1

d
e

e
n
e
r
o

d
e

2
0
1
3

9.3.3 Operacin por lote alimentado
En el cultivo por lote alimentado, los nutrientes son alimentados continua o
semicontinuamente, mientras el efluente es removido discontinuamente (Fig. 9.8). Tal
sistema se llama cultivo por lote con alimentacin repetida. El cultivo por lote alimentado se
utiliza usualmente para superar la inhibicin por sustrato o la represin por catabolito
mediante la alimentacin intermitente del sustrato. Si el sustrato es inhibitorio, la adicin
intermitente de sustrato mejora la productividad de la fermentacin al mantener la
concentracin del sustrato baja. La operacin por lote alimentado tambin se llama sistema
semicontinuo o cultivo continuo de volumen variable. Considere un cultivo por lote donde la
concentracin de biomasa a un cierto tiempo est dada por:




( ) S S Y X X
0
M
S X 0
+ = Ec. 9.27

Donde S
0
es la concentracin inicial del sustrato, Y
M
X/S
es el coeficiente de rendimiento, y X
0
es la concentracin inicial de biomasa. Cuando la concentracin de biomasa alcanza su
valor mximo (X
mx
), la concentracin de sustrato es muy baja S<<S
0
, y tambin X
0
<<X. Esto
es, X
mx
~Y
M
X/S
S
0
. Suponga que a X
mx
~ Y
M
X/S
S
0
, se inicia una alimentacin de nutriente a
una velocidad de flujo F, con una concentracin de sustrato S
0
. La cantidad total de biomasa
en el recipiente es X
t
= VX, donde V es el volumen de cultivo a tiempo t. La velocidad de
incremento en el volumen de cultivo es:

F
dt
dV
=
Ec. 9.28

La integracin de la Ec. 9.28 rinde

V = V
0
+ Ft Ec. 9.29

Donde V
0
es el volumen inicial de cultivo (l).

La concentracin de biomasa en el recipiente a cualquier tiempo t es:

V
X
X
t
=
Ec. 9.30
La velocidad de cambio en la concentracin de biomasa es:

2
t
t
V
dt
dV
X
dt
dX
V
dt
dX
|
.
|

\
|

|
|
.
|

\
|
=
Ec. 9.31

BIOPROCESS ENGINEERING Basic concepts
2013

2
Traducido por Cecilia Carpio

Dado que dX
t
/dt =
net
X
t
, dV/dt = F, y F/V = D, la ecuacin 9.31 se transforma en:

( )X D
dt
dX
neta
=

Cuando el sustrato se consume totalmente S ~ 0 y X = X
mx
= Y
M
X/S
S
0
. Adems
puesto que casi todo el sustrato en la unidad de volumen se consume, entonces
dX/dt = 0. Este es un ejemplo de estado quasi estacionario. Un sistema por lote
alimentado opera a estado quasi estacionario cuando la velocidad de consumo de
nutriente es casi igual a la velocidad de alimentacin. Puesto dX/dt = 0 en el estado
quasi estacionario, entonces

neta
= D Ec. 9.33

Si la energa de mantenimiento puede ser despreciada,

S K
S

S
mx neta
+
=


Entonces:

D
D K
S
mx
S

~
Ec. 9.34

El balance del sustrato limitante sin energa de mantenimiento es:

M
X/S
t
neta
0 S 0
t
Y
X
FS Vr FS
dt
dS
= =
Ec. 9.35

Recordar que S
t
= VS

Donde S
t
es la cantidad total de sustrato limitante en el cultivo y S
0
es la
concentracin de sustrato en la corriente de alimentacin.

En el estado quasi estacionario, X
t
= VX
mx
y esencialmente todo el sustrato se
consumi de modo que se acumula una cantidad de sustrato no significativa. Por
tanto,

SF ~ 0 y dS/dt ~ 0
M
X/S
t
neta
0 M
X/S
t
neta
0
Y
X
FS
Y
X
FS 0 = =
Ec. 9.36
La ecuacin 9.31 en el estado quasi estacionario con S = 0 rinde:

0
M
X/S mx mx
t
S FY F X
dt
dV
X
dt
dX
= =
|
.
|

\
|
=
Ec. 9.37

BIOPROCESS ENGINEERING Basic concepts
2013

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Traducido por Cecilia Carpio

La integracin de la ecuacin 9.37 desde t=0 a t siendo la cantidad inicial de
biomasa en el reactor de X
t
0
rinde:

t S FY X X
0
M
X/S
t
0
t
+ = Ec. 9.38

Esto es, la cantidad total de clulas en el cultivo se incrementa linealmente con el
tiempo (lo cual se observa experimentalmente) en un cultivo por lote alimentado. La
velocidad de dilucin y por tanto
neta
disminuye con el tiempo en un cultivo por lote
alimentado. Puesto que
neta
= D en el estado quasi estacionario, la velocidad de
crecimiento es controlada por la velocidad de dilucin. El uso de modelos no
estructurados es una aproximacin, puesto que
neta
es una funcin del tiempo.

