Tesis Aromaticos

1
ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA DE CROMATOGRAFA DE GASES

CON DETECTOR DE IONIZACIN POR LLAMA PARA LA DETERMINACIN
DE BTEX (BENCENO, TOLUENO, ETILBENCENO Y XILENO) EN MATRICES
ACUOSAS

JHON EDGAR ARROYAVE GARCA
LINA MARA VILLA FLREZ

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
QUMICA INDUSTRIAL
PEREIRA
2011

2

ACUOSAS


TRABAJO DE GRADO
Requisito final para optar al ttulo de Qumico Industrial

DIRECTOR: JUAN PABLO ARRUBLA VLEZ Qco MSc.
ASESOR: CARLOS HUMBERTO MONTOYA N Qco Ind
GRUPO DE ESTUDIO DEL RECURSO HDRICO.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
QUMICA INDUSTRIAL
PEREIRA
2011

3

NOTA DE ACEPTACIN DE TRABAJO DE GRADO
ACUOSAS

Presentado por:

Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez realizada la
versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos otorgar:
La nota de ------------------------------------------------------------------
Con la connotacin: -----------------------------------------------------

Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:
Director: JUAN PABLO ARRUBLA VLEZ
Firma: -------------------------------------------------------------
Asesor: CARLOS HUMBERTO MONTOYA N
Firma: -------------------------------------------------------------
Jurado:
Firma: -------------------------------------------------------------

4

DEDICATORIA

A Dios por darnos la vida y su amor infinito, por acompaarnos y darnos fortaleza en todo
momento de nuestras vidas y mostrarnos el camino que debemos seguir para alcanzar la
verdadera felicidad.
A la Virgen Mara por su amor, acompaamiento e intercesin ante su Hijo.
A nuestras familias por su amor, apoyo, comprensin y dedicacin en cada momento. Por
inculcar en nosotros valores y principios morales que nos hacen ser mejores personas.
Por estar siempre con nosotros especialmente en los momentos difciles ayudndonos a
superar las dificultades.
A nuestros amigos por el cario y apoyo que siempre nos brindaron.

5

AGRADECIMIENTOS

A Dios todopoderoso, por estar siempre con nosotros, cambiando nuestras vidas,
mostrndonos el camino que debemos seguir. Por darnos la fuerza necesaria para
cumplir nuestras metas y sueos a pesar de los obstculos que se pueden presentar. Por
ensearnos la felicidad que se alcanza al estar cerca de l.
A la Virgen Mara por su compaa en cada instante de nuestras vidas y por interceder en
todo momento y lugar por nosotros ante su Hijo.
A nuestras familias por el cario, apoyo y amor incondicional que nos han brindado
durante el transcurso de nuestras vidas. Por el nimo y la motivacin en los momentos
difciles, haciendo posible la superacin de las dificultades.
A nuestro director Juan Pablo Arrubla y asesor Carlos Humberto Montoya por el apoyo,
tiempo, dedicacin y conocimientos que nos brindaron para la realizacin de este
proyecto.
A Hugo Fernando Arias, Jaime Alejandro Martnez y Paula Andrea Giraldo que con
paciencia nos ensearon a operar el cromatgrafo de gases y nos brindaron su
conocimiento y experiencia en el campo de la investigacin.
A los profesores de la escuela de qumica por los conocimientos aportados durante el
transcurso de nuestra carrera.
A Mara Victoria, Javier y Germn por su colaboracin cada que fue necesario.
A nuestros amigos por apoyarnos cuando lo necesitamos. Por hacer ms agradable
nuestra estada en la universidad.
A todas las entidades y personas que de alguna manera hicieron posible cumplir nuestra
meta.

6

TABLA DE CONTENIDO
Pg.
NDICE DE TABLAS 11
NDICE DE FIGURAS 13
NDICE DE ANEXOS 14
GLOSARIO 15
RESUMEN 17
JUSTIFICACIN 18
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 21
OBJETIVOS 22
1 MARCO TERICO 23
1.1 ESTANDARIZACIN 23
1.1.1 Linealidad y rango 24
1.1.2 Precisin 26
1.1.2.1 Repetibilidad 26
1.1.2.1.1 Repetibilidad del sistema instrumental 26
1.1.2.1.2 Repetibilidad del mtodo 27
1.1.2.2 Precisin intermedia 27
1.1.2.3 Reproducibilidad 27
1.1.3 Exactitud 27
1.1.4 Lmite de deteccin (LD) 28
1.1.5 Lmite de cuantificacin (LC) 29

7

1.1.5.1 Mtodo basado en la relacin seal/ruido 29
1.1.5.2 Mtodo basado en la desviacin estndar de la respuesta del blanco y 29
La pendiente de la recta de calibrado
1.1.5.2.1 Mtodos instrumentales que corrigen la seal frente a un blanco 30
1.1.5.2.2 Mtodos instrumentales que no corrigen la seal frente a un blanco 30
1.1.5.3 Mtodo basado en la extrapolacin de la recta de calibrado a 31
concentracin cero
1.1.6 Sensibilidad 31
1.2 CROMATOGRAFA DE GASES (GC) 31
1.2.1 Ventajas 32
1.2.2 Instrumentacin en cromatografa de gases 33
1.2.2.1 Gas portador 35
1.2.2.2 Sistema de inyeccin 36
1.2.2.3 Configuracin de la columna y del horno de la columna 37
1.2.2.4 Sistemas de deteccin 38
1.2.2.4.1 Detector de ionizacin por llama (FID) 39
1.2.3 Anlisis cualitativo y cuantitavivo 42
1.2.3.1 Anlisis cualitativo 42
1.2.3.2 Anlisis cuantitativo 42
1.2.3.2.1 Mtodo del patrn interno 43
1.2.3.2.2 Mtodo del estndar externo 43
1.2.3.2.3 Mtodo de la normalizacin de las reas 44

8

1.3 EXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPE) 44
1.3.1 Consideraciones tericas 45
1.3.1.1 Interacciones polares 46
1.3.1.2 Interacciones apolares 47
1.3.1.3 Interacciones inicas 48
1.3.2 Etapas de la extraccin en fase slida 50
1.3.2.1 Acondicionamiento del adsorbente 50
1.3.2.2 Aplicacin de la muestra (adsorcin) 51
1.3.2.3 Lavado del adsorbente 51
1.3.2.4 Elucin 51
1.3.3 Ventajas 52
1.4 HIDROCARBUROS AROMTICOS (BTEX) 52
1.4.1 Estabilidad 52
1.4.2 Propiedades fsicas y qumicas 53
1.4.2.1 Comportamiento de los BTEX en agua 55
1.4.3 Fuente de hidrocarburos aromticos 56
1.4.3.1 Petrleo 56
1.4.3.1.1 Aromticos del reformado cataltico 56
1.4.3.1.2 Aromticos del craqueo con vapor 58
1.4.3.1.3 Separacin de hidrocarburos aromticos 58
1.4.4 Procesos de transformacin de aromticos 60
1.4.5 Refinacin del petrleo y composicin de la gasolina en Colombia 60

9

1.4.5.1 Refinacin nacional del petrleo 60
1.4.5.2 Composicin de la gasolina en Colombia 60
1.4.6 Usos de los BTEX 62
1.4.6.1 Benceno 62
1.4.6.2 Tolueno 63
1.4.6.3 Etilbenceno 63
1.4.6.4 p-Xileno 63
1.4.6.5 o-Xileno 64
1.4.6.6 m-Xileno 64
1.4.7 Toxicidad de los BTEX 64
1.4.7.1 Benceno 65
1.4.7.2 Tolueno 66
1.4.7.3 Etilbenceno 67
1.4.7.4 Xileno 67
1.4.8 Mtodos de anlisis de los BTEX 69
2 SECCIN EXPERIMENTAL 72
2.1 MUESTRA DE ANLISIS 72
2.2 MUESTREO 72
2.3 TRANSPORTE, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE LA 72
MUESTRA
2.4 EXTRACCIN EN FASE SLIDA 73
2.5 COMPOSICIN DEL ESTNDAR DE BTEX 74

10

2.6 ANLISIS CROMATOGRFICO 75
2.6.1 Estndar 75
2.6.2 Patrones 76
2.6.3 Curvas de calibracin 77
2.6.4 Anlisis de las muestras 77
3 RESULTADOS Y DISCUSIN 78
3.1 ANLISIS CROMATOGRFICO DEL ESTNDAR 78
3.2 CALIBRACIN 80
3.3 TRATAMIENTO ESTADSTICO 84
3.3.1 Indicadores de relacin lineal 87
3.3.2 Exactitud 89
3.4 ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA DE EXTRACCIN EN FASE 90
SLIDA (SPE)
3.4.1 Porcentaje de recuperacin 90
3.5 ANLISIS DE LAS MUESTRAS 92
3.5.1 Resultados de pH y temperatura en las trampas de grasas 92
3.5.2 Anlisis cromatogrfico 93
3.5.3 Anlisis de un humedal 97
3.5.4 Interferencias en el anlisis 98
4. CONCLUSIONES 99
5. BIBLIOGRAFA 101
6. ANEXOS 107

11

NDICE DE TABLAS
Pg.
Tabla 1. Propiedades de los detectores para cromatografa de gases 40
Tabla 2. Fases estacionarias usadas en extraccin en fase slida 50
Tabla 3. Propiedades fisicoqumicas de los BTEX 54
Tabla 4. Valores ms altos de los BTEX encontrados en agua subterrnea 55
urbana.
Tabla 5. Rango de valores de la vida media de los BTEX en das 56
Tabla 6. Composicin de gasolinas reformadas. 57
Tabla 7. Composicin gasolina procedente de craqueo con vapor. 58
Tabla 8. Puntos de ebullicin de los BTEX. 59
Tabla 9. Gasolina corriente. 61
Tabla 10. Gasolina extra 61
Tabla 11. Diesel corriente 62
Tabla 12. Diesel extra o diesel premium 62
Tabla 13. Valores permitidos por la EPA 68
Tabla 14. Clasificacin de riesgo carcingeno de la EPA 69
Tabla 15. Composicin del estndar de BTEX marca RESTEK cdigo de 74
Catlogo 30213
Tabla 16. Programacin de la temperatura del horno de cromatgrafo 77
Tabla 17. Tiempos de retencin y reas medidas por el equipo de los 79
hidrocarburos aromticos.

12

Tabla 18. reas de la cola del diclorometano medida por el equipo 80
Tabla 19. Datos de las reas obtenidos de cada patrn para la construccin de 81
las curvas de calibracin.
Tabla 20. Datos de las reas obtenidas para la elaboracin de la curva de 82
calibracin del benceno
Tabla 21. Datos para determinar la repetibilidad instrumental 84
Tabla 22. Datos para el clculo de la SD y el % RSD para el benceno 86
Tabla 23. Resultados estadsticos obtenidos de las curvas de calibracin 87
Tabla 24. Datos obtenidos para el test de linealidad 88
Tabla 25. Datos obtenidos para calcular la exactitud 89
Tabla 26. Datos obtenidos para el porcentaje de recuperacin de cada patrn 90
Tabla 27. Porcentajes de recuperacin de los BTEX 91
Tabla 28. Temperatura y pH en las trampas de grasas 93
Tabla 29. Concentraciones de BTEX en las estaciones de servicio 95
Tabla 30. Concentracin de BTEX en la salida del humedal 98

13

NDICE DE FIGURAS

Pg.

Figura 1. Diagrama de un sistema de cromatografa gas-lquido 35
Figura 2. Detector de ionizacin por llama caracterstico 41
Figura 3. Fases estacionarias polares y sus interacciones con los analitos 46
Figura 4. Fases estacionarias apolares y sus interacciones con los analitos 47
Figura 5. Fases estacionarias de intercambio inico 49
Figura 6. Etapas de la extraccin en fase slida 51
Figura 7. Molcula del benceno 53
Figura 8. Principales reacciones de aromatizacin 57
Figura 9. Trampa de grasas 72
Figura 10. Cromatgrafo de gases utilizado en el anlisis 75
Figura 11. Cromatograma patrn 50ppm 78
Figura 12. Cromatograma del solvente de elucin (Diclorometano) 79
Figura 13. Grfica de barras de las concentraciones de BTEX 83
Figura 14. Curva de calibracin para el benceno 83
Figura 15. Grfica de barras de los porcentajes de recuperacin de los BTEX 91
Figura 16. Cromatograma del extracto obtenido en la muestra tomada de la 94
estacin de servicio centro
Figura 17. Cromatograma de la salida del humedal 97

14

NDICE DE ANEXOS

Pg.

Anexo 1 Reacciones de los BTEX para la produccin de diferentes productos 107
Anexo 2. Certificado del anlisis del estndar 110
Anexo 3. Datos de las reas obtenidas de cada patrn para la construccin de 111
las curvas de calibracin.
Anexo 4. Datos de las reas obtenidas para la elaboracin de la curva de 113
calibracin del benceno
Anexo 5. Curvas de calibracin de los BTEX 115
Anexo 6. Datos para la determinacin de la repetibilidad instrumental. 118
Anexo 7. Distribucin de t para diferentes niveles de confianza 119
Anexo 8. Cromatogramas de los extractos obtenidos en las muestras 120
tomadas de las estaciones de servicio
Anexo 9. Cromatogramas de los patrones de BTEX 123

15

GLOSARIO

BTEX: Acrnimo que define la mezcla de benceno, tolueno, etilbenceno y los tres
ismeros del xileno (orto, meta y para).
CROMATOGRAMA: Es un grfico de la respuesta del detector en funcin del tiempo.
DETECTOR: Dispositivo que responde a cierta caracterstica del sistema que est sujeto
a observacin y convierte esa respuesta en una seal susceptible de medirse.
ESTANDARIZACIN: Procedimiento estadstico que consiste en verificar y documentar,
que exista un alto grado de seguridad en la obtencin de resultados que deberan ser
precisos y exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad previamente
establecidos.
EXACTITUD: Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor
convencional verdadero (Material de referencia interno de la firma), sea como un valor de
referencia aceptado (Material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el
valor encontrado (Valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un
cierto nmero de veces.
FID (FLAME IONIZATION DETECTOR) DETECTOR DE IONIZACIN POR LLAMA:
Detector para cromatografa de gases que se basa en la captura de los iones producidos
durante la pirlisis de analitos orgnicos en una flama.
GC (GAS CHROMATOGRAPHY): CROMATOGRAFA DE GASES: Es una tcnica de
gran sensibilidad y exactitud que se utiliza para separacin, identificacin y cuantificacin
de compuestos voltiles. Se basa en la distribucin del analito entre un fase mvil gaseosa y
una fase liquida inmovilizada sobre la superficie. La fase mvil se denomina gas
transportador, ya que es un gas inerte cuya finalidad es transportar las molculas de la
muestra a travs de la columna. Los adsorbentes, tales como gel de slice, almina, sales
inorgnicas, polmeros porosos, tamices moleculares y carbn grafitizado, son las fases
estacionarias.
LMITE DE CUANTIFICACIN: Cantidad ms pequea del analito en una muestra que
puede ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un parmetro del

16

anlisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa
particularmente para impurezas y productos de degradacin. Se expresa como
concentracin del analito.
LMITE DE DETECCIN: Cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede
ser detectada por una nica medicin, con un nivel de confianza determinado, pero no
necesariamente cuantificada con un valor exacto. Es comnmente expresado como
concentracin del analito.
LNEA BASE: Es la parte del cromatograma que registra la respuesta del detector en
ausencia de soluto o solvente.
PICO: Es la parte del cromatograma que registra la respuesta del detector mientras que
uno o ms componentes son eludos de la columna.
PRECISIN: Expresa la cercana de coincidencia (Grado de dispersin) entre una serie
de mediciones obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea bajo
condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisin
intermedia y reproducibilidad.
SPE (SOLID PHASE EXTRACTION) EXTRACCIN EN FASE SLIDA: La SPE es una
tcnica muy empleada en la preparacin de muestras para anlisis por cromatografa
lquida, de gases, electroforesis y an para espectrofotometra. Tambin, se ha convertido
en una de las tcnicas para clean-up y concentracin de muestras utilizadas por los
qumicos analticos.
SPLIT: Modo de inyeccin con divisin de flujo, en el cual rpidamente se vaporiza la
muestra antes de entrar en la columna. Una fraccin definida de la muestra de vapor entra
en la columna y el resto sale de la entrada a travs de un orificio de ventilacin.
SPLITLESS: Modo de inyeccin sin divisin de flujo, el cual utiliza una entrada divisora en
donde la abertura de divisin de flujo se bloquea durante el perodo de inyeccin de tal
manera que la mayor parte del vapor de la muestra entra en la columna
USEPA: (United States Environmental Protection Agency) Agencia de Proteccin
Ambiental de Estados Unidos cuya misin es la de proteger la salud de los humanos y la
del medio ambiente [1,17,25,41].

17

RESUMEN

La cromatografa de gases es una de las tcnicas ms ampliamente usadas en el anlisis
de contaminantes ambientales derivados del petrleo, ya que esta es una tcnica analtica
instrumental de alta sensibilidad capaz de identificar cualitativa y cuantitativamente
concentraciones muy bajas de estos componentes.
Se realiz la estandarizacin de la tcnica de Cromatografa de Gases con Detector de
Ionizacin por Llama (GC/FID) para la determinacin de BTEX en matrices acuosas. En el
proceso de estandarizacin se estimaron los valores para los parmetros que determinan
el rendimiento del mtodo analtico como son: precisin, exactitud, linealidad, lmite de
deteccin, lmite de cuantificacin y sensibilidad; logrando valores aceptables de estas
medidas.
En la extraccin y preconcentracin de la matriz, se emple la extraccin en fase slida
(SPE) utilizando cartuchos C
18
y diclorometano como solvente de elucin. Este mtodo de
extraccin expuso buenos porcentajes de recuperacin, entre 69,22 y 80,01%, con
desviaciones estndar inferiores al 10%.
El mtodo fue aplicado para la determinacin de BTEX en matrices acuosas, usando
muestras reales procedentes de la trampa de grasas ms limpia de tres estaciones de
servicio de la ciudad de Pereira. Se encontraron concentraciones de 0,013ppm, 0,014ppm
y 0,018ppm de etilbenceno, m,p-xileno y o-xileno respectivamente en una de las tres
estaciones de servicio. Aunque en Colombia no existe una ley como tal que limite la
concentracin de BTEX en agua, los resultados obtenidos indican que se genera poca
contaminacin de agua con estos compuestos en las estaciones de servicio analizadas.

18

JUSTIFICACIN

El crecimiento exponencial de la poblacin mundial ha dado como resultado una mayor
demanda de combustibles fsiles (hidrocarburos). Aunque muchos de estos compuestos
se utilizan para generar energa, un alto porcentaje se libera al ambiente en los procesos
de extraccin, refinado, transporte y almacenamiento, lo que representa un riesgo
potencial para los ecosistemas; tal es el caso de algunos componentes de la gasolina
denominados BTEX (Benceno, Tolueno, Etilbenceno, orto-, meta-, para-xileno) que
constituyen una de las principales fuentes de contaminacin de suelos, aire y agua. Son
usados ampliamente en industrias, tales como de impresin, pinturas, resinas sintticas,
gomas sintticas y como intermedios qumicos en la sntesis de diversos compuestos.
Las fuentes ms comunes de contaminacin por BTEX en el agua son: prdidas
producidas en los tanques subterrneos de almacenamiento de productos derivados del
petrleo o vertidos ocurridos durante el transporte de dichos productos, efluentes de
estaciones de gasolina y de las industrias qumicas, lixiviacin de tanques de
almacenamiento de gasolina y de los vertederos. El uso de agua contaminada ocasiona
un montn de problemas para la salud humana y las vidas acuticas [2,3,4,5].
Los efectos potenciales en la salud humana por exposicin a los BTEX por encima del
mximo nivel contaminante (MCL, por sus siglas en ingls) permitido en agua potable;
son: anemia, disminucin de plaquetas en la sangre, mayor riesgo de cncer, daos en el
sistema nervioso y problemas en el hgado y el rin. Por ende, la presencia de estas
sustancias qumicas en el agua, son un enorme peligro para la salud humana [6].
Para el caso de Colombia, aunque no existe una ley como tal que limite la concentracin
de estos compuestos en el agua, los BTEX son foco de atencin dentro de los aspectos
de salud y de conservacin del medio ambiente; por lo que se han incluido como
sustancias de inters sanitario en el Decreto 3930 de 2010 para usos de agua y residuos
lquidos [7].

