BIO 219 Biologa Vegetal 1

Pedagoga en Biologa y Ciencias Naturales

Instituto de Biologa
Pontificia Universidad Catlica de Valparaso
UI! N" 1# $IC%O&COP'!
Introduccin#
La observacin de imgenes aumentadas es causada por la fragmentacin del vidrio. Durante la Edad Media ya
se conocan lentes que eran capaces de aumentar las imgenes hasta diez veces. El tipo ms simple de lente es
la lupa comn.
El maravilloso microscopio fabricado por !ntonio "an Loeu#enhoec$% en el siglo &"'' era casi tan sencillo como
las lentes para lectura% pero permiti el descubrimiento de un nuevo mundo de vida microscpico.
(oberto )oo$e% con una versin me*orada del primer microscopio compuesto + que no era ms que un tubo con
una lente en cada e,tremo+ vio por primera vez las c-lulas. Durante el transcurso de los siglos &"'' y &"'''% el
aparato fue perfeccionado constantemente.
.na c-lula animal tpica mide apro,imadamente% entre /0 y 10 micrmetros de dimetro% es decir% unas cinco
veces ms peque2a que la menor partcula visible a simple vista. 3or ello% hasta que no se dispuso de buenos
(icroscopios pticos a principios del siglo &'&% no se conoca que los te*idos vegetales y animales eran
agregados de c-lulas. Este descubrimiento propuesto por 4chleiden y 4ch#an en /515 permiti postular la teora
celular% inicindose formalmente la disciplina conocida como biologa celular.
Las c-lulas% en la mayora de los casos% no slo son diminutas sino que tambi-n transparentes. Debido a esto% los
principales descubrimientos sobre la estructura interna de las c-lulas dependieron del hallazgo% a fines del siglo
&'&% de diversas t-cnicas de preparacin de los materiales + mediante fi*acin% corte y tincin + que proporcionaron
el contraste suficiente para hacerlas visibles.
!dems el perfeccionamiento del microscopio lleg a un alto grado y se logr obtener aumentos hasta /600 veces
respecto al tama2o natural.
4i los microscopios podan aumentar la imagen de los ob*etos /600 o quizs 7000 veces% lo nico que habra que
hacer era obtener mayor poder de resolucin en estos aparatos.
Desafortunadamente no e,iste forma de me*orar el microscopio ptico compuesto% y un bilogo del /800 poda
observar una c-lula al microscopio tan bien como nosotros. El factor limitante del microscopio ptico respecto a
aumentar su poder de resolucin radica en la naturaleza de la luz.
! principios de los a2os /890 se desarroll el (icroscopio electrnico mucho ms poderoso que el ptico.
:ambi-n en este caso% muchas de las comple*as estructuras que se pudieron observar con este instrumento
dependieron% a su vez% de las nuevas t-cnicas de preservacin y tincin de la muestra.
)asta ahora% la microscopa depende tanto de las t-cnicas para la preparacin del esp-cimen como del
rendimiento del propio microscopio.
O)*etivos#
!l t-rmino de este prctico el alumno;
<onoce los componentes y el funcionamiento del microscopio ptico% como herramienta bsica para
la observacin y estudio a escala celular.
<omprende los diferentes poderes del microscopio% mediante la observacin de ob*etos sencillos.
<alcula el aumento o magnificacin de un esp-cimen.
=bserva algunos microorganismos% como estrategia de aprendiza*e para el uso del microscopio.

