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PROGRAMA DEL CURSO

TEMA 7: Estructura del gen eucariota.


Regulacin de la expresin gnica.
En clases anteriores
Teora cromosmica de la herencia

Los genes se encuentran en los cromosomas

Los cromosomas estn formados por
molculas de ADN y protenas

Donde est la informacin gentica
de los organismos eucariotas?
Centrosomas
NUCLEO
Ribosomas
Cromatina
Nucleolo
Envoltura nuclear

Vacuola central
Retculo
Endoplasmtico
Rugoso
Retculo
Endoplasmtico Liso
Membrana plasmtica
Mitocondria
Pared celular
Peroxisoma
Pared de la clula
adyacente
Aparato de Golgi
Plasmodesmos
CITOESQUELETO
Cloroplastos
Microfilamentos
Filamentos
intermedios
Microtbulos
ADN
ARN
PROTEINA
Tomado de: An Introduction to Genetic Analysis. 7th edition Griffiths
AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. New York: W. H. Freeman 2000.
Localizacin
final de las
protenas en
la clula
Tomado de: An Introduction to Genetic Analysis.
7th edition Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et
al. New York: W. H. Freeman 2000.
Cmo es la estructura de un
gen eucariota?
Regin
regula-
dora
ESQUEMATIZACION DEL GEN
Otra secuencia
regulatoria fuera de
la secuencia del gen
Otra secuencia
regulatoria fuera de
la secuencia del gen
ADN
Regin reguladora
Regin estructural
Regin estructural
Sitio de inicio de
la trascripcin
(nucleotido+1)
5
3
3
5
Detalle de la estructura de un gen eucariota
ESQUEMATIZACION DEL GEN
Sitio de inicio de la trascripcin
(nucleotido+1)
Primeras tres bases (ATG) que codificarn
para el codn de iniciacin
Ultimas tres bases TGA TAA TAG que
codificarn para uno de los 3 posibles
codones de terminacin o STOP.
Regin
regula-
dora
Regin estructural
caat tata
Promotor
Regin estructural
intrn intrn exn
exn exon int
5UTR 3UTR
Regin codificante
int exn exn
+1
Transcripcin y procesamiento del ARN
Sitio de inicio de
la trascripcin
(nucleotido+1)
exon exon exon
exn exn exn exn AAAAAAA exn

C
TRANSCRIPTO MADURO:
Adicin de caperuza en
extremo 5
Adicin de cola de
adeninas (cola de poli A)
Remocin de intrones
Adicin de caperuza en extremo 5
Adicin de cola de adeninas (cola de
poli A), en la secuencia 3UTR, existe
una seal de poliadenilacin
Remocin
de intrones
(splicing)
caat tata intrn intrn exn
exn exn int
5UTR 3UTR
Promotor
Regin estructural
Regin codificante
int exn exn
+1
intrn intrn exn
exn exn int
5UTR 3UTR
Regin codificante
int
exn exn
+1
3UTR 5UTR
Gen de la Ovoalbumina
Transcripto primario
ARN mensajero maduro
Tomado de: An Introduction to Genetic Analysis. 7th edition Griffiths
AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. New York: W. H. Freeman 2000.
ARNm maduro
primer codn AUG marca el
Inicio de la traduccin

exn exn exn
AAAAAAAAA C
cola de poli A Caperuza
5UTR
3UTR
ORF (open reading frame)
Marco de lectura abierto
AUG
UGA
UAA
UAG
exn
exn
3 posibles codones stop (final
de la traduccin)
Traduccin del ARNm
primer codn AUG marca el
Inicio de la traduccin

