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ABSTRACT: Una de las tcnicas ms utilizadas en los

laboratorios de microbiologa para estudiar la actividad de


los antimicrobianos, frente a los microorganismos respon-
sables de las infecciones, es la prueba que se realiza para
determinar la susceptibilidad respecto a la sensibilidad o
resistencia de una bacteria a un grupo de antibiticos.
Mediante un antibiograma se puede establecer que trata-
miento ser el ms adecuado para el tratamiento de un
paciente afectado por una infeccin por las bacterias que
se estn estudiando en este caso se aplic para las bacte-
rias E.coli., Pseudomona, Bacillus, Serratia, Proteus y
Staphylococcus. La realizacin de esta prueba implica,
cultivar el microorganismo en este caso se utiliz Pseu-
domona como incgnita en un medio que contiene un
determinado sustrato, mediante la siembra en csped del
microorganismo problema, posteriormente se realiz la
colocacin de los discos antibiticos los cuales contenan
Cloranfenicol, Eritromicina, Tetraciclina, Nitrofurantoina,
Nalidxico, Gentamicina a una concentracin teraputica
y un control de Metanol. Posteriormente se Incubaron y
se midi los halos de inhibicin. Para este proceso se
midi con regla el punto donde las bacterias no pudieron
reproducirse. El Cloranfenicol y Tetraciclina fueron los
antibiticos de amplio espectro que presentaron ms am-
plios halos de inhibicin.

INTRODUCCIN
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se reali-
za para determinar la susceptibilidad de una bacteria a un
grupo de antibiticos.
Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el labo-
ratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los
antimicrobianos frente a los microorganismos responsa-
bles de las infecciones, se considera como antimicrobiana
cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de
inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea
susceptible para la utilizacin como tratamiento en los
pacientes. Los antibiticos pueden ser de origen natural,
sinttico o semisinttico. A pesar de toda la estandariza-
cin y su aplicacin con los mejores controles de calidad
establecidos cada infeccin y cada paciente no pueden ser
estandarizados, al hacer la extrapolacin al organismo
vivo del binomio microorganismo-antimicrobiano.


Figura 1. Antibiograma realizado a la Pseudomona aeru-
ginosa

El antibiograma ha sido objeto de descrdito por parte de
los clnicos, siendo muchos de los errores imputables, no
solo al antibiograma y su ejecutor sino tambin a errores
en el conocimiento farmacolgico clnico y a la mala
interpretacin de los resultados. Los elementos ms ade-
cuados que debemos tener presentes para asegurar una
terapia antimicrobiana exitosa son la respuesta clnica del
paciente sometido a un determinado tratamiento y la
demostracin por cultivos repetidos, que el microorga-
nismo ha sido eliminado -cura bacteriolgica-o que an
persiste fallo bacteriolgico.
Desafortunadamente una cura bacteriolgica no siempre
asegura una cura clnica satisfactoria. No obstante esto
ltimo, diversos estudios han demostrado una buena co-
rrelacin entre las pruebas de sensibilidad in vitro y los
resultados de la terapia clnica.Se enfatiza que los resulta-
dos de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana son
guas para el clinico y no una garanta de que un agente
antimicrobiano ser efectivo en la terapia.
La sensibilidad de un organismo a determinados antimi-
crobianos ha sido definida como la menor concentracin
del antimicrobiano en microgramo/mL que evita el cre-
cimiento invitro del microbio y se refiere como la concen-
tracin mnima inhibitoria (CMI). (1 2)
La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme
en la esperanza de vida de las personas que padecan
procesos infecciosos, aunque desgraciadamente tambin
supuso un aumento en los niveles de resistencia antibiti-
ca.
El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:
La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de
un tratamiento antibitico correcto al paciente. Es necesa-
rio conocer si el microorganismo responsable de la infec-
cin posee mecanismos que le confieran inmunidad frente
a algn antibitico para no incluirlo como terapia. En
cuanto al tratamiento el antibiograma no slo es necesario
en la instauracin, tambin resulta til en el seguimiento e
incluso en la confirmacin de tratamientos empricos.
En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se
comienza el tratamiento antes de conocer los datos de
sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confir-
mar, o en su caso corregir el tratamiento. Otra aplicacin
de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiolo-
ga. Es necesario detectar el aumento de los niveles de
resistencia en los aislamientos clnicos para tomar medi-
das correctoras.
Por otro lado tambin puede tener utilidad diagnstica
porque el perfil de resistencia puede en algn caso orien-
tar en la identificacin bacteriana.
El cloranfenicol es un Aero frmaco trmicamente esta-
ble, efectivo frente a un amplio espectro de microorga-
nismos, en especial estafilococus, pero debido a sus serios
efectos secundarios (dao a la mdula sea, incluyendo
anemia aplsica) en humanos, su uso se limita a infeccio-
nes muy graves, como la fiebre tifoidea.