I+, $IC%O&COPIO -P.ICO
:an importante como el aumento de un microscopio es su poder de resolucin. El o*o humano tiene un poder de
resolucin de apro,imadamente />/0 mm% o /00 micrmetros. El poder de resolucin es una medida de la
capacidad para distinguir un ob*eto de otro? es la distancia mnima que debe haber entre dos ob*etos para que
sean percibidos como ob*etos separados. 3or e*emplo% si uno mira dos lneas que se encuentran a menos de /00
micrmetros una de otra% se ver una sola lnea algo engrosada. De modo seme*ante dos puntos que est-n
separados por menos de /00 micrmetros aparecen como un nico punto borroso. ! la inversa% si uno mira dos
lneas o dos puntos que estn a /70 micrmetros uno de otro% puede distinguirlos fcilmente.
La mayora de las c-lulas eucariotas miden entre /0 y 10 micrmetros de dimetro% entre 1 y /0 veces menos que
el poder de resolucin del o*o humano? las c-lulas procariotas son an ms peque2as. 3ara ver c-lulas
individuales y ms an para distinguir las estructuras internas de ellas debemos usar instrumentos que permitan
ver con mayor resolucin. La mayor parte del conocimiento actual de la estructura celular se obtuvo con la ayuda
de tres tipos de instrumentos; el (icroscopio ptico% el (icroscopio electrnico de trans(isin y el
(icroscopio electrnico de )arrido+
Los me*ores microscopios pticos tienen un poder de resolucin de 0%7 micrmetros% y as superan al o*o en 600
veces. Es tericamente imposible construir un microscopio ptico que supere dicho valor. El factor limitante es la
longitud de onda de la luz que va desde 0%9 micrmetros para la luz violeta hasta 0%@ micrmetros para la luz ro*a.
<on el microscopio ptico podemos distinguir las estructuras ms grandes dentro de las c-lulas eucariotas y
tambi-n c-lulas procariotas individuales. 4in embargo no podemos observar la estructura interna de las c-lulas
procariotas ni distinguir entre las estructuras mas finas de las c-lulas eucariotas.
Atese que poder de resolucin y aumento son dos cosas diferentes. 4i uno toma una fotografa de dos lneas que
est-n separadas por lo menos de 0%7 micrmetros% usando el me*or microscopio puede ampliarse esa fotografa
indefinidamente% pero las dos lneas seguirn confundidas en una sola. .sando lentes ms potentes se puede
incrementar el aumento pero esto no me*orar la resolucin.
Este instrumento esta constituido por dos lentes convergentes que producen% en con*unto% una imagen virtual% de
mayor tama2o e invertida del ob*eto.
El microscopio de luz cuenta de un sistema ptico y de iluminacin% montados en una estructura mecnica. 4us
partes son las siguientes% como se muestra en la figura /

