PRCTICA N 3: METODOS DE SIEMBRA

Para estudiar los microorganismos, se han diseado mtodos que permiten cultivarlos
bajo condiciones controladas y de esta manera manejar un solo tipo de microorganismo.
La siembra en placa o en tubo consiste en transferir un inculo de una muestra
determinada a un medio de cultivo. Adems, se debe considerar no slo el aspecto
nutricional, sino tambin las condiciones de incubacin tratando de apro!imarse a las
condiciones reales en la naturale"a, por eso debe ajustarse p#, concentraciones de
sales, temperatura, disponibilidad de o!$geno, etc. La aplicacin de estos factores
permite aislar microorganismos a partir de cultivos mi!tos, y obtener cultivos puros,
facilitando su identificacin. %l tipo de siembra y cultivo depende del microorganismo de
inters.
Tipos de siembra
&todo de siembra en superficie por agotamiento 'estr$a en placa(
%s el ms com)n y sirve para obtener colonias aisladas y de esta manera cultivos
a!nicos o puros. *e usa un asa de siembra en aro y se toma una muestra a partir de
un cultivo mi!to, luego en una placa petri con agar se hacen estr$as sobre la superficie.
Al reali"ar las estr$as e ir avan"ando se obtendrn menos microorganismos. +ada
colonia aislada deriva de una sola clula posiblemente.
&todo de siembra en superficie por diseminacin
Las muestras deben ser diluidas previamente antes de su siembra en placa. Al no
conocer la carga microbiana de una muestra es preferible sembrar la muestra directa y
todas las diluciones reali"adas. %n este mtodo, el inculo correspondiente a las
diluciones y,o muestra directa es colocado en la superficie del agar y se e!tiende con
asa de -riglas.y estril. -e preferencia debe dejarse que la muestra e!tendida se
absorba en el agar por /0 minutos antes de colocar las placas para su incubacin. %ste
mtodo sirve para reali"ar el recuento microbiano en una muestra determinada.
&todo de siembra por incorporacin o Pour plate
Las muestras deben ser diluidas previamente antes de su siembra en placa. Al no
conocer la carga microbiana de una muestra es preferible sembrar la muestra directa y
todas las diluciones reali"adas. %n este mtodo, el inculo correspondiente a las
diluciones y,o muestra directa es colocado en una placa petri estril y me"clado con
agar fundido. *e homogeni"an las muestras y se deja solidificar. Las colonias se
dispondrn de diferente manera, algunas quedarn atrapadas en el agar y otras
desarrollarn en superficie. %ste mtodo sirve para reali"ar el recuento microbiano en
una muestra determinada.
Medio Comn o Simple
Aar Trip!i"ase de So#a $TSA%
&edio base para fines generales, utili"ado con o sin sangre u otro enriquecimiento para
el aislamiento y cultivo de una variedad de microorganismos.
+1&P1*2+2134
Peptona de caseina.................... /0 gr
Peptona de harina de soya........ 0 gr
/
+loruro de sodio......................... 0 gr
Agar 5 Agar................................. /0 gr
Agua destilada............................ / L
p# 6,7 8 9,/
Medios Sele"!i&os
Aar Ma" Con'e#
*e basa en la fermentacin de la lactosa, las colonias de organismos capaces de
fermentar lactosa producen una ca$da locali"ada de p#, lo cual seguido por la absorcin
del rojo neutro, imparte un color rojo a la colonia. Las colonias de organismos que no
fermetnan lactosa permanecen incoloras y transl)cidas. La selectividad del medio se
debe a la presencia del cristal violeta y sales biliares que inhiben casi o completamente
el crecimieto de bacterias gram positivo.
+1&P1*2+2134
Peptona de +ase$na............................. /6 gr
Peptona de carne.................................. 7 gr
+loruro de sodio................................... 0 gr
Lactosa................................................. /9 gr
&e"cla de sales biliares...................... /,0 gr
:ojo neutro........................................... 9,97 gr
+ristal violeta........................................ 9,99/ gr
Agar Aga............................................ /7,0 gr
p# 6,/ 8 9,/
OB(ETI)O
Aplicar el tipo de siembra seg)n requerimiento del ejercicio
E*er"i"io +,- M.!odos de siembra para Aislamien!o de Ba"!erias
+,-,- Siembra en S/per0i"ie por ao!amien!o
La siembra en superficie de la placa por agotamiento es un mtodo de siembra que
consiste en agotar totalmente el medio con el cultivo o muestra problema, permitiendo el
aislamiento de las diferentes bacterias presentes en una muestra problema.
&ateriales
; / placa de <*A
; / placa de &ac +on.ey
; +aldo de +ultivo problema
Procedimiento
/. -ividir la placa imaginariamente en = cuadrantes
>. <omar una asada del caldo de cultivo problema y colocarla en uno de los cuadrantes,
seguidamente levantar el asa de siembra y sembrar en forma de "ig;"ag en el
segundo cuadrante. Proceda de la misma manera para los cuadrantes 7 y =.
1bservar esquema de siembra. :eali"ar este tipo de siembra en los medios de <*A y
&ac+on.ey
>
7. 2ncubar a 76?+ por >= horas en aerobiosis
Lectura e 2nterpretacin4
:eali"ar el estudio de las colonias aisladas que deben haber desarrollado en el cuarto
cuadrante, reali"ar coloracin gram de cada una de las colonias que hayan desarrollado
en el medio de <*A y anotar su resultado en @ormato 3?=. Para la descripcin de
colonias deber hacer uso del cuadro de +aracter$sticas macromorfolgicas.
+,-,1 Siembra en s/per0i"ie por disemina"i2n
/. A partir de la muestra problema, tomar / mL y colocar en un tubo que contenga A
ml de solucin salina 9.B0C 'dilucin /(. -e este tubo tomar /mL y traspasar a
un tubo > 'dilucin >( y repetir lo mismo para un tercer tubo 'dilucin 7(.
>. +olocar 9./ mL de cada tubo de dilucin sobre la superficie de cada placa que
contiene agar Plate +ount.
7. -iseminar con asa de -riglas.i 'asa de vidrio en forma de L( sobre toda la
superficie del agar.
=. 2ncubar a 76?+ por >= horas. :eali"ar el recuento microbiano.
0. Anotar resultados en @ormato 3?=.
+,-,3 Siembra por Po/r Pla!e o In"orpora"i2n
/. -e la dilucion / del ejercicio anterior, tomar / ml y colocar en una placa petri
estril vac$a.
>. Derter el tubo con agar Plate +ount licuado temperado
7. #omogeni"ar cultivo con agar reali"ando figuras en B y dejar solidifcar
=. :epetir pasos /, > y 7 para las diluciones > y 7 del ejercicio anterior
0. 2ncubar las placas a 76?+ por >= horas. :eali"ar el recuento microbiano.
E. Anotar resultados en @ormato 3?=.
7
PRIMER CUADRANTE
SEGUNDO CUADRANTE
TERCER CUADRANTE
CUARTO CUADRANTE
%squema de siembra por agotamiento
=
CARACTERISTICAS
MACROMORFOLOGICAS DE COLONIAS
BACTERIANAS