DISTRIBUCION DE DIFERENTES DISTRIBUCION DE DIFERENTES

GENOTIPOS DE GENOTIPOS DE Bartonella bacilliformis Bartonella bacilliformis

EN EL PERU. EN EL PERU.
Instituto de Medicina Tropical
Instituto de Medicina Tropical
Alexander von Humboldt Alexander von Humboldt
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Palmira Ventosilla
INTRODUCTION
www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm
www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm
FAMILIA Bartonellaceae
GENERO
Bartonella
B. alsatica, B. bacilliformis, B. birtlesii, B. clarridgeiae, B. doshiae,
B. elizabethae, B. grahamii, B. henselae, B. koehlerae, B. peromysci,
B. schoenbuchensis, B. schoenbuchii* , B. talpae, B. taylorii,
B. tribocorum, B. vinsonii, B. quintana.
* Bergey, 2 Enero del 2002.
http://dx.doi.org/10.1007/bergeysoutline
ESPECIES
CLASE
Alfa Proteobacteria
TAXONOMIA
-2 Proteobacteria SUBCLASE
FACTORES DE VIRULENCIA
1. DEFORMINA
Protena extracelular de 67kDa
2. MOVILIDAD
La flagelina es una protena de 42 kDa.
Se expreso la flagelina de B.
bacilliformis en E. Coli: Se amplific por
PCR el gen fla A e insert en el plsmido
pGEM-T, obtenindose la construccin
pAEfla. Esta se transfiri a E. coli
BL21(DE3) dando una buena expresin de
flagelina (PAGE-SDS).
Se evaluar su capacidad antignica
de la flagelina, proteinas de invacim
IaIA en IaIB en ratones BalB/c.
Clonamiento y expresin del gen de flagelina de Bartonella
bacilliformis EN Escherichia coli. Garca-de-la-Guarda, R., Alvarado,
D., Lozano, O., Flores, L, Guerrero, A. M., Ventosilla, P., Guerra, H.,
Coha, J. M., Ramrez, P. y Romero C. IC, 2002-2003.
En resumen, las protenas como la flagelina, ialAB,
deformina, RhoA, y el antgeno de 43 kDa han empezado a
ayudar a entender los mecanismos moleculares para la
invasin de B. bacilliformis a los eritrocitos. Las funciones
de estas protenas todava no se conocen totalmente,
Yanji Xu and Yan Chai Bartonella bacilliformis: Molecular Mechanisms of Invasion. Einstein
Quart. J. Biol. Med. (2002) 19:56-58.
INVASION
Modelo de ingreso de Bartonella bacilliformis al glbulo rojo
Rolain JM, Novelli S, Ventosilla P, Maguina C, Guerra H, Raoult D. Immunofluorescence detection of B. bacilliformis
flagella in vitro and in vivo in human red blood cells as viewed by laser confocal microscopy. Ann N Y Acad Sci. 2003
Jun;990:581-4
Llego al Laboratorio del IMT-UPCH 4+1 muestras de sangre.
Los cultivos se hicieron positivos a 7 das, a las colonias se les
hicieron PCR e IFI, y se confirmo el diagnstico de B. bacilliformis.
Ventosilla P, Lpez M, Antnez de Mayolo A, Guerra H, Merello J, Prez E, Maguia C,
Montoya M. Bartonella bacilliformis en el Valle Sagrado Cusco, Per 1998: Aislamiento e
identificacin por PCR e IFI. X Jornadas Cientficas Homero Silva Daz, 1998: 47
Ventosilla P. http://euwog.free.fr/archive/meeting_juin99/proceeding.doc,
Henriquez C, Infante B, Merello J. Gallino M, Santivaez L, Maguia C, Guerra H, Birtles R,
Ventosilla P. Identificacin de Bartonella bacilliformis por mtodos moleculares. Rev Med
Hered 2002; 13:58-63.
Mayo-1998: Brote de
Cusco en El Sagrado
Valle de los Incas,
Urubamba.
Prez E., Ogusuku E., Ventosilla P., Birtles R., Guerra H., Merello J., Infante B.
and Montoya M., Lutzomyia peruensis, probable vector of Bartonella bacilliformis
in the Sacred Valley of the Incas, Cusco, Peru, 1998. 65th Annual Meeting of the
AMCA the American Mosquito Control Association. February 21-24. St. Louis,
Missouri. Pg. 42.
Villaseca P, Padilla C, Ventura G, Samalvides F, Yaez H, Chevarra L, Ellis B,
Rotz L, Leake J, Beati L.Rev Med Exp 1999, XV (1-2). Importancia de la
Lutzomyia peruensis en la transmisin de la enfermedad de Carrin en el Valle
Sagrado de los Incas. Urubamba-Cusco, Per.
WHO/TDR
Identification
Identification
of
of
Bartonella
Bartonella
bacilliformis
bacilliformis
genotypes and their
genotypes and their
relevance to epidemiological relevance to epidemiological
investigations
investigations
of
of
human bartonellosis
human bartonellosis
.
.
Birtles
Birtles
R,
R,
Fry
Fry
N, Ventosilla P,
N, Ventosilla P,
C
C

