Determinacion Cuantitativa de Carbohidratos

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UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN

MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADMICA
FORMATO PARA PRCTICAS DE LABORATORIO
Fecha: Abril de 2011 Cdigo: GRL-006 Versin: 4.0
INFORMACIN BSICA
NOMBRE DE LA PRCTICA:
Determinacin Cuantitativa de Carbohidratos
PRCTICA No.
06
ASIGNATURA: Bioqumica.
TEMA DE LA PRCTICA: Volumetra de Glucosa en Gaseosas.
LABORATORIO A UTILIZAR: Laboratorio de Qumica y Bioqumica.
CONTENIDO DE LA GUA
OBJETIVOS
Determinar cuantitativamente azcares reductores utilizando el mtodo de Fehling en bebidas gaseosas
comercialmente conocidas como aplicacin del anlisis de azcares.
INTRODUCCIN
Los carbohidratos son las molculas biolgicas ms abundantes y ampliamente distribuidas en la naturaleza.
Siendo la celulosa, la biomolcula que se encuentra en mayor cantidad en la biosfera; y el almidn, la fuente
energtica alimentaria ms empleada en el mundo. Adems de ser componentes naturales de muchos
alimentos, la industria alimentaria emplea los carbohidratos en funcin de sus propiedades funcionales,
usndolos como ingredientes para mejorar la aceptabilidad, palatabilidad y vida til de diversos alimentos.

Los carbohidratos cumplen funciones importantes dentro de los organismos vivos. En plantas y animales
proporcionan energa (almidn, glucosa, sacarosa), cumplen funciones estructurales y de proteccin (celulosa,
quitina). Los carbohidratos los carbohidratos pueden definirse como polihidroxialdehdos y polihidroxicetonas
y derivados de estos.

Con la realizacin de esta prctica, los estudiantes desarrollarn destrezas en la aplicacin de un mtodo de
anlisis qumico (volumetra) en la determinacin cuantitativa de azcares reductores en bebidas gaseosas
comerciales mediante el reactivo de Fehling.

MARCO TERICO

Los carbohidratos son molculas que estn compuestas principalmente por oxgeno, carbono e hidrgeno y
son derivadas de aldehdos y cetonas. Estos compuestos son los ms abundantes sobre la superficie terrestre
y tienen funciones fundamentales en la naturaleza y ms especficamente en los organismos. Las principales
funciones de estas molculas son estructurales, tambin son usadas como fuente de energa disponible, por
lo que tambin tienen funciones de reserva de energa (glucgeno).

Aunque los carbohidratos son ampliamente empleados como fuente de energa, tambin han sido empleados
en la ltima dcada, como blanco para desarrollar vacunas que sean efectivas contra bacterias y tambin como
adyuvantes y transportadores de protenas antgenas en vacunas empleadas para inmunoterapia. Los
carbohidratos tambin han sido empleados para la deteccin de tumores cancergenos; esto es posible debido
a que las clulas del sistema inmune, especficamente los antgenos presentes en las clulas, expresan
receptores carbohidratos; los cuales proveen seales para las clulas y liberan protenas unidas a los
carbohidratos para el procesamiento efectivo y presentacin a las clulas T. Algunos ejemplos de estos
carbohidratos son la manosa y los receptores scavenger (Apostolopoulos V, 2000). En la figura 1 se muestran
algunos ejemplos de las funciones que pueden cumplir los carbohidratos, especficamente la glucosa y sus
polmeros en las clulas.

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Figura 1: Ejemplos de las funciones que pueden cumplir los carbohidratos en las clulas de los organismos.
Adaptado de (Koolman, 2005)

Existen diversos mtodos analticos de cuantificacin de carbohidratos, basados en la capacidad reductora de
los azcares que tienen libre el grupo hidroxilo del carbono anomrico. Estos carbohidratos son capaces de
reducir (hacer que ganen electrones) elementos como el Cobre (Cu
+2
), el Hierro (Fe
+3
) o el Yodo (I
0
)

Ejemplos de azcares reductores pueden ser:
Monosacridos: Glucosa, Fructosa.
Disacridos: Maltosa, Lactosa.

