Cuestionario punto isoelctrico de caseina

QUE REACCIONES DE PRECIPITACIN DE PROTENAS CONOCE?

Precipitacin por salado: grandes cantidades de una sal muy soluble
agregada a una solucin de protenas, disminuye la interaccin protena- H
2
O
porque le quita la capa de solvatacin, predominar la interaccin protena-
protena y se producir la precipitacin. La concentracin salina a la que se
produce la precipitacin no es igual para cualquier proteina, lo que permite usar
sta propiedad para la separacin y purificacin de protenas particulares a
partir de mezclas complejas.
Comnmente se usa sulfato de amonio (NH
4
)
2
SO
4
para tal fin, a causa de su
gran solubilidad. La adicin gradual de sta sal permite el fraccionamiento de
una mezcla de protenas, las cuales son precipitadas pero no desnaturalizadas,
entonces un exceso de agua, por encima del punto de precipitacin, permite
solubilizar nuevamente las protenas.

Efecto del calor: el calentamiento de las protenas en soluciones neutras
produce alteraciones en sus propiedades, tales como disminucin de la
solubilidad, prdida de la actividad especfica, prdida de sus caractersticas de
cristalizacin. Conjunto de alteraciones que se las conoce como
desnaturalizacin.

Formacin de sales:
Efecto de metales pesados: las protenas son precipitadas de sus soluciones
por sales de metales pesados, por combinacin del in metlico con la forma
aninica de la protena. Las sales comnmente usadas son HgCl
2
ZnCl
2
.
Efecto de los cidos: las protenas pueden precipitarse de la solucin acuosa
por la adicin de ciertos cidos tales como tricloroactico (TCA), perclrico,
clorhdrico, los cuales forman con las protenas sales insolubles.






















QU ES ELECTROFORESIS DE PROTEINAS?
La primera etapa del proceso es la aplicacin de la muestra. En papel o acetato
de celulosa, esto se puede efectuar de forma puntual (permite el anlisis de
varias muestras simultneamente en pequeas cantidades) o
longitudinalmente(permite el estudio de una sola muestra pero en mayor
cantidad). La muestra se aplica disuelta en el tampn de electroforesis, del que
est impregnado el soporte y que se encuentra en los reservorios de la cubeta,
y se deposita en una pequea zona, lo ms estrecha posible, en el centro o en
un extremo del soporte (si se conoce cul va a ser la direccin de
desplazamiento de la misma) y de forma perpendicular a la direccin del campo
elctrico. Conviene evitar la proximidad de los bordes del papel, ya que all el
campo elctrico no es homogneo y se distorsionan las bandas segn
avanzan. El volumen que se aplica suele ser inferior a 10 L y si se necesitan
mayores volmenes porque la muestra se encuentre muy diluida, pueden
hacerse aplicaciones sucesivas sobre la misma zona, dejando secar entre
aplicacin y aplicacin. Es necesario humedecer el soporte (papel o acetato de
celulosa) para que sea conductor; para ello, se impregna el soporte de tampn
de electroforesis por ambos extremos y de forma simultnea para que por
capilaridad se desplace hacia la zona de aplicacin de la muestra.
En los geles de agarosa, se perfora el gel con ayuda de un troquel o una pipeta
de dimetro adecuado y se elimina esa porcin por succin. La perforacin
puede ser cilndrica o rectangular, dependiendo del nmero y cantidad de
muestra a analizar y la muestra se deposita en el orificio practicado sin que
llegue a rebosar. En este caso, el tampn est embebido en el soporte
(agarosa). En todos los casos, la zona de aplicacin debe ser lo ms estrecha
posible, para aumentar la resolucin y evitar solapamientos entre bandas que
migren en posiciones cercanas. La electroforesis termina cuando se haya
producido la mxima separacin de los componentes de la muestra, pero sin
sobrepasar los lmites del soporte. Para evitar que se sobrepasen estos lmites,
se utilizan los marcadores electroforticos que son molculas coloreadas con
una movilidad electrofortica superior a cualquier componente de la muestra
(poseen elevada carga respecto a su tamao). Entre los marcadores ms
utilizados se encuentran la dinitrofenil-lisina (DNP-Lys) y el azul de bromofenol.
Una vez acabada la electroforesis, se procede a la etapa de tincin. El soporte
se retira de la cubeta y se sumerge en un recipiente que contiene una
disolucin de un colorante que se une de manera especfica a los componentes
de la muestra y que precipita a los componentes separados en la posicin en la
que se encuentren. Las disoluciones ms utilizadas en el caso de protenas son
el Negro Amido al 1% (p/v) en cido actico y el Azul de Coomasie al 0.1%
(p/v) en metanol/agua/cido actico (9:9:2 v/v/v).
Si la electroforesis se pretende desarrollar a escala preparativa, ha de utilizarse
un papel de mayor grosor (175 gr/cm2), en lugar del utilizado en la
electroforesis analtica (85-100 gr/cm2; 0.15mm de espesor), lo que permite la
aplicacin de una mayor cantidad de muestra (50-100L)






