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CAPITULOII

BACTERIAS AUTOTROFAS
I,as bacterias auttrofas estrictas son microorganismos que obtie-
nen su carbono del CO, atmosfrico, o disuelto en el agua, mediante
procesos de quimiosntesis (Primera parte, pg. 28), y la energa indis-
pensable para su actividad, por la oxidacin de compuestos inorgni-
cos de nitrgeno, azufre, hierro, carbono e hidrgeno. I,as transforma-
ciones referentes a los compuestos de nitrgeno y azufre son de una
gran importancia para los suelos. ^
I,as bacterias auttrofas facultativas pueden obtener su carbono
bien del CO, atmosfrico, o disuelto, o del contenido en diversos com-
puestos orgnicos.
I,a eaistencia de ambos tipos de bacterias est ligada forzosa-
mente a la presencia de las substancias indicadas, cuya ogidacin
constituye su nica fuente de energa, y, en su mayor parte, son inca-
paces de descomponer la materia orgnica, cuya presencia, en cir-
cunstancias determinadas, puede perturbar su desarrollo (ii^ ).
Por su mayor importancia en los suelos, slo nos ocuparemos deta-
lladamente de los siguientes grupos de bacterias auttrofas, ordena-
dos atendiendo a la fuente de energa que utilizan:
A) Bacterias que utilizan compuestos de nitrgeno.
B) Bacterias que utilizan el azufre y sus compuestos (pg. 35)
C) Bacterias que utilizan compuestos sencillos de carbono (p-
gina 39)
D) Bacterias que utilizan el hidrgeno {pg. q.o).
No trataremos de las bacterias auttrofas, que, como las de los
gneros Leptothrix y S^iro^hyllum, ogidan compuestos de hierro y
manganeso, porque hasta ahora (86) se desconoce su importancia en
el suelo, toda vez que la mayora de los estudios tcnicos se han llevado
a cabo en relacin con el agua.
- 25-
A^ BACTERIAS QUE OBTII;NI:rN SU ENERGA M$DIANTT: LA OXIDA-
CIN DI; COMPUESTOS DE NITRGI:NO. - Como ya indicamos (Prime-
ra parte, pg. i2), las experiencias de Schlcesng y Mintz, aplicadas
a los suelos por Warington y otros, demostraron la naturaleza bio-
lgica del proceso de formacin de nitratos en la descomposicin de la
materia orgnica; pero al intentar aislar los grmenes productores
de la transformacin se fracas repetida^ veces, debido a deficiencia
de los mtodos empleados: medios orgnicos a base de gelatina; hasta
que, en ISqo, Winogradsky, que haca poco tiempo haba realizado
sus estudios sobre las sulfo y ferrobacterias, tuvo la feliz idea de ensa.-
yar como medio de aislamiento una solucin exclusivamente mineral,
a base de sulfato amnico, en la que ciertas bacterias se desarrollaron
activamente, llevando a cabo la nitrificacin de la sal amoniacal. ^ste
descubrimiento fu notable, no slo por haber permitido el aislamiento
de las bacterias nitrificantes, sino porque confrm la existencia - re-
cin revelada por los estudios sobre sulfobacterias - de la quimio-
sntesis, y, por tanto, de poder que posean determinadas bacterias
de vivir, como las plantas provistas de clorofila, a egpensas de materia
mineral egclusivamente.
Winogradsky (IO8) emple un medio de cultivo selectivo, en el
que ^lo pudieran desarrollarse aquellas bacterias capaces de ogidar
los compuestos de amonaco. El medio usado contena:
Sulfato amnico (NH`)^ SO^ ..... . . . .. . . . . . . . . . . i gramo.
Fosfato bfpotsco ^IiPO^ .. . . . . . .. . . . . . . . .. . . i ^
Agua corriente . .............................. iooo r
El medio lo distribua en matraces de fondo plano, colocando en
cada uno Ioo c. c., y de o,s a i gramo de carbonato de magnesia, este-
rilizndolo todo durante quince minutos a una atmsfera de presin.
I,os matraces se inoculan con una pequea cantidad de suelo y se
incuban a una temperatura de 2g^ a 30^.
Igualmente puede emplearse el siguiente medio lquido de cultivo
para el aislamiento de bacterias nitrosas (iio):
Sulfato amnico ( NH^ )^ SO^ ..... . . . . . . . . . . . . . . i,o gramos.
Fosfato bipotsco R=HPO^ .. . . . . . . . . . . . . . . . . . i,o
Cloruro sdirn Na CI . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . z,o r
Sulfato magasico Mg SO^ ^H^O ..... . . . . . . . . . o,s
Sulfato feztoso Fe SO^ 7Hy0 . . .. . . . .. . .. . . . . . Indcios.
Carbonato magnaico Mg CO^ . . . . . . .. . . . . . . . . . Esceso.
Agua destilada ....... .. . . . . . . . . . . ..... .. ... . . iooo gramos.
-25-
A fin de prevenir prdidas de amonaco, es preferible esterilizar
el carbonato magnsico separadamente. Cuando est fro, se agrega
un eaceso de carbonato a cada matraz. I,a formacin de nitritos se
comprueba con el reactivo de Tromsdorf (*), y Ia desaparicin del
amonaco, mediante e1 reactivo de Nessler (**).
