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1. Introduccin

A partir del desarrollo de la biotecnologa moderna y distintas tcnicas moleculares
llamadas de ADN recombinante se establece una manera distinta de tener acceso
y utilizar la diversidad gentica. La tecnologa del ADN recombinante permite
modificar directamente el ADN mediante el uso de unas protenas particulares
llamadas enzimas de restriccin.

Estas protenas se pueden considerar como las tijeras moleculares ya que
pueden cortar las hebras de ADN en porciones y en sitios especficos. Otro
componente esencial para la produccin de molculas de ADN recombinante son
las ligasas. Como su nombre lo indica estas enzimas ligan porciones separadas
de ADN y por lo tanto las podemos considerar el pegamento entre estas
molculas. As pues, la habilidad de cortar, modificar y pegar molculas de ADN,
actividades clave de la ingeniera gentica, es lo que posibilita crear ADN
recombinante.

La tecnologa del DNA recombinante tiene varios usos, uno de estos es el
desarrollo de organismos genticamente modificados (OGM) conocidos tambin
como organismos transgnicos. Esta aplicacin de la biotecnologa nos permite
acceder y utilizar de manera relativamente ms precisa a la diversidad de genes
pero, al mismo tiempo, conlleva nuevas incertidumbres y por lo tanto debe
utilizarse bajo ciertos lineamientos que garanticen su uso seguro.



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2. La importancia de las tcnicas de fitomejoramiento para incrementar
la produccin agrcola

Mercado Gonzles, Gabriela, 2003; menciona que el fitomejoramiento tiene sus
bases en los experimentos realizados hace ms de un siglo por Gregor Mendel, en
los que concluy que las caractersticas de los organismos estn dadas por
factores discretos heredables (genes), y no son resultado, como se crea
anteriormente, de la mezcla azarosa de las cualidades de los progenitores, con
este conocimiento comenz, entre los cultivos de mayor importancia, el mtodo
tradicional de produccin de cultivares mejorados mediante cruzas dirigidas entre
individuos, de la misma especie o de especies estrechamente relacionadas.

Los individuos sobresalientes son seleccionados en ciclos subsecuentes de
cultivo, hasta que despus de numerosos eventos de cruzas y retrocruzas,
aunadas a laboriosas pruebas de campo, se obtiene una generacin portadora de
la caracterstica deseada que es reconocida como una nueva variedad, todo el
proceso de seleccin va acompaado de colectas, tanto de semillas como de
plantas completas, que son almacenadas en bancos de germoplasma quedando a
disposicin para posteriores usos.

Cabe destacar que una importante limitante de todo proyecto de produccin de
nuevas variedades vegetales es la incompatibilidad sexual entre las especies de
plantas seleccionadas como progenitores y que si la divergencia gentica entre
las especies involucradas es muy grande, la probabilidad de obtener semillas
viables de tal cruza es demasiado baja y mayor ser el nmero de generaciones
requerido para incorporar en la progenie el carcter elegido.

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Los objetivos principales de los programas de fitomejoramiento actuales siguen
siendo aumentar el rendimiento, disminuir las prdidas ocasionadas por plagas y
enfermedades y reducir los costos de produccin, sin embargo, ahora tambin se
tiene inters de emplear los cultivos agrcolas para generar productos de alto valor
agregado para usos en la industria qumica, alimenticia y farmacutica.

As, hoy en da la ingeniera gentica, definida como la manipulacin en el
laboratorio de la informacin gentica de un organismo utilizando las tcnicas de
la biologa molecular, se presenta como una poderosa alternativa para obtener
cultivares transgnicos que superen en su productividad y calidad a sus
contrapartes obtenidas por mtodos tradicionales.

La ingeniera gentica permite el acceso y la manipulacin directa de la
informacin gentica de cualquier ser vivo, e incluso posibilita la creacin de
genes sintticos. Por ello, esta tecnologa, rompe con las barreras impuestas por
la incompatibilidad sexual y hace posible introducir en plantas, genes provenientes
no slo de otras especies vegetales evolutivamente distantes, sino incluso de
hongos, virus, bacterias y animales, esta modificacin se lleva a cabo en un ciclo.

Lo anterior se basa en el principio de que el cdigo gentico de los organismos
vivos es universal, es por ello que la obtencin de plantas transgnicas
(portadoras de un gene ajeno o heterlogo) empleando alguna de las tcnicas
disponibles para tal efecto, representa hoy en da uno de los medios ms verstil y
preciso para producir variedades vegetales mejoradas.