19

El benceno es una sustancia cancergena, razn por la cual el Ministerio de Trabajo, por
medio del Decreto 1214 del 6 de Julio de 1999, restringi el uso de ste en las industrias
de Colombia [8].
A nivel internacional: el benceno, el tolueno y el etilbenceno son compuestos designados
como contaminantes prioritarios por la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados
Unidos (USEPA, por sus siglas en ingls). Y La accin y niveles de riesgo del benceno,
tolueno, etilbenceno y xilenos son descritos en las normas de calidad del gobierno
Holands para la evaluacin de la contaminacin del suelo y el agua [9].
La USEPA establece los siguientes lmites mximos permisibles en agua potable en mg/L
para BTEX: benceno, 0.005; tolueno, 1.0; etilbenceno, 0.7 y mezcla de xilenos, 10 [10].
Los lmites mximos permisibles establecidos por la Secretara de Salud de Mxico
permisible en agua potable para BTEX en mg/L son: benceno, 0.01; tolueno, 0.3;
etilbenceno, 0.7 y mezcla de xilenos, 0.5 [11]. La unin europea (EU) establece el mximo
nivel contaminante de 0,001 mg/L para el benceno en agua potable [12].
Las consecuencias de la contaminacin con BTEX de las aguas sobre el abastecimiento
pblico, su uso agrcola e industrial, as como sus efectos ambientales pueden llegar a
tener influencias negativas de gran magnitud, es por esto que se necesita verificar la
concentracin de estos compuestos en las fuentes de captacin de plantas
potabilizadoras y efluentes de empresas como el de las estaciones de servicio.
Con este trabajo se pretende estandarizar por Cromatografa de Gases utilizando un
Detector de Ionizacin por Llama (GC/FID) el anlisis de BTEX en matrices acuosas, ya
que esta es una tcnica analtica instrumental de alta sensibilidad capaz de identificar
cualitativa y cuantitativamente concentraciones muy bajas de constituyentes voltiles y
semivoltiles del petrleo. El anlisis de estos compuestos con este mtodo analtico
requiere de una extraccin y preconcentracin previa, para lo cual se han utilizado
tcnicas como el mtodo de purga y trampa con cromatografa de gases, extraccin en
fase slida (SPE), y la microextraccin en fase slida (SPME). Para el desarrollo de este
proyecto se busca la estandarizacin de la SPE [13].
Atendiendo a la demanda del sector industrial, organismos de control y a la comunidad en
general, el grupo de estudio del recurso hdrico implement un mtodo analtico

20

estandarizado para el anlisis de BTEX, como aporte de la universidad en el soporte
tcnico a la comunidad regional.

21

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Las consecuencias de la contaminacin de aguas con BTEX sobre el abastecimiento
pblico, su uso agrcola e industrial, as como sus efectos ambientales, pueden llegar a
tener influencias negativas. Corporaciones como la Corporacin Autnoma Regional de
Risaralda (CARDER) y la Secretara de Salud de Risaralda son las encargadas de velar
por el cuidado del medio ambiente en la regin; es por esto que se requiere de una
tcnica analtica instrumental de alta sensibilidad para determinar de manera confiable el
grado de contaminacin y poder tomar as las medidas respectivas.
Teniendo en cuenta la gran demanda del sector industrial y comunidad en general para la
determinacin de BTEX en el agua, y ante la ausencia de un mtodo analtico
estandarizado para el anlisis de estos compuestos en el Laboratorio de Aguas y
Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira, es fundamental contar con una
tcnica analtica estandarizada como la cromatografa de gases con detector de
ionizacin por llama que permita implementar el mtodo analtico y sobre todo arrojar
datos con adecuado y comprobable grado de confianza. Igualmente esto ayudara a
estudios posteriores del Grupo de Investigacin del Recurso Hdrico, brindndole ms
herramientas para profundizar en el estudio sobre BTEX.
Puede el Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira
suplir la necesidad regional para analizar BTEX en matrices acuosas a concentraciones
bajas por medio de la estandarizacin de una tcnica cromatogrfica de alta resolucin?

22

OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la tcnica de cromatografa de gases con detector de ionizacin por
llama (CG/FID) para la identificacin y cuantificacin de BTEX en matrices acuosas.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Estandarizar la tcnica de extraccin en fase slida determinando los parmetros de:
porcentaje de recuperacin y precisin.
Obtener en forma experimental los parmetros de: precisin, exactitud, lmite de
deteccin y cuantificacin, linealidad y sensibilidad para la tcnica cromatogrfica.
Analizar el contenido de BTEX en los efluentes (trampas de grasas) de tres estaciones
de servicio de la ciudad de Pereira para determinar su grado de contaminacin.

23

1. MARCO TERICO

1.1 ESTANDARIZACIN
La necesidad de contar con mediciones exactas en la actualidad es una premisa
fundamental del desarrollo industrial y por ende, econmico y comercial de la sociedad.
Las mediciones en general, y particularmente las analticas, se utilizan para tomar
decisiones en diferentes campos: uno de ellos es la relacin compra/venta o aceptacin y
rechazo, como puede ser la aceptacin de un producto en otro pas o de un lote de
producto en una empresa; la eleccin de un proveedor o la evaluacin de la conformidad
de un producto; en ciertos casos el establecimiento de multas si no se cumple con la
normatividad, etc. Claramente es importante determinar el resultado correcto y ser capaz
de demostrar que lo es, para que cualquier decisin basada en l pueda tomarse con
confianza; es all donde se hace importante la estandarizacin de mtodos de anlisis que
permite demostrar que un mtodo analtico cumple con los requisitos particulares para un
uso especfico en el laboratorio mediante el examen y provisin de evidencias objetivas
[14,15].
La estandarizacin de un mtodo analtico es un proceso riguroso que dependiendo de la
tcnica analtica a la que pertenezca el mtodo, la matriz, el analito, la cantidad de
parmetros de estandarizacin, y de la logstica empleada para su desarrollo, puede
requerir de un tiempo ms o menos considerable (en algunos casos puede superar los
seis meses) [15].
Muchos analistas consideran que un mtodo estndar o de referencia, que ha sido
estandarizado por algn organismo que posee una cierta reputacin, puede aplicarse
directamente al laboratorio. Siguiendo un mtodo previamente estandarizado se puede
alcanzar buenos resultados, pero hace falta demostrar que funcionan en nuestro mbito
de trabajo.
Por tanto, un mtodo siempre debe estandarizarse cuando es necesario verificar que sus
parmetros de calidad se adecuan al problema analtico particular que se debe resolver
en el laboratorio [16].

24

Siguiendo un mtodo previamente estandarizado se puede alcanzar buenos resultados
pero hace falta demostrar que funcionan en nuestro mbito de trabajo. Por tanto, un
mtodo siempre debe estandarizarse cuando es necesario verificar que sus parmetros
de calidad se adecuan al problema analtico particular que se debe resolver en el
laboratorio [16].
De acuerdo al mtodo de ensayo que se est estandarizando; volumtrico, gravimtrico,
instrumental, se debe establecer una metodologa especfica para encontrar los
parmetros que se quieran como son:

1.1.1 LINEALIDAD Y RANGO
La linealidad es la capacidad del mtodo para proporcionar resultados que son
directamente (o por medio de transformaciones matemticas) proporcionales a la
concentracin del analito en la muestra dentro de un rango establecido.
Siempre que sea posible se buscar una respuesta de tipo lineal que facilitar su trazado,
interpolacin e interpretacin. En el caso que la respuesta del mtodo no sea lineal pero si
proporcional a la concentracin son vlidos otros ajustes matemticos.
El rango se define como el intervalo comprendido entre la concentracin mnima y
mxima de analito para el cual se ha demostrado su correcta precisin, exactitud y
linealidad del mtodo descrito.
Para evaluar la linealidad se recomienda que dentro del rango establecido se estudien al
menos 5 niveles de concentracin las cuales se analicen por triplicado (K=5, nde
replicas=3); estadsticamente lo correcto sera analizar las muestras de forma aleatoria,
pero para minimizar posibles efectos de memoria en el equipo es conveniente analizarlas
en sentido creciente de concentracin. Otro aspecto importante es realizar pesadas
independientes, ya que as se elimina el posible error sistemtico que se podra arrastrar
partiendo de una sola pesada y realizando diluciones; no obstante, para evaluar la
linealidad en las impurezas se suelen utilizar sucesivas diluciones ya que normalmente se
trabaja a niveles de concentracin muy bajos y esto dificultara las pesadas.

25

Con los resultados de estudio de la linealidad se hace una relacin entre las cantidades o
concentraciones X (variable independiente o predictiva) y la respuesta y (variable
dependiente, por ejemplo reas, alturas, absorbancias, etc.). La relacin entre ambas
variables se expresa matemticamente como una recta de regresin del tipo y = bx + a,
donde b es el valor de la pendiente y a el trmino independiente. Esta regresin es
obtenida por un mtodo de ajuste (por lo general mnimos cuadrados); en algunos casos
podra ser necesaria alguna transformacin matemtica previa (uso de logaritmos,
recprocos de las variables, etc.) para obtener funciones lineales.
La pendiente b se encuentra relacionada con la sensibilidad del mtodo analtico de forma
que a mayor pendiente mayor sensibilidad (respuesta del mtodo frente a los cambios de
la concentracin del analito).
El trmino independiente a, u ordenada en el origen, es la interseccin de la recta con el
eje de ordenadas y es indicativo del error sistemtico. La representacin grfica de la
recta de regresin en un sistema de coordenadas junto con los valores experimentales,
permite visualizar la bondad del ajuste. Si la recta no pasa cerca del origen de
coordenadas significa que el mtodo a evaluar est afectado por un error sistemtico por
defecto o exceso en el intervalo estudiado. Si existen diferencias apreciables entre los
valores experimentales y los puntos de la recta significa que la linealidad no es buena.
Independiente de la apariencia de la recta, resulta conveniente evaluar el coeficiente de
correlacin (r) y el coeficiente de determinacin (r
2
). El coeficiente de correlacin nos
indica el grado de relacin entre la variable x (concentracin), y la variable y (respuesta).
Su valor mximo es 1. Si r es cercano a la unidad significa que existe correlacin con una
probabilidad elevada. Un valor nulo indica ausencia de relacin lineal entre las variables.
El valor recomendable para el coeficiente de correlacin es 0,999, aunque en el caso de
impurezas se admite 0,990.
La informacin obtenida mediante el clculo de r es limitada y no justifica por s sola la
linealidad, siendo r
2
coeficiente de determinacin el que aporta una mayor significacin
estadstica ya que representa la proporcin de la variacin total de y explicada por el
modelo [17].

26

1.1.2 PRECISIN
La precisin est relacionada con la dispersin de las medidas alrededor de su valor
medio o central y corresponde al grado de concordancia entre ensayos individuales
cuando el mtodo se aplica repetidamente a mltiples alcuotas de una muestra
homognea.
La precisin se expresa matemticamente como la desviacin estndar (SD), o ms
comnmente como la desviacin estndar relativa (RSD) o coeficiente de variacin (CV)
[18].
El objetivo del estudio de la precisin es conocer la variabilidad o el ms-menos del
mtodo de ensayo. Esta variabilidad es debida a errores aleatorios inherentes a todo
mtodo de ensayo. Como consecuencia de la existencia de estos errores, los anlisis
efectuados sobre muestras idnticas, en las mismas circunstancias, no conducen
generalmente a resultados idnticos. Los factores susceptibles que influirn sobre los
resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados (analista, equipo,
instrumental, reactivos, tiempo, etc.) de aqu la importancia del estudio de la precisin.
La precisin diferentes tipos de estudios:
1.1.2.1 Repetibilidad: se expresa matemticamente por el coeficiente de variacin
(desviacin estndar relativa) de una serie de medidas. Esta estudia la variabilidad del
mtodo efectuando una serie de anlisis sobre la misma muestra en las mismas
condiciones operativas (por un mismo analista, con los mismos aparatos y reactivos, etc.),
en un mismo laboratorio y en un periodo de tiempo corto.
Uno de los factores que ms puede influir en la Repetibilidad del mtodo de anlisis es la
concentracin del analito, ya que la desviacin estndar de las respuestas obtenidas
aumenta al disminuir la concentracin del analito.
1.1.2.1.1 Repetibilidad del sistema instrumental
Este parmetro estudia la variabilidad debida nicamente al instrumento, y se determina
analizando repetidamente una misma muestra de forma consecutiva de 6 a 10 veces. La
estimacin de esta se realiza con el clculo del coeficiente de variacin de las respuestas
obtenidas.

27

Los resultados obtenidos en la repetibilidad instrumental dependen del instrumento, por
ejemplo no se puede obtener el mismo coeficiente de variacin en un equipo con
inyeccin automtica que con inyeccin manual.
1.1.2.1.2 Repetibilidad del mtodo
El ensayo de Repetibilidad del mtodo se efecta sobre una serie de alcuotas de una
muestra homognea que se analiza independientemente desde el principio (preparacin
de muestra) hasta el final (lectura de resultados) por el mismo instrumento y el mismo
analista.
La Repetibilidad del mtodo depende generalmente del proceso de preparacin de la
muestra. Es decir, cuanto mayor sea la manipulacin de la muestra ms probable es que
la variabilidad del mtodo aumente.
1.1.2.2 Precisin intermedia: Estudia la variabilidad del mtodo efectuando una serie de
anlisis sobre la misma muestra pero en condiciones operativas diferentes (diferentes
analistas, aparatos, das, etc.) y en un mismo laboratorio.
1.1.2.3 Reproducibilidad: Estudia la variabilidad del mtodo bajo condiciones operativas
diferentes y en distintos laboratorios [17].

1.1.3 EXACTITUD
La exactitud de un procedimiento analtico expresa la proximidad entre el valor que es
aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor
experimentalmente encontrado.
De esta definicin surge el problema de saber cul es el valor verdadero. No obstante,
cuando se dispone de patrones de referencia certificados, el valor de dicho patrn es el
que se acepta como valor verdadero y la exactitud puede evaluarse aplicando el mtodo
sobre dicho patrn, o bien analizando muestras de placebo o de problema a las que se ha
aadido una cantidad conocida de dicho patrn. Tambin se acepta la comparacin de los
resultados con un mtodo de referencia validado del que se ha demostrado su exactitud;
entonces el valor verdadero es el que se obtiene con dicho mtodo de referencia.

28

La exactitud debe determinarse en todo el rango especificado para el mtodo analtico. Se
recomiendan un mnimo de 9 determinaciones sobre 3 niveles de concentracin del
analito que cubran el rango especificado (por ejemplo 3 determinaciones por 3 niveles de
concentracin, que podra ser la concentracin central y las concentraciones en los
extremos del rango).
La exactitud se expresar como porcentaje de recuperacin en la valoracin de una
cantidad conocida de analito aadida sobre la muestra o como la diferencia entre la media
obtenida y el valor aceptado como verdadero junto a los intervalos de confianza.
No siempre se obtienen valores de recuperacin cercanos al 100%, ya que sta depende
de la matriz de la muestra, de la efectividad de mtodo de preparacin y extraccin y de la
concentracin del analito. Aunque es deseable alcanzar valores de recuperacin cercanos
al 100%, en algunas muestras de matrices complejas solo se obtienen valores del 50, 80
o 90%. En estos casos es importante que aunque la recuperacin sea baja, la precisin
del mtodo sea alta ya que entonces puede intentar aplicarse un factor de correccin.
La desviacin de la exactitud por exceso se produce cuando existen interferencias y la
selectividad del mtodo no es la adecuada, entonces se obtienen resultados superiores al
valor verdadero. En este caso, si es posible, se debera modificar las condiciones del
mtodo para optimizar la selectividad o bien cambiar a otro alternativo que sea selectivo.
La desviacin de la exactitud por defecto suele producirse cuando la matriz de la muestra
es compleja y la extraccin del analito requiere varios pasos obtenindose recuperaciones
ms bajas. Cuando esto ocurre sera conveniente intentar optimizar la preparacin de la
muestra para mejorar el factor de recuperacin. Si esto es muy costoso o no es posible,
cuando la exactitud obtenida es repetible, es decir, tienen una precisin elevada y adems
es homognea en todos los niveles de concentracin estudiados, puede aplicarse un
factor de correccin en el clculo final para compensar las prdidas del analito debidas al
mtodo de extraccin [17].
1.1.4 LMITE DE DETECCIN (LD):
El lmite de deteccin (LD) corresponde a la mnima cantidad de analito en la muestra que
se puede detectar aunque no necesariamente cuantificar en las condiciones establecidas

29

y se expresa en unidades de concentracin (%, ppm, ppb, etc.). Su determinacin puede
efectuarse mediante la relacin entre el ruido y la seal debida al analito.
1.1.5 LMITE DE CUANTIFICACIN (LC):
Dado un mtodo analtico determinado, se entiende por lmite de cuantificacin (LC) de
dicho mtodo, la mnima cantidad de analito presente en la muestra que se puede
cuantificar, bajo las condiciones experimentales descritas, con una adecuada precisin y
exactitud; tambin se expresa en unidades de concentracin [17,18].
Existen diversos procedimientos de anlisis y sistemas instrumentales que dependiendo
de sus caractersticas definen en muchos casos cul es el mtodo ptimo para determinar
tanto el lmite de deteccin como el de cuantificacin. Entre los mtodos ms comunes se
tienen los siguientes:
1.1.5.1 Mtodo basado en la relacin seal/ruido
Este mtodo, uno de los ms conocidos y empleados, requiere que el procedimiento de
anlisis sea instrumental y que proporcione una seal blanco, un ruido de fondo o una
lnea de base, es decir una seal residual a concentracin cero de analito
(espectrofotometra UV-visible o la cromatografa de gases o lquida).
Este procedimiento presenta la desventaja de que en numerosas ocasiones al llevar a
cabo la comprobacin experimental del LC calculado, se observa que es posible obtener
resultados igualmente precisos y exactos an cuando se desciende ms en la
concentracin lmite
1.1.5.2 Mtodo basado en la desviacin estndar de la respuesta del blanco y la
pendiente de la recta de calibrado
De acuerdo a la IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry), puede
calcularse el LD Y LC de un mtodo analtico a partir del conocimiento de la desviacin
atribuible a la respuesta de una muestra de placebo y la pendiente de la recta de
calibrado del analito.
La expresin a aplicar para este clculo vara en funcin de si el mtodo instrumental
empleado corrige la seal frente a un blanco o no.

30

1.1.5.2.1 Mtodos instrumentales que corrigen la seal frente a un blanco
Este primer caso correspondera a un mtodo espectrofotomtrico en el que se podra
calcular el LD y el LC tericos mediante la expresin:

Donde:
C
L
= Concentracin de analito en el lmite de cuantificacin o deteccin.
K= Constante que usualmente se considera igual a 10 para el LC e igual a 3 para el LD.
S
bl
= desviacin estndar correspondiente a la seal del blanco o placebo.
b= pendiente de la curva de calibracin obtenida al representar la respuesta del mtodo
frente a la concentracin de analito. Evidentemente el rango de esta recta tiene que ser
cercano en concentraciones a los niveles lmite de cuantificacin [17].
Si el mtodo analtico realiza la lectura final por duplicado o triplicado, mejorando con ello
la precisin, se ha de introducir en la frmula el trmino correspondiente a las rplicas (n)
en la siguiente forma:

1.1.5.2.2 Mtodos instrumentales que no corrigen la seal frente a un blanco
El caso en que no se realiza correccin frente a un blanco es tpicamente el de mtodos
cromatogrficos GC o HPLC. En stos se ha de tener en cuenta tambin la seal media
obtenida del anlisis correspondiente al placebo, es decir, el ruido de fondo o background
del sistema (Ybl) con lo que la expresin final ser entonces:

31

1.1.5.3 Mtodo basado en la extrapolacin de la recta de calibrado a concentracin
cero
Se trata de un procedimiento aplicable tambin a mtodos analticos instrumentales que
proporcionan resultados numricos y dirigido a evitar el clculo, en ocasiones costoso en
tiempo, como se ha podido observar, de la seal media del blanco y su desviacin
estndar. El mtodo utiliza la pendiente de una recta de calibrado realizada a niveles de
concentracin cercanos a los lmites esperados, pero sustituye el valor real de la seal del
blanco por el resultante de la extrapolacin de dicha recta. La interseccin con el eje Y
corresponder tericamente al valor de la respuesta a concentracin cero de analito [17].

1.1.6 SENSIBILIDAD
La sensibilidad de un mtodo analtico corresponde a la mnima cantidad de analito que
puede producir un resultado significativo [18]. En contraste con el lmite de deteccin, la
sensibilidad de un mtodo est definida como la habilidad para distinguir entre diferentes
concentraciones, y se calcula as:

Para mtodos donde la respuesta con respecto a la concentracin es una funcin lineal, la
sensibilidad es constante con respecto a la concentracin y es igual a la pendiente de la
curva de calibracin. Contrariamente a las funciones lineales, la sensibilidad de mtodos
cuando su respuesta es no-lineal cambia con la concentracin del analito [19].