El cloranfenicol es estable en soluciones neutras y cidas,
pero al llegar al pH 10 el frmaco es inactivado. Es mode-
radamente soluble en agua, ms soluble en alcohol y ter.
Las soluciones a 37 C se deterioran paulatinamente con
una vida media de 6 meses. Existe una versin del anti-
bitico que en vez de ser palmitato es succinato sdico de
cloranfenicol. Es resistente a temperaturas de esteriliza-
cin lo cual es muy comn en laboratorios microbiolgi-
cos.
Tanto el palmitato como el succinato de cloranfenicol
deben ser hidrolizados a cloranfenicol en el organismo
antes que pueda ejercer su accin antibacteriana. El anti-
bitico inhibe la sntesis de protenas bloqueando la acti-
vidad de la enzima peptidil transferasa al unirse a la
subunidad 50S del ribosoma evitando la formacin del
enlace peptdico. (4)
La Eritromicina se ha usado desde esa poca para el tra-
tamiento de infecciones del tracto respiratorio superior, la
piel y tejidos blandos causados por organismos suscepti-
bles (principalmente cocos Gram positivos), y especial-
mente en pacientes alrgicos a las penicilinas.
La Eritromicina es el medicamento de eleccin para el
tratamiento de infecciones por M. pneumoniae, Legio-
nella pneumophila, difteria, coqueluche, conjuntivitis o
neumona por Chlamydia trachomatis y angiomatosis
bacilar.
La eritromicina inhibe la sntesis de protenas en la bacte-
ria al unirse a la subunidad 50S del ribosoma bacteriano.
Esta unin inhibe la actividad de la peptidil transferasa,
interfiriendo con la traslocacin de los aminocidos du-
rante la traduccin y ensamblaje de las protenas. Segn
la dosis administrada y el organismo sobre el que acte, la
eritromicina tiene efectos bacteriostticos o bactericidas.
(3)
Las tetraciclinas constituyen un grupo de antibiticos,
unos naturales y otros obtenidos por semisntesis, que
abarcan un amplio espectro en su actividad antimicrobia-
na. Qumicamente son derivados de la naftacenocar-
boxamida policclica, ncleo tetracclico, de donde deriva
el nombre del grupo.
Las tetraciclinas naturales se extraen de las bacterias del
gnero Actinomyces. De Streptomyces aurofaciens se
extraen la clortetraciclina y la demetilclortetraciclina, de
Streptomyces rimosus se extrae la oxitetraciclina, y la
tetraciclina, representante genrico del grupo, se puede
extraer del Streptomyces viridifaciens, aunque tambin se
puede obtener de forma semisinttica. Una caracterstica
comn al grupo es su carcter anfotrico, que le permite
formar sales tanto con cidos como con bases, utilizndo-
se usualmente los clorhidratos solubles.
Presentan fluorescencia a la luz ultravioleta y tienen la
capacidad de quelar metales di o trivalentes, como el
calcio, manganeso, o magnesio. (5)
Actan fundamentalmente como bacteriostticos a las
dosis habituales, aunque resultan bactericidas a altas
dosis, generalmente txicas. Actan por varios mecanis-
mos: Desacoplan la fosforilacin oxidativa de las bacte-
rias. Provocan una inhibicin de la sntesis protica en el
ribosoma de la bacteria. Actan inhibiendo la sntesis
proteica al unirse a la subunidad 30 S del ribosoma y no
permitir la unin del cido ribonuclico de Transferencia
(tRNA) a este, ni el transporte de aminocidos hasta la
subunidad 50 S. Existe tambin evidencia preliminar que
sugiere que las tetraciclinas alteran la membrana cito-
plasmtica de organismos susceptibles, permitiendo la
salida de componentes intracelulares.
[5]