1. TITULACIN DE UNA SOLUCIN

Una Titulacin es un mtodo Volumtrico (se basa en la adicin de volmenes) que tiene como principal
objetivo la determinacin de la concentracin desconocida de una solucin (Analito), mediante la adicin de
pequeos volmenes de una segunda solucin de concentracin conocida (Valorante).

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2. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos se pueden definir qumicamente como
derivados Aldehdicos o Cetnicos de alcoholes superiores
polivalentes (con ms de un grupo OH) (Ver Figura 2).

Los carbohidratos, azcares o hidratos de carbono pueden ser
Monosacridos (Ribosa, Fructosa, Glucosa), Disacridos
(Sacarosa, Lactosa, Maltosa), Oligosacridos (Inulina,
Oligofructosa) y Polisacridos (Almidn, Glucgeno, Celulosa).

Los monosacridos reaccionan de acuerdo a los grupos hidroxilo y
carbonilo que poseen, los disacridos y los polisacridos se pueden
hidrolizar para producir monosacridos (Horton, Moran,
Scrimgeour, Perry, & Raw, 2008).

OH
O H H
H OH
H OH
O
OH
OH
O
H OH
O H H
H OH
H OH
H
Aldosa
Cetosa
(Aldohexosa) (Cetohexosa)
Fructosa Glucosa

Figura 2: Ejemplos de Aldosa y Cetosa
2.1 DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES

Los azcares (especficamente los monosacridos) que reaccionan con oxidantes suaves se denominan
azcares reductores. Estructuralmente se sabe que aquellos monosacridos y disacridos que poseen su
carbono anomrico libre (es decir, el grupo hidroxilo OH del carbono anomrico sin estar comprometido en un
enlace glucosdico) son capaces de sufrir reacciones de xido reduccin en su grupo OH. Si dichos azcares se
tratan con una solucin llamada reactivo de "Fehling (Cu
+2
en tartrato de sodio y potasio acuoso) y luego se
someten al calor, el color azul inicial de estos reactivos cambia a un color rojo ladrillo y se forma un precipitado
del mismo color de xido de Cobre I (Cu2O) (Ver Figura 3). Este grupo OH libre es caracterstico de los
monosacridos y algunos disacridos. Los azcares que contienen un grupo hemiacetal dan pruebas positivas
(Devlin, 2004).

O
OH
OH
O H
O H
O H
O
OH
H
O H
OH
O H
OH
O
OH
O H
O H
OH
O H
OH
Glucosa
(Azcar Reductor)
+
H
2
O
+
xido de Cobre I
Cu
2
O
(Rojo Ladrillo)
Cu
O O
O O
Na K
O O
2
Glucnico
cido
Complejo Cupro-Tartrato
OH
-

Figura 3: Reaccin de Fehling

2.2 REACTIVO DE FEHLING

El reactivo de Fehling, es una solucin descubierta por el qumico alemn Hermann Von Fehling y que se utiliza
como reactivo para la determinacin de azcares reductores.
El reactivo de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:
FEHLING A: Solucin de Sulfato de cobre (II) al 3.46%.
FEHLING B: Solucin de Sal de Rochelle (tartrato de potasio y sodio) con hidrxido de sodio.

Las dos soluciones se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido
de cobre (II).

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CONSULTA PREVIA

1. Para establecer la cantidad de glucosa que se puede medir con el reactivo de Fehling cuantitativamente se
realiz el siguiente procedimiento: tomar 10 mL del reactivo de Fehling (5 mL de Fehling A ms 5 mL de
Fehling B) y una solucin de glucosa al 1%, el volumen gastado de la solucin fue 12,5 mL.
Calcule cuantos gramos de glucosa reducen 10 mL de Fehling. (Segn la siguiente ecuacin) (1,0/5,0)

Gramos de Glucosa que reducen 10 mL de Fehling = (Conc. de la Glucosa en g/mL) x (mL de Glucosa gastados)

2. Para determinar el porcentaje de glucosa en una bebida refrescante se emplea un proceso semejante al
del punto anterior. Se emplearon los mismos 10 mL de Fehling para la titulacin y de la bebida se gastaron
5,6 mL para finalizar la titulacin. Calcule, empleando adems el valor obtenido en el punto 1, el porcentaje
de glucosa presente en la bebida refrescante acorde con la siguiente ecuacin. (1,0/5,0)
% = (