1.2 CROMATOGRAFA DE GASES
Desde sus inicios en los aos cincuenta, la cromatografa de gases (GC) se ha convertido
en la tcnica principal para la separacin y anlisis de compuestos voltiles. A partir de
entonces, las aplicaciones de sta tcnica han ido aumentado a medida que se han
mejorado los instrumentos de cromatografa; siendo factible la separacin, caracterizacin
y cuantificacin de una gran variedad de compuestos tanto en muestras ambientales,
biolgicas y mdicas, como en comidas, sabores y fragancias. En la actualidad es usada

32

rutinariamente en multitud de laboratorios universitarios, de investigacin e industriales,
debido a su alta resolucin, sensibilidad y selectividad. Adems de las aplicaciones
tpicamente analticas, la GC puede utilizarse a escala preparativa para la obtencin de
compuestos de elevada pureza [20,25].
En cromatografa de gases los analitos (siempre en estado gaseoso) se distribuyen entre
una fase mvil gaseosa y una fase estacionaria que puede ser un slido o una delgada
pelcula lquida que recubre al slido; dependiendo de la fase estacionaria que se utilice
(slida o lquida) la cromatografa en fase gaseosa se clasifica en: cromatografa gas-
slido (CGS) y cromatografa gas-lquido (CGL). De las dos modalidades, la CGL es la
forma ms selectiva de la cromatografa y la que se presta a mayores usos.
En cromatografa de gases, la fase mvil se denomina gas transportador, ya que es un
gas inerte cuya finalidad es transportar las molculas de la muestra a travs de la
columna. Los adsorbentes, tales como gel de slice, almina, sales inorgnicas, polmeros
porosos, tamices moleculares y carbn grafitizado, son las fases estacionarias en la CGS.
Esta se utiliza principalmente para la separacin de gases permanentes y compuestos
orgnicos muy voltiles. Los lquidos orgnicos de alto punto de ebullicin constituyen la
fase estacionaria de la CGL. La fase liquida se extiende como una pelcula delgada sobre
un slido inerte llamado soporte slido. La base para la separacin es la particin de la
muestra dentro o fuera de esta pelcula lquida. Si se puede encontrar una fase lquida
que tenga solubilidad selectiva para dos compuestos, entonces estos dos pueden
separarse mediante cromatografa de gases.
1.2.1 VENTAJAS
Las siguientes son algunas ventajas generales de GC que cabe destacar:
Alta Resolucin: La eficiencia puede ser expresada en nmeros de platos, y las
columnas capilares suelen tener nmeros de platos de cientos de miles. Los ismeros
con puntos de ebullicin muy prximos que no pueden separarse por destilacin se
separan fcilmente mediante la cromatografa de gases. Adems, el hecho de que las
concentraciones de soluto son muy diluidas, en las columnas de GC se elimina la
posibilidad de azetropos, que a menudo plaga las separaciones por destilacin.

33

La CG se presta a usos ms variados que la mejor columna de destilacin, ya que la
columna cromatogrfica puede sustituirse fcilmente. Esto permite la separacin
selectiva debido a solubilidades diferentes, aun cuando los puntos de ebullicin estn
muy cercanos. Como hay numerosas columnas, se puede escoger entre ellas, lo que
confiere variedad a la gama de muestras que pueden manejarse [20].
Sensibilidad: Esta caracterstica del sistema de cromatografa de gases explica en
gran medida su uso extensivo. El ms simple detector de conductividad trmica
puede medir fcilmente microgramos. El detector de ionizacin por llama fcilmente
mide nanogramos (10
-9
g), y los detectores ms selectivos como el de captura de
electrones y el detector fotomtrico de llama alcanzan los picogramos (10
12
g). Este
nivel de sensibilidad es ms impresionante si se tiene en cuenta que el tamao de la
muestra utilizada es del orden de 1L o menos.
Tiempo de anlisis: La separacin de todos los componentes de una muestra puede
tardar desde varios segundos hasta 30 minutos. Anlisis que rutinariamente tardan
una hora o ms se pueden reducir a una cuestin de minutos, debido a la alta tasa de
difusin en fase gaseosa y el rpido equilibrio entre las fases mvil y estacionaria
[23].
Resultados cuantitativos: La GC permite obtener muy buenos resultados
cuantitativos. Sin embargo, la exactitud es funcin de muchos factores. Se puede
obtener buena exactitud en una amplia gama de concentraciones de la muestra,
desde miligramos hasta nanogramos [22].
Comodidad: El funcionamiento del GC es un procedimiento relativamente sencillo.
No es difcil para capacitar al personal no tcnico para llevar a cabo separaciones de
rutina [23].
Costos: En comparacin con muchos instrumentos de anlisis disponibles en la
actualidad, los cromatgrafos de gases representan un valor excelente [23].

1.2.2 INSTRUMENTACIN EN CROMATOGRAFA DE GASES

34

En 1954 se introdujo en el mercado el primer cromatgrafo de gases comercial.
Rpidamente fue aceptado como un importante instrumento para el anlisis qumico tanto
en la investigacin como en la industria. Con igual rapidez se han ideado y desarrollado
perfeccionamientos, accesorios, complementos y variantes, que no han cesado de
aparecer hasta la fecha. En los aos sesenta, se hicieron habituales los integradores
electrnicos y los equipos para el procesamiento de datos basados en una computadora.
Los aos ochenta introdujeron la utilizacin de las computadoras para el control
automtico de la mayora de los parmetros instrumentales, tales como la temperatura de
la columna, caudales y la inyeccin de la muestra; el desarrollo de instrumentos de alto
rendimiento a un coste moderado; y tal vez lo ms importante, el desarrollo de las
columnas abiertas que son capaces de separar una multitud de analitos en un tiempo
relativamente corto [22,25].
Un cromatgrafo de gases funciona de la siguiente manera. Un gas portador inerte (como
el helio) fluye continuamente desde un cilindro de gas de gran tamao mediante el puerto
de inyeccin, la columna, y el detector. La tasa de flujo del gas portador es
cuidadosamente controlada para garantizar tiempos de retencin reproducibles y reducir
al mnimo el ruido y la deriva del detector. La muestra se inyecta (normalmente con una
microjeringa) en el puerto de inyeccin con calefaccin donde se vaporiza y es llevada a
la columna; por lo general una columna capilar de 15 a 30 m de largo recubierta en su
interior con una delgada (0,2 m) pelcula de un lquido de alto punto de ebullicin (fase
estacionaria). Se da la particin de la muestra entre las fases mvil y estacionaria,
ocasionando la separacin en componentes individuales basados en la solubilidad relativa
en la fase lquida y presin de vapor relativa.
Despus de la columna, el gas portador y la muestra pasan por un detector. Este
dispositivo mide la cantidad de la muestra, y genera una seal elctrica. Esta seal va a
un sistema de datos integrador que genera un cromatograma (el acta de anlisis). En la
mayora de los casos el sistema informtico de gestin integra automticamente el rea
del pico, calcula el rendimiento e imprime un informe con los resultados cuantitativos y
tiempos de retencin. Cada uno de estos siete componentes se muestran en la figura 1.

35

Figura 1. Diagrama de un sistema de cromatografa gas-lquido.

1.2.2.1 GAS PORTADOR
El gas portador es la fase mvil en GC. Su objetivo principal es la de llevar la mezcla de
los solutos desde que se introduce en el sistema cromatogrfico hasta la salida del
detector, pasando a travs de la columna donde se produce la separacin. Debe ser
qumicamente inerte y no interaccionar ni con la columna ni con los componentes de la
mezcla, es decir, no debe afectar a los procesos de particin o de adsorcin. Un objetivo
secundario es proporcionar una matriz adecuada para el detector que permita medir los
componentes de la muestra [22].
Los gases ms utilizados son: nitrgeno, hidrgeno y helio. La eleccin de uno de ellos va
a depender de: la fase estacionaria, y el tipo de detector utilizado. Otros aspectos a
considerar seran costo, pureza y seguridad en su uso [22,24].

36

El Helio es el gas portador ms popular debido a que presenta mayor eficiencia a ratas de
flujo rpidas, se utiliza para los detectores de conductividad trmica y de ionizacin por
llama. El Hidrgeno tambin es comnmente usado, aunque no se recomienda por su
potencial de explosin. El nitrgeno proporciona una sensibilidad un poco mayor, pero un
anlisis ms lento que el helio; se utiliza tanto para el detector de captura de electrones
como el detector de ionizacin por llama [20,22].
Es importante que el gas portador sea de alta pureza. Las impurezas (en especial oxigeno
y agua) pueden alterar qumicamente la fase lquida y, por ende, modificar los tiempos de
retencin. Las columnas de polisteres, poliglicoles y poliamidas son susceptibles de ser
degradadas por el oxigeno y el agua. Trazas de agua pueden des-adsorber otros
contaminantes en la columna y producir numerosas seales en el detector o hasta picos
fantasma [22].
1.2.2.2 SISTEMA DE INYECCIN
Las muestras para GC pueden ser gases, lquidos o slidos. La cantidad de muestra que
se debe introducir depende del tamao de la columna; pero, generalmente en
cromatografa de gases se utilizan muestras pequeas (entre 0,01 y 20 L) [22,25].
La eficacia de la columna requiere que la muestra sea de un tamao adecuado y que sea
introducida como un tapn de vapor; la inyeccin lenta de muestras demasiado grandes
provoca un ensanchamiento de las bandas y una pobre resolucin. El mtodo ms comn
de inyeccin de muestra implica el uso de una microjeringa para inyectar una muestra
liquida o gaseosa a travs de un septum de goma de silicona, en una cmara de
vaporizacin instantnea situada en la cabeza de la columna (esta cmara normalmente
est unos 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil de la
muestra); el mbolo de la jeringa puede manejarse a mano (inyeccin manual) o mediante
un dispositivo electrnico o neumtico (inyeccin automtica). Para columnas capilares el
tamao de la muestra es de aproximadamente 10
3
L; por lo cual, para mantener la
cantidad de muestra en el intervalo correcto, existe un inyector especial que reduce la
cantidad de muestra que llega a la cabeza de la columna capilar: el inyector split/splitless.
En el modo split la muestra se divide permitiendo pasar a la columna solamente una
pequea fraccin de la muestra, desechando el resto; mientras que en el modo splitless
toda la muestra se inyecta en la columna [25,27].

37

Para el caso de muestras slidas, estas se disuelven en un solvente apropiado y se
introducen de forma anloga a los lquidos normales [22].
1.2.2.3 CONFIGURACIN DE LA COLUMNA Y DEL HORNO DE LA COLUMNA
La columna constituye la parte esencial del sistema cromatogrfico y de la que depende el
xito o el fracaso de los anlisis. En ella est contenida la fase estacionaria, que
determina la selectividad y la eficacia de las separaciones.
Hasta hace poco tiempo, la mayor parte de las cromatografas de gases se realizaban con
columnas empaquetadas o de relleno, mientras que actualmente se utilizan ms
extensamente las columnas tubulares abiertas o capilares porque ellas presentan mejor
eficacia en la separacin ya que proporciona un nmero mayor de platos tericos. Las
primeras suelen tener una longitud comprensible entre 1 y 6 m, con un dimetro interno
que oscila entre 2 y 6 mm, mientras que las columnas capilares tienen longitudes entre 10
y 100 m y dimetros comprendidos entre 0,1 y 0,6 mm. En cuanto a los materiales de que
estn fabricadas, suelen ser acero inoxidable o vidrio para columnas empaquetadas, y
slice para las capilares, si bien se han utilizado tambin otros metales como aluminio o
cobre, e incluso tefln [21].
La temperatura es una variable importante en cromatografa, siendo necesario su control
preciso en orden a obtener resultados reproducibles. Por ello, las columnas
cromatogrficas suelen disponerse en rollos de 10 a 30 cm de dimetro, con el fin de
poder colocarlas en el interior de un horno termostatizado que permita operar entre unos
10 C por encima de la temperatura ambiente y unos 450 C, con una precisin de 0,1 C.
La temperatura ptima de la columna depende del punto de ebullicin de la muestra y del
grado de separacin requerido. En la prctica con temperaturas de la columna iguales o
ligeramente superiores a la temperatura de ebullicin promedio de la muestra, se obtienen
tiempos de elucin razonables (2 a 30) minutos. Para muestras cuyos componentes
presentan un amplio intervalo de temperaturas de ebullicin, a menudo es conveniente
emplear una programacin de la temperatura, con lo que se aumenta la temperatura de la
columna bien de forma continua o bien por etapas, al mismo tiempo que tiene lugar la
separacin [21,25].

38

En general, la resolucin ptima se asocia con una temperatura mnima; en contrapartida
la reduccin de temperatura produce un aumento en el tiempo de elusin, y por lo tanto
del tiempo que se necesita para completar el anlisis [25].
1.2.2.4 SISTEMAS DE DETECCIN
En el cromatgrafo de gases uno de los elementos ms importantes es el detector; este
es un dispositivo que indica y mide los solutos en la corriente del gas portador,
convirtiendo una seal no medible directamente en una seal elaborable de una
propiedad fsica. Esta seal es elaborada por una comparacin entre el gas portador puro
y el mismo gas llevando cada uno de los componentes previamente separados en la
columna, esto es traducido en una seal elctrica que es amplificada y registrada al
momento de salir de la columna [29].
Varias son las caractersticas generales que debe reunir un detector para ser utilizado en
cromatografa, y que se pondrn de manifiesto en la generacin y calidad de la seal del
mismo. Estas caractersticas son las siguientes:
Sensibilidad adecuada: La sensibilidad del detector indica la respuesta del mismo
ante un cambio de la propiedad fsica que mide; a su vez, este cambio de
propiedad fsica se deber a la presencia de una menor o mayor cantidad de
componente en el detector. Debe ser lo ms alta posible.
Buena estabilidad y reproducibilidad: La lnea base de un cromatograma est
sometida a fluctuaciones fortuitas, conocidas como ruido de fondo, el cual se
puede producir en los distintos componentes del cromatgrafo. Originar una seal
estable (lnea de base) y reproducible (pico) [21,25].
Respuesta lineal: la linealidad del detector considera que la respuesta del mismo,
seal, sea proporcional a la variacin en la cantidad de componente que en un
momento dado se encuentre en el detector. Esta debe extenderse a varios
rdenes de magnitud.
Intervalo de temperaturas de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente
hasta al menos 400 C.
Tiempo de respuesta corto que sea independiente del caudal.
Respuesta semejante para todos los solutos o, por el contrario, una respuesta
selectiva y altamente predecible para uno o ms tipos de solutos [25].

39

Adems de las caractersticas indicadas, es deseable que el detector posea tambin:
tiempo de respuesta corto, resistencia mecnica y qumica, sencillez de manejo y
mantenimiento.
Algunos detectores son universales, es decir que son sensibles a prcticamente todos los
compuestos que eluyen de la columna. Por otro lado, hay detectores discriminativos
(selectivos) que son sensibles solo a compuestos especficos, dando un cromatograma
muy sencillo. Tambin pueden ser clasificados como destructivos o no de los analitos.
Los detectores se clasifican en dos grupos dependiendo de si slo conducen a una
informacin nica, como el tiempo de retencin y los que producen, adems de tiempo de
retencin, la informacin estructural del analito en cuestin. Por esta razn, algunos
cromatgrafos de gases estn equipados con dos o tres detectores vinculados en serie.
Sin embargo, la respuesta de todos los detectores depende de la concentracin molar o
de la masa de analito en la compaa de gas de arrastre [28].
En la tabla 1 puede observarse los detectores ms utilizados, con un breve resumen de
sus ventajas.

1.2.2.4.1 DETECTOR DE IONIZACIN POR LLAMA (FID)
El FID es el ms usado de los detectores, posee una alta sensibilidad y es de respuesta
universal, lo que significa que responde casi de la misma manera por unidad de masa de
analito sin que influya su estructura qumica mientras tenga carbonos orgnicos. Es
insensible a los gases no combustibles como H
2
O, CO
2
, SO
2
, y NO
X
.
El FID se basa en la conductividad elctrica de los gases. A temperatura y presin
normales, los gases se comportan como aislantes, pero si en su interior existen tomos o
molculas cargadas elctricamente, o electrones libres, se produce un incremento en la
conductividad. Las molculas de la muestra, que estn presentes en el gas de arrastre,
llegan al detector y son quemadas por la llama producida por la combustin de aire e
hidrgeno, dando como resultado la formacin de iones los cuales son reunidos en un
electrodo colector que genera una corriente, que es convertida en voltaje, y
posteriormente amplificada para ser captada por el registrador [21]. Un detector de
ionizacin por llama caracterstico se observa en la figura 2.

40

TIPO LMITE DE
DETECCIN
APROXIMADO
(g s
-1
)
INTERVALO
LINEAL
APROXIMADO
CARACTERISTICAS
Conductividad
trmica (TCD)
10
- 5
10
-6
10
3
- 10
4
Detector universal. Mide
cambios en la conduccin de
calor
Ionizacin por
llama (FID)
10
-12
10
6
- 10
7
Detector universal. Mide
corrientes inicas de pirolisis
Captura
electrnica (ECD)
10
-14
10
2
- 10
3
Detector selectivo para
compuestos que contienen
tomos con elevada afinidad
electrnica
Fotomtrico de
llama (FPD)
10
-13
10
2
Detector selectivo para
compuestos que contienen S
o P
Nitrgeno-Fsforo 10
-8
10
-14
10
5
- 10
7
Selectivo para compuestos
que contienen N o P
Fotoionizacin
(PID)
0
-8
10
-12
10
5
Detector universal (alguna
selectividad debida al gas de
la lmpara)
Detectot Hall 10
-11
10
5
Detector especifico para
compuestos que contienen
un halgeno, S o N
Espectmetro de
masas
(MS)
10
-12
Vara
dependiendo
del tipo de
espectmetro
de masas as
como de los
tipos de
compuestos
analizados
Detector universal
Espectrmetro
infrarrojo de
transformada de
Fourier
(FTIR)
10
-10
10
2
Molculas polares
Tabla 1. Propiedades de los detectores para cromatografa de gases.
El FID es tal vez el detector ms ampliamente utilizado para la cromatografa de gases
debido a varias ventajas: (a) responde a prcticamente todos los compuestos orgnicos

41

que contienen carbono con alta sensibilidad (aproximadamente 10
-13
g/mL); (b) no
responde a las impurezas comunes del gas portador como agua y dixido de carbono; (c)
cuenta con un amplio rango de respuesta lineal (aproximadamente 10
7
) y una excelente
estabilidad de la lnea base; (d) es relativamente insensible a pequeos cambios de
flujo/rata en la columna durante la programacin de la temperatura; (e) es altamente
seguro, duradero, y fcil de usar; y (f) tiene detector bajo de volumen muerto y rpida
respuesta. Sus limitaciones son: (a) se da poca o ninguna respuesta a los gases no
combustibles y todos los gases nobles; y (b) es un detector destructivo que modifica las
propiedades fsicas y qumicas de la muestra de forma irreversible [13].

Figura 2. Detector de ionizacin por llama caracterstico [22].

El FID responde a compuestos que en la combustin ceden especies con carga elctrica
en una llama hidrgeno/aire, la reaccin de los radicales libres que se da es:

42

Estas especies cargadas, bajo la influencia de un campo elctrico, son capturadas en un
electrodo colector y medidas por un electrmetro, cuya salida es amplificada. El campo de
aplicacin del FID es muy grande, ya que responde a casi todos los compuestos
orgnicos. Una desventaja es que a menudo es demasiado inespecfico y poco sensible
para el anlisis medioambiental y el anlisis de residuos [26].

1.2.3 ANLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO:
La cromatografa ha llegado a ser el principal mtodo para la separacin de especies
qumicas estrechamente relacionadas entre s. Adems, se puede emplear para la
identificacin cualitativa y cuantitativa de las especies separadas [25].
1.2.3.1 Anlisis cualitativo:
El tiempo de retencin o el volumen de retencin para un soluto dado se pueden utilizar
para su identificacin si se mantienen constantes las siguientes variables de la columna:
longitud, espesor, temperatura y presin (rata del flujo del gas portador). Sin embargo,
cuando se parte de una muestra desconocida, se hace difcil identificar sus componentes
por este procedimiento, ya que los miles de compuestos conocidos hacen que existan
demasiadas posibilidades entre las que elegir [22].
El analista no siempre se enfrenta con muestras totalmente desconocidas, por lo que, en
muchos casos, el problema puede resolverse cromatogrficamente. El procedimiento ms
simple de anlisis cualitativo se realiza con ayuda de patrones: los tiempos de retencin
de los picos desconocidos se comparan con los tiempos de retencin de compuestos
conocidos, separados en la misma columna y en las mismas condiciones experimentales.
Como alternativa, cuando se sospecha que un componente ya identificado corresponde a
un pico dado se aade a la muestra problema algo de componente puro, y se realiza un
cromatograma. En el registro obtenido debe aparece el pico del componente aumentado
en su dimensin [21,30].
1.2.3.2 Anlisis cuantitativo:
En cromatografa de gases los parmetros cuantitativos son la altura, o el rea, del pico
del analito, las cuales son comparadas con la de uno o ms patrones.