Los perfiles de producto en un cultivo por lote alimentado se pueden obtener al usar
las definiciones de Y
P/S
o q
P
. Cuando el coeficiente de rendimiento de producto Y
P/S

es constante, en el estado quasi estacionario con S<<S
0


P ~ Y
P/S
S
0
Ec. 9.39

O la potencial salida de producto es

FP ~ Y
P/S
S
0
F Ec. 9.40

Cuando la velocidad especfica de formacin del producto q
P
es constante,

t
P
t
X q
dt
dP
=
Ec. 9.41

Donde P
t
es la cantidad total de producto en el cultivo.

Sustituyendo X
t
= (V
0
+Ft) X
mx
en la ecuacin 9.41 rinde:

( ) Ft V X q
dt
dP
0 mx P
t
+ =
Ec. 9.42

La integracin de la ecuacin 9.42 rinde:

t
2
Ft
V X q P P
0 mx P
t
0
t
|
.
|

\
|
+ + =
Ec. 9.43

En trminos de concentracin de producto, la ecuacin 9.43 puede escribirse como:

t
2
Dt
V
V
X q
V
V
P P
0
mx P
0
0
|
.
|

\
|
+ + =
Ec. 9.44

La figura 9.9 describe la variacin de V, (=D), X, S, y P con el tiempo en el estado
quasi estacionario en un slo ciclo de cultivo por lote alimentado.
BIOPROCESS ENGINEERING Basic concepts
2013

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Traducido por Cecilia Carpio

En algunas operaciones por lote alimentado, parte del volumen del cultivo se
remueve a ciertos intervalos, puesto que el volumen del reactor es limitado. Esta
operacin se llama cultivo por lote alimentado repetido. El volumen de cultivo y la
velocidad de dilucin (=
neta
) soportan variaciones cclicas en esta operacin.

Si el tiempo de ciclo t
w
es constante y el sistema est siempre en estado quasi
estacionario, entonces la concentracin al final de cada ciclo est dado por:

w
w w
mx P 0 w
t
2
t D
X q P P
|
.
|

\
|
+ + =
Ec. 9.45

Donde D
w
= F/V
w
, V
w
es el volumen de cultivo al final de cada ciclo, V
0
es el volumen
de cultivo residual despus de la remocin, es la fraccin de volumen de cultivo
que permanece en cada ciclo (=V
0
/V
w
), y t
w
es el tiempo de ciclo.

El tiempo de ciclo se difine como:

w
w w 0 w
w
D
- 1
F
- V
F
V - V
t = = =
V
Ec. 9.46

La sustitucin de la ecuacin 9.46 en la 9.45 rinde:

( )
2
w
mx P
0 w
- 1
2D
X q
P P + =
Ec. 9.47

Un ejemplo de cultivo por lote alimentado es su utilizacin en algunas
fermentaciones de antibiticos, donde una solucin de glucosa se aade
intermitentemente al caldo de cultivo debido a la represin de vas para la
produccin de metabolitos secundarios causada por las altas concentraciones de
glucosa. El mtodo de lote alimentado se puede aplicar a otras fermentaciones de
metabolitos secundarios tales como cido lctico y fermentaciones de clulas de
plantas y de animales, donde la velocidad de formacin de producto es mxima a
bajas concentraciones de nutriente.

El cultivo por lote alimentado es importante en fermentaciones de E. coli para hacer
protenas a partir de tecnologa de DNA recombinante. Para sintetizar una alta
concentracin de producto, es deseable crecer el cultivo a una densidad celular muy
alta antes de inducir la produccin de la protena de inters. Si la E. coli tiene un
suministro ilimitado de glucosa crecer a la velocidad mxima, pero produce cidos
orgnicos (ej. actico) como subproductos. La acumulacin de estos subproductos
inhibe el crecimiento. Si la glucosa se alimenta a una velocidad que sostenga la
velocidad de crecimiento a un valor ligeramente menor que la v mxima, la E. coli
usa la glucosa ms eficientemente, haciendo menos subproducto. Se puede
alcanzar densidades celulares muy altas (50 a 100 g/l). El cultivo por lote alimentado
puede beneficiarse de un control de proceso activo. Por ejemplo, la velocidad de
alimentacin de glucosa podra ser controlada mediante la medicin de la
concentracin de glucosa en el medio o de la velocidad de generacin de CO
2

usando un controlador de retroalimentacin.