&iste(a $ec/nico
/. Pie o Base; 3uede ser de diferentes formas.
7. Colu(na; !rticula con la base y sostiene al condensador% platina y tubo% este ltimo contiene los sistemas
de lentes oculares BcabezalC. 3uede ser monocular% binocular% etc.
1. Platina; Lugar donde se deposita la preparacin y esta se afirma con el <arro "ernier% el cual permite
mover la muestra. Es una plataforma horizontal con un orificio central por donde pasan los rayos de luz.
9. %evlver; <ontiene los sistemas de lentes ob*etivos. 3ermite% al girar% cambiar los ob*etivos.
6. .ornillos de 0nfo1ue; 4on dos% el Macrom-trico y el Microm-trico. El Macrom-trico apro,ima el enfoque
y el Microm-trico consigue un enfoque ms preciso.
&iste(a -ptico
/. Ocular; Lente situada cerca del o*o del observador. !mpla la imagen del ob*etivo.
7. O)*etivo; Lente situada cerca de la preparacin. !mpla la imagen de -sta.
2
2igura1# Partes del $icroscopio -ptico
&iste(a de Ilu(inacin
1. 2oco; Es la fuente de iluminacin artificial y dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
2. Condensador; Lente que concentra los rayos luminosos que pasan por el orificio de la platina y llegan a
la preparacin.
3. 3iafrag(a; (egula la cantidad de luz que entra en el condensador.
4. 2iltro; "idrio de color que se usa para obtener luz monocromtica Bselecciona una sola longitud de onda
del espectro visibleC.
Uso del $icroscopio -ptico
El microscopio es un instrumento costoso. 4e debe dar el me*or cuidado posible% siga siempre estas instrucciones
generales cuando lo utilice.
/. :ransporte el microscopio con las dos manos; .na por deba*o de la base y la otra en el asa.
7. <olquelo a una distancia prudente respecto del borde de la mesa y ubquese frente a -l. 4i hay una
lmpara unida al microscopio% tenga <.'D!D= <=A L=4 <!DLE4. <uando traba*e con el microscopio
retire de la mesa de traba*o todo elemento innecesario.
1. <uando se inicia la sesin de traba*o con este instrumento% se debe colocar el ob*etivo de menor aumento
BlupaC en posicin de enfoque. .sted sentir un EclicF cuando este enca*e en su sitio.
9. <olocar la preparacin sobre la platina su*etndola con las pinzas metlicas.
6. 4iempre se debe comenzar la observacin con el ob*etivo de menor aumento B9,C.
G.+ 3ara realizar el enfoque; <omience por acercar el lente del ob*etivo a la preparacin% empleando el tornillo
(acro(4trico5 hasta que se observe la muestra algo ntida. 4e debe tener precaucin ya que se corre el
riesgo de incrustar el ob*etivo en la preparacin pudi-ndose da2ar alguno de ellos o ambos. Luego se
debe girar el (icro(4trico hasta obtener un enfoque fino.
@. 3asar al siguiente ob*etivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y slo es suficiente mover un poco el
microm-trico para lograr el enfoque fino. 4i al cambiar de ob*etivo se perdi por completo la imagen% es
preferible volver a enfocar con el mnimo aumento y repetir la operacin desde el paso 6. El ob*etivo de
90, enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances;
aC 'ncrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores% bC Mancharlo con aceite de
inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el ob*etivo de inmersin.
5. :erminada la observacin% vuelva al aumento menor B9,C% retire la preparacin y apague la luz. De*e el
microscopio con el menor aumento en posicin de enfoque BEclicFC. !segrese de que la parte mecnica de
la platina no sobresalga del borde de la misma y d-*elo cubierto con su funda.
P!%! .0N0% P%0&0N.0#
Aunca inclinar el microscopio cuando use preparaciones hmedas.
Las lentes del microscopio cuestan casi tanto como todas las dems partes *untas. Aunca las limpie con otra
cosa que no sean papel para lentes.
3
!C.IVI3!30&
Pr/ctica en el Uso del $icroscopio y !plicaciones+
1+ O)servacin
a6 (ecorte una letra y colquela en un portaob*etos limpio sobre una gota de agua. Espere un momento Bhasta
que el papel se humedezcaC y luego coloque un cubreob*eto sobre ella. Esto se llama Emonta*e hmedoF.
Modo de colocar un cubreob*etos; Mantenga el cubreob*etos en un ngulo apro,imado de 96H respecto al
portaob*etos y entonces b*elo lentamente. .na ligera presin sobre -l eliminar las posibles burbu*as de aire
que hubieran quedado atrapada.
)6 <oloque el portaob*etos sobre la platina y su*-telo con las pinzas de a*uste. Mueva el portaob*etos de tal
manera que la letra quede en el centro del orificio de la platina. <ercirese que el ob*etivo de menor aumento est-
colocado en posicin de enfoque. Mirando por un costado de la platina use el tornillo macrom-trico para ba*ar
lentamente el tubo hasta que el ob*etivo llegue al tope o hasta que el ob*etivo este apro,imada a 7 mm del
cubreob*etos.
c6 Mirando a trav-s del ocular% sube el ob*etivo con el tornillo Macrom-trico hasta que la letra este enfocada. .se
el tornillo microm-trico para afinar el enfoque. <ompare como se ve la letra a trav-s del microscopio y a simple
vista.
d6 (ecorte una letra E!F y haga un monta*e hmedo para e,aminarla con el menor aumento. Describa la posicin
de la letra tal como usted la ve a simple vista y a trav-s del microscopio.
e6 Mire a trav-s del ocular y simultneamente desplace la platina lentamente de un lado al otro sin que la letra
salga del campo visual. Este procedimiento se realiza mediante la manipulacin de los tornillos que desplazan la
platina.
/./ IJu- parece sucederle a la letraK
/.7 Mueva el portaob*etos hacia la derecha% Ien qu- sentido se desplaza la imagenK
/.1 IJu- puede decir acerca de la posicin relativa y el movimiento de los ob*etos cuando estos se ven a trav-s
del microscopioK
2+ !u(ento
4
<onsideremos ahora lo que quieren decir los t-rminos Epoco aumentoF y Egran aumentoF. Estos se refieren al
grado de ampliacin obtenida. <uando se usa el microscopio es importante saber cuntas veces est ampliado el
ob*eto. 4i un microscopio aumenta el ob*eto 60 dimetros B60&C la imagen que usted ve es 60 veces ms larga y
ancha que el ob*etivo observado a simple vista% a una distancia de 76%9 cm.
En cada ob*etivo y en el ocular hay un nmero grabado que indica el grado de aumento que suministra. El
aumento combinado% producido por el ob*etivo y el ocular% es igual al producto de estos nmeros. 4i% por e*emplo%
el nmero del ocular es 6& y el del ob*etivo de poco aumento es de /7&% la ampliacin combinada es /7 , 6 L G0
dimetros.