exn exn exn
AAAAAAAAA C
cola de poli A Caperuza
5UTR
3UTR
ORF (open reading frame)
Marco de lectura abierto
AUG
UGA
UAA
UAG
exn
exn
3 posibles codones stop (final
de la traduccin)
Protena
1 AA: Metionina
Extremo Amino
(N-terminal)
Extremo Carboxilo
(C-terminal)
Pptido Seal
Se transcriben todos los genes en todo
momento y en todas las clulas de un
organismo?
Regulacin de la expresin gnica
Mltiples sitios de regulacin
Regulacin de la transcripcin
en Eucariotas
Control transcripcional en eucariotas
factores que actan en trans reconocen factores en cis
elementos (secuencias) del gen (CIS),en general
en el extremo 5
cercanos al inicio de la transcripcin ( TATA 30)
proximales (CAT, otros)
silenciadores y potenciadores ubicados a gran
distancia tanto hacia el extremo 5 como al 3

protenas reguladores: FACTORES DE
TRANSCRIPCION (TRANS)

Activadores: Protenas que se unen al ADN en los
secuencias conocidas como enhancers . Los activadores
ayudan a determinar cuales genes sern encendidos y
la tasa de trascripcin que estos tendrn.
Represores: Protenas que se unen
al ADN en los sitios conocidos como
silencers o silenciadores. Los
silenciadores interfieren con el
funcionamiento de los activadores
haciendo mas lenta la trasncripcin.
Factores basales de transcripcin son
elementos esenciales para la
transcripcin pero por s mismos no
pueden incrementar o disminuir la tasa
de transcripcin.
Regulacin de la
transcripcin en
clulas
eucariticas
Tomado de: An Introduction to Genetic Analysis. 7th
edition Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. New
York: W. H. Freeman 2000.
Efecto de mutaciones puntuales de
elementos CIS en el nivel de
transcripcin
Tomado de: An Introduction to Genetic Analysis. 7th edition Griffiths
AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. New York: W. H. Freeman 2000.
Elemento HRE (potenciador de
respuesta a hormona estrgeno) del
gen de la ovoalbmina
TEMA 8: Organizacin del
Genoma Eucariota
El genoma
Definiciones de genoma
1920s set cromosmico de una clula haploide
Suma total de genes
Suma total de secuencias codificantes y no
codificantes
El genoma es toda la informacin gentica contenida
en las clulas de un organismo en particular
EL GENOMA ES EL ADN CONTENIDO EN UNA CLULA
HAPLOIDE
Donde est la informacin gentica
de los organismos eucariotas?
Centrosomas
NUCLEO
Ribosomas
Cromatina
Nucleolo
Envoltura nuclear

Vacuola central
Retculo
Endoplasmtico
Rugoso
Retculo
Endoplasmtico Liso
Membrana plasmtica
Mitocondria
Pared celular
Peroxisoma
Pared de la clula
adyacente
Aparato de Golgi
Plasmodesmos
CITOESQUELETO
Cloroplastos
Microfilamentos
Filamentos
intermedios
Microtbulos
El genoma
Por lo general, cuando se habla de genoma en los
organismos eucariotas se hace referencia al ADN
contenido en el ncleo, organizado en cromosomas. O
sea GENOMA NUCLEAR.
En vegetales, tambin se encuentran 2 organelos que
poseen su propio genoma:
Cloroplastos: GENOMA CLOROPLASTICO
Mitocondrias (tambin presente en animales):
GENOMA MITOCONDRIAL
Especie Tamao del
genoma (Mb)
Nmero de
genes
Saccharomyces
cerevisiae
12 5770
Caenorhabditis
elegans
97 20598
Drosophila
melanogaster
180 13525
Arabidopsis
thaliana
125 25498
Fugu rubripes 365 30000
Mus musculus 3300 30000
Homo sapiens 3200 30000
GENOMAS Y SUS TAMAOS
GENOMAS Y SUS TAMAOS
El ser humano tendra solo el doble de genes que la mosca
del vinagre y apenas 5.000 genes ms que la planta
Arabidopsis. El ADN humano es al menos en un 98%
idntico al de los chimpancs y otros primates.

VALOR C: contenido total de ADN del genoma haploide
de un individuo.