)

3. Realice la clasificacin de los siguientes carbohidratos en el diagrama que se presenta a continuacin:
Maltosa, fructosa, galactosa, gulosa, lactosa, celulosa, lixosa, sacarosa, quitina, trehalosa. (1,0/5,0)

MONOSACARIDO DISACARIDO POLISACARIDO
REDUCTOR
NO RECUCTOR

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4. Analice la siguiente estructura y mencione si es posible o no que acte como un azcar reductor. Justifique
su respuesta.(1,0/5,0)
O
O
H
H
H
O H
OH
H OH
H
OH
O
OH
H
H
H
OH
H OH
H
OH

__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

RIESGOS Y SEGURIDAD (1,0/5,0)
Sulfato de Cobre II (Presente en Fehling A)
H302-H319-H315-H410
P273-P302+P352-P305+P351+P338
Hidrxido de Sodio (Presente en Fehling B)
H314-H290
P280 -P301+P330+P331- P305+P351+P338

Frases H
H290:____________________________________________________________________________________
H302:____________________________________________________________________________________
H314:____________________________________________________________________________________
H315:____________________________________________________________________________________
H319:____________________________________________________________________________________
H410:____________________________________________________________________________________
Frases P

P273:____________________________________________________________________________________
P280:____________________________________________________________________________________
P302+P352:_______________________________________________________________________________
P301+P330+P331:__________________________________________________________________________
P305+P351+P338:__________________________________________________________________________

METODOLOGA
1. Ingreso de los estudiantes a la prctica (Cada uno debe tener sus elementos de bioseguridad: Guantes,
Tapabocas y Bata).
2. Entrega y revisin de la consulta previa.
3. Presentacin de Quiz sobre los objetivos, introduccin, el marco terico y la consulta previa.
4. Retroalimentacin de consulta previa, la cual incluye aclaracin de las posibles dudas que tengan los
estudiantes.
5. Explicacin del procedimiento de la prctica por parte del docente.
6. Entrega del material de laboratorio.
7. Desarrollo de la prctica.
8. Puesta en comn de los resultados obtenidos, posibles causas de error y conclusiones.
9. Realizacin y entrega del Informe de Laboratorio.
10. Entrega y revisin del material de Laboratorio.

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MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR
MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS MATERIALES ESTUDIANTE
1 Bureta de 25 mL 10 mL Glucosa al 1% Elementos de Bioseguridad
1 Pinzas para bureta 5 mL Fehling A 50 mL Gasesosa Sprite o 7up
2 Beaker de 250 mL 5 mL Fehling B 50 mL Gaseosa Coco-Cola o Pepsi
2 Erlenmeyer de 125 mL 40 mL Agua Destilada
2 Pipetas aforadas de 5 mL 1 mL Azul de metileno
1 Probeta de 50 mL
2 Pipeteadores
1 Plancha de Calentamiento
1 Magneto
1 Soporte Universal
Verifique que en la etiqueta de la gaseosa se registre el contenido de azcares presentes en la bebida
PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.

Usar elementos de proteccin bata, tapabocas, guantes y gafas como requisitos mnimos de seguridad al
ingresar al laboratorio.
NUNCA corra o juegue en el Laboratorio, puede ocasionar un accidente.
No utilizar la misma pipeta para varios reactivos ya que los contamina.
Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado.
Lavar cuidadosamente todo el material al iniciar y al finalizar la prctica.
Al emplear la plancha de calentamiento tenga precaucin de que el cable NO toque superficies calientes.
No disponga residuos calientes en los frascos de residuos.