Se agregan dos o tres veces pequeas porciones de una solucin
estril de sulfato amnico, a medida que se haya ido agotando la ante-
rior, y se hace un trasplante del cultivo a otro matraz con el mismo
medio de cultivo, utilizando de preferencia pequeas porcones del
fondo del matraz, en la que las bacterias forman un sedimento sobre
el carbonato de magnesio. Despus de tres o cuatro trasplantes, el
cultivo est lo suficientemente enriquecido para permitir el aisla-
miento de las bacterias.
^n el cultivo se encuentran conjuntamente las bacterias nitricas
y las nitrosas; mientras eziste amonaco en el medio, las bacterias
ntricas permanecen inactivas, empezando a funcionar tan pronto
como todo el amonaco ha sido osidado en nitrto. S el trasplante se
hace durante la primera fase, mientras egista bastante amonaco en
el medio, las bacterlas ntricas pueden ser eliminadas completamente
en eI transcurso de varios trasplantes consecutivos. Para el aislamiento
de las bacterias nitrosas pueden emplearse medo^ slidos, como e1 gel
(*) kl reactivo de 1^to^tsnoxi+ se prepara aadieado lentamente, con agitadn
constante, una soludn hIrviente de zo gramos de doruro de dnc en ioo c. c. de agua
destilada a una diludn de 4 gramos de almidn en agua. Se coatina caleatando
hasta que se disuelva la mayor caatidad posible de almidn y la solucia sea cas
dara. Entonces se diluye en agua y se agregan z gramos de yoduro de cinc; se completa
con agua hasta un litro de volumen; ae filtra, p se guarda en la obscuridad ea frascos
ben tapados.
Para la determinadn de nitritos, se rnlocan tres gotas del reactivo en utt ^platllo
de porcelana y se agrega una gota de cido sulfbrirn dllufdo (i : 3). Se toma con un asa
de platino una pequeiia cantidad del lquido a ensayar y se toca la auperficie del reac-
tivo: una coloracin azul indica la presenda de nitritos.
(+^)
Reactivo de N^ssr,g^t: Disolver go gramos de yoduro potsico en una pe-
quea cantidad (akededor de 3g c. c.) de agua destilada, frfa, esenta de amonfaco;
aHedir cloruro mercrico en solucin saturada hasta que persista un ligero predpi-
tado. ^ntonces agregar 40o c, c. de una soluda al 5o por roo de potasa, que se ha
dejado clariHcar por sedimentadn antes de usarla; ae completa el volumen hasta un
litro; se deja reposar durante una semana; se decanta, q se conaerva, al abrigo de la
luz, en f*ascos pequeos bien tapados.
Para el uso, se aade a una gota del reactivo la caatIdad del lquido a ensayas
que pueda llevar un asa de hilo de platino: una coloradn amarllla de oro lndica la
preseada de amonfaco.
- zy -
silceo de Winogradsky, que se prepara mezclando volmenes iguales
de silicato sdico o potsico (peso esp., i,og a i,o6) y de cido clorh-
drico (peso esp., i,io), echando el primero sobre el segundo. I,a mez-
cla se dializa con papel pergamino, durante varios dias, en agua des-
tilada, que se renueva frecuentemente, hasta que el dializado slo
produzca un ligero enturbiamiento con el AgNO,. I,a solucin clara
contiene atrededor de un 2 por ioo de cido silcico, y puede conser-
varse durante tres meses en frascos, con tapn de cristal y esterilizado,
de i i5^ a i2o^. Adems del cido silcico, se preparan las cuatro solu-
ciones siguientes:
[I)
(^s)^SO^ .................................... 3,o gramos.
K,HPO^..................................... i,o
MgSO^ 7H^0 .. .... . . . .. .... . . . . . .. . . . . .. .. . . 0,5 ^
Agua desttlada ............................... ioo c. c.
[2] 5olucin de sulfato ferroso al 2 por ioo.
[3)
Solucin saturada de NaCI.
[4] I.echada de magnesia: Una suspensin espesa de carbonato de
magaesio finamente pulverizado, en agua destilada.
En un matraz se colocan 5o c. c. de la solucin de cido silcico, y
se agregan 2,g c. c. de la solucin [Z], i c. c. de la solucin [2] y sufi-
ciente cantidad de la [4], para dar a la mezcla un aspecto lechoso.
(En sustitucin de la magnesia puede usarse una solucin al o,i por ioo
de carbonato sdico.) I,a mezcla se echa en placas de Petri pequeas,
esterilizadas, y se coloca una gota de la solucin L3] en el centro de cada
placa. Se colocan en posicin horizontal, y al cabo de una hora se ha
solidificado el medio.
I,a inoculacin se hace, bien en el matraz, o, posteriormente, en las
cajas de Petri, colocando una gota sobre la superficie, que se extiende
con una varilla de cristal esterilizada, que se usa sucesivamente para
la inoculacin de otras dos cajas de Petri, de modo que se obtenga
una serie de diluciones. I,as cajas se incuban de 25^ a 30^.