43

Anlisis basados en la altura del pico:
El uso de la altura del pico presenta como ventaja la comodidad de medida, pero
solamente proporciona una exactitud aceptable en el caso de muestras sencillas de pocos
componentes que den lugar a picos agudos, estrechos y claramente separados. Adems
la altura del pico es muy sensible a variaciones en las condiciones de operacin, por lo
que el uso de este parmetro exige un control cuidadossimo de dichas condiciones. Las
medidas de altura de pico son interesantes para los anlisis de rutina, en los que se
puede sacrificar algo de la exactitud a favor de la sencillez y rapidez de las
determinaciones [20,25].
Anlisis basados en las reas de los picos:
El uso, como parmetro, del rea del pico es ms acertado cuando se requiere mayor
exactitud en las determinaciones cuantitativas. Como se sabe, el rea del pico es funcin
de la cantidad de componente o de la concentracin del mismo [21,25].
Los resultados de las reas o alturas de los picos de los analitos, se utilizan para
determinar las concentraciones exactas de cada una de las especies mediante los
siguientes mtodos:
1.2.3.2.1 Mtodo del patrn interno:
En cromatografa cuantitativa la mayor precisin se consigue por el uso de patrones
internos debido a que se evitan las incertidumbres asociadas a la inyeccin de la muestra.
En este procedimiento, se introduce en cada estndar y en la muestra una cantidad
exactamente medida del patrn interno, y la relacin de las reas (o alturas) del analito y
del patrn interno sirve como parmetro analtico [25].
1.2.3.2.2 Mtodo del estndar externo:
Un estndar externo es el que se analiza separadamente de la rplica desconocida que
se est ensayando. Los estndares, que contienen distintas concentraciones conocidas
de analito junto a la matriz que es similar o idntica a la de la muestra, son inyectados. A
continuacin se obtienen los cromatogramas de los patrones y se representan las alturas
o reas de pico en funcin de la concentracin. La representacin grfica de los datos

44

debera originar una lnea recta que pasara por el origen de coordenadas; los anlisis se
basan en esta grfica. [27].
1.2.3.2.3 Mtodo de la normalizacin de las reas:
Este mtodo de la normalizacin de las reas evita las incertidumbres asociadas con la
inyeccin de la muestra. En ste mtodo, se determinan las reas de todos los picos
eludos; tras corregir esas reas debido a las diferencias en la respuesta del detector a los
distintos compuestos, la concentracin del analito se calcula por la relacin de su rea
con el rea total de los picos [25].

1.3 EXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPE)
Normalmente las muestras a analizar que se reciben en un laboratorio no estn en la
forma apropiada para realizar directamente el anlisis. A veces la muestra no est en el
disolvente apropiado. La tcnica de Cromatografa de Gases (GC) requiere que el analito
est en un disolvente voltil [31]. Es por esto que se procede por una tcnica de
extraccin, en la cual se transfiere el soluto de cierto disolvente a otro que sea adecuado.
En este caso, se utiliza la extraccin en fase slida (SPE, por sus siglas en ingls).
La (SPE) es muy empleada en la preparacin de muestras para anlisis por cromatografa
lquida, de gases, electroforesis y an para espectrofotometra [33]. La (SPE) se ha
convertido en una de las tcnicas para clean-up y concentracin de muestras utilizadas
por los qumicos analticos.
Con los aos, la SPE ha experimentado un crecimiento constante por las necesidades de
los analistas a encontrar los procedimientos de preparacin de muestras que sea sencillo
y relativamente econmico, que proporcione una buena recuperacin del analito y
adecuada selectividad, que reduzca el uso de disolventes orgnicos, y que pueda ser
automatizado, cuando la necesidad surja [34].
Los usos ms importantes de la SPE en matrices acuosas son: plaguicidas, hidrocarburos
alifticos, benceno y los bencenos alqulicos, contaminantes prioritarios, materiales
aromticos policclicos, fenoles clorinados, bifenilos policlorinados (PCBs), cloroanilinas y
cloruro de tributilestao [35].

45

Los principales objetivos de la SPE son: a) eliminacin de componentes que interfieren
con la matriz, b) concentracin selectiva y aislamiento de los analitos, y c) cambio de la
matriz del analito segn sea necesario para su posterior anlisis. El enriquecimiento
puede aumentar la sensibilidad de deteccin; a menudo este paso es necesario para
alcanzar el lmite de deteccin de la concentracin de analitos de inters para los anlisis
cualitativos y cuantitativos, sin enriquecimiento a menudo un anlisis fiable a nivel de
trazas no es posible [36].
Es esencialmente una tcnica de separacin basada en los mismos principios de la
cromatografa lquida, con un poder de resolucin menor, pero con buena selectividad. En
SPE se hace pasar una disolucin que contiene los analitos sobre una fase slida (o fase
estacionaria) que los absorbe especficamente, la cual suele estar compactada en el
fondo de una pequea columna de plstico. Despus de la adsorcin, los analitos se
eluyen con una pequea cantidad de otro disolvente extractor, con el que interaccionan
ms fuertemente que con la fase estacionaria. Por tanto, la SPE no solo consigue un
cambio de matriz del analito, sino que reduce el volumen de la muestra [31,33].
1.3.1 CONSIDERACIONES TERICAS
En cualquier sistema de extraccin en fase slida se cuentan tres componentes a saber:
1) la muestra problema que contiene los analitos en una matriz compleja, 2) la fase
estacionaria o soporte slido (cartucho) y 3) los solventes de acondicionamiento, lavado y
elucin.
Los componentes de la muestra se separan por migracin diferencial desde la fase
estacionaria hacia los solventes de lavado y elucin, atendiendo a las diferencias en
cuanto a propiedades fsicas y qumicas, las cuales favorecen las fuerzas de retencin
para algunos compuestos y las fuerzas de elucin para otros [33].
Las diferentes fases estacionarias se clasifican segn el tipo de interaccin que tengan
con el analito. Las interacciones son consecuencias de sus propiedades qumicas y
bsicamente son de tres tipos: interacciones polares, interacciones no polares e
interacciones de intercambio inico. Esta ltima clase se subdivide en intercambio
aninico e intercambio catinico.

46

Figura 3. Fases estacionarias polares y sus interacciones con los analitos [38].

1.3.1.1 Interacciones polares:
Las interacciones polares que se dan en la SPE incluyen puentes de hidrgeno,
interacciones dipolo-dipolo y otras interacciones entre tomos del analito y los grupos
polares de la fase estacionaria. La retencin de analitos por interacciones polares se
facilita mediante disolventes no polares. Por otra parte, la elucin de analitos desde
adsorbentes polares se facilita mediante disolventes polares con alta fuerza inica. Este
mecanismo de interaccin se denomina particin en fase normal [31].
Los adsorbentes polares ms comnmente utilizados para fase normal en SPE son slica
(SiO
2
)x, almina (Al
2
O
3
), silicato de magnesio (MgSiO
3
o Florisil), y los adsorbentes de
slice enlazada en los que la slice reacciona con grupos funcionales altamente polares
para producir aminopropil [(SiO
2
)x-(CH
2
)
3
NH
2
]-, cianopropil [(SiO
2
)x-(CH
2
)
3
CN]-, y diol

47

[(SiO
2
)x-(CH
2
)
3
OCH
2
CH(OH)CH
2
(OH)]-. La figura 3 muestra ejemplos de fases
estacionarias polares junto con las interacciones que se dan con los analitos [38].

Figura 4. Fases estacionarias apolares y sus interacciones con los analitos [38].

1.3.1.2 Interacciones apolares:
Las interacciones no polares son aquellas que ocurren entre los enlaces carbono-
hidrgeno del absorbente y los enlaces carbono-hidrgeno de los analitos. La retencin
de analitos por interacciones no polares se facilita por disolventes polares. La elucin de
analitos desde adsorbentes no polares se facilita con disolventes con suficiente carcter
apolar como para romper las interacciones no polares entre analito y adsorbente. Este
mecanismo de retencin se denomina particin en fase reversa [31].
Las fases enlazadas comunes producidas para aplicaciones en fase reversa incluyen
grupos hidrofbicos y alquilo alifticos como octadecil (C
18
), Octil (C
8
), etil (C
2
), o

48

ciclohexil, unidos covalentemente a la columna vertebral de la slica gel (Figura 4). Grupos
fenil aromticos tambin se pueden unir [38].
1.3.1.3 Interacciones inicas:
Las interacciones inicas ocurren entre molculas de analito con cargas opuestas a las
del adsorbente. Para que se d el intercambio inico se deben cumplir dos condiciones:
La matriz y el disolvente deben estar a un pH donde el analito y el adsorbente
estn cargados.
La matriz y el disolvente no deben contener altas concentraciones de iones de la
misma carga que el analito

[31].
Los grupos inicos pueden estar cargados (positiva o negativamente) o no dependiendo
del pH. Cuando el adsorbente contiene grupos funcionales cargados positivamente y el
contrain intercambiable del analito en la matriz de la muestra lquida est cargado
negativamente, el proceso de acumulacin se llama intercambio aninico. Por el contrario,
si el grupo funcional en la superficie del adsorbente est cargado negativamente y el
contrain intercambiable del analito en la matriz de la muestra lquida est cargado
positivamente, el proceso de acumulacin se llama intercambio catinico [31,38].
Los adsorbentes de intercambio inico contienen grupos funcionales ionizados (aminas
cuaternarias o cidos sulfnicos), o grupos funcionales ionizables (aminas
primarias/secundarias o cidos carboxlicos). En el caso de los adsorbentes de
intercambio inico por lo general contienen grupos funcionales dbilmente bsicos como
las aminas primarias o secundarias (se cargan a condiciones de pH bajos) o grupos de
amonio cuaternario muy bsicos (se cargan a todos los pH). Los adsorbentes de
intercambio catinico contienen grupos funcionales dbilmente cidos como los cidos
carboxlicos (se cargan a condiciones de pH alto), aromticos muy cidos o cidos
sulfnicos alifticos (se cargan a todos los niveles de pH) [38].
La fuerza inica tambin juega un papel importante en las separaciones SPE de
intercambio inico. La fuerza inica es una medida de la concentracin total de iones
presentes en el medio. La retencin del analito en la fase estacionaria ser funcin del
nmero de otras especies inicas presentes en la matriz y disolvente capaces de competir

49

por los grupos cargados del adsorbente. As, bajas fuerzas inicas promueven la
retencin del analito, mientras que altas fuerzas inicas facilitan la elucin [31].
En la figura 5 se observan algunas fases estacionarios de intercambio inico.

Figura 5. Fases estacionarias de intercambio inico.

La mayora de las fases estacionarias utilizadas para SPE son de slica gel o
modificaciones de sta con tamaos y partculas en promedio de 40 m y tamaos de
poro por lo general de 60 , exceptuando aquellas usadas en las separaciones por
tamao molecular [33]. Las columnas para extraccin en fase slida tienen capacidad de
depsito de 1mL, 3mL, y 6mL, pero pueden ser adaptados depsitos de 15 75mL
cuando el volumen de la muestra es muy grande [39].
Algunas de las caractersticas estructurales de las fases estacionarias con su respectivo
mecanismo de separacin se resumen en la tabla 2.

50

Cod. Estructura Mecanismo retencin-
elucin
Si Slicagel (Polar) Fase Normal
Florisil Silicato de Magnesio (Polar) Fase Normal
Diol -(CH
2
)
3
-O-CHOHCH
2
OH Fase Normal
NH
2
-(CH
2
)
3
-NH
2
Aminopropil Fase Normal
Al-A Almina cida Fase Normal
Al-B Almina bsia Fase Normal
Al-N Almina neutra Fase Normal
CN -(CH
2
)
3
-CN Cianopropil Fase Normal/Reversa
C-8 -(CH
2
)
7
-CH
3
Octil Fase Reversa
C-18 -(CH
2
)
17
-CH
3
Octadecil Fase Reversa
Ph -(CH
2
)
3
-Phe Fenilpropil Fase Reversa
NH/NH
2
-(CH
2
)
3
-NHCH
2
CH
2
NH
2

Diamino (WAX)
Intercambio Aninico (Dbil)
SAX -(CH
2
)
3
-N
+
(CH
3
)
3
Cl
-
Intercambio Aninico
(Fuerte)
SCX C
6
H
4
-SO
2
OH (Fuerte) Intercambio catinico
WCX -(CH
2
)
3
-COOH (Dbil) Intercambio catinico
G-25 Sephadex G-25 Exclusin
LC-PCN Cianopropilsilil Exclusin
Tabla 2. Fases estacionarias usadas en extraccin en fase slida.

1.3.2 ETAPAS DE LA EXTRACCIN EN FASE SLIDA
1.3.2.1. Acondicionamiento del adsorbente
Acondicionamiento del adsorbente es necesario a fin de garantizar una interaccin
reproducible con el analito. Acondicionado, tambin llamada la solvatacin, se traduce en
una humectacin de los grupos funcionales del adsorbente y por lo tanto produce un
ambiente que es adecuado para la adsorcin del analito. Adsorbentes polares suelen
estar acondicionados con 2-3 volmenes de columna de un disolvente, que es miscible
con agua (MeOH, THF, isopropanol, etc.), seguido por el disolvente en el que se disuelve

51

la sustancia analizada (matriz polar). Adsorbentes polares estn acondicionados con
solventes no polares.
Luego del acondicionamiento el adsorbente no debe funcionar en seco, porque de lo
contrario se destruye la solvatacin.
1.3.2.2 Aplicacin de la muestra (adsorcin)
Aplicacin de la muestra se puede realizar con presin positiva o negativa con un caudal
de ~3 mL/min.
1.3.2.3 Lavado del adsorbente
Lavado del absorbente se consigue normalmente con una solucin de lavado especial
que selectivamente eluye las impurezas, pero deja el analito en la columna. Sin embargo,
en algunos casos puede que no sea necesario. Si la diferencia de polaridad entre la
solucin de lavado y eluyente es muy grande, o si ambos no son miscibles, el secado del
adsorbente despus del lavado es recomendable.
1.3.2.4. Elucin
El analito purificado se eluye finalmente con un solvente fuerte, suficiente para desplazar
el analito del absorbente. La elucin no debe ser demasiada rpida, la velocidad de la
elucin depende de la columna o la dimensin del cartucho y de la cantidad de
adsorbente [31,36]. La figura 6 muestra las etapas de la extraccin en fase slida

Figura 6. Etapas de la extraccin en fase slida.

52

1.3.3 VENTAJAS
Bajo consumo de disolvente.
Tamao de muestra puede ser grande o pequeo
En algunos casos enorme ahorro de tiempo.
Posibilidades de automatizacin.
A menudo una preparacin de la muestra se puede resolver ms concretamente
mediante el uso de SPE, ya que es posible diferentes interacciones del analito con
la fase slida (absorbente), y los mtodos pueden ser optimizados mediante el
ajuste de las condiciones cromatogrficas. La SPE ofrece una multitud de
adsorbentes polares, hidrofbicos y o interacciones inicas, mientras que la
extraccin lquido-lquido se limita a la particin de equilibrios en la fase lquida
[36].

1.4 HIDROCARBUROS AROMTICOS (BTEX)
El acrnimo BTEX define la mezcla de benceno, tolueno, etilbenceno y los tres ismeros
del xileno (orto, meta y para) [41].
1.4.1 ESTABILIDAD
Los compuestos orgnicos voltiles (VOCs) son compuestos qumicos que tienen una
presin de vapor alta en condiciones normales para evaporarse significativamente y entrar
en la atmsfera. Los hidrocarburos aromticos como el benceno, tolueno, etilbenceno, y
los xilenos son algunos de estos compuestos los cuales se obtienen del carbn y del
petrleo.
Los hidrocarburos aromticos forman una gran familia de compuestos que tienen un
ncleo comn, el ncleo bencnico. El benceno contiene 92.3 por ciento de carbono y 7,7
por ciento de hidrgeno con la frmula qumica C
6
H
6
. La molcula de benceno se
representa mediante un hexgono formado por los seis conjuntos de tomos de carbono e
hidrgeno unidos con alternancia de enlaces simples y dobles (figura 7). La molcula de

53

benceno es la piedra angular de compuestos aromticos, la mayora de los cuales
contienen uno o ms anillos de benceno.

Figura 7. Molcula del benceno.

Los BTEX se caracterizan por poseer una gran energa de resonancia que desemboca en
una gran estabilidad termodinmica. Se trata de hidrocarburos orgnicos monoaromticos
de bajo peso molecular, poco solubles en agua [3].
El ncleo aromtico tiene una gran estabilidad (energa de resonancia); sin embargo, por
su acumulacin de electrones, reacciona fcilmente con varios tipos de agentes y tanto
mejor cuando no se pierde el carcter aromtico. Las reacciones de adicin ocurren con
dificultad y necesitan un gran aporte de energa, mientras que las de sustitucin son
fciles [42].
En las reacciones de sustitucin electroflica aromtica un electrfilo (E+) reacciona con
un anillo aromtico y sustituye uno de los hidrgenos. Se puede introducir en el anillo
aromtico muchos sustituyentes diferentes por reacciones de sustitucin electroflica; si se
seleccionan los reactivos adecuados es posible halogenar el anillo aromtico, nitrarlo,
sulfonarlo, alquilarlo o acilarlo. La estructura del compuesto aromtico determina su
reactividad y la regioselectividad de la reaccin [44].

1.4.2 PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS
La planaridad de las molculas de los hidrocarburos aromticos influye mucho en sus
propiedades fsicas: sus densidades son mayores que las de los alifticos y su punto de
ebullicin (Peb) y punto de fusin (Pf) son ms altos. Los Peb aumentan regularmente con
el peso molecular, pero los Pf dependen de la simetra de la molcula (Tabla 3).

54

Compuesto

Frmula

Estructura

Apariencia
y olor

Peso
molecular
(g/mol)

Peb.
(C)

Pf.
(C)

Densi-
dad
(20C)
Presin
de
vapor a
25C
(mmHg)

Solubili-
dad en
agua a
25C(g/L)

Benceno

C6H6

Lquido
incoloro/olor
aromtico

78,12

80,1

5,5

0,8780

12,64

1,79

Tolueno

C6H5CH3
CH
3

Lquido
incoloro/olor
aromtico

92,1

111

-95

0,8662

3,79

0,53

Etilbenceno

C2H5C6H5

Lquido
incoloro/olor
aromtico

106

136

-95

0,8669

1,28

0,17

o-Xileno

C6H4(CH3)2

CH
3
CH
3

Lquido
incoloro/olor
aromtico

106,2

144,4

-25

0,8968

0,88

0,18

m-Xileno

C6H4(CH3)2

CH
3
CH
3

Lquido
incoloro/olor
aromtico

106,2

138,9

-48

0,8811

1,11

0,16

p-Xileno

C6H4(CH3)2
CH
3
CH
3

Lquido
incoloro/olor
aromtico
(Es un slido
por debajo
de 12,7C)

106,2

138,3

13

0,8541

1,18

0,16
Tabla 3. Propiedades fisicoqumicas de los BTEX.

El benceno es muy voltil y sus vapores son inflamables y txicos (con accin
cancergena) por lo que hay que manejarlo con gran cuidado. Se observa que la
temperatura de fusin del benceno es 100C ms alta que la del tolueno, o la del

55

etilbenceno; esto se debe al perfecto empaquetamiento del benceno y a la disimetra que
introducen las cadenas laterales. Entre los ismeros se observa que el p-xileno funde a
una temperatura mayor, porque es el ms simtrico.
Los hidrocarburos aromticos flotan sobre el agua y son muy poco solubles en ella pero
algo ms que los alcanos. La solubilidad de los hidrocarburos aromticos es de 3 a 5
veces mayor que la de los hidrocarburos alifticos. Por su fuerte densidad electrnica, los
hidrocarburos aromticos son menos hidrfobos que los alcanos; el benceno es miscible
en todas las proporciones con productos de una amplia gama de polaridades: gasolina,
teres, alcoholes y cidos carboxlicos, y, por ello, es un buen disolvente para reacciones
industriales [42,43].
1.4.2.1 COMPORTAMIENTO DE LOS BTEX EN AGUA
Las emisiones de BTEX al medio ambiente se acumulan principalmente en el aire debido
a su naturaleza voltil, y en menor proporcin en agua y suelo. Los niveles en agua
provienen principalmente de derrames de gasolina y otros productos del petrleo y de su
uso como disolventes. Los que son vertidos al agua superficial pasan rpidamente al aire
por volatilizacin. Cuando se vierten al terreno, son adsorbidos por el suelo y migran con
facilidad hacia el agua subterrnea, donde permanecen estables durante largo tiempo.
Los niveles ms altos de estos compuestos encontrados en agua subterrnea se
muestran en la tabla 4.
COMPUESTO AGUAS SUBTERRNEAS (g/L)
Benceno 80
Tolueno 1,4
Etilbenceno 0,87
Xilenos 2,5
Tabla 4. Valores ms altos de BTEX encontrados en agua subterrnea urbana.