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3. Mtodos de transformacin gentica de plantas

Bartha, R y Atlas, R., 2008; describen que con las metodologas del DNA
recombinante ahora es posible la produccin de organismos modificados
genticamente o transgnicos, en los que se han insertado genes heterlogos
mediante su manipulacin en el laboratorio, particularmente en plantas, el poder
introducir nueva informacin gentica requiere que se cumpla con los siguientes
dos requisitos:

a) disponer de un mtodo para la regeneracin in vitro de la especie de inters
b) contar con un mtodo de transformacin eficiente para la misma

Puesto que las tcnicas de cultivo de tejidos hacen posible que a partir de
cualquier clula o tejido se puedan regenerar plantas completas, su uso resulta
indispensable para la regeneracin de individuos transgnicos que contengan la
nueva informacin gentica, en lo que a transformacin se refiere, es necesario
contar con un mtodo que permita tanto la introduccin del material gentico que
se pretende incorporar, como su integracin estable, funcional y heredable en el
genoma vegetal.

Las plantas transgnicas que se han logrado obtener a la fecha, provienen del uso
de diversos mtodos de transformacin gentica, entre ellos se tiene un mtodo
biolgico y por lo tanto natural, basado en el empleo de una bacteria que vive en
todos los suelos del mundo llamada Agrobacterium tumefaciens, debido a que
inicialmente se pens que el sistema basado en Agrobacterium slo se poda
aplicar a un nmero limitado de especies vegetales (ahora se sabe que puede no
slo transformar todas las especies vegetales sino tambin otros organismos
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como hongos), surgi la necesidad de desarrollar mtodos de transformacin
gentica alternativos.

Entre estos mtodos alternativos se pueden mencionar protocolos fisicoqumicos
de transformacin directa, como la electroporacin de protoplastos y los
tratamientos con polietilenglicol y cloruro de calcio, y mtodos fsicos, como el
bombardeo con micropartculas recubiertas de DNA.

El primer mtodo diseado para la transformacin de clulas vegetales, que ha
resultado el ms exitoso y por consecuencia el ms usado, surgi del estudio
detallado del mecanismo de infeccin de la bacteria fitopatgena Agrobacterium
tumefaciens, desde entonces, los esfuerzos fueron enfocados a conocer los
mecanismos de transferencia de este DNA, con la idea de adecuar este sistema
para transferir genes a plantas.

Estudios orientados a establecer la funcionalidad de genes provenientes de otros
organismos en sistemas vegetales, mostraron que los genes procarinticos o
eucarinticos heterlogos intactos no son reconocidos por la maquinaria de la
planta, y por consiguiente, no son expresados, esto llev a la conclusin de que la
expresin de genes heterlogos en sistemas vegetales, slo sera posible si las
secuencias codificantes de los genes forneos se colocaban bajo el control de
seales transcripcionales funcionales en plantas.

El primer ejemplo exitoso de la expresin de un transgn en clulas vegetales fue
reportado en 1983 y al ao siguiente se obtuvo la primera planta de tabaco
transgnica diseada por ingeniera gentica, tomndose estos avances como el
nacimiento de la poca del fitomejoramiento agrcola por ingeniera gentica.
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La supuesta incapacidad de Agrobacterium para infectar plantas
monocotiledneas, limit por mucho tiempo la transformacin de cultivos tan
importantes como arroz, trigo y maz, este hecho impuls la bsqueda de tcnicas
alternativas y as surgieron la introduccin de DNA a clulas desprovistas de pared
celular (protoplastos), utilizando sustancias permeabilizantes de la membrana
plasmtica, como el polietilenglicol, la aplicacin de pulsos elctricos de alto
voltaje que abren poros en la membrana (electroporacin) y la microinyeccin, que
no es otra cosa que la introduccin directa de DNA en el ncleo de las clulas
vegetales.

La aplicacin de estos mtodos ha sido muy limitada, ya sea por las
inconveniencias que representan el poder regenerar plantas completas a partir de
protoplastos o por lo difcil e imprctico que resulta utilizar la micro inyeccin con
fines masivos y comerciales, las dificultades para la transformacin de cereales
fueron vencidas cuando, en 1987, se dise un acelerador de partculas con el
cual es posible bombardear clulas o segmentos de tejido vegetal con micro
partculas recubiertas de DNA. Este mtodo, tambin conocido como biobalstica,
que permiti la transformacin de maz y arroz, tambin se ha empleado
exitosamente para transformar diferentes especies vegetales de gran importancia
alimenticia a escala mundial.

4. El Sistema de Agrobacterium Tumefaciens

Tortora, G.J., Funke, B.R., y Case, C.L., 2008; mencionan que el A. tumefaciens y
A. rhizogenes, son bacterias que viven en la mayora de los suelos y que infectan
a un gran nmero de especies vegetales, tales bacterias son los agentes causales
de las enfermedades denominadas agalla de la corona (A. tumefaciens) y raz
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pilosa (A. rhizogenes), que se caracterizan por la formacin de un tumor (agalla
de la corona) o por el crecimiento anormal de races (raz pilosa), alrededor de
zonas heridas.