El desarrollo de organismos en la placa se investiga primeramente
mediante pruebas qumicas que revelen la formacin de nitratos y
desaparicin de amonaco, para lo que se toman con un asa esterili-
zada pequeas porciones del gel, que se someten a la accin de los
reactivos indicados anteriormente. Una vez comprobada la presencia
de bacterias nitrosas, se puede alimentar peridicamente el cultivo
con la adicin de una o dos gotas de una solucin estril de sulfato
amnico al io por ioo.
-28-
I,as diminutas colonias miscroscpicas se estudian mejor sobre el
medio transparente al carbonato sdico, empleando aumentos de
cincuenta a cien dimetros. I,as colonias, incoloras al principio, toman
color amarillento; ms tarde, pardusco, y al fnal, pardo obscuro. Al
cabo de un cierto tiempo, de diez a catorce das, empiezan a aclararse
desde los bordes al centro, hasta quedar incoloras. Sobre el medio
lechoso, con carbonato magnsico, se forma algunas veces un halo
transparente alrededor de las colonias, debido a la accin del cido
nitroso sobre el carbonato magnsico.
I,as bacterias que intervienen en la ogidacn del amonfaco en
cido nitroso pertenecen a los gneros Nitrosomonas y Nitrosococcus.
Gnero Nitrosomonas Winogradsky, i8qz.
I,as bacterias del gnero Nitrosomonas se caracterizan por tener
clulas mviles en forma de bastoncillos provistos de flagelos polares,
que se desarrollan en medios carentes de materia orgnica o que la
contienen en pequea cantidad.
I,a especie tipo es la Nitrosomonas euro^aea Winogradsky, cono-
cindose otras dos especies, que, con la mencionada, describimos a
continuacin, utilizando, como para las restantes especies bacterianas,
las descripciones de Bergey en su Manual (g).
Nitrosomonas europaea Winogradsky.
(Arch. Sci. Biol., S. Petersburgo, I, i892.)
Bastoncillos de o,g a I x Z,I a i,8 , presentndose aislados y
rara vez en cadenas de tres o cuatro. Poseen un flagelo polar cuya
longitud es tres o cuatro veces la del bastoncillo. Muy rara vez pre-
sentan un flagelo en cada extremo.
Se desarrolla fcilmente en medio lquido desprovisto de materia
orgnica, que contenga sulfato amnico, fosfato potsico y carbonato
bsico de magnesia. I,os individuos se unen, formando zoogleas alre-
dedor de 1as masas de carbonato en el fondo del matrax.
Sobre geles silceos forma colonias pequeas compactas, de color
pardo, con bordes netamente definidos.
Convierte en nitritos las sales amoniacales.
Habitat: Suelo.
-29-
Nitrosomonas javancnsis Winogradsky.
(ArcA. Sci. Biol., 5. Peters., I, t8g2.)
Bastoncillos pequeos aovados, de o,2 a o,5 de longitud, pro-
vistos de un flagelo polar, cuya longitud es unas veinte veces la del
bastoncillo.
En medios inorgnicos lquidos se agrupan formando pequeos
copos o escamas, que se adhieren a las paredes del recipiente, perma-
neciendo claro el lquido.
Las colonias en geles silfceos son de forma circular o elptica.
Convierte en nitritos las sales amoniacales.
Habitat: Suelo.
Nitrosomonas groningensis Sack.
(Centralblatt. Bakt.,
II, 64^ 34: 19z5)
Bastoncillos de o,4 X o,6 , inmviles. Gram negativos.
Colonias sobre gelatina: pequeas, circulares, incoloras y bri-
llantes.
Colonias sobre gel silceo: circulares, compactas, incoloras.
P^nturbia el caldo.
Sobre patata: colonias pequeas, incoloras.
No forma indol.
P^n ausencia del osgeno, reduce los nitratos a nitritos.
En solucin de peptona que contenga (NH.),50. forma nitritos.
Ataca lentamente a la celulosa.
Puede tomar el carbono del CO, atmosfrico, de la glucosa, de la
lewlosa, de la maltosa, de la sacarosa y de la asparagina.
Aerobia.
Temperatura ptima: 20^.
Habitat: Suelo.
Gnero Nitrosococcus Winogradsky, 1892.
Bacterias esferoidales grandes, que no se desarrollan en los me-
dios ordinarios de cultivo. 1^n el suelo y en medios de cultivo adecua-
dos transforman el amonaco en nitritos.
^ 3^ -
I,a especie tipo es
Nitrosococcus nitrosus Migula, Bergey y col. ..
Snvoxistr^s. - Nitrosococcus W inogradsky (Arch. Sci. Biol., S. Peters., s; r89z,^"^
Ann. Inst. Pastsur, g, 577; i8gi). Microccecus xilrosus (Winog,radsk^ffitgnla^j
System der Bakterien, r94; r9oo)
Esferas giandes de I,5 a I,7 de dimetro, con gruesa memb^rana
celular, aparentemente inmviles. r
Cultivo en gel silceo: colonias brillantes, grandes, blanquecinas o
amarillentas, granulares.
Aerobia.
Temperatura 8ptima: 20o a 250.
Habitat: Suelo.