La persistencia de estos compuestos en agua vara de acuerdo con las condiciones
medioambientales. As, en aguas superficiales la vida media puede ser muy corta, debido
a la volatilizacin, sin embargo en aguas subterrneas, donde no hay evaporacin, la vida
media es muy larga. En la tabla 5 se indica el rango de valores de la vida media previstos

56

para los BTEX en agua superficial y agua subterrnea, basados en la biodegradacin
aerobia y biodegradacin aerobia-anaerobia, respectivamente.
COMPUESTO AGUA SUPERFICIAL AGUA SUBTERRNEA
Benceno 5-16 10-730
Tolueno 4-22 7-28
Etilbenceno 3-10 6-228
o-Xileno 7-28 14-365
p-Xileno 7-28 14-56
m-Xileno 7-28 14-56
Tabla 5. Rango de valores de la vida media de los BTEX en das [3].

1.4.3 FUENTE DE HIDROCARBUROS AROMTICOS
Los hidrocarburos aromticos, principalmente benceno, tolueno, xilenos y etilbenceno,
tienen una importancia industrial extraordinaria; son materia prima para ms del 60% del
tonelaje de plsticos, elastmeros y fibras sintticas que se fabrican al igual que para
colorantes, insecticidas, medicamentos, etc. La mayor parte de hidrocarburos aromticos
se obtiene del petrleo (95%), y slo una pequea proporcin de la hulla (5%).
Aunque el contenido de aromticos originalmente presente tanto en el petrleo como en el
carbn es bajo, en determinados procesos de tratamiento trmico o cataltico de refineras
y coqueras se producen en proporciones significativas que hacen econmica su
separacin, obtenindose actualmente de la gasolina reformada, de la gasolina de
pirlisis y del alquitrn de la hulla [42].
1.4.3.1 PETRLEO
Actualmente, la mayor parte de las mezclas BTEX que se producen en las destileras de
petrleo se obtienen por los procesos de reformado cataltico y craqueo al vapor:
1.4.3.1.1 AROMTICOS DEL REFORMADO CATALTICO
El reformado cataltico de las fracciones C
6
-C
8
se realiza con catalizadores de Pt o Pt-Rh
sobre almina, a 500 C y 30 atm, con el fin de aumentar el ndice de octano de las
gasolinas y produce gran cantidad de hidrocarburos aromticos (BTEX), adems de

57

alcanos y alquenos. La gasolina vaporizada se diluye con H
2
para cortar la formacin de
carbn sobre catalizador; el proceso se llama tambin hydroforming. Las principales
reacciones de aromatizacin son [42]:

Figura 8. Principales reacciones de aromatizacin.

La gasolina reformada es la fuente ms importante de estos hidrocarburos, ya que
contiene hasta el 55% de ellos (Tabla 6).

COMPOSICIN DE GASOLINAS REFORMADAS
Benceno 3-6%
Tolueno 15-20%
Xilenos 19-21%
Etilbenceno 4-5%
Aromticos superiores 10-15%
No aromticos 35-45%
Tabla 6. Composicin de gasolinas reformadas.

58

1.4.3.1.2 AROMTICOS DE CRAQUEO CON VAPOR
La industria petroqumica utiliza el craqueo con vapor de gasolinas para obtener grandes
cantidades de etileno, propileno y otros alquenos, pero en este proceso se producen
tambien cantidades importantes de BTEX [42].
El proceso consiste en pirolizar una mezcla de gasolina y vapor de agua a (800-900) C,
sin catalizadores, durante 0,1 a 1 segundo. Se obtiene un 50% de etileno+ propileno y un
20% de gasolina craqueada que tiene la composicin que se da en la Tabla 7.

COMPOSICIN GASOLINA PROCEDENTE DE CRAQUEO CON
VAPOR
Benceno 38-40%
Tolueno 20-22%
Xilenos 2-3%
Etilbenceno 4-6%
Aromticos superiores 2-5%
No aromticos 30-32%
Tabla 7. Composicin gasolina procedente de craqueo con vapor.

1.4.3.1.3 SEPARACIN DE HIDROCARBUROS AROMTICOS
El primer paso de la separacin es normalmente una destilacin para separar la fraccin
en el intervalo de (80145) C que se va a fraccionar, teniendo en cuenta las temperaturas
de ebullicin de los BTEX y eliminando los extremos ligeros y pesados (Tabla 8).
Debido a la formacin de mezclas azeotrpicas entre algunos aromticos, naftnicos y
parafnicos dentro de este intervalo, el paso siguiente es la separacin de los aromticos
de los no aromticos con el empleo de disolventes por: extraccin lquido-lquido,
adecuada para el rango de 20-65 %w en contenido de aromticos; destilacin extractiva
para el rango de 65-90 %w de aromticos y destilacin azeotrpica para contenido alto de
aromticos, > 90 %w [46].

59

COMPUESTO T (C)
Benceno 80
Tolueno 110
Etilbenceno 136
p- Xileno 138
m- Xileno 139
o- Xileo 145
Tabla 8. Puntos de ebullicin de los BTEX.

La volatilidad relativa del o-xileno es de 1,16 mientras que la del p- y m-xileno es de
alrededor de 1,02. Hacer una separacin para p- y m-xileno por destilacin est fuera de
toda lgica. El p-xileno es una molcula estrecha con los dos grupos metilo, uno en cada
extremo. El m-xileno es ms esfrico, debido a la posicin de los grupos metilo. El
proceso de separacin ms dependiente de la forma de la molcula, para un volumen
molecular fijo, es la cristalizacin. La diferencia en la forma molecular tiene dos efectos.
Primero, las molculas de p-xileno pueden agruparse juntas en una estructura cristalina
ms rpidamente, debido a su forma simtrica; como resultado de esto, el p-xileno tiene
un punto de congelacin mucho ms alto (13,3 C) qu e cualquiera de los otros ismeros.
Segundo, la diferencia de forma entre el p-xileno y el m-xileno significa que las molculas
de m-xileno no pueden ajustarse fcilmente dentro de la estructura cristalina del p-xileno
en la fase slida. Como resultado, la fase slida formada por congelacin parcial de una
mezcla de los dos ismeros contiene esencialmente p-xileno puro, y el factor de
separacin para un proceso de cristalizacin es realmente muy alto [37].
Tambin hay diferencias en las propiedades de adsorcin que se pueden utilizar para
aislar ismeros individuales del xileno. En la adsorcin, la estructura porosa del
adsorbente preferentemente retiene el ismero producto de inters. Un tratamiento
posterior con un lquido desorbente (por lo general otro orgnico como el tolueno) disocia
el producto del adsorbente. La separacin del ismero producto de xileno puede entonces
ser realizado utilizando una destilacin fraccionada simple [47].

60

1.4.4 PROCESOS DE TRANSFORMACIN DE AROMTICOS
Dado que la industria qumica tiene una demanda de hidrocarburos aromticos que no
puede satisfacerse con la distribucin de aromticos obtenida directamente de las
gasolinas reformadas, de pirlisis y del alquitrn de hulla, se han desarrollado procesos
de transformacin de hidrocarburos aromticos entre s. De un modo global, el objetivo de
estos procesos es contrarrestar el exceso de oferta de tolueno y la demanda de benceno
y xilenos. Los procesos ms significativos son:
Hidrodesalcohilacin de tolueno
Isomerizacin del m-xileno
Desproporcionamiento de tolueno y transalquilacin con trimetilbencenos.

1.4.5 REFINACIN DEL PETRLEO Y COMPOSICIN DE LA GASOLINA EN
COLOMBIA
1.4.5.1 REFINACIN NACIONAL DEL PETRLEO
En Colombia (2010), Ecopetrol fue capaz de refinar diariamente 315 mil barriles, es decir,
13.2 millones de galones de petrleo cada 24 horas. De esos, resultan unos 71500
barriles por da de gasolina (3.6 millones de galones) y 97330 barriles de ACPM (4
millones de galones). El pas se autoabastece de crudo. Exporta e importa, dependiendo
de los requerimientos del mercado local e internacional y se surte fundamentalmente de
los yacimientos de La Cira-Infantas, en Barranca; Chuchupa en La Guajira; Cao Limn
en Arauca y Cusiana-Cupiagua, en Casanare [49].
1.4.5.2 COMPOSICIN DE LA GASOLINA EN COLOMBIA
La gasolina est compuesta por una mezcla de hidrocarburos que van desde los que
poseen 4 tomos de carbono hasta los que tienen 10-11 tomos de carbono; stos
hidrocarburos pueden ser parafnicos, isoparafnicos, olefnicos, naftnicos y aromticos,
obtenidos de diversos procesos de refinacin como destilacin, crackeo trmico y
cataltico, reformacin cataltica, alquilacin, e isomerizacin.

De las cuatro (4) clases en que se subdividen los hidrocarburos (parafnicos, naftnicos,
aromticos y olefnicos), la que predomina en el petrleo bruto es la clase de los

61

hidrocarburos parafnicos (parafinas), que pueden ser de cadena lineal (n-parafinas) o
ramificada (isoparafinas).

Los hidrocarburos aromticos se caracterizan por su elevado peso especfico y por un
poder antidetonante bastante elevado. Se encuentran en el petrleo bruto en cantidades
limitadas, salvo algn tipo que los contiene en mayor proporcin [50].

La empresa Colombiana de petrleos ECOPETROL sigue la normatividad de la American
Society for Testing and Materials (ASTM) y en las siguientes tablas se muestran las
principales caractersticas de las gasolinas distribuidas en Colombia.

Caractersticas Unidades Mtodos Mximo
Benceno mL/100 mL
ASTM D-5580
ASTM D-3606
ASTM D-6729
1,0
Aromticos mL/100 mL
ASTM D-5580
ASTM D-1319
Mtodo PIANO
(ASTM D-6729)
28
Tabla 9. Gasolina corriente.

Caractersticas Unidades Mtodos Mximo
Benceno mL/100 mL
ASTM D-5580
ASTM D-3606
ASTM D-6729
2
Aromticos mL/100 mL
ASTM D-5580
ASTM D-1319
Mtodo PIANO
(ASTM D-6729)
35
Tabla 10. Gasolina extra.

62

Caracterstica Unidades Mtodos Mximo
Aromticos mL/100 mL
ASTM D-1319
ASTM D-5186
35
Tabla 11. Diesel corriente.

Caracterstica Unidades Mtodos Mximo
Aromticos mL/100 mL
ASTM D-1319
ASTM D-5186
35
Tabla 12. Diesel extra o diesel premium [51].

1.4.6 USOS DE LOS BTEX
El benceno y sus derivados se han utilizado en una variedad de productos, algunos de los
cuales incluyen: plaguicidas, detergentes, pinturas, colorantes, lubricantes, gomas, drogas
y explosivos.
1.4.6.1 Benceno
Desde que el benceno fue descubierto en 1825, se ha utilizado para una variedad de usos
industriales y comerciales. Uno de los primeros usos del benceno fue como locin de
afeitar, por el olor agradable distintivo del producto qumico. Tambin se empleo para
descafeinar el caf y como aditivo antidetonante en la gasolina.
El benceno se puede encontrar en una serie de productos elaborados por algunas de las
empresas ms grandes del mundo, como por ejemplo:
Coca-Cola
Pepsi
Cadbury Schweppes (Compaa Britnica de Confites)
Kraft Foods (Bebidas, queso, lcteos, snacks, confitera y cereales.)
Polar Beverages(Bebidas)
Algunos de los mayores productores de benceno en los Estados Unidos son:

63

Chevron
Shell Chemical
Exxon
Dow Chemical
Amoco
El benceno es un componente integral en la produccin de polmeros, plsticos, resinas,
adhesivos, nylon, detergentes, colorantes, lubricantes, explosivos y plaguicidas. La
mayora de los materiales antes mencionados se producen a partir de tres usos derivados
del benceno: estireno, fenol y ciclohexano [52].
1.4.6.2 Tolueno
Ms del 50% del tolueno producido se convierte en benceno por hidrodesalquilacin. En
mucha menor escala se utiliza un proceso de desproporcin cataltica.
Alrededor del 10% de la produccin de tolueno se utiliza para obtener trilita o TNT
(2,4,6-trinitrotolueno), explosivo militar de gran potencia. Otro tanto se usa para
disolventes y el resto, resinas de poliuretano y diversas sntesis.
Una parte de las fracciones ricas en tolueno se incorporan a gasolinas para alcanzar altos
ndices de octano.
1.4.6.3 Etilbenceno
Si bien cerca del 99% del etilbenceno se consume en la produccin de estireno, una
pequea cantidad se utiliza en aplicaciones de solventes, remplazando algunas veces al
xileno.
1.4.6.4 p-Xileno
La mayor demanda en el mercado de los ismeros del xileno es de p-xileno, materia
prima para fibras sintticas, se utiliza para hacer el cido tereftlico (TPA) y dimetil
tereftalato (DMT), intermediarios en la fabricacin de fibras tereftalato de polietileno (PET),
plsticos moldeados y pelculas.

64

1.4.6.5 o-Xileno
El o-xileno se utiliza principalmente en la fabricacin de anhdrido ftlico que es la materia
prima para la fabricacin de plastificantes y resinas para pinturas. Menores usos
adicionales en la fabricacin de bactericidas, herbicidas para la soja, aditivos de aceite
lubricante.
1.4.6.6 m-Xileno
El m-xileno tiene menos aplicaciones, aunque el cido isoftlico se usa para obtener
algunos tipos de resinas de polister. Gran parte del excedente de m-xileno y sus mezclas
brutas se reincorporan a las gasolinas para aumentar el ndice de octano o se usan como
disolventes [42].
En el anexo 1 se muestras algunas reacciones de los BTEX para la produccin de
diferentes productos.

1.4.7 TOXICIDAD DE LOS BTEX
Todos los compuestos orgnicos voltiles son nocivos. Los efectos de la exposicin a
estas sustancias incluyen los cambios en el hgado y los efectos dainos en los riones, el
corazn, los pulmones y el sistema nervioso [41].

Los BTEX estn en todas partes entre las muestras de inters ambiental (agua, aire,
tierra). Debido a que los BTEX son compuestos neutros, solubles en lpidos y de bajo
peso molecular, son absorbidos rpidamente por el organismo una vez inhalados o
ingeridos. La mayor fuente de riesgo de exposicin al benceno es por va area. La
exposicin humana a estos hidrocarburos aromticos, tambin ocurre por ingestin
(consumo de agua o alimentos contaminados). Los BTEX al ser muy solubles en lpidos
tienden a acumularse en los tejidos grasos [3].
Se hace hincapi en el benceno, ya que este es el ms txico del grupo de los BTEX.

65

1.4.7.1 Benceno
El uso del benceno se ha regulado con el fin de proteger al pblico de niveles peligrosos
de exposicin a la sustancia txica. La exposicin prolongada al benceno se ha
relacionado con el desarrollo de una serie de enfermedades graves, algunas de la cuales
incluyen leucemia mielgena aguda, leucemia mielgena crnica y anemia aplsica.
El benceno produce efectos hematolgicos en los seres humanos y animales. Las etapas
iniciales de la toxicidad del benceno pueden ser caracterizadas por deficiencias en los
elementos especficos de la sangre, dando lugar a anemia, leucopenia o trombocitopenia.
A pesar de que el benceno ha sido reconocido como un compuesto qumico
extremadamente txico capaz de provocar muchos efectos negativos para la salud, no se
ha prohibido por completo. Todava se utiliza en toda una variedad de productos
comerciales e industriales, sin embargo, el contenido en benceno de estos productos est
estrictamente regulado por varias entidades internacionales, en particular la Agencia de
Proteccin Ambiental (EPA) y el Departamento de Salud y Servicios Humanos (DHHS).
[52].
Trabajadores de las industrias que fabrican o usan benceno pueden estar expuestos a
altos niveles de esta sustancia qumica. Industrias como las del caucho, refineras de
petrleo, plantas qumicas, fbricas de calzado y las industrias relacionadas con la
gasolina.
Fuentes de benceno en el medio ambiente incluyen la gasolina, los gases de escape de
automviles, el humo del cigarrillo, las emisiones de los hornos de coque y otros procesos
industriales, y las aguas residuales de ciertas industrias.
El benceno se ha identificado en el agua. Algunos productos de consumo de los hogares,
tales como pegamentos, productos de limpieza, detergentes, artculos de arte, y
decapantes, contienen benceno.
La evidencia que vincula el benceno y el cncer proviene de estudios en su mayor parte a
trabajadores, y se relaciona con la leucemia, sobre todo en dos tipos de llamada leucemia
mieloide aguda y en menor medida, la leucemia linfoctica crnica. La leucemia es un
cncer de las clulas formadoras de sangre en la mdula sea.

66

Los datos en seres humanos se apoyan en estudios con animales. Hay pruebas
suficientes de la carcinogenicidad del benceno en animales de experimentacin. Estudios
en animales dieron con el hallazgo de un exceso de riesgo de leucemia en los seres
humanos a la exposicin al benceno por inhalacin y por ingestin.
Se ha demostrado que el benceno induce aberraciones cromosmicas, o cambios, en
clulas de mamferos in vitro (fuera de un organismo vivo). In vivo (dentro de un
organismo vivo) los estudios han demostrado que la exposicin al benceno conduce a
cambios en los cromosomas en las clulas de la mdula sea. Estos cambios se
encuentran comnmente en la las clulas de la leucemia humana.
El Programa Nacional de Toxicologa, de Estados Unidos, la Agencia Internacional de
Investigacin sobre el Cncer (IARC) y la EPA clasifican al benceno como "un
carcingeno conocido".
El consumo de alimentos o lquidos contaminados con altos niveles de benceno puede
producir vmitos, irritacin del estmago, mareos, somnolencia, convulsiones, y la
frecuencia cardaca rpida. En casos extremos, la muerte puede producirse despus de la
ingestin oral o inhalacin de concentraciones muy elevadas (aproximadamente 10.000-
20.000 ppm) de benceno.
A largo plazo y/o alto nivel de exposicin (un ao o ms) al benceno, puede interferir con
la produccin normal de clulas sanguneas por hematopoytico (sangre) en las clulas
de la mdula. Esto puede resultar en anemia (disminucin de la capacidad de la sangre
para transportar oxgeno) y bajo recuento de glbulos blancos (disminucin de la
capacidad de la sangre para combatir infecciones), e incluso puede ser mortal. Existe
alguna evidencia de que el benceno tambin puede ser perjudicial para los rganos
reproductivos.
El benceno es considerado un carcingeno humano basado en datos experimentales y
epidemiolgicos [58].
1.4.7.2 Tolueno
El tolueno puede afectar al sistema nervioso. A niveles moderados puede ocasionar
cansancio, confusin, debilidad, mareos, prdida de la memoria, nusea, prdida del
apetito, la audicin y la visin a color.

67

Estudios en humanos y animales, indican que el tolueno no produce cncer [48].
1.4.7.3 Etilbenceno
En animales, la exposicin a concentraciones relativamente bajas de etilbenceno durante
varios das o semanas produjo dao potencialmente irreversible del odo interno y de la
audicin.
En animales, la exposicin a concentraciones relativamente bajas de etilbenceno durante
meses o aos produjo dao de los riones.
La Agencia Internacional de Investigacin del Cncer (IARC) ha determinado que el
etilbenceno es posiblemente carcinognico en seres humanos [54].
1.4.7.4 Xileno
Los cientficos han descubierto que las tres formas de xileno afectan la salud de manera
similar. No se han descrito efectos nocivos causados por los niveles de xileno que ocurren
normalmente en el ambiente. La exposicin breve a niveles altos de xileno puede producir
irritacin de la piel, los ojos, la nariz y la garganta; dificultad para respirar; alteracin de la
funcin pulmonar; retardo de la reaccin a estmulos visuales; alteraciones de la memoria;
malestar estomacal; y posiblemente alteraciones del hgado y los riones. Tanto las
exposiciones breves como prolongadas a altas concentraciones de xileno pueden producir
numerosos efectos sobre el sistema nervioso, como por ejemplo dolor de cabeza, falta de
coordinacin muscular, mareo, confusin y prdida del sentido del equilibrio. Algunas
personas expuestas brevemente a cantidades de xileno muy altas fallecieron. La mayora
de la informacin sobre los efectos observados en personas expuestas al xileno
prolongadamente se deriva de estudios de trabajadores en industrias que manufacturan o
usan xileno.
Los resultados de los estudios en animales indican que la exposicin a grandes
cantidades de xileno puede producir alteraciones del hgado, los riones, los pulmones, el
corazn y el sistema nervioso. La exposicin breve de animales a concentraciones de
xileno muy altas produce espasmos musculares, incoordinacin, sordera, alteraciones del
comportamiento, alteraciones del peso de algunos rganos y de la actividad de algunas
enzimas y tambin la muerte.

