos.
Preparadosdecentenootorgadosporlactedra.
Elementosdedibujo(hojasblancas,lpiznegro,gomadeborrar,etc.).
Calculadora.

Actividades
1) Observe detenidamente los preparados y diferencie las clulas en interfase y en
divisin.Luego,completeelsiguientecuadroindicandoelnmerodeclulasqueestn
encadafase.Apartirdeestainformacin,calculeelndicemittico(IM).

Horario
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Interfase
Profase
Metafase
Anafase
Telofase
Total
IM

2)Encadaunadelasmicrofotografasdecebolla(Alliumcepa)delaFigura4indiquela
fasedelamitosisenlaqueseencuentralaclulaysielmaterialfuesometidoonoa
pretratamiento. Cuando fuera posible, indique el nmero cromosmico (2n) de la
especieestudiada.

C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
18

Figura4CromosomasmitticosdeAlliumcepaconysinpretratamiento.(Gentileza
deA.Fernndez).

Cuestionario
1. Un individuo diploide y homocigtico AA, Cuntas copias del alelo A tiene en el
periodoG
1
delainterfaseycuntasenmetafase?
2. Un individuo diploide y heterocigtico Aa, Cuntas copias del alelo A tiene en el
periodoG
1
delainterfaseycuntasenmetafase?
3. Porquesimportantedeterminarelndicemittico?
4. En qu fase del ciclo celular se observan los cromosomas para el anlisis
cariotpico?Porqu?
5. Culessonlasdiferenciasentrelospreparadosrealizadosconpretratamientoysin
pretratamientoenplantas?
6. La cebolla, Allium cepa es una especie vegetal con 2n=16 cromosomas Cuntas
cromtidastienecadaunodeloscromosomasdecebollaentelofase?
7. Lascromtidasdeuncromosomasonidnticasalascromtidasdesuhomlogo?
Porqu?

Bibliografa
De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El
Ateneo,BuenosAires.
Lacadena,J.R.1996.Citogentica.1edicin.Ed.Complutense.Madrid.
McLeish,J.&B.Noad.1958.Lookingatchromosomes.Copyrigth.Macmillan.
Strickberger,M.W.1988.Gentica.3edicin.Ed.Omega,Barcelona.
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m
C
l
i
c
k

t
o

b
u
y

N
O
W
!
P
D
F
-XChan
g
e
w
w
w
.
t
r
a
c
k
er -s of t w
a
r
e
.
c
o
m