Para el aislamiento de las bacterias nitricas puede partirse:
a) De uno de los anteriores medos lfqudos en que se haya ago-
tado el amonaco, haciendo trasplantes sucesivos sobre medios en que,
como el que se indica a continuacin, se ha substitudo la sal amnica
por nitritos, con los que se consigue la eliminacin de las bacterias
ttitrosas; o
b) Inoculando con suelo directamente el medio elegido.
Como medio lquido puede emplearse eI siguiente (40):
Nitrto sdfoo (NaNO^) ... . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . i,o gramos.
Carbonato sdco (Na^CO') . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . r,o ^
Fosfato dipotsico (g^HPO^) ... . . . . . . . .. . . . . . . . o,g
Cloruro sdico (NaCI) ............ .............. o,g ^
Sulfato magnsico (MgSO^ ^H^O) .. .. . . . . . . . . . . . 0,3 r
Sulfato ferroso (FeSO^ yFI^O) ... .. . . . . . . . . . . . . . Indidos.
Agua destilada . . . . . . . . .. . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . . rooo c. c.
Se colocan porciones de unos 2o c. c. en matraces de 1^rlenmeyer
de 15o c. c., se inoculan y se cultivan a 280.
Cada siete o diez das se toma con un asa de platino esterilizada
una gota del medio de cada matraz, y se comprueba la desaparicin de
los nitritos con el reactivo de Trommsdorf, en la forma ndcada, y
la presencia de nitratos, con la difenilamina (*}, para lo que se caloca
( ^ ) Paza preparar el reactivo de difenlamixta, se disuelven o,7 gramos de difeuila-
mina en una mezcla de 6o c. c. de cido sulfrico puro (p. e., i,84) q 28,8 c. c. de agua
destflada; se enfrfa la mezcia, y se aladen lentamente rr,3 c. c. de cido clorhdrico
rnncentrado (p. e., t,rg); se deja reposar hasta el dta siguiente, y se decanta, para
separar la parte de base que precipita. Se conserva en frascos topacio y al abrigo de
la luz.
- 3 i ,.
en una depresin del platillo de porcelana una gota del reactvo y
se toca con una gota de la solucin que se prueba: una coloracin
azulada indica la presencia de nitratos. ^sta prueba no puede reali-
zarse en presencia de nitritos, por lo que si la prueba de Trommsdorf
es positiva, hay que esperar a que se hayan agotado los nitritos.
Tan pronto como el cultivo acusa la desaparicin de los nitritos
y la aparicin de nitratos, se hacen trasplantes en matraces estriles
con el mismo medio de cultivo. Cuando se han repetido bastantes
veces estos trasplantes, como el desarrollo de las bacterias nitrifi-
cantes se encuentra favorecido por el medio, terrninan por ser las
nicas que subsisten, evitndose o, por lo menos, disminuyendo las
contaminaciones. A esta serie de trasplantes, que tienden a aumentar
o a enriquecer en un medio de cultivo el nmero de individuos de una
determinada especie, suele denominrseles kcultivos de enriqueci-
mientos.
Para el cultivo y aislamiento de las bacterias ntricas puede usarse
el siguiente medio slido:
Nittito sbdirn (NaNO^) . ...... . . . . . . . . . . . . . . . z,o gramos.
Carbonato sdico (Na=COi) . . . . . . .. . . . . . . . . . . i,o ^
Fosfato bipotsico (^HPO^) . . ..... . . . . . . . . . . o,g r
Agat ...................................... ig,o r
Agua destilada .. . . .. . . .. .. ....... .. . . . .. . . . iooo c. c.
El medio esterilizado se coloca. en placas de Petri, y una vez solidi-
ficado, se pasa por su superficie una aguja de platino esterilizada
que lleve una gota del cultivo en medio lquido. I,as placas inocula-
das se incuban a 30^ durante dos semanas. l,a raya inoculada se pre-
senta entonces opaca, y en ella se distinguen a simple vista numerosas
gotitas redondeadas. I,as colonias prximas a la superficie son bri-
llantes, ligeramente parduscas, con dimetro de 3o a 5o y formas
variadas. I,as colonias aparecen sobre la superficie como gotas homo-
gneas de un dmetro de too a i8o. Sobre agar en bsel, Ias colonias
son de un blanco sucio, con una gran gota semifluida en la parte
inferior.
Como sobre el medio indicado pueden desarrollarse tambin otras
bacterias del suelo, debe tenerse cuidado para no confundirlas con las
bacterias ntricas. Waksman (io2) recomienda seleccionar las colo-
nias ms pequeas y combinar el control cuidadoso de la desapari-
cin de los nitritos con incubaciones prolongadas de tres semanas
a 30^. I,as colanias ms caractersticas se utilizan para el trasplante
^ 3^ -
a medios lquidos, empleando las pipetas capilares de Winogradsky,
que se obtienen estirando a la lmpara tubos capilares de vidrio.
Con 1a extremidad afilada del capilar esterilizado ^ toca en la colo-
nia elegida, introducindola despus en el medio lquido, y al golpear
ligeramente contra el fondo del matraz se rompe dicha extremidad,
que queda con el inculo en e1 medio lquido. Despus de una serie
de trasplantes suelen obtenerse algunos que se desarrollan en cultivo
puro.