68

La Agencia Internacional para la Investigacin del Cncer (IARC) y la EPA han
determinado que no hay suficiente informacin para determinar si el xileno es
carcinognico y lo consideran no clasificable en cuanto a carcinogenicidad en seres
humanos [55]. En la tabla 13 se especifican los valores permitidos por la EPA para los
BTEX.
Compuesto
Qumico

CASRN Estndares Ao
doc
HA
Advertencias de Salud Clasificacin
por
grupo
MCLG
(mg/L)
MCL
(mg/L)
Nios 10 kg
1 da
(mg/L)
10
das
(mg/L)
RfD
(mg/Kg/L)
DWEL
(mg/L)
Tiempo
de vida
(mg/L)
Riesgo
de
cncer
mg/L
en 10
-4

Benceno 71-43-2 cero 0,005 F`87 0,2 0,2 0,004 0,1 - 0,1 A
Tolueno 108-88-
3
1 1 D`93 20 2 0,2 7 1 - D
Etilbenceno 100-41-
4
0,7 0,7 F`87 30 3 0,1 3 0,7 - D
Xileno 1330-
20-7
10 10 D`93 40 40 0,2 7 - - D
Diclorometano 75-09-2 cero 0,005 D`93 10 2 0,06 2 - 0,5 D
Tabla 13. Valores permitidos por la EPA.

Definiciones:
10
-4
Cancer Risk: Riesgo de cncer.
CASRN (Chemical Abstracts Service Registry Number): Es una identificacin numrica
nica para compuestos qumicos, polmeros, secuencias biolgicas, preparados y
aleaciones.
DWEL (Drinking Water Equivalent Level): Nivel equivalente de agua potable.
HA: Asesor de Salud. Una estimacin de los niveles aceptables de agua potable para una
sustancia qumica basada en la informacin sobre los efectos en la salud.
MCL (Maximum Contaminant Level): El MCL es el nivel ms alto de un contaminante
permitido en agua potable.

69

MCLG (Maximum Contaminant Level Goal): El MCLG es el objetivo del nivel contaminante
mximo.
RfD (Reference dose): Dosis de referencia.
La EPA tiene evidencias en cuanto a la probabilidad de que una sustancia qumica puede
ser un carcingeno para los seres humanos, los BTEX no son una excepcin. Cada
producto qumico se coloca en una de las siguientes cinco categoras segn directrices de
la EPA. En la tabla 14 se da la clasificacin basada en las directrices para la evaluacin
de riesgo carcingeno de la EPA.
Grupo Categora
A Cancergeno humano
B Probable cancergeno humano.
B1: Indica limitada evidencia en
humanos.
B2: Indica suficiente evidencia en
animales (no hay pruebas en
humanos).
C Posible cancergeno humano
D No clasifica como cancergeno
humano
E No existe evidencia de ser
cancergeno para humanos.
Tabla 14. Clasificacin de riesgo carcingeno de la EPA [63].

1.4.8 MTODOS DE ANLISIS DE BTEX
La cromatografa de gases es una de las tcnicas ms ampliamente usadas para
cuantificar mezclas de compuestos orgnicos voltiles. Para el anlisis de BTEX en agua,
se suele combinar la cromatografa de gases con espectrometra de masas (MS) o con
deteccin de ionizacin por llama (FID), debido a la alta sensibilidad [56].

70

Antes de realizar el anlisis, se requiere realizar una extraccin y preconcentracin previa;
histricamente, la extraccin lquido-lquido (LLE) y la extraccin en fase slida (SPE) se
han utilizado para la extraccin de compuestos de residuos de matrices acuosas. Sin
embargo, la LLE se utiliza raramente hoy en da debido a la alta demanda de disolventes
orgnicos y por la pobre recuperacin de los solutos. En el caso de la SPE, en
comparacin con LLE, requiere un menor volumen de disolventes para la desorcin del
analito, pero las columnas pequeas o discos utilizados causan taponamiento si la
muestra acuosa contiene finas partculas slidas [57,59].
La microextraccin en fase slida tambin se ha aplicado para separar BTEX de matrices
acuosas ya sea por adsorcin directa del lquido o por muestreo headspace. En la
actualidad se recomienda la simplificacin y la miniaturizacin de los mtodos de
preparacin de muestras que tienen la ventaja de utilizar ninguna o muy poca cantidad
(L) de solventes orgnicos txicos. Entre los mtodos ms utilizados y adecuados se
tiene: purga y trampa, headspace (HS), solid-phase microextraction (SPME), o la
combinacin de estas como headspace solid-phase dynamic extraction (HS-SPDE) y
headspace solid-phase microextraction (HS-SPME).
El mtodo de espacio libre o headspace (HS) es una tcnica de muestreo adecuada para
determinar compuestos orgnicos voltiles por GC. En HS, la muestra se coloca
normalmente en un frasco sellado y se calienta en horno hasta que los compuestos
voltiles llegan al equilibrio con la fase gaseosa. Las concentraciones relativas de un
analito en las dos fases se determinan por el coeficiente de particin, que se define como
la relacin de la concentracin del analito en la fase lquida a la de ste en la fase
gaseosa. Una alcuota de la fase gaseosa es finalmente analizada por GC. HS ofrece
varias ventajas: no requiere de instrumentacin complicada, no es necesario el uso de
solventes orgnicos y la sensibilidad para benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX)
es considerablemente mayor en comparacin con las tcnicas de inyeccin directa. Sin
embargo, el equipo requerido no es barato y la sensibilidad puede no ser suficiente para
muestras con muy bajos niveles de BTEX. De hecho, el muestreo de HS es propicio para
el anlisis de muestras con alto contenido de compuestos voltiles (Ejemplo: aguas
residuales) [40].
Un avance reciente en el anlisis de compuestos voltiles es el uso de la microextraccin
en fase slida (SPME). Usando SPME los analitos pueden ser muestreados a travs de

71

inmersin directa en agua o del espacio libre (HS) de la muestra. En el muestreo directo,
se coloca la fibra directamente en la muestra para extraer los compuestos orgnicos, esta
se recomienda para muestras de agua relativamente limpias. Sin embargo, para muestras
sucias tales como aguas residuales o muestras acuosas que contienen grasa y/o aceite
no se recomienda SPME directa; es ms adecuado extraccin de los analitos de el
espacio libre (HS) por encima de la matriz de la muestra (HS-SPME). Por lo tanto,
muchos problemas de interferencia se eliminan, porque la fibra no est en contacto con la
muestra. HS-SPME es especialmente til en el caso de analitos muy voltiles [40,59].
Los intentos de superar algunos inconvenientes que participan en SPME han incluido la
aplicacin de un recubrimiento inmovilizado en el interior de la pared de una aguja, el uso
de un capilar como fase de extraccin, o el embalaje de materiales absorbentes para la
extraccin. La extraccin dinmica en fase slida (SPDE) es un desarrollo de SPME, la
ventaja de sta sobre SPME es el aumento del volumen de material de absorcin. En el
uso de SPDE, el material de absorcin est cubierto en la aguja de acero de una jeringa.
Una extraccin dinmica se realiza desde el espacio libre por encima de una matriz
acuosa mediante la aspiracin y la liberacin del volumen de la jeringa. La desorcin se
lleva a cabo directamente en el inyector del GC [59].
El mtodo de purga y trampa es ampliamente utilizado para la extraccin de compuestos
orgnicos voltiles de muestras acuosas seguido por cromatografa de gases.
Los mtodos de purga y trampa, HS y SPME para el anlisis de BTEX y otros VOCS han
sido aprobados por la EPA en varios protocolos [60,61,62,64,65,]

72

2. SECCIN EXPERIMENTAL

2.1 MUESTRAS DE ANLISIS
Las muestras analizadas corresponden a los efluentes del tratamiento de aguas
residuales (agua de trampas de grasas) de tres estaciones de servicio de la ciudad de
Pereira; ubicadas en las comunas el jardn, centro y universidad. En la figura 9 se observa
una trampa de grasas de una de las estaciones de servicio.

Figura 9. Trampa de grasas.

2.2 MUESTREO
Las muestras de agua se recolectaron en la salida del sistema de trampa de grasas (es
decir, la que va directo al alcantarillado) de las tres estaciones de servicio. Se realiz un
muestreo puntual siguiendo las recomendaciones del Standard Methods, las muestras se
recolectaron en envases de vidrio de boca ancha con capacidad para 600mL. En cada
trampa de grasas se midi el pH y la temperatura [13].
2.3 TRANSPORTE, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA
Durante su transporte, las muestras se almacenaron en neveras de icopor que
aproximadamente mantenan las muestras a (4-12) C. Estas fueron transportadas
rpidamente a uno de los laboratorios de la escuela de qumica de la Universidad
Tecnolgica de Pereira, transcurrido un tiempo no mayor de 30 minutos despus de

73

colectadas y se pasaron a una nevera tipo industrial con una temperatura aproximada de
4 C.
La extraccin se llev a cabo dentro de las 48 horas despus de la coleccin de las
muestras por el mtodo de extraccin en fase slida. Los extractos fueron recogidos,
sellados con papel parafilm y por ltimo se guardaron en la nevera a -20 C hasta su
posterior corrida por GC, que no demor ms de 4 das en ejecutarse.
En general, entre menor sea el tiempo transcurrido desde la toma de la muestra y su
extraccin, ms fiables sern los resultados analticos. Para minimizar el potencial de
volatilizacin o biodegradacin de las muestras, estas se deben mantener lo ms frio
posible pero sin congelar (preferiblemente 4 C).
Evidencia experimental indica que algunos compuestos aromticos son susceptibles a
degradacin biolgica rpida bajo ciertas condiciones ambientales; por lo que la
refrigeracin por s sola no es adecuada para preservar estos compuestos en aguas
residuales por ms de siete das. Por esta razn es recomendable mantener la muestra a
4 C y analizarla lo ms rpido que se pueda, en ca so de no ser posible se recomienda
adicionar HCl hasta un pH cercano a 2.

2.4 EXTRACCIN EN FASE SLIDA
Para la extraccin de los BTEX de las diferentes muestras se utilizaron cartuchos C18 de
500mg marca Supelco y bombas de aire para generar presin positiva con el fin de
acelerar el proceso.
Antes de iniciar con el proceso de extraccin se realizaron filtraciones para remover
slidos de muestras muy sucias. Todo este proceso se realiz a bajas temperaturas (5 -
8) C.
La columna fue activada con dos porciones de 3 mL de metanol y preequilibrada con 3 mL
de agua. La muestra de la estacin de servicio (50mL) fue cargada en la columna con un
flujo de 3 mL/min. Se realiz un lavado con 2 mL de agua. Finalmente, los analitos fueron
eludos con 2 alcuotas de 1 mL de diclorometano.
Debido a que el benceno tiene un punto de ebullicin relativamente bajo, no se pueden
dejar secar los cartuchos de extraccin por un largo periodo de tiempo ni tampoco utilizar

74

mtodos con calor; por lo cual despus de la elucin de los analitos con diclorometano se
hace necesario recoger los extractos en un embudo de separacin donde se realiza una
especie de extraccin lquido-lquido para remover la pequea cantidad de agua que
pueda quedar contenida. De igual forma, los extractos fueron tratados con una cantidad
muy pequea de sulfato de sodio anhidro para obtener eluatos libres de agua, el volumen
final obtenido fue de 1mL. Esta operacin se llev a cabo con rapidez para evitar posibles
prdidas de todos los compuestos voltiles en el extracto. Todas las muestras fueron
tratadas de la misma manera. Cada componente fue identificado y cuantificado mediante
la comparacin de su tiempo de retencin y el rea del pico con los de concentracin
conocida de la solucin estndar, la cual tambin fue inyectada en el GC bajo las mismas
condiciones experimentales.

2.5 COMPOSICIN DEL ESTNDAR DE BTEX
Se adquiri un estndar comercial de mezcla de BTEX marca RESTEK con una
concentracin de 2000g/mL, cdigo de catlogo 30213 (en el anexo 2, se muestra el
certificado de la muestra). La composicin del estndar y la concentracin de cada uno de
los compuestos presentes en l, se presentan en la tabla 15.

COMPUESTO CONCENTRACIN
Benceno 2000,00 g/mL
Tolueno 2000,00 g/mL
Etilbenceno 2000,00 g/mL
p-Xileno 2000,00 g/mL
m-Xileno 2000,00 g/mL
o-Xileno 2000,00 g/mL
Metanol (Solvente) -
Tabla 15. Composicin del estndar de BTEX marca RESTEK cdigo de catlogo 30213.

75

Las condiciones a las que fue eludo el estndar para el certificado del anlisis fueron las
siguientes:
Columna: Stabilwax (cat.#10657). 60m x 0,32mm x 1m.
Gas transportador: Hidrgeno @ 40 cm/seg.
Programacin de la temperatura: 50C durante 4 min. Se lleva a 200 C a razn de
6 /min.
Temperatura del inyector: 200 C.
Temperatura del detector: 200 C.
Tipo de detector: FID

2.6 ANLISIS CROMATOGRFICO
2.6.1 ESTNDAR
Se utiliz un cromatgrafo de gases con detector de ionizacin por llama marca Shimadzu
GC-2014 (Figura 10), equipado con autoinyector AOC-20i+s, automuestreador AOC-20s,
inyeccin Split-splitless, y columna MXT5 serie 508529G1 (30m de longitud x 0.25 mm ID
x 0.50 m de espesor de pelcula).

Figura 10. Cromatgrafo de gases utilizado en el anlisis.

76

A partir del estndar de 2000,00 ppm se prepar un patrn de 50,00 ppm utilizando como
solvente de elucin diclorometano. ste se inyect en un cromatgrafo de gases donde se
realizaron varias corridas modificando tanto la temperatura de la columna, el volumen de
inyeccin y el flujo de corrida; esto con el fin de obtener un procedimiento ms eficiente,
con tiempos de corridas menores y con una separacin confiable entre los analitos
evaluados.
Las condiciones de operacin que se lograron establecer para realizar un anlisis
cromatogrfico ptimo de BTEX son las siguientes
Columna: MTX5.
Longitud: 30m
Dimetro interno: 0.25mm
Espesor de pelcula: 0.5m
Gas transportador: Helio.
Flujo total: 2.5 mL/min.
Flujo en la columna: 0.75 mL/min
Velocidad lineal: 20 cm/seg.
Temperatura de inyector: 250 C
Volumen de inyeccin: 1 L
Modo de inyeccin: Split
Radio del Split: 1
Temperatura del detector: 250 C
Tipo de detector: FID
La programacin de la temperatura se muestra la tabla 16.
2.6.2 PATRONES
A partir del estndar 30213 de BTEX de concentracin de 2000,00 ppm se realizaron
varias diluciones para obtener patrones que cubren concentraciones que van desde 0,25
hasta 50,00 ppm utilizando como solvente Diclorometano. Esto se realizada mediante el

77

RAZN DE
CALENTAMIENTO
(C/min)
TEMPERATURA
(C)
TIEMPO DE ESPERA (min)
- 40 2
10 100 2
30 190 0
Tabla 16. Programacin de la temperatura de horno del cromatgrafo.

mtodo de estndar externo; el cual consiste en la preparacin de patrones de
concentracin semejante al analito en la muestra, pero que se analizan separadamente
de la muestra desconocida.
2.6.3 CURVAS DE CALIBRACIN
Despus de preparados los patrones externos, se llevan al cromatgrafo de gases donde
son inyectados siguiendo el mtodo cromatogrfico descrito en el apartado 2.6.1. A
continuacin se obtienen los cromatogramas de los patrones y se representan las alturas
o reas de pico en funcin de la concentracin. La representacin grfica de los datos
origina una lnea recta que pasara por el origen de coordenadas; los anlisis cuantitativos
se basan en esta grfica.
2.6.4 ANLISIS DE LAS MUESTRAS
Despus de que la tcnica fue estandarizada y las muestras fueron extradas se hizo su
anlisis cromatogrfico a las mismas condiciones con las que se analizaron los patrones
externos. La identificacin de cada compuesto se realiza mediante comparacin de
tiempos de retencin de los picos obtenidos en los cromatogramas de la muestra con los
obtenidos en el estndar; y la cuantificacin a partir de la curva de calibracin obtenida al
graficar el rea del pico de cada patrn en funcin de la concentracin.

78

3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 ANLISIS CROMATOGRFICO DEL ESTNDAR
Para la identificacin de cada uno de los hidrocarburos aromticos presentes en el
estndar se realiz un anlisis cromatogrfico de un patrn de 50,00 ppm. En el
cromatograma obtenido (figura 11) se lograron identificar 5 picos, los cuales pertenecen al
benceno, tolueno, etilbenceno, m,p-xileno y o-xileno. Debido a la proximidad de los puntos
de ebullicin del p-xileno y m-xileno (pico 4 de la figura 11) que corresponden a 138 y 139
C respectivamente, no se logr separar estos 2 is meros (coeluyen quedando unidos en
un solo pico) debido a que la columna utilizada (MTX5) no es especfica para separar
ismeros del xileno. En el caso de que se requieran individualmente, es necesario el uso
de otra columna la cual separe m- y p-xileno como lo es la Stabilwax, la cual es utilizada
por el proveedor del estndar (Anexo 2). En varios artculos publicados se presenta este
solapamiento de los picos en el anlisis cromatogrfico [13,17,18,32,40].
En anlisis cromatogrfico a nivel de trazas se suele emplear un modo de inyeccin
splitless para mejorar la precisin del mtodo, esto se puede utilizar cuando los tiempos
de retencin de los compuestos de inters son mayores a 10 minutos, debido a que la
presin deforma y ensancha los picos; para el caso del anlisis de BTEX no se pudo
realizar debido a que prcticamente todos los compuestos salen antes o en este tiempo.
Para corregir de algn modo este problema se inyect en modo Split 1L con un radio de
Split de 1, que se asemeja a una inyeccin splitless.

Figura 11. Cromatograma patrn 50ppm

79

En la tabla 17 se presenta el nombre de cada hidrocarburo aromtico con su respectivo
tiempo de retencin y el rea medida por el equipo.
PICO NOMBRE TIEMPO DE
RETENCIN
(MINUTOS)
PROMEDIO DE
REAS
1 Benceno 6,03 260029,20
2 Tolueno 8,21 266337,10
3 Etilbenceno 10,49 271106,60
4 m,p-xileno 10,67 561352,40
5 o-xileno 11,20 273992,40
Tabla 17. Tiempos de retencin y reas medidas por el equipo de los hidrocarburos
aromticos.

Al realizar el anlisis cromatogrfico del solvente de dilucin (Diclorometano) se observa
un pico pequeo (Figura 12) cerca al tiempo de retencin del benceno, por lo cual se hizo
necesario inyectar varias veces el solvente de dilucin diferentes das para verificar que el
rea medida de ste fuera reproducible y crear un factor de correccin que eliminar
cualquier error generado (Tabla 18).

Figura 12. Cromatograma del solvente de elucin (Diclorometano).

80

Cola del diclorometano en un tiempo de
retencin (TR: 6,045) cercano al del benceno
(TR: 6,025)
INYECCIN REA
1 4931,10
2 4930,20
3 4944,50
4 4932,30
5 4941,50
6 4921,40
7 4920,40
8 4938,00
9 4923,40
10 4929,60
11 4923,70
12 4924,00
PROMEDIO 4930,01
SD 7,97
%RSD 0,16
Tabla 18. reas de la cola del diclorometano medida por el equipo.

3.2 CALIBRACIN
Para la calibracin del mtodo cromatogrfico se realizaron diluciones a partir del
estndar. La curva realizada para cada hidrocarburo aromtico est comprendida entre
los valores de 0,25 a 50,00 ppm, estos valores se seleccionaron porque eran los que
mejor correlacionaban con una lnea recta. Cada patrn se prepar e inyect en el
cromatgrafo de gases cinco veces, de los cuales se escogieron los tres resultados de
rea ms prximos para asegurar la confiabilidad y reproducibilidad del mtodo.
Para cada nivel de concentracin se determin la media y el porcentaje de desviacin
estndar relativa (RSD), as:

81

[35]
En la tabla 19 se presentan las concentraciones y los promedios de las reas obtenidas
de cada uno de los patrones que se utilizaron para la elaboracin de la curva de
calibracin del estndar de BTEX con su repectivo porcentaje de desviacin estndar
(%RSD).
En el anexo 3 se encuentran las reas obtenidas de las tres rplicas de cada patrn, con
su media, desviacin estndar (SD) y porcentaje de desviacin estndar (%RSD).

g/mL PROMEDIO REA %RSD (n=3)
BENCENO TOLUENO ETILBENCENO m,p-XILENO o-XILENO
0,25 6325,900,06 1320,700,27 1451,470,55 2673,030,85 1351,201,09
0,50 7511,13 0,38 2652,23 1,24 2983,79 0,33 5636,37 0,60 2883,37 0,60
1,00 9990,40 0,75 5128,97 1,11 5855,30 0,87 10973,671,26 5415,20 0,64
1,25 1120,7710,52 6448,870,99 7013,370,64 13075,570,25 6662,230,64
2,50 17609,030,84 13070,470,74 13990,560,38 27436,830,76 13358,070,99
5,00 30555,030,45 26701,401,33 27699,970,48 55689,130,99 27184,331,70
10,00 55596,571,40 49129,370,95 50239,230,08 101530,530,81 49450,300,49
12,50 69295,530,46 66540,631,56 67666,440,22 142703,100,68 68486,531,36
25,00 133739,001,02 133399,330,62 135717,331,02 283484,770,33 136997,700,24
50,00 260137,670,26 267334,330,34 272988,600,89 566991,331,45 276315,601,08
Tabla 19. Datos de las reas obtenidas de cada patrn para la construccin de las curvas
de calibracin.