PARADOJ A DEL VALOR C: ausencia de
correlacin entre la cantidad de ADN y la
complejidad de un organismo
Hongos
Saccharomyces cerevisiae 12.1
Aspergillus nidulans 25.4
Protozoarios
Tetrahymena pyriformis
190
Invertebrados
Caenorhabditis elegans 97
Drosophila melanogaster 180
Bombyx mori 490
Locusta migratoria (langosta migratoria) 5000
Vertebrados
Takifugu rubripes 400
Homo sapiens 3200
Mus musculus (ratn) 3300
Plantas
Arabidopsis thaliana 125
Oryza sativa (arroz) 430
Zea mays (maz) 2500
Pisum sativum (arveja) 4800
Triticum aestivum (trigo) 16000
Fritillaria assyriaca 120000
ESPECIE TAMAO GENOMA
(Mb)
TIPO Y ORGANIZACIN DE LAS
SECUENCIAS DE ADN
ADN Eucaritico
Genes de copia nica
ADN presente en
ms de una copia
ADN espaciador
Secuencias
funcionales
Secuencias sin
funcin conocida
Secuencias
Transponibles
Repeticiones
en tndem
Secuencias
funcionales
no
codificantes
Familias de
genes (y
pseudogenes
relacionados)
Repeticiones en
heterocromatina
centromrica
Familias de genes
dispersos
Familias gnicas en tndem
Secuencias funcionales
A
D
N

M
E
D
I
A
N
A
M
E
N
T
E

R
E
P
E
T
I
D
O

ADN presente
en ms de una
copia
Secuencias
funcionales no
codificantes
Familias de genes
(y pseudogenes
relacionados)
Familias de
genes
dispersos
Familias gnicas
en tndem
Secuencias telomricas
(repeticiones dispuestas
en tndem)
Ejemplos:

Actina 5-30
Queratinas > 20
Tubulinas 3-15
Globinas hasta 5
Ejemplos:

rDNA
(ADN ribosomal)
en humanos hasta
400 copias/genoma
ADN MEDIANAMENTE
REPETIDO
ADN
ALTAMENTE
REPETIDO
ADN presente
en ms de una
copia
Secuencias sin
funcin conocida
Secuencias
Transponibles
Repeticiones
en tndem
Repeticiones en
heterocromatina
centromrica
Minisatlites Microsatlites
VNTRs
(Variable
Number of
Tandem
Repeats)
15-100 pb
por
repeticin
2-5 pb por
repeticin
Repetidas
ms de 10
veces
Secuencias sin
funcin
conocida
Transposones
Secuencias
Transponibles
Repeticiones en
tndem
Retrotransposones
ADN presente
en ms de una
copia
ADN MEDIANAMENTE REPETIDO
Cmo se estudian
los genomas?
Genmica Estructural
Genmica Funcional
Objetivo de la Genmica es conocer
el/los genoma/s de una especie en
particular/diferentes especies.

Aplicaciones del estudio de los
genomas
Predecir genes, secuencias promotoras y reguladoras
de la transcripcin.

Comparar genomas de diferentes individuos de la
misma especie para detectar variaciones o
polimorfismos a nivel poblacional. Estas variaciones
pueden ser rearreglos cromosmicos
(deleciones/inserciones, translocaciones)

Comparar genomas de diferentes especies. Esto
permite hacer inferencias acerca de los procesos
evolutivos de remodelacin de genomas.