I,as bacterias que llevan a cabo la osidacin de los nitritos en
nitratos pertenecen al gnero Nitrobacter Winogradsky t892, cuya
especie tipo es Nitrobacttr Winogradskyi Buchanan.
Bergey, en su obra citada, resea las siguientes especies:
i. - Nitrobacter Winogradskyi Buchanan.
(Winogradsky, Arch. Sci. Biol., S. Peten., i: 8^; i89z. Buchanan,
Jour. oJ Bact., 3: 180; i9i8.)
Bastoncillos cortos, inmviles, con membrana gelatinosa, de o,6
ao,8XIai,2.
Pueden cultvarse en medios sin materia orgnica.
Sobre agar lavado: De siete a diez das, colonias muy pequeas,
circulares o irregulares, de color pardo claro que tiende a obscurecerse.
Sobre gel siliceo: Colonias ms pequeas, pero ms densas que
sobre agar lavado.
Agar lavado en bisel: De siete a diez das, faja estrecha, agrsada.
Caldo mineral: A los diez das, sedimento algodonoso.
Oxida los nitritos en nitratos.
Aerobia.
Temperatura ptima: 25o a 2go,
Habitat: Suelo.
2. - Nitrobacter punctatus Sack.
(Sack, Centbl. Bakt., II, 6s: 20; i92q.)
Bastoncillos largos, inmvile^, de 2 a 3 de longitud. Gram posi-
tivos.
Sobre gelatina: Colonias blancas circulares.
Picadura profunda sobre gelatina: I,icuacin lenta.
Sobre agar nitritos: Colonias blancas circulares, granulares, con
borde ondulado.
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Caldo: No se enturbia.
I.eche con nitrito y tornasol: Sin cambio.
Patata: No se desarrolla.
No forma indol.
Transforma los nitritos en nitratos.
No forma SH,.
Hidroliza la celulosa.
Puede obtener el carbono del anhdrido carbnico, degtrosa, levu-
losa, lactosa, sacarosa, manita y celulosa, pero no de los carbonatos.
Aerobia.
Temperatura ptima: 20^.
Habitat: Suelo.
3. - Nitrobacter /lavus Sack.
(Sack, Cext b l. j. Bakt ., II, 62: 20; ig24.}
Bastoncillos de o,g x 2 , inmviles. Gram negativos.
Picadura sobre gelatina: Crecimiento superficial amarillento. Sin
licuacin.
Agar nitrito: Colonias circulares, pequeas, amarillas.
Agar en bisel: Linea filiforme amarilla.
Caldo: No se enturbia.
I,eche tornasolada, con nitrito: Sin cambio.
Patata: Capa gruesa cremosa.
Porma indol.
Transforma los nitritos en nitratos.
No forma SH,.
Hidroliza la celulosa.
Puede obtener su carbono de1 anhdrido carbnico, glucosa, levu-
losa, lactosa, sacarosa, manita y celulosa, pero no de los carbonatos.
Aerobia.
Temperatura ptima: 20^.
Habitat: Suelo.
4. - Nitrobacter o^acus 5ack.
(Sack, Cent b i. f. Bakt ., II, 62: 2i; i924.}
Bastoncillos de o,z x 2,o , inmviles. Gram positivos.
Gelatina: Colonias circulares color naranja.
Picadura en gelatina: I,icuacin.
-34-
Agar nitrito: Colonias circulares color naranja.
Caldo: Se enturbia y produce sedimento color naranja.
I,eche tornasolada, con nitrito: Sin cambio.
Patata: Capa gruesa, hmeda, color anaranjado rojizo.
No forma indol.
Transforma los nitritos en nitratos.
No forma SH,.
Hidroliza la celulosa.
Puede obtener su carbono del anh{drido carbnico, glucosa, levu-
losa, lactosa, sacarosa, manita y celulosa, pero no de los carbonatos.
Aerobia.
Temperatura ptima: 20^.
Habitat: Suelo.
B^ BACT^RIAS QU^ O$TI^N^N SU $3dRRGA D^ I.A OXIDACIN D^I,
AZUFR^ Y SU5 COMPUx5TOS. - Todos los microorganismos necesitan
pequeas cantidades de azufre para la sfntesis de su protoplasma. Di-
versas bacterias, y aun algunos hongos, parecen ser capaces de ozidar
pequeas cantidades de azufre; pero son pocas las que, como las sulfo-
bacterias, actan sobre cantidades mucho mayores que las necesarias
para elaborar su propia substancia, utilizando el azufre y sus com-
puestos como fuente de energfa.
I,as sulfobacterias, que son capaces de obtener energa de la ozida-
cin del azufre y sus compuestos, deben distinguirse de las otras bacte-
rias que intervienen en el ciclo del azufre, tales como las que liberan
SH, en la hidrlisis de las protenas o en la reduccin de los sulfatos.
De los diferentes grupos de bacterias capaces de o$idar el azufre
y sus compuestos, nicamente se encuentran en los suelos las pertene-
cientes al gnero Thiobacillus, que se presentan con gran abundancia
en .todos los suelos, sobre todo en los que han recibido como abono
azufre, bien en forma orgnica (aguas residuales de alcantarillado, etc-
tera) o inorgnica.
Del gnero Thiobacillus se conocen las siguientes especies:
Thiobacillus thio^arus Beijerinck.