Las resistencias bacterianas a las tetraciclinas son de
aparicin lenta, aunque mucho ms rpida si se utiliza por
va tpica. El mecanismo bacteriano implicado puede ser
mediante plsmido, lo que explica la reticencia a usar las
tetracilinas en el mbito hospitalario, para evitar la apari-
cin de resistencias simultneas a varios antibiticos.
Existen resitencias cruzadas entre los miembros del gru-
po. (6)
Esta recomendado para Bacterias gram positivas: Strepto-
coccus, Diplococcus, Clostridium.
Bacterias gram negativas: Neisseria, Brucellas, Haemop-
hilus, Shigella, Escherichia coli, Bordetella, Klebsiella,
Vibrio y Pasteurella, Espiroquetas, algunos protozoos:
Entamoeba, Actinomyces, Rickettsia.
Este espectro explica su utilizacin en las siguientes pato-
logas, entre otras:Infecciones de la piel: Acn, roscea.
Infecciones urogenitales: Gonococia, sfilis. Infecciones
gastrointestinales: Disentera, clera, amebiasis, lcera
gstrica, infecciones periodontales. Infecciones respirato-
rias: Faringoamigdalitis, bronquitis y algunas formas de
neumona atpica. Otras infecciones: Fiebre recurrente,
fiebre Q, tifus exantemtico, tifus endmico, actinomico-
sis, brucelosis.
Hay que tener en cuenta que aunque in vitro su actividad
es ms amplia, in vivo nos encontramos con otros muchos
antibiticos que pueden resultar ms efectivos o con me-
nos efectos adversos que las tetraciclinas, por lo que stas
quedan relegadas a antibitico de segunda eleccin, cuan-
do fallan los de primera eleccin.
La nitrofurantona es un frmaco utilizado en la profilaxis
y el tratamiento de las infecciones urinarias no complica-
das. Es activa contra la mayora de bacterias gram positi-
vas y gram negativas. A pesar de que las sulfamidas y
otros antibacterianos suelen ser los tratamientos de prime-
ra eleccin para las infecciones del tracto urinario, la
nitrofurantona se emplea habitualmente con fines preven-
tivos y en tratamientos de supresin a largo plazo.
La nitrofurantona es en realidad un profrmaco que la
propia bacteria activa mediante flavoprotenas como la
nitrofurano reductasa que reducen la molcula para obte-
ner sustancias intermedias que alteran los ribosomas y
otras macromolculas bacterianas. Como resultado, el
frmaco interfiere en varias rutas enzimticas vinculadas
a la respiracin celular, el metabolismo glucdico y la
sntesis de protenas, ADN, ARN y la pared bacteriana.
Esta accin simultnea sobre tres procesos distintos puede
explicar la dificultad de las bacterias atacadas para desa-
rrollar resistencias. Tiene un efecto bacteriosttico o bac-
tericida dependiendo de la concentracin empleada y del
organismo infectante.
Acta sobre bacterias gram positivas y gram negativas,
mostrndose ms eficaz con estas ltimas, especialmente
cuando se trata de especies pertenecientes a la familia de
las enterobactericeas. Tambin ha probado ser eficaz
frente a Corynebacterium, estafilococos y espectrococos,