3. POR QUE LOS AMINOACIDOS ACTUAN COMO AMORTIGUADORES
FISIOLOGICOS, SOBRE TODO LOS QUE TIENEN ALGUN Pk PROXIMO AL
PH FISIOLOGICO(7,4)?

En los organismos multicelulares el pH de los fluidos extracelulares est
tambin fuertemente regulado. La constancia en el pH se logra gracias a los
amortiguadores biolgicos que son mezclas de cidos dbiles y sus bases
conjugadas.Los aminocidos son las unidades elementales constitutivas de las
molculas denominadas Protenas
Protenas que son los compuestos nitrogenados ms abundantes del
organismo, a la vez que fundamento mismo de la vida.
Los alimentos que ingerimos nos proveen protenas. Pero tales protenas no se
absorben normalmente en tal constitucin sino que, luego de su
desdoblamiento ("hidrlisis" o rotura), causado por el proceso de digestin,
atraviesan la pared intestinal en forma de aminocidos y cadenas cortas de
pptidos, segn lo que se denomina " circulacin entero heptica".

Esas sustancias se incorporan inicialmente al torrente sanguneo y, desde all,
son distribudas hacia los tejidos que las necesitan para formar las protenas,
consumidas durante el ciclo vital.


4.COMO SE PONEN DE MANIFIESTO EL CARACTER AMORTIGUADOR
DE LOS AMINOACIDO?

Los aminocidos son las unidades elementales constitutivas de las molculas
denominadas Protenas
Protenas que son los compuestos nitrogenados ms abundantes del
organismo, a la vez que fundamento mismo de la vida.
Los alimentos que ingerimos nos proveen protenas. Pero tales protenas no se
absorben normalmente en tal constitucin sino que, luego de su
desdoblamiento ("hidrlisis" o rotura), causado por el proceso de digestin,
atraviesan la pared intestinal en forma de aminocidos y cadenas cortas de
pptidos, segn lo que se denomina " circulacin entero heptica".

Esas sustancias se incorporan inicialmente al torrente sanguneo y, desde all,
son distribudas hacia los tejidos que las necesitan para formar las protenas,
consumidas durante el ciclo vital.












5. LAS PROTEINAS PUEDEN VARIAR SUS CARACTERISTICAS DE
SOLUBILIDAD? COMO?

Las protenas al igual que los aminocidos son anfteras, es decir se pueden
comportar como cidos y como bases dependiendo del pH del medio, esto es
debido a la presencia de aminocidos con grupos ionizables, que pueden
captar y ceder H+, como consecuencia pueden amortiguar las variaciones de
pH.

Solubilidad

La solubilidad depende de diversos factores como: pH, conformacin,
disposicin de los restos, etc. Las protenas que tienen conformacin
filamentosa son insolubles mientras, que las que tienen conformacin
globular son solubles en agua. Debido al elevado peso molecular que suelen
tener forman dispersiones coloidales.

La solubilidad se debe a los restos de los aminocidos superficiales que forman
la molcula de la protena, que tienen grupos polares y grupos que se pueden
ionizar, estos grupos establecen puentes de hidrgeno con el agua,
formndose alrededor de la molcula de protena una capa de molculas de
agua llamada capa de solvatacin, que impide su unin con otras molculas de
protenas. Si esta capa de solvatacin se rompe, las molculas de protenas se
unen entre s formando un agregado insoluble y precipitan.