Anlisis Estructural de los
genomas
Mapeo gentico
Mapeo fsico
Mapeo comparativo
Secuenciacin completa del genoma
El mapeo gentico
El mapeo gentico est basado en la utilizacin
de tcnicas genticas para construir mapas que
muestran la posicin de marcadores genticos o
de marcadores moleculares
Las tcnicas genticas incluyen experimentos de
recombinacin
El mapeo fsico
El mapeo fsico utiliza tcnicas de Biologa
Molecular para examinar directamente las
molculas de ADN para la construccin de
mapas que muestran la posicin de
fragmentos de ADN (en general de
secuencia desconocida) en el genoma.
Mapeo fsico de familias de ADN repetido en cromosomas de
remolacha azucarera
(tomado de Schimidt, T. and Heslop-Harrison, J.S., 1998. Genomes, genes and junk:
the large-scale organization of plant chromosomes. Trends Plant Sci)
Modelo de la organizacin de
un cromosoma vegetal
(tomado de Schimidt, T. and Heslop-Harrison, J.S., 1998. Genomes, genes and junk:
the large-scale organization of plant chromosomes. Trends Plant Sci)
Bibliotecas genmicas
Como no es posible secuenciar un genoma en
una sola reaccin de secuenciacin se lo divide
en fragmentos, los cuales se almacenan en
clones de bibliotecas genmicas.
Una biblioteca genmica es un conjunto de
clones, cada uno de los cuales contiene un
fragmento de un genoma de un organismo
dado.
Las bibliotecas genmicas se consiguen
clonando los fragmentos en vectores.
Clon de ADN genmico
Tomado de: An Introduction
to Genetic Analysis. 7th
edition Griffiths AJF, Miller
JH, Suzuki DT, et al. New
York: W. H. Freeman 2000.
Biblioteca Genmica
Tomado de: An Introduction
to Genetic Analysis. 7th
edition Griffiths AJF, Miller
JH, Suzuki DT, et al. New
York: W. H. Freeman 2000.
En febrero de 2001, el
Proyecto de Genoma
Humano (Human Genome
Research Institute ) y Celera
Genomics publican,
simultneamente, su
secuenciacin del genoma
humano (en Nature y
Science, respectivamente).
Secuenciacin de genomas
Secuenciacin de genomas
Nature, 2000
Secuenciacin del genoma de
Arroz, Science, 2002
Regiones de segmentos duplicados en
el genoma de Arabidopsis (2n=10)
Cr.1
Cr. 2
Cr.3
Cr.4
Cr.5
Los cromosomas individuales son representados como barras grises (con el cromosoma 1 en
la parte superior), los centrmeros estn marcados en color negro. Las bandas coloreadas conectan
los segmentos duplicados correspondientes. La similitud entre las repeticiones de ADNr est
excluda. Los segmentos duplicados en una orientacin inversa estn conectados con bandas
coloreadas torsionadas. La escala es en megabases (tomado de: The Arabidopsis Genome
Initiative, 2000).
Anlisis funcional de los
genomas
Abordajes:
Gentica convencional (un gen por
estudio)
Anlisis global del genoma
(transcriptmica)
No todos los genes se transcriben en todo
momento y en todas las clulas de un
organismo
Biblioteca de ADNc
Tomado de: An Introduction to Genetic
Analysis. 7th edition Griffiths AJF, Miller
JH, Suzuki DT, et al. New York: W. H.
Freeman 2000.
Obtencin de ADNc a partir de
ARNm
Tomado de: An Introduction to
Genetic Analysis. 7th edition
Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT,
et al. New York: W. H. Freeman
2000.
Bibliotecas de ADNc
Las bibliotecas de ADNc se pueden
explorar con sondas de ADN y/o
anticuerpos (al estimular la expresin
de los insertos en las bacterias)
Bibliografa
Griffiths, A.J.; Miller, J.H.; Suzuki, D.T.; Lewontin,
R.C.; Gelbart, W.M.
Introduccin al anlisis Gentico (7 edicin en espaol)

Captulo 10: Repaso de transcripcin y traduccin. Flujo de
informacin gentica
Captulo 11: Regulacin de la expresin gnica en eucariotas
Captulo 12: Tecnologa del ADN recombinante. Bibliotecas
Captulo 13: Aplicaciones de la tecnologa del ADN recombinante.
Ingeniera gentica
Captulo 14: Genmica