7./ Encuentre los nmeros de aumento sobre el ocular y ob*etivos de un microscopio y calcule las ampliaciones
obtenidas cuando se usa el de poco aumento.

7.7 (epita el procedimiento para mayor aumento.
7+ $edicin con $icroscopio
Debido a que los ob*etos observados con el microscopio son generalmente muy peque2os% los bilogos
encuentran conveniente usar unidades de longitud menor que el cm o el mm% para la medicin microscpica. .na
de tales unidades usada comnmente% es el micrmetro% para el cual se usa como smbolo la letras griega 8
seguido por una ( B/>/000mm L /M(C. 3odemos calcular el tama2o de un ob*eto microscpico comparndolo con
el tama2o del campo visual.
El tama2o del campo visual visto con el ob*etivo de menor aumento medirse de manera directa con una regla
milimetrada.

1./ I<ul es el dimetro del campo% en mm% observado con el ob*etivo de menor aumentoK
1.7 I<ul es el valor del dimetro e,presado en la unidad MmK
3ara medir el dimetro del campo de gran aumento emplee el siguiente procedimiento; primero divida el nmero
de ampliaciones del ob*etivo de gran aumento por el nmero de ampliaciones del de poco aumento. Luego divida
el dimetro del campo visual observado con poco aumento por su cuociente. Este es el dimetro del campo de
visin de gran aumento. 3or e*emplo si la ampliacin de su ob*etivo de poco aumento es de /7& y el de su
ob*etivo de gran aumento es 95 &% el cuociente que usted obtiene es 9.
4i el dimetro del campo de visin de poco aumento es /G00 Mm% el dimetro del campo de visin de gran
aumento es /G00 dividido 9% que es igual a 900 Mm. Empleando este m-todo de clculo%