(Beijerinck, Centbl. f. Bakt., II, rt: 593: 1904. Nathanson, Mitt. Zool. Statiox. Nea-
pel, XV: 65$; igo3. Diiggeli, Die Schwe/elbaktevien. Neujahresblatt Naturf. Gesell.,
T,urich, aio igiq. Suljomonas thioparus Orla Jensen.)
Bastoncillos cortos, delgados, mviles, de o,s x 3,o .
-35-
Cult ivo en medio dqut ido. -Como medio de cultivo emple Beije-
rinck el siguiente:
N^ ^^' SH,O .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . g,oo gramos.
Na HCO, ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I,oo r
Nas HPO^ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . o,zo ^
NH^CI . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . o,I ^
Mg C1, . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . o,r ^
Agaa . . ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Iooo c . c .
> ^ 1 medio, sin esterilizar, se inocula con agua de rfo o con tierra, y
sQ incuba de 2$^ a 30^ . A los dos o tres dfas, la superfice del medio se
cubre con una pelcula de azufre mezclado con bacterias. Haciendo
el trasplante al mismo rnedio se forma la pelcula en veinticuatro
horas.
Cultivo en medio slido. -^n el medio anterior, adicionado con
un 2 por Ioo de agar, forma colonias amarillas circulares, pequeas.
^ s aerobia y auttrofa, derivando su energa de la oxidacin de
los tiosulfatos, sulfuros, 5H, y del azufre elemental. Reaccin ptima:
Bsica.
Se encuentra en las aguas de mar y de rio y en el suelo.
Thiobacillus denitrificans Beijerinck.
(Centrlbl. J. Bakt., II, II: 5f^ ^ ; Igoq.)
Bastoncillos cortos, de o,g x 3 de longitud, mvles con ayuda
de seis a ocho flagelos pertricos.
Cultivo en medio lquido. - Beijerinck emple el siguiente:
gNO, ..................................... 0.5 Sramos.
Na,CO, ................................... 0,2
K,IiPO^ ................................... 0,2
CaCO, .................................... 20,0 ^
Azufre ..................................... Ioo,o
Agua d e r o o canal . ... .. .... . . . . . . . . . . . . . . . . Iooo c .c.
^1 cultivo se hace en frascos, completamente llenos d el med io,
provistos d e tubo d e segurid ad , incubad os a 30^. E1 d esarrollo es
escaso.
Cultivo en medio slido. -Colonias grandes, delgadas, blancas.
$s anaerobia y auttrofa, obteniendo el carbono del CO,, carbo-
natos y bicarbonatos.
Oxida el azufre elemental y los sulfuros.
-36-
Reaccin ptima: pH = ^,9 a g,z. fdem mnima: pH ^ 3^5
Se encuentra en las ag^uas de ro y de canal y en el suelo.
Thiobacillus Trautu^enii Bergey y col.
(Trauwefn, Ccntbl. j. Bakt., II, 53= 513: 192I.)
Bastoncillos cortos, de o,5 X i a 2 , mviles. Gram negativos.
Cultivo en medio lquido. - No precipita azufre.
Cultivo en mcdio slido. - Colonias blancas pequeas, de un milf-
metro de dimetro.
Medio de cultivo lquido:
gNO^ ..................................... I,o gramos.
Na=HPOa .................................. o,z
Na^Os5Hs0 .. ........................... z,o
NaHCOa .................................. I,o
MgCls ...... .............................. o,I
A gu a d e st i lad a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I o0o c . c .
Medio slido: ll anterior con un 2 por ioo de agar.
Aerobia facultativa: Tiene la propiedad de usar los nitratos como
fuente de oxigeno en condiciones anaerobias.
Reaccin: I,mites, pH = 6 y pH = io. ptima: pH = 7,q a 8,5.
Auttrofa facultativa: Oxida los tiosulfatos en ditionatos, tetra-
tionatos y sulfatos, sin precipitar azufre; tambin puede oxidar el
azufre y los sulfuros. .
Se desarrolla bien sobre muchos medios orgnicos.
Habitat: Aguas de canales y de alcantarillado y en el suelo.
Thiobacillus thiooxidans Waksman y Joffe.
(Jour. o/ Bact.. 7: z39; Igzz.)
Bastoncillos cortos, con 1os extremos redondeados, de o,g a o,8
de longitud, inmviles. Se presentan aislados o en cadenas cortas.
Cultivo en medio lquido. - Como medio lquido, Waksman emplea
el siguiente:
( NHa) ^ S Oa . . . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . . . . .. . . . 0 ,2 gramos.
MgS Oa 7 H' O ....... . .. .. . .. . . . . . . . . .. . . . . o,g
KH^POa .................................. 3 .o n
CaClg .................................... o,z s
^
A z u fre en polvo ........................... Io,oo
A gu a d e st i lad a ............................ Iooo c . c .
-37-
El medio se esteriliza durante treinta minutos en bao de vapor,
tres das consecutivos. Cuando el medio se inocula con un cultivo
fresco de Th. thioozidans, el desarrollo se manifiesta a los cuatro das,
a 25^, por un enturbiamiento uniforme sin formacin de pelcula. A los
ocho das, el cultivo se enturbia fuertemente, y el azufre que flotaba
en el medio empieza a depositarse en el fondo.