tanto del grupo D como viridans. No tiene actividad ante
Pseudomonas, Serratia y Providencia.(7)
El cido nalidxico es un antibitico del grupo de las
quinolonas, activa en contra de Gram negativas. A con-
centraciones menores acta como bacteriosttico, es de-
cir, inhibe el crecimiento y reproduccin bacteriana, sin
matar el organismo. A concentraciones ms elevadas
acta como bactericida, es decir, mata la bacteria en vez
de simplemente inhibir su reproduccin.
El cido nalidxico selectiva y reversiblemente bloquea la
replicacin del ADN bacteriano, por medio de la inhibi-
cin de una subunidad de la enzima girasa del ADN indu-
ciendo la formacin de un complejo enzimtico ineficaz.
Sus acciones tambin pueden causar que el empaqueta-
miento ultratorcional del ADN se vea relajado, causando
inestabilidad en las molculas genticas.
La gentamicina es un aminoglucsido. Se emplea como
antibitico para erradicar infecciones en el ojo contra
bacterias sensibles. Tambin sirve para tratar diversas
enfermedades graves de piel, pulmn, estmago, vas
urinarias y sangre, as como heridas cutneas. Su uso est
indicado cuando la administracin de otros antibiticos
menos potentes haya sido ineficaz. Debido a su gran
toxicidad y a los mltiples efectos secundarios, ha de
evitarse su uso si no es estrictamente necesario. Se con-
centran en odo y rin, por lo tanto tienen efectos otol-
gicos y nefrotxicos.
Su mecanismo de accin consiste en interferir en la snte-
sis normal de protenas, originando protenas no funciona-
les en microorganismos susceptibles.
Para ejercer su accin deben ingresar en la clula bacte-
riana. Esto ocurre en 2 etapas por un mecanismo de trans-
porte activo. En la primera fase, el ingreso a la clula
depende del potencial transmembrana generado por el
metabolismo aerobio. La segunda fase es de ingreso ace-
lerado, y se ve favorecida por la unin previa del amino-
glucsido al ribosoma bacteriano. Ciertas condiciones que
reducen el potencial elctrico de la membrana como la
anaerobiosis o el bajo pH del medio, disminuyen el ingre-
so de estos compuestos al citoplasma bacteriano.
Una vez dentro de la clula, los aminoglucsidos se unen
de manera irreversible a la subunidad 30S del ribosoma
bacteriano. Esta unin interfiere con la elongacin de la
cadena peptdica. Tambin causan lecturas incorrectas del
cdigo gentico formndose protenas anmalas. Algunas
de estas son protenas de membrana y el resultado es la
formacin de canales que permiten el ingreso de ms
drogas a la clula.
Es activo contra Gram negativas, especialmente Esche-
richia coli, especies de Proteus (indol-positivo e indol-
negativo), Pseudomonas aeruginosa, especies de Klebsie-
lla, Enterobacter, Serratia, Citrobacter, y especies de
Staphylococcus (coagulasa-positiva y coagulasa-negativa,
incluyendo cepas resistentes a penicilina y meticilina).
Los anaerobios, tales como Bacteroides o Clostridium, y
la mayora de las especies de Streptococcus suelen ser
resistentes a los aminoglucsidos. (7)


MTODOS
El mtodo cientfico empleado para la elaboracin de un
antibiograma fue el proporcionado segn la Ctedra de
Qumica Orgnica y Bioqumica. UNA. Costa Rica,
2011.


RESULTADOS
Conforme se realizaron los antibiogramas a las diferentes
bacterias se determin que:
E. coli: Es sensible al cloranfenicol, tetraciclina y genta-
micina, por el contrario la eritromicina, nitrofurantona y
cido nalidixico poseen resistencia sobre la bacteria.
Pseudomona Aeruginosa: Es sensible al cloranfenicol,
eritromicina, tetraciclina, nitrofurantona, cido nalidxico
y gentamicina.
Bacilos: Es sensible al cloranfenicol, eritromicina, cido
nalidxico y gentamicina, por el contrario es resistente a la
tetraciclina y nitrofurantona.
Serratia: Es sensible al cloranfenicol, eritromicina, tetra-
ciclina, nitrofurantona y gentamicina, por el contrario el
cido nalidixico posee resistencia sobre la bacteria.
Proteus: Es sensible al cloranfenicol, eritromicina, tetraci-
clina, nitrofurantona y gentamicina. En el caso del cido
nalidixico es intermedio
Staphiloccocus: Es sensible a la eritromicina y gentamici-
na, por el contrario el cido nalidixico posee resistencia
sobre la bacteria y el cloranfenicol y nitrofurantona
tienen un efecto intermedio.