Para el benceno en particular, la curva de calibracin se elabor restando del rea
obtenida el rea del pico adyacente al pico del diclorometano, debido a que el rea
registrada por el equipo corresponde a la del benceno ms el rea del pico adyacente al
diclorometano. Los datos obtenidos entonces se observan en la tabla 20. Los datos de
cada una de las replicas se observan en el anexo 4.

82

(g/mL) rea 4930
0,25 1395,890,26
0,50 2581,121,12
1,00 5060,391,48
1,25 6340,760,93
2,50 12679,021,17
5,00 25625,020,54
10,00 50666,561,54
12,50 64365,520,50
25,00 128808,991,06
50,00 255207,660,26
Tabla 20. Datos de las reas obtenidas para la elaboracin de la curva de calibracin del
benceno.

Los valores de %RSD son menores al 2%, lo que indica la repetibilidad en los resultados
de la metodologa utilizada para estandarizar.
En la figura 13 se muestra el promedio de las reas medidas para cada concentracin.
Las barras de error en la figura representa el SD de las tres replicas. Teniendo en cuenta
las barras de error, se puede observar la repetibilidad de los resultados para cada uno de
los niveles de concentracin de cada uno de los hidrocarburos aromticos.
Con el promedio de las reas y la concentracin se construy una curva de calibracin
para cada compuesto. Cada curva se forz a pasar por cero y se obtuvo la respectiva
ecuacin de la recta. En la figura 14 se presenta la curva de calibracin para el benceno;
las curvas de los dems compuestos se encuentran en el anexo 5.

83

Concentracin (ppm)
r
e
a
0
,
2
5
p
p
m
0
,
5
0
p
p
m
1
,
0
0
p
p
m
1
,
2
5
p
p
m
2
,
5
0
p
p
m
5
,
0
0
p
p
m
1
0
,
0
0
p
p
m
1
2
,
5
0
p
p
m
2
5
,
0
0
p
p
m
5
0
,
0
0
p
p
m
0
200000
400000
600000
800000
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
m,p-Xileno
o-Xileno
. SD

Figura 13. Grfica de barras de las concentraciones de los BTEX.

Figura 14. Curva de calibracin del benceno

La repetibilidad del sistema instrumental estudia la variabilidad debida nicamente al
instrumento. Para evaluar este parmetro se prepararon tres patrones de BTEX de
concentraciones diferentes los cuales se inyectaron por triplicado en el cromatgrafo de
gases. En la tabla 21 se presentan las reas de cada patrn medidas por el equipo al
inyectarse cada uno, tres veces (Ver anexo 6).
y = 5114,03x
R = 1
SD = 157,72
%RSD = 3,06
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)

84

[g/mL] PROMEDIO REA %RSD (n=3)
BENCENO TOLUENO ETILBEN-
CENO
m,p-XILENO o-XILENO
2,50 18054,230,093 13079,100,16 14012,300,45 27829,930,26 13427,100,17
12,50 70957,430,48 66139,430,14 67514,870,25 142308,370,19 68183,330,29
25,00 134765,000,11 133582,170,34 135189,170,57 285060,230,23 137307,300,28
Tabla 21. Datos para la determinacin de la repetibilidad instrumental.

Los valores de porcentaje de desviacin estndar relativa son menores al 1% en los tres
niveles de concentracin estudiados, lo que indica la repetibilidad del sistema
instrumental.

3.3 TRATAMIENTO ESTADSTICO
Para cada curva de calibracin de los diferentes compuestos se calcularon los parmetros
estadsticos necesarios para realizar la estandarizacin del mtodo como son:
R
2
: Coeficiente de correlacin.
%RSD: Porcentaje de desviacin estndar relativa
LD: Lmite de deteccin.
LC: Lmite de cuantificacin.
Exactitud
Los valores de R
2
y %RSD fueron suministrados por el software GC-Solution con el cual
se maneja el equipo. El software determina %RSD mediante el procedimiento de
coeficientes de variacin de los factores de respuesta (f), en el cual f expresa la
relacin entre la lectura o respuesta (rea) y la concentracin. En una calibracin lineal los
factores de respuesta deben ser semejantes entre si y cercanos al valor de la pendiente.
El procedimiento a seguir consiste en:
- Calcular f para cada concentracin mediante la siguiente frmula:

85

Donde, Y
i
es la Respuesta (rea) y X
i
la concentracin
- Determinar (promedio de los factores de respuesta) y SD (Desviacin estndar de
los factores de respuesta).
- Calcular el porcentaje de desviacin estndar relativa.
Como las lecturas de las reas de los patrones del benceno tenan un error debido a que
estas incluan tanto el rea del benceno como el rea generada por una cola del solvente
de dilucin, se hace necesario restar el rea de la cola del blanco al rea de cada patrn
para calcular el %RSD; ya que de no ser as los f para cada concentracin no seran
semejantes entre s porque a medida que se aumenta la concentracin aumenta el rea
del benceno ms el rea de la cola del blanco que permanece constante.
En la tabla 22 se observa los datos para el clculo del %RSD para el benceno.
Para la determinacin del LD y LC se empleo el mtodo basado en la extrapolacin de la
recta de calibrado a concentracin cero [17,18], el cual es un procedimiento aplicable a
mtodos analticos instrumentales. El mtodo consiste en:
1) Determinar la pendiente de la curva de calibracin (concentracin vs rea)
2) Se obtiene otra curva de calibracin, inyectando cada punto por triplicado, pero en este
caso slo se corren los tres patrones de menor concentracin de analito, determinndose
la ecuacin de esta nueva curva de calibracin y se extrapola la respuesta a
concentracin cero, obtenindose un estimado de la respuesta del blanco Y
bl.

3) Se determina la desviacin estndar perteneciente a cada concentracin del punto 2,
se calcula la recta correspondiente a concentracin vs desviacin estndar (SD) y se
extrapola como en el caso anterior la desviacin estndar a concentracin cero,
obtenindose el estimado SD
bl
, correspondiente a la desviacin estndar del blanco.
Se calcula el lmite de deteccin (3 veces desviacin estndar del blanco) y el lmite de
cuantificacin (10 veces desviacin estndar del blanco) aplicando las siguientes
frmulas:

86

Lmite de deteccin

Lmite de cuantificacin

X
(Concentracin)
Y
(rea promedio)
F
(Factor de respuesta)
0,25 1393,39 5573,56
0,25 1394,29 5577,16
0,25 1399,99 5599,96
0,50 2605,29 5210,58
0,50 2588,99 5017,98
0,50 2549,09 5098,18
1,00 5091,79 5091,79
1,00 5114,39 5114,39
1,00 4974,99 4974,99
1,25 6337,59 5070,07
1,25 6401,19 5120,95
1,25 6283,49 5026,79
2,50 12823,29 5129,32
2,50 12686,69 5074,68
2,50 12527,09 5010,84
5,00 25785,29 5157,06
5,00 25539,89 5107,98
5,00 25549,89 5109,98
10,00 51104,99 5110,50
10,00 51129,09 5112,91
10,00 49765,59 4976,56
12,50 64079,59 5126,37
12,50 64713,99 5126,37
12,50 64302,99 5144,24
25,00 127992,99 5119,72
25,00 128042,19 5121,69
25,00 130391,79 5215,67
50,00 255907,39 5118,15
50,00 255157,59 5103,15
50,00 254557,99 5091,16
PROMEDIO 5147,76
SD 157,72
%RSD 3,06
Tabla22. Datos para el clculo del % RSD para el benceno.

87

La tabla 23 muestra los resultados estadsticos obtenidos de las curvas de calibracin.
NOMBRE R R2 % RSD LD
(ppm)
LC
(ppm)
SENSIBILIDAD
(rea/ppm)
Benceno 1 1 3,06 2,25E
-2
3,65E
-2
5114,03
Tolueno 0,9998 0,9997 2,66 1,18E
-2
1,84E
-2
5330,54
Etilbenceno 0,9998 0,9997 4,69 5,64E
-3
1,5E
-2
5440,26
m,p-Xileno 0,9997 0,9995 3,77 4,71E
-3
1,54E
-2
11305,82
o-Xileno 0,9997 0,9995 3,75 1,17E
-2
1,66E
-2
5497,53
Tabla 23. Resultados estadsticos obtenidos de las curvas de calibracin.

3.3.1 INDICADORES DE RELACIN LINEAL
- COEFICIENTE DE CORRELACIN (R
2
)
Los respectivos valores de R
2
(Tabla 23) de cada una de las graficas de los diferentes
hidrocarburos aromticos muestran que el modelo lineal es suficientemente confiable en
el rango de concentracin trabajado, ya que estos valores se acercan a la unidad lo cual
indica que se estableci una correlacin altamente significativa (P < 0,01) entre los puntos
analizados.

- CONTRASTE CON UN INDICADOR ESTADSTICO (t) DE STUDENT
Para determinar ste indicador se debe trabajar con dos hiptesis:
H
0
: Hiptesis nula (Se asume que la correlacin es cero; es decir, no existe relacin entre
las variables).
H
1
: Hiptesis alterna (Se asume que existe correlacin entre las variables).
Para el desarrollo del test se calcula t
r
con n-2 grados de libertad para un nivel de
confianza del 95% (probabilidad p=0,05) siendo n el nmero de niveles de concentracin
analizados y se compara con el valor t
crtico
que corresponde al t tabulado.
Esto se realiza para cada compuesto, y se calcula mediante:

88

Para un nivel de confianza del 95%; n=10-2=8 grados de libertad, se tiene: t
crtico
= 2,31(En
el anexo 7 se presentan los valores de t para diferentes niveles de confianza) [35].
Ahora, si t
r
> t
crtico
se rechaza la hiptesis nula.
Compuesto
R r
2
t
r
t
crtico
H
0
Correlacin
lineal

Benceno
1 1

2,31 Rechazada Significativa
Tolueno 0,9998767 0,9997534 180,09 2,31 Rechazada Significativa
Etilbenceno 0,9998607 0,9997215 169,46 2,31 Rechazada Significativa
m,p-Xileno 0,9997877 0,9995755 137,25 2,31 Rechazada Significativa
o-Xileno 0,9997936 0,9995872 139,18 2,31 Rechazada Significativa
Tabla 24. Datos obtenidos para el test de linealidad.

La aplicacin de la prueba t student (correlacin significativa) demuestra que la diferencia
entre los puntos experimentales y los puntos de las lneas rectas son mucho ms
pequeas de lo que convencionalmente se acepta como diferencias aceptables para este
tipo de anlisis.
La precisin del mtodo es expresada en trminos de desviacin estndar relativa (RSD);
los resultados obtenidos para este parmetro indican que el mtodo es reproducible
debido que no sobrepasan el 5%.
Los LD y LC son buenos, ya que permiten detectar la presencia de BTEX a nivel de
trazas, dado que de esta forma es que se encontraran disueltos en las muestras de agua.
Adems hay que tener en cuenta que la tcnica de extraccin empleada (SPE) ayuda a
concentrar los analitos de una forma significativa, con posibles factores de
enriquecimiento hasta 1000. Para el caso de la extraccin realizada de los BTEX se

89

alcanza un factor de enriquecimiento de 50, lo que permite aumentar la confiabilidad del
mtodo.
Las sensibilidades se toman como la pendiente de cada curva de calibracin para los
diferentes hidrocarburos aromticos, estas indican que la habilidad para distinguir entre
diferentes concentraciones del analito por parte del mtodo es buena.
3.3.2 EXACTITUD
Para calcular la exactitud se prepararon por triplicado tres niveles de concentracin
diferentes. Con los datos obtenidos se realiz el clculo de la desviacin estndar y la
exactitud (expresada como porcentaje de error); esta ltima mediante la siguiente frmula:
%

100
En la tabla 25 se muestran los datos obtenidos para calcular la exactitud expresada en
porcentaje de error.
Compuesto Concentracin
Real (ppm)
Concentracin
experimental (ppm)
Media
(ppm)
%RSD Porcentaje
de error
(%E)

Benceno
50 50,03 49,82 49,74 49,86 0,30 0,28
25 25,03 25,04 25,49 25,29 1,03 0,76
5 5,15 4,98 5,13 5,09 1,77 1,80

Tolueno
50 49,96 50,25 50,29 50,17 0,36 0,34
25 25,29 25,19 24,94 25,14 0,72 0,56
5 5,01 4,83 4,91 4,92 1,83 1,60

Etilbenceno
50 49,86 50,98 50,02 50,29 1,21 0,58
25 25,16 24,88 24,61 24,88 1,12 0,48
5 5,19 5,09 5,07 5,12 1,17 2,40

m,p-Xileno
50 49,65 50,58 50,15 50,13 0,92 0,26
25 24,96 25,29 25,18 25,14 0,68 0,56
5 4,95 4,90 4,86 4,90 1,02 2,00

o-Xileno
50 49,87 50,86 50,07 50,27 1,03 0,54
25 24,91 24,73 24,74 24,79 0,40 0,84
5 4,92 4,84 4,83 4,86 1,03 2,80
Tabla 25. Datos obtenidos para calcular la exactitud
La exactitud evaluada del mtodo es buena, ya que los datos de porcentaje de error (%E)
mostrados en la tabla 25 son menores al 5%, lo que indica que el mtodo es bueno y
tiene buena proximidad con los valores reales.

90

3.4 ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA DE EXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPE)
3.4.1 PORCENTAJE DE RECUPERACIN
El porcentaje de recuperacin de la tcnica de extraccin se determin mediante la
contaminacin de tres muestras de agua desionizada (50mL) con un patrn RESTEK de
2000ppm de BTEX (realizado por triplicado), de tal manera que se consiguiera cubrir gran
parte del rango especificado del mtodo analtico. Se efectu el procedimiento de
extraccin de las muestras contaminadas simulando el proceso de SPE que deba
realizarse con las muestras reales.
En la tabla 26 se observan las concentraciones y los porcentajes de recuperacin
obtenidos para los diferentes hidrocarburos aromticos.

COMPUESTO CONCENTRACION
(ppm)
PORCENTAJE DE
RECUPERACIN (%)
X %RSD

BENCENO
50,00 70,01 71,35 65,92 69,43 4,38
20,00 60,15 62,42 66,28 62,95 4,92
1,00 69,77 74,11 81,96 75,28 8,21

TOLUENO
50,00 75,64 71,01 73,71 73,45 3,17
20,00 72,04 73,04 65,71 70,26 5,66
1,00 77,58 84,86 77,32 79,92 5,35

ETILBENCENO
50,00 75,03 72,49 77,89 75,14 3,59
20,00 76,49 73,68 80,38 76,85 4,38
1,00 68,41 73,45 76,39 72,75 5,55

m,p-XILENO
50,00 76,99 75,39 80,34 77,57 3,26
20,00 80,87 76,91 81,63 79,80 3,17
1,00 67,74 68,47 76,02 70,74 6,48

o-XILENO
50,00 81,64 79,47 82,69 81,27 2,02
20,00 81,69 79,97 85,96 82,54 3,74
1,00 71,98 77,67 78,97 76,21 4,88
Tabla 26. Datos obtenidos para el porcentaje de recuperacin de cada patrn.

91

COMPUESTO PORCENTAJE DE
RECUPERACIN (%)
X
(%)
SD
(%)
%RSD
BENCENO 69,43 62,95 75,28 69,22 6,17 8,91
TOLUENO 73,45 70,26 79,92 74,54 4,92 6,60
ETILBENCENO 75,14 76,84 72,75 74,91 2,05 2,74
m,p-XILENO 77,57 79,80 70,74 76,04 4,72 6,21
o-XILENO 81,27 82,54 76,21 80,01 3,35 4,19
Tabla 27. Porcentajes de recuperacin de los BTEX
En la figura 15 se muestran los porcentajes de recuperacin de los BTEX utilizando la
tcnica de SPE, y los %RSD de los resultados obtenidos los cuales estn representados
mediante barras de error. Los porcentajes de recuperacin van en orden creciente
conforme se incrementa el punto de ebullicin de los compuestos; obtenindose el mayor
porcentaje de recuperacin (%RP= 80,01) para el o-Xileno con punto de ebullicin de
144,4C, y el menor porcentaje de recuperacin (%RP = 69,22) para el benceno con punto
de ebullicin de 80,1C.
Porcentajes de recuperacin de los BTEX
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

d
e

r
e
c
u
p
e
r
a
c
i
n

(
%
)
B
e
n
c
e
n
o
T
o
l
u
e
n
o
E
t
i
l
b
e
n
c
e
n
o
m
,
p
-
X
i
l
e
n
o
o
-
X
i
l
e
n
o
0
20
40
60
80
100

Figura 15. Grafica de barras de los porcentajes de recuperacin de los BTEX

92

La recuperacin de los analitos de inters a partir de una matriz dada se utiliza como una
medida de la exactitud del mtodo. Es importante estar seguros que la extraccin
recupera la mayor parte de los analitos; mtodos aprobados por la EPA aceptan
porcentajes de recuperacin entre el 70 y el 120% [19,38].
La extraccin en fase slida (SPE) de los BTEX en general expuso buenos porcentajes de
recuperacin (superiores al 70%); excepto para el benceno que se obtuvo un valor un
poco inferior, aunque en realidad ste no se aleja mucho del valor recomendado. Adems
considerando la volatilidad de los compuestos analizados estos valores son adecuados.
La magnitud porcentual o la masa relativa del analito y la complejidad de la matriz resulta
de importancia para la determinacin del %RSD por lo cual para el anlisis de trazas son
apropiados %RSD de 5 a 10% o un poco mayores [18]. Para el caso de los %RSD de los
valores obtenidos de los porcentajes de recuperacin de los analitos son inferiores al 10%
lo que indica la precisin del mtodo; esto se puede observar en la figura 15 mediante las
barras de error.
La precisin es especialmente importante en la preparacin de muestras, esta
generalmente disminuye con la disminucin de la concentracin del analito, y adems
puede verse afectada dependiendo de los pasos en el proceso de medida. Para el caso
de la SPE la variabilidad puede venir del propio cartucho, el lavado, la extraccin, el
secado, o los pasos de redisolucin, por lo cual se debe controlar al mximo estas
variables para tratar de reducir la incertidumbre durante la preparacin de la muestra [38].

3.5 ANLISIS DE LAS MUESTRAS
3.5.1 RESULTADOS DE pH Y TEMPERATURA EN LAS TRAMPAS DE GRASAS
Las estaciones de servicio en las cuales se desarroll el muestreo estn ubicadas en las
comunas: el jardn, universidad y centro, todas ellas en la ciudad de Pereira. Se tomaron
muestras en la ltima trampa de grasas (es decir, de la que esta antes del desage final)
de tres estaciones de servicio. En cada trampa de grasas de las distintas estaciones de
servicio se tom el pH y la temperatura, mediante un medidor digital de pH, marca
Thermo scientific. La temperatura es una variable importante que influye en el

93

comportamiento de los BTEX en el agua, variando su solubilidad. En la tabla 28 se
muestran los valores de pH y temperatura obtenidos.
ESTACIN TEMPERATURA
(C)
pH
Estacin el jardn 23,5 6,24
Estacin
universidad
26,8 6,98
Estacin centro 27,3 6,08
Tabla 28. Temperatura y pH en las trampas de grasas.
Los hidrocarburos son generalmente pocos solubles en agua. La solubilidad de stos
depende sobre todo de su naturaleza qumica; ya que esta disminuye cuando el peso
molecular aumenta. Los componentes ms voltiles resultan ser los ms solubles, aunque
la solubilidad es pequea en comparacin con la evaporacin [45,53].
La solubilidad crece con la temperatura. Este aumento es, no obstante, menor que la
elevacin de la presin de vapor del hidrocarburo.
3.5.2 ANLISIS CROMATOGRFICO
Con el objetivo de extraer, concentrar y eliminar el mayor nmero de interferencias, se
realiz una extraccin en fase slida antes del anlisis cromatogrfico. Se utiliz la tcnica
de cromatografa de gases con detector de ionizacin por llama para la determinacin de
BTEX.
Para la identificacin de los BTEX se compararon los tiempos de retencin de los picos
obtenidos en los cromatogramas de las muestras reales con los tiempos de retencin de
cada hidrocarburo aromtico del estndar. La cuantificacin se realiza mediante el mtodo
del patrn externo; se calcula la concentracin a partir de una recta de calibrado donde se
representa el rea de los picos de patrones de concentracin conocida frente a la
concentracin en la fase gaseosa de los mismos.
Los resultados arrojados por los cromatogramas muestran que en la estacin el jardn y la
estacin universidad no se detectaron BTEX (Ver anexo 8) En cambio en la estacin
centro se logra detectar la presencia de los BTEX (Figura 16).