Si en lugar de un cultivo se utiliza para la inoculacin una muestra
de suelo que contenga bacterias, el proceso es dntico, aun cuando
se desarrolle con ms lentitud.
Como medio slido puede usarse:
N^^' S^0 ...
......................... s.o gramos.
KFI^PO^ .................................. 3.0
NEi^Ct ................................... o, t ^
CaCI, .................................... o.2g
^
Agar ..................................... 20, 0
Ageta destllada . .. . . .. . . . . . . . . . .. .. . . .. .. . . i ooo c . c .
El medio se esteriliza durante quince minutos a una atmsfera
de presin. )^as placas se inoculan con un cultivo lquido y se incuban
de 25^ a 30^. A los cinco o seis das aparecen diminutas colonias de color
amarillo paja o crema, que al microscopio aparecen rodeadas con
cristale^ de yeso, procedentes de la accin del H,50. formado so-
bre el Ca. ^1 fenmeno es ms destacado si se usa fosfato triclcico
en lugar de cloruro clcico.
Aerobia.
Reaccin: I,mites, pH = 6 y pH = i. ptima, pH = z a 4.
Auttrofa, obtiene su energa mediante la oxidacin del azufre
elemental, de los tiosulfatos y, en menor escala, de los sulfuros a
sulfatos. Utiliza el CO, como fuente de carbono, no empleando los
carbonatos.
Habitat: Suelos de las proaimidades de las minas de azufre y suelos
tratados con azufre.
* s s
I,as reacciones desarrolladas en el proceso de ogidacin, estudia-
das por Winogradsky (io^), a partir de H,S, o en condiciones favo-
rables a su produccin, son las siguientes:
A,S + 1/, O, = H^O + S-} - i,t caloras.
S^- t 1/, O, ^- H^O = H,SO` -{ - i4i,2 caloras.
H,SO^ + CaCO, = CaSO^ -{- H,O -}- CO,.
-38-
Algunas bacterias, como el Th. thiooxidans, osidan directamente
el H,S en H,SO^, sin formar azufre elemental, mientras que otras,
como el Th. thioparus, liberan azufre alrededor de sus clulas.
I,os tosulfatos son oxidados por el Th. thio^arus de acuerdo con
la siguiente reaccin (7):
Ney S^Os -f- O= Na^SOt -I- S.
^1 Th, thiooxidans los oxida directamente en sulfatos (io4):
Na^S^O^ -}- z0^ ^- Fi^O = Na^SO^ -}- H^SO^.
^1 azufre elemental se oxida directamente en cido sulfrico:
2S -}- 30^ -}- zH^O a zH^SO^.
^n presencia de fosfato triclcico, el cido sulfrico formado reac-
ciona, dando primeramente fosfato biclcico, luego monoclcico y
finalmente cido fosfrico {ioa):
Caa (PO^)' -^ H^SO^ -^- 2H^0 = Ca$ (HPO^)^ -}- CaSOi zHyO.
Ca^ (HPOs)= + H^SO^ -^ zH^O = Ca (H^PO^)^ -}- CaSOs 2Hy0.
Ca (H=PO^)^ -^- HtSO4 -}- sH^O = zHaPO^ -}- CaSO^ zHyO.
Agregando 5 gramos de flor de azufre y i5 gramos de fosfato
triclcico a ioo gramos de suelo, se comprueba que el $5 por Ioo del
fosfato se ha hecho asimitable al cabo de unas treinta semanas (62).
C^ BACTRRIAS QUE OBTIEN^N SU EN^RGA MRDIANT^ I,A OXIDA-
cix D^ co^aPU^sros s^xcu,I,os D^ rARBOxo. - I,as bacterias capa-
ces de la oxidacin de compuestos sencillos de carbono ms frecuentes
en el suelo son las que pueden osidar el xido de carbono formado en
las combustiones incompletas y en la descomposcin del estrcol,
segn la reaccin
CO ^- 1/^ O^ ^ CO^ + q4 calortas,
y las que oxidan el metano que se produce en la descomposicin anaero-
bia de la celulosa y otros compuestos orgnicos en los pantanos, es-
tercoleros, etc., de acuerdo con la reaccin
CH^ ^}- z0$ = CO^ -{- zH^O -^ zi8 calorfas.
Entre las primeras se encuentra la Carboxydomonas oligocarbol5hila
(Beijerinck y Van Delden) Orla Jensen, que se presenta como baston-
cillos muy pequeos, de o,5 X o,^ a Z , inmviles, incoloros, reunidos
en masas irregulares por una substancia mucilaginosa.
-34-
Se desarrolla en medios lquidos desprovistos de materia orgnica,
sobre los que forma una gruesa pelcula gelatinosa, y en agar lavado
que contenga las sales minerales necesarias.
Se desarrolla mejor en 1a obscuridad.
Temperatura ptima: 250.
^ntre las bacterias del suelo capaces de oxidar el CH^ se encuentra
el Methanomonas methanica (Shngen) Orla Jensen, que se presenta
en forma de bastoncillos, de I,5 a 2 X 2 a 3 , mviles en los cultivos
jvenes por medio de un solo flagelo; en los cultivos viejos parecen
casi esfricos.