TABLAS Y GRFICOS
Tabla 1. Resultados obtenidos al realizar un antibiograma
de las diferentes bacterias, para la medicin de los halos
de inhibicin en mm.


Clo-
ranfe-
nicol
Eritro
tro-
mici-
na
Te-
traci-
clina
Nitro-
furan-
tona
Na-
lidi-
xico
Gen-
tami-
cina
Met
ano
l
E. coli
(1)
15 - 15 - 13 18 -
E. coli 20 - 20 7 13 25 -

(2)
Pseu-
domo-
na
aerugi-
nosa
28 26 23 22 20 15 -
Bacilos
subtilis
29 25 - - 25 20 -
Serra-
tia sp
26 23 29 18 - 23 -
Proteus
mirabi-
lis
27 30 24 17 17 18 -
Staphi-
lococ-
cus
17 24 17 11 13 18 -


Tabla 2. Resistencia y sensibilidad de las bacterias estu-
diadas con respecto a los antibiticos utilizados.
Antibitico
E.
co
li
Pseudo-
mona
aerugino-
sa
Baci-
los
Se-
rratia
Pro-
teus
Staphilo-
cocus
Cloranfeni-
col
S S S S S I
Eritromici-
na
R S S S S S
Tetracicli-
na
R/
S
S R S S S
Nitrofuran-
tona
R S R S S I
cido
Nalidixico
R S S R I R
Gentamici-
na
S S S S S S








DISCUSIN DE RESULTADOS

Todas las enterobacterias de inters clnico, con excep-
cin muy posiblemente de la proteus mirabilis son porta-
doras de una betalactamasa cromosmica natural. Este es
uno de los principales mecanismos de resistencia en los
Gram negativos, la enzima responsable por la resistencia
a la betalactamasa es la AmpC, la cual es codificada por
el mismo gen. Esta es una de las razones del porque la E.
coli, Bacilos, Serratia, proteus y Staphilococus son resis-
tentes a diferentes antibiticos utilizados.
Otro factor que explica la resistencia de las bacterias a
ciertos antibiticos utilizados, es la resistencia por baja
permeabilidad de la membrana externa, esto se debe a que
la protena OprD la cual funciona como canal de entrada
de los aminocidos bsicos, presenta una deficiencia, la
deficiencia de la protena hace que una betalactamasa
cromosomal se exprese. (8)
Las bacterias Gram negativas en su mayora son resisten-
tes a la tetraciclina, debido a las OprD que pueden expor-
tar al antibacteriano hacia afuera de la bacteria tan rpido
como cuando es transportado dentro de la clula bacteria-
na, la resistencia a este antibitico, sin embargo se obser-
va que todas las gram negativas dieron como resultado
sensibilidad al antibitico, caso contrario con las gram
positivas como Bacilos y Staphilococus, que dieron resis-
tencia al antibitico, muy posiblemente la la concentra-
cin de la protena en las bacterias era alta, por lo que la
capacidad de penetrar al interior de la bacteria es alta y
las bacterias no lograron exportar el antibacteriano hacia
el exterior.
La Pseudomona es una de las bacterias, gram negativas,
implicado en infecciones nosocomiales, causando infec-
ciones de vas respiratorias, urinarias, oculares, entre
otros, y con facilidad desarrola mutaciones cromosmicas
y adquiere material gentico que le da resistencia a com-
puestos, donde influyen todos los mecanismos de resis-
tencia bacteriana, aun as se observa que de todas las
bacterias estudiadas fue la que presento sensibilidad a
todos los antibiticos. (8)
Respecto al cloranfenicol y tetracilina son de amplio
espectro ya que altera los ribosomas, alterando la trans-
cripcin dando como resultado la detencin del proceso
de snteisis.
Entre los otros factores que intervienen en los resultados
del antibiograma, se encuentran el pH, ya que la sensibi-
lidad de las pruebas est estandarizada a pH fisiolgico,
ya que existen varios antibiticos que poseen un amplio
rango de pH, aun as otro actan mejor en pH bsico o
cido. Tambin los cationes de calcio y magnesio, ya que
si el medio est deficiente de estos cationes, aumentar la
permeabilidad de la pared celular a estos antibiticos,
produciendo altas o bajas concentraciones mnimas inhi-
bitorias, dando falsos sensibles. El tamao del inculo
tiene gran importancia puesto que si es pequeo las bacte-
rias resistentes pueden no quedar incluidas. Por otro lado,
se encuentra la inactivacin enzimtica de los beta-
lactmicos, estas enzimas estn siempre expresadas en
algunas bacterias, pero mayormente van a ser inducidas
por la presencia del antibitico, la bacteria puede morir
antes de que la enzima pueda reproducirse para destruir el
antibitico, sin embargo existe un gran nmero de cepas
capaz de producir la enzima y destruir el antibitico, por
lo que puede resultar una falsa sensibilidad nivel del anti-
biograma por no poner el inculo adecuado. (9)