94

Figura 16. Cromatograma del extracto obtenido en la muestra tomada de la estacin de
servicio centro. Donde: 3: etilbenceno, 4: m,p xileno, 5: o-xileno

Teniendo en cuenta que la extraccin en fase slida (SPE) de los analitos expuso
porcentajes de recuperacin entre el 69,22 y 80,01%, se hace necesario aplicar un factor
de correccin que permita determinar la concentracin correcta de los diferentes
compuestos. Este factor de correccin se emplea cuando la recuperacin de los analitos
es baja pero la precisin del mtodo es alta; para el caso de la SPE la precisin es buena
ya que el porcentaje de desviacin estndar (%RSD) es inferior al 10%.
A continuacin se presenta la ecuacin utilizada para determinar la concentracin de los
BTEX, en la cual se incluye el factor de correccin del porcentaje de recuperacin.
100%
%

Donde:
C
a
: Concentracin del analito.
C
l
: Concentracin medida en el cromatgrafo de gases
V
f
: Volumen final
%RC: Porcentaje de recuperacin
V
c
: Volumen de carga (50mL)

95

En la tabla 29 se encuentran las muestras analizadas, los tiempos de retencin, y el
promedio de las concentraciones de BTEX con su respectivo valor de %RSD.
ESTACIN BTEX TR Concentracin (g/mL) Promedio %RSD

Estacin el
jardn
Benceno - ND ND ND - -
Tolueno - ND ND ND - -
Etilbenceno - ND ND ND - -
m,p- Xileno - ND ND ND - -
o-Xileno - ND ND ND - -

Estacin
universidad
Etilbenceno - ND ND ND - -
m,p- Xileno - ND ND ND - -
o-Xileno - ND ND ND - -

Estacin
centro
Etilbenceno 10,54 0,013 0,013 0,012 0,013 4,8
m,p- Xileno 10,69 0,014 0,014 0,013 0,014 4,14
o-Xileno 11,23 0,018 0,018 0,017 0,018 3,22
Tabla 29. Concentraciones de BTEX en las estaciones de servicio. ND: No detectado

En el anlisis de BTEX en aguas de salida de las trampas de grasas de tres estaciones de
servicio de la ciudad de Pereira, no se detect la presencia de ninguno de ellos en dos de
las tres estaciones de servicio analizadas (Estacin el jardn y universidad) como se
muestra en la tabla 29. Para el caso de la estacin centro, se detect la presencia de
etilbenceno, m,p-xileno y o-xileno en concentraciones de 0,013 ppm, 0,014 ppm y 0,018
ppm respectivamente (Tabla 29).

96

En el caso de estaciones de servicio, los riesgos de contaminacin de agua pueden
incluir: sistemas subterrneos y/o sistemas superficiales. El agua subterrnea puede
contaminarse por fugas o prdidas en sistemas enterrados (tanques y caeras). En
cambio las aguas superficiales, a partir de drenajes de aguas contaminadas que se
dirigen a las trampas de grasas correspondientes; estas aguas aceitosas y con restos de
combustible son mayormente producidas en el rea de dispensadores (islas de despacho)
debido al goteo que se originan al momento del expendio de gasolina, a pequeos
derrames que se producen ocasionalmente y a prdidas producidas accidentalmente al
momento del trasvase de combustible del auto tanque hacia los tanques de
almacenamiento.
La volatilizacin afecta las concentraciones iniciales de los BTEX. Cuando ha habido un
derrame de gasolina, lo primero que ocurre en el sitio contaminado es que parte de esta
se volatiliza dado el bajo peso molecular relativo y la alta presin de vapor (En la tabla 3
se puede observar los pesos moleculares y las presiones de vapor de los BTEX). La
cantidad de hidrocarburos presentes suele ser proporcional al espacio existente desde la
ltima lluvia, perodo en el que se produce la acumulacin de hidrocarburos en el
pavimento; al igual que depende de las condiciones medioambientales. Estas pudieron
ser algunas posibles causas de no haber detectado concentraciones de BTEX en las
estaciones el jardn y universidad; adems al realizar el anlisis cromatogrfico hasta un
tiempo de retencin de 17 minutos se observa (anexo 8) poca cantidad de hidrocarburos
de mayor peso molecular, lo que indica que no se produjo gran contaminacin en las islas
de despacho.
Sin embargo, cuando los BTEX son vertidos sobre el agua, estos se pueden disolver en
ella, aunque su tiempo de residencia es muy corto. La solubilidad de estos compuestos en
agua es relativamente alta comparada con otros hidrocarburos. En la tabla 3 se encuentra
la solubilidad de los BTEX en agua.
La persistencia de los hidrocarburos aromticos en agua vara de acuerdo con las
condiciones medioambientales. As, en aguas superficiales la vida media puede ser muy
corta, debido a la volatilizacin. Sin embargo, en aguas subterrneas, donde no hay
evaporacin, la vida media es muy larga (En la tabla 5 se observa el tiempo de vida media
de los BTEX tanto en aguas superficiales como en aguas subterrneas).

97

En el anlisis del agua de la estacin centro se detect la presencia de etilbenceno, m,p-
xileno y o-xileno en bajas concentraciones (0,013, 0,014 y 0,018 ppm respectivamente); lo
que unido con los anlisis de las estaciones el jardn y universidad, indican que no se
genera gran contaminacin de BTEX en el agua de salida de las trampas de grasas de
estas estaciones, pudindose encontrar probablemente en el aire debido a la volatilizacin
de estos compuestos. En Colombia no existe una ley que limite la concentracin de BTEX
en agua, pero con los resultados de los anlisis realizados se puede concluir que estas
tres estaciones de servicio vierten aguas residuales industriales al acueducto con bajas
concentraciones en hidrocarburos aromticos (BTEX).
3.5.3 ANLISIS DE UN HUMEDAL
Se realiz un anlisis cromatogrfico del agua de salida de uno de los humedales de la
planta de tratamiento de aguas residuales de la Universidad Tecnolgica de Pereira.
Se contamin con una mezcla de combustibles: 75% de gasolina diesel y 25% de
gasolina corriente con un flujo de 90 mL/min.
En la figura 17 se observa el cromatograma obtenido en el anlisis cromatogrfico del
humedal.

Figura 17. Cromatograma de la salida del humedal. Donde:1: benceno, 2: tolueno, 3:
etilbenceno, 4: m,p xileno, 5: o-xileno

En la tabla 30 se encuentran las concentraciones de BTEX encontradas a la salida del
humedal.

98

Humedal BTEX TR Concentracin (g/mL)

Salida
humedal
Benceno 6,03 0,13
Tolueno 8,21 0,40
Etilbenceno 10,51 0,17
m,p- Xileno 10,67 0,29
o-Xileno 11,21 0,25
Tabla 30. Concentracin de BTEX en la salida del humedal

En el anlisis de BTEX en el agua de salida de uno de los humedales de la Universidad
Tecnolgica de Pereira, se detect la presencia de todos los hidrocarburos aromticos
analizados; siendo la concentracin de tolueno (0,40ppm) mayor que la de los otros
compuestos.

3.5.4 INTERFERENCIAS EN EL ANLISIS
Los mtodos de purificacin reducen los compuestos interferentes presentes en el
extracto de los analitos antes del anlisis. Las muestras medioambientales son matrices
extremadamente complejas, para alcanzar los lmites de deteccin requeridos es
necesario eliminar la mayor cantidad posible de suciedad de los extractos que se
analizan. La mayora de los procedimientos de purificacin se basan en el uso de la
extraccin slido-lquido en columna, habindose recomendado sorbentes slidos muy
diversos en funcin de la naturaleza qumica de las sustancias que se quieren purificar.
Adems de las interferencias presentes en el extracto se pueden generar otras en la fase
pre-analitica: al momento de la toma de la muestra; cuando la conservacin de la muestra
no se hace a temperaturas adecuadas, al momento de la extraccin, o por contaminantes
presentes en los reactivos o cristalera. Para evitar este tipo de interferencias se
recomienda tener cuidado exhaustivo durante el proceso de la toma, conservacin y
extraccin de la muestra, lavar escrupulosamente el material de vidrio y usar reactivos de
alta pureza.

99

4. CONCLUSIONES

Se estandariz la tcnica de cromatografa de gases (GC), utilizando detector de
ionizacin por llama (FID) para la identificacin y cuantificacin de BTEX en matrices
acuosas.
La tcnica de cromatografa de gases con detector de ionizacin por llama (CG/FID), para
el anlisis de BTEX expuso muy buenos resultados para los parmetros estadsticos
necesarios para la cuantificacin de estos: coeficientes de correlacin cercanos a la
unidad, en promedio 0,9996; y valores de porcentaje de desviacin estndar (%RSD) que
no sobrepasan el 5%.
Los lmites de deteccin (LD) y cuantificacin (LC) obtenidos para la tcnica
cromatogrfica permiten determinar concentraciones bajas de BTEX, se obtuvieron
valores alrededor de 0,011ppm y 0,020ppm respectivamente considerndose buenos
porque permiten la determinacin de los BTEX a nivel de trazas teniendo en cuenta que la
muestras antes de ser analizadas son concentradas mejorando su deteccin en el equipo.
Los valores de sensibilidades obtenidas, en promedio 6538, indican que la habilidad para
distinguir entre diferentes concentraciones del analito por parte del mtodo es buena.
Se estandariz la tcnica de extraccin en fase slida (SPE), obtenindose buenos
porcentajes de recuperacin (superiores al 69,22%), que unidos a porcentajes de
desviacin estndar (%RSD) inferiores al 10% demuestran la exactitud y precisin de la
tcnica.
Los anlisis realizados a los diferentes extractos de las muestras de agua en las tres
estaciones de servicio de la ciudad de Pereira indican que no hubo presencia de BTEX en
dos de las tres estaciones de servicio analizadas. En dicha estacin se detect la
presencia de etilbenceno, m,p-xileno y o-xileno en concentraciones de 0,013 ppm, 0,014
ppm y 0,018 ppm respectivamente. Aunque en Colombia no exista una ley como tal que
limita la concentracin de BTEX en agua, estos resultados indican que no se genera gran
contaminacin de BTEX en el agua de salida de las trampas de grasas de estas
estaciones.

100

La estandarizacin de la tcnica de cromatografa de gases con detector de ionizacin por
llama (GC/FID) aporta una herramienta de anlisis con la cual se puede reportar
resultados confiables y repetibles en la universidad Tecnolgica de Pereira para realizar
investigaciones y anlisis de BTEX en matrices acuosas.

101

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107

6. ANEXOS

Anexo 1. Reacciones de los BTEX para la produccin de diferentes productos
Benceno:
El benceno es uno de los productos orgnicos de mayor consumo y sus aplicaciones ms
importantes son:
a) Casi el 50% se utiliza para obtener etilbenceno estireno poliestireno
(plstico).
b) Alrededor del 20% para obtener fenol via cumeno.

Figura 14. Reaccin para la obtencin de fenol.
El fenol se usa para obtener resinas fenlicas y para numerosas sntesis de
plaguicidas, medicamentos, etc.
c) Entre el 15 y el 20% se usa para obtener nylon va ciclohexeno.

Figura 15. Reaccin para la obtencin de nylon.
a) Otros usos importantes son:
Para anilina va nitrobeneno

Figura 16. Reaccin para la obtencin de anilina

108

La cual es intermediario para colorantes y numerosas sntesis.
Para fibras y barnices de polister a travs de anhdrido maleco.

Figura 17. Reaccin para la obtencin de polisteres.
Y para diversas sntesis.
Para obtener detergentes va dodecilbenceno.

Figura 18. Reaccin para la obtencin de detergentes.

Tolueno

Figura 19. Reaccin para la obtencin de benceno y mezcla de xilenos.

109

o-xileno

Figura 20. Reaccin para la obtencin de plastificantes, resinas, barnices.

110

Anexo 2. Certificado del anlisis del estndar

111

Anexo 3. Datos de las reas obtenidas de cada patrn para la construccin de las curvas
de calibracin.

[g/mL]
INYECCIN REA
CENO
m,p-XILENO o-XILENO

0,25
1 6323,40 1316,70 1456,30 2693,50 1338,20
2 6324,30 1322,10 1442,30 2677,20 1348,20
3 6330,00 1323,30 1455,80 2648,40 1367,20
PROMEDIO 6325,90 1320,70 1451,47 2673,03 1351,20
SD 3,58 3,52 7,94 22,84 14,73
%RSD 0,06 0,27 0,55 0,85 1,09

0,50
1 7535,30 2618,10 2995,00 5602,30 2870,,00
2 7519,00 2654,60 2978,00 5670,00 2878,40
3 7479,10 2684,00 2978,10 5636,80 2903,40
PROMEDIO 7511,13 2652,23 2983,70 5636,37 2883,37
SD 28,91 33,01 9,79 33,85 17,28
%RSD 0,38 1,24 0,33 0,60 0,60

1,00
1 10021,80 5170,20 5913,00 10928,80 5423,40
2 10044,40 5153,00 5817,60 11129,00 5445,00
3 9905,00 5063,70 5835,30 10863,20 5377,20
PROMEDIO 9990,40 5128,97 5855,30 10973,67 5415,20
SD 74,82 57,17 50,75 138,46 34,63
%RSD 0,75 1,11 0,87 1,26 0,64

1,25
1 11267,60 6447,00 6972,40 13110,00 6704,70
2 11331,20 6513,60 7061,70 13044,70 6619,00
3 11213,50 6386,00 7006,00 13072,00 6663,00
PROMEDIO 11270,77 6448,87 7013,37 13075,57 6662,23
SD 58,91 63,82 45,10 32,79 42,85
%RSD 0,52 0,99 0,64 0,25 0,64

2,50
1 17753,30 12963,10 13903,40 27196,10 13204,80
2 17616,70 13153,00 14011,60 27566,20 13430,50
3 17457,10 13095,30 14029,70 27548,20 13438,90
PROMEDIO 17609,03 13070,47 13990,56 27436,83 13358,07
SD 148,24 97,35 52,88 208,67 132,80
%RSD 0,84 0,74 0,38 0,76 0,99

112

[g/mL]
INYECCIN REA
CENO
m,p-XILENO o-XILENO

5,00
1 30715,30 26895,90 27825,90 56326,70 27543,90
2 30469,90 26289,80 27711,90 55390,70 27347,80
3 30479,90 26918,50 27562,10 55350,00 26661,30
PROMEDIO 30555,03 26701,40 27699,97 55689,13 27184,33
SD 138,88 356,63 132,30 552,52 463,45
%RSD 0,45 1,33 0,48 0,99 1,70

10,00
1 56035,00 49273,90 50201,00 100796,00 49167,50
2 56059,10 48607,70 50281,30 102423,70 49596,20
3 54695,60 49506,50 50235,40 101371,90 49587,20
PROMEDIO 55596,57 49129,37 50239,23 101530,53 49450,30
SD 780,35 466,50 40,29 825,36 244,95
%RSD 1,40 0,95 0,080 0,81 0,49

12,50
1 6909,60 65963,70 67528,30 142107,20 67890,70
2 69644,00 65916,70 67647,20 142176,30 68005,80
3 69233,00 67741,50 67823,70 143825,80 69563,10
PROMEDIO 69295,53 66540,63 67666,40 142703,10 68486,53
SD 321,79 1040,25 148,63 972,90 934,11
%RSD 0,46 1,56 0,22 0,68 1,36

25,00
1 132923,00 134239,10 136950,50 282466,30 137367,00
2 132972,30 133363,90 135975,50 283694,20 136749,10
3 135322 132596,00 134226,00 284294,80 136877,00
PROMEDIO 133739,00 133399,33 135717,33 283484,77 136997,70
SD 1370,96 822,15 1380,47 931,58 326,15
%RSD 1,02 0,62 1,02 0,33 0,24

50,00
1 260837,40 266337,10 271106,60 561352,00 273992,60
2 260087,60 267575,50 275730,80 576448,50 279695,10
3 259488,00 268090,40 272128,40 563173,50 275259,20
PROMEDIO 260137,67 267334,33 272988,60 566991,33 276315,60
SD 676,09 901,19 2429,15 8240,63 2994,48
%RSD 0,26 0,34 0,89 1,45 1,08

113

Anexo 4. Datos de las reas obtenidas para la elaboracin de la curva de calibracin del
benceno
Concentracin
(g/mL)
Inyeccin rea 4930

0,25
1 1393,39
2 1394,29
3 1399,99
PROMEDIO 1395,89
SD 3,58
%RSD 0,26

0,5
1 2605,29
2 2588,99
3 2549,09
PROMEDIO 2581,12
SD 28,91
%RSD 1,12

1
1 5091,79
2 5114,39
3 4974,99
PROMEDIO 5060,39
SD 74,82
%RSD 1,48

1,25
1 6337,59
2 6401,19
3 6283,49
PROMEDIO 6340,76
SD 58,91
%RSD 0,93

2,5
1 12823,29
2 12686,69
3 12527,09
PROMEDIO 12679,02
SD 148,25
%RSD 1,17

5
1 25785,29
2 25539,89
3 25549,89
PROMEDIO 25625,02
SD 138,88
%RSD 0,54

10
1 51104,99
2 51129,09
3 49765,59
PROMEDIO 50666,56
SD 780,35
%RSD 1,54

114

12,5
1 64079,59
2 64713,99
3 64302,99
PROMEDIO 64365,52
SD 321,79
%RSD 0,5

25
1 127992,99
2 128042,19
3 130391,79
PROMEDIO 128808,99
SD 1370,96
%RSD 1,06

50
1 255907,39
2 255157,59
3 254557,99
PROMEDIO 255207,66
SD 676,09
%RSD 0,26

115

Anexo 5. Curvas de calibracin

Curva de calibracin para el benceno

Curva de calibracin para el tolueno.

y = 5114,027x
R = 1
SD = 157,72
%RSD = 3,06
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)
y = 5330,537x
R = 0,9997
SD = 139,45
%RSD = 2,66
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)

116

Curva de calibracin para el Etilbenceno.

Curva de calibracin para el m,p-Xileno.

y = 5440,263x
R = 0,9997
SD = 261,45
%RSD = 4,69
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)
y = 11305,82x
R = 0,9995
SD = 414,16
%RSD= 3,77
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)

117

Curva de calibracin para el o-Xileno.

y = 5497,534x
R = 0,9995
SD = 202,93
%RSD = 3,75
0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
0 10 20 30 40 50 60
r
e
a
Concentracin (ppm)

118

Anexo 6 Datos para la determinacin de la repetibilidad instrumental.
g/mL
INYECCIN REA
BENCENO TOLUENO ETILBEN
CENO
m,p-XILENO o-XILENO

2,50
1 18044,10 13086,30 14065,40 27888,40 13401,20
2 18045,00 13095,10 14029,80 27851,60 13439,10
3 18073,60 13055,90 13941,70 27749,80 13441,00
PROMEDIO 18054,23 13079,10 14012,30 27829,93 13427,10
SD 16,78 20,57 63,68 71,80 22,45
%RSD 0,093 0,16 0,45 0,26 0,17

12,50
1 71213,40 66049,10 67528,80 142107,30 68148,40
2 70567,60 66136,50 67339,60 142205,30 68006,50
3 71091,30 66232,70 67676,20 142612,50 68395,10
PROMEDIO 70957,43 66139,43 67514,87 142308,37 68183,33
SD 343,08 91,83 168,73 267,91 196,64
%RSD 0,48 0,14 0,25 0,19 0,29

25,00
1 134678,60 133887,90 135563,50 285551,60 137616,20
2 134671,40 133065,20 134296,10 284294,40 136877,40
3 134945,00 133793,40 135707,90 285334,70 137428,30
PROMEDIO 134765,00 133582,17 135189,17 285060,23 137307,30
SD 155,93 450,19 776,78 672,04 383,97
%RSD 0,11 0,34 0,57 0,23 0,28

119

Anexo 7. Distribucin de t para diferentes niveles de confianza.

[35]

120

Anexo 8. Cromatogramas de los extractos obtenidos en las muestras tomadas de las
estaciones de servicio

servicio el jardn

servicio universidad

121

servicio centro

122

Anexo 9. Cromatogramas de los patrones de BTEX

123

124

125

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