1.1 <alcule el dimetro del campo visual de los mayores aumentos de su microscopio.
9+ :ee atenta(ente el siguiente e;tracto#
...El conocimiento de la anatoma microscpica se ampli mucho durante el siglo && gracias a microscopios con
mayor poder de resolucin y aumento que los instrumentos convencionales. Esto permiti descubrir detalles que
antes no estaban claros o que no eran visibles. :ambi-n influy de forma positiva el progreso de las t-cnicas de
laboratorio que facilitaban la observacin...
9./. IJu- es el poder de resolucinK
9.7. I! que se refiere que un microscopio tenga mayor poder de resolucin que otroK
El poder de resolucin B3(C esta determinado por la apertura num-rica de la lente y por la longitud de onda de
la luz utilizada.
P% <!N=>+?1 @ Donde; !A L apertura num-rica
0.G/ es una constante
NL longitud de onda de la luz utilizada
El l(ite de resolucin BLrC es la mnima distancia que debe e,istir entre dos puntos para poder
distinguirlos separadamente
:r <>+?1@=!N
5
A+ Usando un colorante
(etire un trocito de epidermis interna de catfilo de cebolla y prepare un monta*e hmedo con unas gotitas de
agua destilada. =bserve% al microscopio% la disposicin de las c-lulas% dibu*e y describa el contenido.
! la preparacin anterior agregue unas gotas de lugol% observe y se2ale las diferencias en relacin con el epitelio
sin te2ir.
?+ $idiendo con el (icroscopio
<on la preparacin anterior% mida el largo de las c-lulas. 3roceda de la siguiente forma;
G./.+ <uente el nmero de c-lulas BA<C a lo ancho del campo visual. El ancho del campo visual B<"C para los
ob*etivos del microscopio son;
9, L 9.6 mm /0, L /.5 mm 90, L 0.96 mm /00, L 0./5 mm
G.7.+ <alcule el dimetro de sus c-lulas% en mm segn la frmula
3 < CV = NC
B+ CCu/l es el Poder de PenetracinD
@./.+ <ruce dos hilos sobre el portaob*etos% agregue una gota de agua y cubra con el cubreob*etos. 3ase a
trav-s de todos los aumentos% enfocando el hilo superior y el inferior I<on cul logra enfocar ambos hilosK
E+ O)servacin de (icroorganis(os
:ome un inoculo de agua de estanque y colquelo sobre el portaob*etos y cbralo con el cubreob*etos. =bserve
primero con el ob*etivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento. Dibu*e ba*o el aumento de 90& y
se2ale las estructuras observadas. 4iga el mismo procedimiento para las algas verdes+azules y los protozoarios.
O.%O& .IPO& 30 $IC%O&COPIO& OP.ICO&
$icroscopio de contraste de fases
.no de los microscopios utilizados por los bilogos es el de contraste de fases inventado por Oritz+Perni$e en
/816. Es e,celente para el estudio de las c-lulas en fresco% sin tincin.
Las c-lulas y sus estructuras% por tener gran cantidad de agua entre sus componentes% son casi transparentes. El
microscopio de contraste de fases acenta las diferencias de ndice de refraccin entre la c-lula y el medio y las
distintas partes de la propia c-lula al transformar las diferencias de ondas luminosas en diferencias de intensidad.
<on este tipo de microscopio% acoplado a un aparato de cinematografa adecuado% ha sido posible obtener
e,celentes pelculas de c-lulas vivas% y de mitocondrias% plstidos% cromosomas etc.% actuando en fenmenos
vitales. <uando las pelculas obtenidas se proyectan a menor velocidad a la que transcurre el fenmeno% -ste
puede ser estudiado tan cuidadosamente como se desee.

El poder de resolucin del o*o humano es 0./ mm% es decir /00 Mm. Esto significa que si se observan dos
lneas que estn separadas a una distancia inferior a 0./mm% slo ver una. En cambio el poder de resolucin
del microscopio ptico es 0.7 Mm% es decir 600 veces mayor que el o*o.
6
$icroscopio de fluorescencia