CONCLUSIONES
Para realizar una correcta realizacin e interpretacin de
un antibiograma, se debe incubar a 37 C entre 20 y 24h
en una atmsfera aerobia o rica en CO
2
, dependiendo de
la bacteria, el inoculo debe de ser de cierta concentracin
puesto que si es mayor o menor se pueden dar falsos
niveles de resistencia o sensibilidad, los antibiticos utili-
zados deben de tener una concentracin establecida, estar

en buenas condiciones, de no ser as pueden las cepas
sensibles pueden dar cierta resistencia.
Para la prescripcin correcta de un antibitico se debe
tomar en cuenta la naturaleza del proceso infeccioso, la
historia clnica del paciente, el mecanismo de accin del
antibitico, la toxicidad, las posibles sensibilizaciones del
paciente y la va de administracin, recordando que la
resistencia de las bacterias es el principal obstculo para
la eficacia del antibitico.
Al conocer el comportamiento de las diferentes bacterias,
y en estas haya un cambio se debe volver a investigar por
medio de pruebas confirmatorias si todava son sensibles
al antibitico y probar otros antibiticos como alternativa.

REFERENCIAS

1 Drmaso D y col. Antibiticos y Quimioterpicos Antibacte-
rianos Uso Clnico. Espaa, Laboratorios Beecham S, A.
1984 pp 65.

2 Low DE. Laboratory Procedures and Magnagement of
Antimicrobial therapy . Korene, .Antimicrobial Therapy in
Infants and Childrery. New York.
1 9 8 8 : pp 3

3 Avendao, Carmen; Lpez Introduccin a la qumica far-
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Espaa. 2001 pp. 568-572.

4 Chloromycetin, a New Antibiotic from a Soil Actinomycete.
Autores: J. Ehrlich; Q.R. Bartz; R.M. Smith; D.A. Joslyn y
P.R. Burkholder; Revista Science, pp 417. 1947.

5 Lorenzo Velzquez et al.: Farmacologa y su proyeccin a
la clnica. 13 ed. Ed. Oteo. 1976, pp. 966

6 Drobnic, L., Salv, J.A.,Curso sobre antibioticoterapia.
Ruan, S.A. 1980, pp. 225

7 Departamento Tcnico del Consejo General de Colegios
Oficiales de Farmacuticos. Catlogo de medicamentos.
Madrid: Consejo General de Colegios Oficiales de Farmacu-
ticos. pp. 1636-1637

8M.C Gamero Delgado, et all. Sensibilidad y resistencia de
Pseudomonas aeruginosa a los antimicrobianos. Revista
espaola de quimioterapia; Vol 20 (N 2). 2007

9Sanchz J., Feris J. Antibiogramas: utilidad y limitaciones. Arch
Dom Ped; Vol 34 ( N 2)


ANEXOS


Figura 2. Antibiograma realizado a la Pseudomona Ae-
ruginosa, con Cloranfenicol, Eritromicina, Tetraciclina,
Nitrofurantona, cido nalidixixo y gentamicina como
antibiticos.