ESCOLA SUPERIOR BATISTA DO AMAZONAS

CURSO DE PS-GRADUAO
MICROBIOLOGIA GERAL

RELATRIO DE AULA PRTICA

DISCIPLINA: BACTERIOLOGIA
PROFESSOR: IVES BERNARDELLI DE MATOS
ALUNA: ANA SLVIA ARAJO APARCIO

MANAUS/AM
MARO/2013

1) INTRODUO

As bactrias so organismos unicelulares, procariontes que formam um grupo

to diverso que incluem desde micro-organismos fotossintetizantes, at parasitas como
o caso das clamdias.
Alm disso, existe uma grande diversidade morfolgica entre os procariontes
sendo as formas, mas comuns: cocos, bacilos, vibrio, espirilo e espiroqueta. Os do tipo
cocos possuem colnias que formam arranjos tpicos para espcies particulares de
bactrias, esses arranjos podem ser: diplococos, estreptococos, estaphylococcus,
sarcinas e ttrade.
Dependendo da estrutura da parede as bactrias podem se dividir em dois
grupos: Gram-positivas e Gram-negativas. As bactrias gram-positivas apresentam
estrutura com muitas camadas de peptidoglicano, e bactrias gram-negativas possuem
poucas camadas de peptidoglicano sendo mais suscetvel ao rompimento mecnico.
A denominao Gram tem como origem o aspecto que tomam as bactrias
quando submetidas ao mtodo de colorao. Este mtodo de colorao de bactrias foi
desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans Christian Joachim Gram em 1884, esta
tcnica envolve o tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano, fixado pelo calor,
com o reagente cristal violeta, lugol, lcool-acetona e fucsina bsica. Atravs desse
mtodo possvel realizar a separao de amostras bacterianas em Gram-positivas e
Gram-negativas, sua determinao morfologia e o seu tamanho a partir das amostras
analisadas. A colorao de Gram um dos mtodos mais importantes a ser utilizado em
laboratrios de microbiologia e de anlises clnicas, sendo quase sempre o primeiro
passo para a caracterizao de amostras de bactrias. A tcnica tem importncia clnica
uma vez que muitas das bactrias associadas a infeces so prontamente observadas e
caracterizadas.
Diante do exposto este relatrio tem como intuito ensinar a colorao de gram, a
tcnica de esgotamento por meio de estrias superficiais averiguando a problemtica
descrita por um microbiologista em seu laboratrio de pesquisa.
P.S: Este relatrio vai te ajudar a responder o exercicio

2) MATERIAS E MTODOS
Ao saber que seus experimentos haviam contaminados o microbiologista
realizou as seguintes etapas:
Para a colorao de Gram foi utilizado:
Lmina;
Soluo salina;
Ala de inoculao;
Bico de Bunsen;
Colnia de bactrias;
Cristal Violeta, Lugol, lcool-acetona, Fucsina;
Papel filtro;
Microscpico;
A lmina foi utilizada para colocar uma gota de soluo salina, e com a ala de
inoculao pde-se tocar levemente na superfcie da colnia e emulsionar o material na
gota de soluo salina. Atravs do bico de Bunsen foi passado o esfregao na chama trs
vezes a fim de fixar o material, a violeta de genciana (cristal violeta) serviu para cobrir
o esfregao seco e deixar por um minuto. Logo em seguida o esfregao foi lavado com
gua corrente, e esgotado a lmina, e coberto com soluo de lugol e deixado por um
minuto, esgotado novamente a lmina se manteve a mesma inclinada, e pingaram-se
gotas de lcool-acetona at quando no desprendesse mais corante da preparao.
E novamente lavou-se com gua corrente novamente coberto a lmina com
soluo de fucsina e deixado por trinta segundos, lavado a lmina cobriu-se com papel
filtro para a secagem da lmina, em seguida examinou-se ao microscpio com a objetiva
de imerso.
E para realizar o novo crescimento das bactrias ele utilizou a tcnica de
semeadura para Isolamento das colnias de bactrias, o material a ser utilizado foi:

Soluo salina;

Ala de inoculao;

Bico de Bunsen;

gar para o crescimento das bactrias;

Com a ala de inoculao devidamente esterilizada, coletou-se amostras de bactrias,
utilizando a tcnica do esgotamento do inculo por estrias, foi semeado a amostra de
bactrias nos meio de cultura. Foi incubado os meios de cultivo slidos, e
posteriormente observou-se as caractersticas das colnias que cresceram em duas
placas de petre.
3) RESULTADOS
Aps retirar as suas placas da estufa com seu experimento o microbiologista
percebeu a contaminao por algum tipo de bactrias. Disposto a saber qual tipo de
bactria contaminou o seu material ele realizou o mtodo de colorao de gram onde
pode-se observar que Gram (+) coram roxo, gram (-) coram rosa. Contudo a colorao
de gram ocorreu com base de que as paredes celulares de bactrias Gram-positivas
seguram o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com lcoolacetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o retm. No
entanto a colorao permitiu uma distino entre bactrias com parede celular mais ou
menos rica em peptidoglicanos.
A partir dessas informaes ele observou que o meio contaminado havia uma
aparente diferena nas colnias presentes. Ento ele realizou um novo crescimento
atravs do mtodo de semeadura isolando as colnias de bactrias com a tcnica de
esgotamento do inculo por estrias, e foi semeando a amostra de bactrias nos meio de
cultura devidamente separados em duas placas de petre. Com devido sucesso em seu
novo crescimento ele pde coletar isoladamente cada tipo de diferentes colnias de
bactrias e realizar uma nova colorao de gram, no havendo uma mistura entre clulas
roxas e rosas. Portando ele pode constatar que inicialmente o seu experimento no
estava contaminado, mas que houve a contaminao do seu experimento por grampositivas estaphylacoccus atravs do seu colega j que este tipo de bactria se faz
presente na pele ou por um descuido na esterilizao adequada dos materiais a serem
utilizados, ou ate mesmo pelo no uso de luvas no momento da manipulao das placas
presentes na estufa.

4) REFERNCIAS

http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gramnegativas;

http://www.forp.usp.br/restauradora/calcio/citolog.htm;

http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/bacterias/bacterias-bacterias.php