El estudio detallado de estas enfermedades puso de manifiesto que
Agrobacterium representa al ingeniero gentico de la naturaleza, ya que su
mecanismo de infeccin, que inicia con la penetracin de las bacterias a las
plantas a travs de heridas, se caracteriza porque el microorganismo inserta un
segmento de su DNA, denominado T-DNA (DNA transferido), en el genoma de las
clulas infectadas, dicho T-DNA, contenido en plsmidos llamados Ti (inductor de
tumores) en A. tumefaciens, y Ri (inductor de races) en A. rhizogenes, contiene
tanto genes responsables de la sntesis de reguladores del crecimiento vegetal,
causantes del crecimiento anormal tpico de las enfermedades causadas por estas
bacterias, como genes para la sntesis de productos inusuales nitro carbonados
denominados opinas, que el microorganismo utiliza como alimento para su
desarrollo y reproduccin.

En el mecanismo infectivo descrito, sobresale que los genes de origen bacteriano
contenidos en el T-DNA, no slo son capaces de integrarse en el genoma vegetal,
sino que una vez integrados, son procesados eficientemente por la planta para
producir protenas funcionales, varios grupos de investigacin sacaron ventaja de
este conocimiento y en el laboratorio se dedicaron a modificar los plsmidos Ti/Ri,
conservando en ellos las secuencias necesarias para la transmisin e integracin
del T-DNA en el genoma vegetal, pero removiendo los genes bacterianos
responsables de la formacin de tumores o races (cepas no oncognicas o
desarmadas).

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Es posible entonces integrar genes heterlogos entre las secuencias de
integracin del T-DNA, para que sean transferidos a los genomas de las plantas
tratadas con Agrobacterium, los bordes del T-DNA han sido transferidos a
plsmidos relativamente pequeos (8-10 Kb) para poder insertar ms fcilmente
los genes heterlogos, stos han sido denominados vectores binarios, de tal
modo, la produccin de plantas transgnicas se logra infectando con cepas de
Agrobacterium desarmadas y vectores binarios, segmentos de una planta, que
pueden ser de hoja, tallo o cotiledn, a partir de los cuales, mediante un proceso
de regeneracin por cultivo de tejidos, se recuperan plantas completas.

Durante el proceso de transformacin frecuentemente se presentan eventos, como
los efectos de la regin genmica donde ocurre la insercin y el nmero de genes
integrados, que alteran la expresin de los genes transferidos, por tal razn, para
garantizar que se recuperen plantas que expresen el transgn en un nivel
adecuado al fin especfico que se persigue, por ejemplo, la cantidad suficiente de
bioinsecticida para matar un insecto, y evitar usar plantas que hayan sufrido
alteraciones debidas a la insercin del T-DNA, usualmente se obtienen entre 50 y
100 eventos independientes de transformacin.

Las diferentes plantas obtenidas a partir de estos eventos independientes de
transformacin son extensivamente probadas, primero a nivel de laboratorio e
invernadero y despus a nivel de campo, para poder identificar una o pocas
plantas que expresan de la manera deseada la nueva caracterstica gentica y
que se comporten de manera indistinguible de la planta original a nivel de campo
en todas sus propiedades agronmicas y alimentarias.

El sistema de transformacin de plantas basado en Agrobacterium, sigue siendo la
primera opcin cuando se piensa en recuperar plantas transgnicas de una
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especie sobre la que no existen antecedentes al respecto, la tcnica ha sido
aplicada con xito para obtener plantas transgnicas de un gran nmero de
especies vegetales dicotiledneas y, recientemente, se ha logrado con l la
transformacin de maz y arroz, por lo que se sugiere que el sistema es
susceptible de emplearse para transformar cualquier especie vegetal.


Fig. 1 Fitomejoramiento mediante ingeniera gentica

Gracias a la biotecnologa podemos aislar y clonar genes de inters
antropocntrico, mediante el empleo de alguno de los mtodos de transformacin
disponibles, dichos genes pueden incorporarse en el genoma de las plantas en un
solo ciclo de cultivo.

5. Conclusiones

Gracias al Sistema de Agrobacterium Tumefaciens se obtienen plantas
genticamente modificadas que presentan el mejoramiento de la composicin y
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cualidades de las semillas y los frutos, asi como la alta calidad nutricional de los
alimentos obtenidos y el aumento del contenido de vitaminas presentes en stos.
Todo esto debido a la ingeniera gentica que permite el acceso y la manipulacin
directa de la informacin gentica de cualquier ser vivo, e incluso posibilita la
creacin de genes sintticos. Por ello, esta tecnologa, rompe con las barreras
impuestas por la incompatibilidad sexual y hace posible introducir en plantas,
genes provenientes no slo de otras especies vegetales evolutivamente distantes.

6. Referencias Bibliogrficas

Mercado Gonzles, Gabriela. (2003).Variabilidad Genetica, Ecologa Microbiana
Sitio web: http://www.emas.co.cl/categorias/biologa/microbio.pdf.consultada2014.

Bartha, R y Atlas, R. Ecologa Microbiana y Microbiologa Ambiental. Primera
Edicin. Editorial Pearson Education. Madrid, Espaa. 2008.

Tortora, G.J., Funke, B.R., y Case, C.L. Microbiologa. Novena Edicin. Editorial
Pearson Education. Madrid, Espaa. 2008.