Mediante la microscopa de fluorescencia se pueden localizar mol-culas en la c-lula de manera especfica.
.n microscopio de fluorescencia es similar al ptico pero posee dos filtros muy potentes que le permiten detectar
un colorante fluorescente en forma de luz. .no de estos filtros% ubicado entre la fuente de luz y el ob*eto% de*a
pasar solo luz de longitud de onda tal que sea absorbida y e,cite el material fluorescente que estamos utilizando
como colorante en el esp-cimen. El otro% ubicado entre el ob*eto y el ocular% solo de*a pasar la luz con longitud de
onda correspondiente a la de la luz emitida por ese material fluorescente.
La microscopa de fluorescencia se utiliza habitualmente para detectar mol-culas especficas en c-lulas y te*idos.
.na t-cnica muy utilizada y potente consiste en acoplar covalentemente un colorante fluorescente a mol-culas de
un anticuerpo% el cual se puede utilizar entonces como un reactivo muy especfico y verstil que se une
selectivamente a las macromol-culas que reconoce en las c-lulas o en la matriz e,tracelular. 4e usan
generalmente dos colorantes fluorescentes% las fluorescena y la rodamina% cada uno de los cuales flurese a
distintas longitudes de onda de la luz y pueden realizarse tinciones simultaneas en un mismo preparado. La
presencia de cada tipo de mol-cula marcada especficamente con cada colorante se pueden detectar cambiando
los filtros correspondientes.

II+, $IC%O&COPIO 0&.0%0O&C-PICO5 30 3I&0CCI-N O :UP!
El microscopio estereoscpico o de diseccin es muy til para ob*etos opacos que por su tama2o deben ser
observados con poco aumento. 3ermite la observacin de ob*etos demasiado peque2os para ser observados a
simple vista% pero relativamente grandes para ser vistos completos con el menor aumento del microscopio
compuesto. El aumento habitual del microscopio estereoscpico vara entre 9& y 90& a G0& aumentos. Este tipo
de microscopio tiene dos ob*etivos y dos oculares% construccin que permite obtener una imagen tridimensional del
ob*eto. El ob*eto se observa generalmente por la luz refle*ada en su superficie. <uando se usa este microscopio
puede ser necesario a*ustar la distancia interpupilar% moviendo los oculares para ver cmodamente al mismo
tiempo con ambos o*os. Los oculares se mueven simplemente empu*ando uno con respecto al otro% acercndolos
o ale*ndolos.


2igura 2# $icroscopio 0stereoscopico o :upa F3iseccin6

O)*etivos#
Localizar y describir la funcin de cada parte del microscopio de diseccin.
!prender a usar correctamente el microscopio de diseccin.

16 %econoci(iento y Uso del $icroscopio de 3iseccin
/./.+ (otule la Oigura 7.
/.7.+ <oloque en la platina del microscopio el ob*eto que va a estudiar. <on los tornillos del enfoque mueva
los ob*etivos tan aba*o como sea posible y despu-s vaya subi-ndolos hasta que el ob*eto aparezca en foco.
7
Mientras e,amina al ob*eto% mu-valo hacia la izquierda y hacia la derecha.
/.1.+ IEn qu- direccin se mueve la imagen en cada casoK
!hora desplcelo de adelante hacia atrs.
/.9.+ I<mo se mueve la imagenK

<ambie el ob*etivo por el aumento siguiente y si es preciso% a*uste la luz y el foco.
/.6.+ <ompare el tama2o de la imagen con el de la imagen que vio anteriormente.
/.G.+ I<mo la ve ahoraK I)a cambiado el tama2o del campo al usar un aumento mayorK E,amine los
ob*etos que desee.


26 O)servaciones 0sporas y Gygosporas del $oHo del Pan;
4i se de*a un pedazo de pan enve*ecer en un lugar hmedo es probable que al cabo de pocos das crezca sobre -l
una pelusa blanca que luego se oscurece. La misma corresponde al micelio de Rhyzopus stolonifer y su
oscurecimiento se debe a la formacin de esporangios que dan lugar a millones de esporas.
7./.+ <on la ayuda de la lupa ubicar los esporangios maduros y enteros.
:omar% con una agu*a de diseccin% una porcin muy peque2a de muestra.
E,tender el material recogido en el portaob*etos.
<olocar una gota de agua y una de azul de metileno.
!plicar el cubreob*etos.
(ealizar preparados de diferentes regiones del hongo que ha crecido en el pan y buscar zygosporas
y observar al microscopio ptico.
7.7.+ =bserve una flor. <on bistur efectuar un corte sagital e identificar cliz% corola% androceo y gineceo. Dibu*e.

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