PROCEDIMIENTO A UTILIZAR
Realizar Montaje N1
5 mL Fehling A
5 mL Fehling B
Cargar Bureta
Glucosa al 1%
Bureta Erlenmeyer
3
Calentar hasta Ebullicin
Realizar Titulacin
2
ESTANDARIZACIN DE LA SOLUCIN DE FEHLING
Registrar Volumen
inicial de Glucosa
40 mL Agua destilada
Registrar Volumen de
Glucosa

gastado
1 1
1
2
3
Todos los materiales deben estar limpios y secos.
Recuerde escribir este dato. Es muy importante para realizar los clculos.
La solucin del Erlenmeyer debe estar en ebullicin. La titulacin termina cuando desaparece
completamente el color azul de la solucin.
2 gotas Azul de Metileno
2

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PREPARACIN
MUESTRAS
Calentar y Agitar
(Desgasificar)
Beaker 150 mL
30 mL Gaseosa
Realizar Montaje N2
5 mL Fehling A
5 mL Fehling B
Cargar gaseosa o
muestra problema
Bureta Erlenmeyer
3
Calentar hasta Ebullicin
Realizar Titulacin
2
DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES
Registrar Volumen
inicial de Gaseosa
40 mL Agua destilada
Registrar Volumen de Glucosa

gastado
1 1
1
2
Todos los materiales deben estar limpios y secos.
Recuerde escribir este dato. Es muy importante para realizar clculos.
3 La solucin del Erlenmeyer debe estar en ebullicin. La titulacin termina cuando desaparece completamente el color azul de la
solucin.
2 gotas Azul de Metileno
2

BIBLIOGRAFA.
Apostolopoulos V, P. M. Madame Curie Bioscience Database [Internet]. (L. Bioscience, Ed.) 2000. Obtenido de
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK6309/
Devlin, T. M. Bioqumica. Libro de texto con Aplicaciones Clnicas. Editorial Revert, S. A. 2004
Horton, h. R., Moran, L. a., Scrimgeour, k. G., Perry, M. d., & Raw, j. D. Principios de Bioqumica. Mxico: Pearson
Education. 2008
Koolman. Color Atlas of Biochemistry. Thieme Medical Publishers. 2005
ELABOR REVIS APROB

Firma: Firma: Firma:
Nombre: Profesores de Laboratorio de
Qumica y Bioqumica
Nombre: Lic. Alba Jihan Chaparro. Nombre: Ing. Claudia Patricia Fernndez
Fecha: Junio de 2014 Fecha: Julio de 2014 Fecha: Julio de 2014

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INFORME DE LABORATORIO
ESTUDIANTES:

GRUPO:
NOTA:
CARRERA:

Formule tres objetivos que desee cumplir con la Prctica de Laboratorio. (0,5/5,0)
1. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

2. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

3. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

Mapa conceptual (0,5/5,0)
Elabore un mapa conceptual sobre esta prctica de laboratorio.

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TABLAS DE RESULTADOS (0,2/5,0)
MUESTRA
VOLUMEN DE SOLUCIN
GASTADO EN LA TITULACIN
% DE GLUCOSA g/mL DE GLUCOSA
GLUCOSA
COCA-COLA
SPRITE
MUESTRA PROBLEMA

CUESTIONARIO

1. Calcule la concentracin en g/mL de la solucin de glucosa al 1% (0,2/5,0)

2. Calcule los gramos de glucosa que reducen 10 ml de solucin de Fehling (0,3/5,0)
Gramos de Glucosa que reducen 10 mL de Fehling = (Conc. de la Glucosa) x (mL de Glucosa gastados)

3. Determine en porcentaje el contenido de glucosa de cada una de las gaseosas analizadas y en la muestra
problema (0,6/5,0)
% = (

) 100

COCA COLA SPRITE MUESTRA PROBLEMA
4. Calcule la concentracin de Glucosa en g/ml de cada una de las gaseosas analizadas y de la muestra
problema (0,3/5,0)
COCA COLA SPRITE MUESTRA PROBLEMA
5. Calcule l % de error de la concentracin de glucosa de la muestra problema (0,4/5,0)

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% = (

) 100

6. Por qu la concentracin reportada en la industria es diferente a la obtenida experimentalmente?
(0,5/5,0)
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS: (0,5/5,0)

Mencione una fuente de error que puede influir al realizar las mediciones y explique su influencia y como se
podra evitar:
Error 1: ___________________________________________________________________________________________
Explicacin:________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIONES(0,5/5,0)

1. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

2. ______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

3. ______________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
APLICACIN PROFESIONAL DE LA PRCTICA REALIZADA(0,25/5,0)
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFA UTILIZADA (0,25/5,0)
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________

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