Cultivado en el siguiente medio, de Shngen,
K,FIPOr .................................. 0.05 gramos.
^8 (NH^).PO^ 6Hy0 .............. ........ o,io r
CaSO^ ................................... o,ot
A gu a d e stil ad a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iooo c. c.
en una atmsfera de una parte de CH4 y dos de aire, al cabo de dos
semanas ha transformado la composicin de la atmsfera en la si-
guiente (g):
CH^ ................................................ o
CO, ................................................. y8
O, ................................................. c72
Tambin son capaces de oxidar el metano algunas bacterias co-
munes, como el Bac. ^yocyaneum y el Bac. f luorescens liqacef aciens (io2).
D^BACTERIAS QU^OBTIENEN5UENERGAM^DIANT^ I,A OXI-
nACINDEI, HIDxG^xo. ^- Uno de los gases que se producen abun-
dantemente en la descomposicin anaerobia de la materia orgnica,
adems deI CO, y del CH., es el hidrgeno, existiendo en el suelo va-
rias especies de bacterias que lo oxidan segn la reaccin
Iit -{- 1^, O, = H,O -}- 68,q calor[as.
Para el estudio de estas bacterias, Niklewski utiliz el sig^iiente
medio (73):
NH^G ................................. i,o gramo^.
KH,POs ................................ t,o ^
MgSO^ yli,0 ........ .................. o,z r
NaHC08 ............................... i,o r
NaC1 .................................. 0,2
Fe CI, .................................. o,oooi
A gu a ................................... iooo c. c.
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Para medio slido, agregar is gramos de agar.
I,os cultivos se colocan bajo una campana de cristal, a travs de
la que se bace pasar hidrgeno purificado, desarrollndose los cultivos
en tres o cuatro das.
Kaserer emple un medio formado por (5z):
KyHPO^ ...................................... 0,5 8ramos.
MgSO^ ....................................... o,z
NH^C1 ....................................... i,o
NaFICOs ..................................... o,s r
FeCI' ........................................ Indicioe.
Agua ......................................... iooo c. c.
En condiciones auttrofas, las bacterias se desarrollan muy len-
tamente en este medio: la presencia de pequeas cantidades de mate-
ria orgnica soluble provoca una aceleracin en la oxidacin del hidr-
geno (4i)
>^ntre las bacterias que obtienen su energa mediante la o$dacin
del hidrgeno pueden citarse las siguientes:
Hydrogenorrionas ^antotro^ha (Kaserer) Orla Jensen.
(Bacillus ^ant ot ro^hus Saserer, Cent bl. Bakt ., II, z6: i8i; i9o^.)
Se presenta en bastoncillos, de o,4 a o,5 x I,2 a i,5 , con egtre-
mos redondeados, bien aislados o en pares o rosarios; provistas de
cpsulas; mviles con ayuda de un flagelo polar. I,as colonias, en agar
o gelatina, son amarillas, lisas, rara vez zonadas concntricamente o
verdosas.
Temperatura ptima: 30^.
Hydrogenomonas vit rea Niklewski.
(Niktewski, Cent bl. Bakt ., II, 20: 46g; igo8.)
Bastoncillos, de 2 de longitud, adheridos entre s, no habindose
observado movilidad.
l^n el medio liquido de Niklewski, antes citado, forma sobre la su-
perficie del medio una pelcula que se adhiere a la pared del tubo.
En agar forma colonias superficiales tenues, plegadas, transparen-
tes, amarillas en el centro y con ligera fluorescencia. Bajo la superficie
forma con dificultad pequeas colonias amarillas.
1^s microaerofilo, no desarrollndose en atmsferas en las que la
tensin del oxgeno exceda del 8 por ioo.
^ 4i _
Hydrogenomo^eeas Jlava Niklewski.
(Niklewski, Celbl. Bakt II, so: 46g; iqo8.)
Bastoncillos, de i,g de longitud, en los que no se observa movi-
lidad.
En medio lquido constituye masas gruesas, aplanadas y caseosas,
no formando pelcula superficial.
En agar forma colonias pequeas, lisas, brillantes, amarillas,
adherentes al medio. Se desarrolla bien bajo la superficie, pero las
colonias son ms plidas.
F,s microaerfilo, no desarrollndose en atmsfera en que la ten-
sin del oxgeno eaceda del 8 por ioo.
Hydrogenomonas pycnoticus Ruhland y Grohmann.
(Cextbl. Bakt., II, 6t: 261; i9z4.)
Bastoncillos, de I x i,5 a 4 , con extremos redondeados, presen-
tndose aislados o en cadenas; tambin se observan formas de invo-
lucin globosas y ovaladas, gigantes, con paredes gruesas. Mvil con
ayuda de flagelos pertricos, forma esporas y es Gram negativa.
I,as colonias sobre agar son pequeas, circulares, pardogrisceas.
Temperatura ptima: 20^.
%as investigaciones de Ruhland (8q.) han probado que la reaccin
del medio ejerce marcada influencia sobre la ogidacin del hidrgeno,
que tiene lugar entre pH = g,16 y pH = g,2I, con el mximo, para
un pH, alrededor de ^.