ceres A, S
ceres A, S

nchez E,
nchez E,
Vizcarra
Vizcarra
H,
H,
Raoult Raoult D. D.
J.
J.
Clin Microbiol
Clin Microbiol
2002; 40:3606
2002; 40:3606
-
-
12
12
FLOWCHART
Sequencing
Purify (Qiagen)
Amplification
Citrate Syntetase gene
(gltA-443f-1137r)
Sequencing
Amplification
ISR (16s-23s rRNA)-
16S1386f-23S115r
Estraction
(QIAamp)
Colony
Purify (Qiagen)
AFLP
AFLP analysis
Standard Europena Working Group on Legionella
Infection protocol (Fry, N. K., J. M. Bangsborg, S. Bernander, J.
Etienne, B. Forsblom, V. Gaia, P. Hasenberger, D. Lindsay, A. Papoutsi,
C. Pelaz, M. Struelens, S. A.Uldum, P. Visca, and T. G. Harrison. 2000.
Assessment of intercentre reproducibility and epidemiological
concordance of Legionella pneumophila serogroup 1 genotyping by
amplified fragment length polymorphism analysis. Eur. J. Clin.
Microbiol. Infect. Dis. 19:773780).
- Be used selective primer PstI-C
- Adapter-oligonucleotide (AFLP-LG1, 5-
CTCGTAGACTGCGTACATGCA-3;
AFLP-LG2, 5-TGTACGCAGTCTAC-3).
glt gltA Analysis A Analysis
gltA analysis. Partial gltA sequences of about 700 bp were
obtained for all isolates. Comparison of these sequences revealed
that the isolates possessed one of two different sequences.
The two isolates obtained from the Huayllacayan
valley in 1990 and the Luc-Uba isolate possessed an identical
sequence that was 97% similar to that of the remaining 23
isolates, including the type strain, KC583. These two sequences
had been deposited in GenBank prior to this study.
TABLE 2. ISR sequence Variation among the six B. bacilliformis
genotypes identified.
DISTRIBUCION DE LOS SEIS GENOTIPOS
DE B. bacilliformis EN EL PERU, 19941-1999.
Conclusiones y Discusi Conclusiones y Discusi n n
Los tres mtodos empleados en este estudio permitieron
diferenciaciones de los aislados de B. bacilliformis.
La sensibilidad del anlisis de secuencia de gltA fue mucho
menor que la de AFLP y ISR.
Con parcial secuencia gltA se obtuvo solo 2 genotipos.
Con ISR se encuentra 6 genotipos mientras que para AFLP 5
genotipos
Una combinacin de anlisis permite detectar la arquitectura
genmincas de las bacterias. Pero debe ser tomado con cuidado el
querer hacer una anlisis a nivel epidemiolgico.
Conclusi
Conclusi

n y Discusi
n y Discusi

n
n
Los tres ltimos brotes cada uno tiene un mismo genotipo, la
pregunta es si esta podra corresponder a un significado
epidemiolgico, ya que tambin se encontr diferentes genotipos
en Ancash, zona endmica.
Por otro lado tenemos cepas de mas de 40 aos, que pareciera
tener un buen grado de estabilidad gentica.
Sin embargo los recientes brotes y la expansin de las reas en
riesgo aun continua en la duda.
El fenmeno del nio tambin pude modulara estos cambios
epidemiolgicos de la Bartonellosis.
Este es el primer estudio donde se demuestra que la cepa asilada
de una persona asintomtica es del mismo genotipo que las cepas
de pacientes sintomticos.
Estudios futuros
Estudios futuros
Proyecto genoma de Proyecto genoma de Bartonella Bartonella bacilliformi bacilliformi
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Secuenciamiento Secuenciamiento y edici y edici n n
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