Manual de Técnicas Analíticas

DETERMINACIN DE LA DEMANDA QUMICA DE OXGENO EN AGUAS
NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS NMX-AA-030-

SCFI-2001.

OBJETIVO
Determinar la demanda qumica de oxgeno (DQO) en aguas naturales, residuales
y residuales tratadas.

REACTIVOS
1 cido sulfrico concentrado (H2SO4)
2 Dicromato de potasio (K2Cr2O7)
3 Sulfato mercrico (HgSO4)
4 Sulfato de plata (Ag2SO4)
5 Biftalato de potasio patrn primario (HOOCC6H4COOK)
PREPARACIN DE SOLUCIONES
Disolucin estandar de dicromato de potasio (A)
Pesar aproximadamente 10 g de dicromato de potasio previamente secado a 103
C por 2 h, pesar con precisin 5.108 g y aadirlos a 250 mL de agua y adicionar
83.5 mL de cido sulfrico concentrado y aproximadamente 16.65 g de sulfato
mercrico, disolver y enfriar a temperatura ambiente. Aforar a 500 mL con agua.

Dilucin de la muestra (B)
Hacer una dilucin de 1:250, 1:100, 1:50 y 1:25

Disolucin de sulfato de plata en cido sulfrico (C)
Pesar aproximadamente y con precisin 7.5 g de sulfato de plata y disolver en 500
mL de cido sulfrico concentrado El sulfato de plata requiere un tiempo
aproximado de dos das para su completa disolucin. La disolucin formada debe
mantenerse en la obscuridad para evitar su descomposicin.

Disolucin estndar de biftalato de potasio para curva de calibracin
Pesar 0.5g de biftalato de potasio, secar 2h a 120C. Pesar con precisin 0.2125
g de biftalato de potasio, disolver en 250 mL de agua y aforar a 500 mL.

RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

La muestra se debe analizar inmediatamente despus de su toma, en caso
contrario debe conservarse en refrigeracin a 4C, adems de la adicin de cido
sulfrico hasta pH < 2.
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.

EQUIPO Y MATERIALES

Estufa de conveccin
Espectrofotmetro
Tubos de ensaye con rosca
Pipetas de 10 mL, 1mL
Vasos de precipitado
Propipeta
Esptula

Curva de calibracin

BLANCO: 1.5 mL de dicromato de potasio, 2.5 mL de agua y 3.5 mal de disulfao
de plata.
Tubo ppm (mg/L) Biftalato de
potasio (mL)
Agua (mL)
1 900 6.75 0.75
2 800 6.00 1.5
3 600 4.5 3.00
4 500 3.75 3.75
5 300 2.25 5.25
6 200 1.5 6.00
7 100 0.75 6.75
8 50 0.375 7.125

PROCEDIMIENTO
Precalentar a 150oC el digestor de DQO, colocar en los tubos de reaccin 1,5 mL
de la disolucin de digestin (A), tomar cuidadosamente 2,5 mL de muestra
previamente homogeneizada (B) y colocar dentro de los tubos de reaccin, aadir
cuidadosamente 3,5 mL de la disolucin de digestin respectiva (C), cerrar
inmediatamente para evitar que se escapen los vapores, asegurarse de que estn
hermticamente cerrados. Suavemente invertir los tubos varias veces destapando
despus de cada inversin para liberar la presin.

Colocar 2,5 mL de agua en un tubo para la determinacin del blanco de reactivos.

Colocar todos los tubos en el digestor previamente calentado a 150C por 2 h;
retirar los tubos del digestor y dejar que los tubos se enfren a temperatura
ambiente, permitiendo que cualquier precipitado se sedimente.

Medir la absorbancia a 620 nm en el espectrofotmetro, previamente calibrado.

DETERMINACIN DE NITRGENO TOTAL KJELDAHL EN AGUAS
NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES NMX-AA-026-SCFI-2010.

OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN.

Determinacin de nitrgeno Kjeldahl total en aguas naturales, residuales y
residuales tratadas.

REACTIVOS

Tetraborato de sodio decahidratado (Na2B4O7 10H2O)
Hidrxido de sodio (NaOH)
cido sulfrico concentrado (H2SO4)
cido brico (H3BO3)
Idicador de rojo de metilo
Indicador de azul de metileno
Alcohol etlico (CH3CH2OH)
Sulfato de cobre (II) anhidro (CuSO4)
Sulfato de potasio (K2SO4)
Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O35H2O)
Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3), patrn primario
Cloruro de amonio (NH4Cl) patrn primario.
cido sulfmico (H2NSO3H)
Naranja de metilo, sal sdica (C14H14N3NaO3S)

NOTA 1: Se puede sustituir el cido sulfmico por otra sal orgnica que contenga
nitrgeno.

PREPARACIN DISOLUCIN.

Disolucin indicadora de cido brico. Secar aproximadamente 30 g de cido
brico en un desecador que contenga slica gel como desecante por 24 h. Pesar
aproximadamente 20,0 g de cido brico seco disolver en 500 mL agua, agregar
10 mL de la mezcla de indicadores y diluir a 1 L. Guardar la disolucin en un
envase de plstico o en un contenedor libre de boro, preparar mensualmente.

Disolucin de tetraborato de sodio (0,025M). Pesar aproximadamente pero con
precisin 9,50 g de tetraborato de sodio decahidratado en 50 mL de agua y llevar
a 1 L con agua.

Disolucin amortiguadora de boratos. Aada 88 mL de la disolucin de NaOH 0,1
M a 500 mL de disolucin de tetraborato de sodio 0,025 M y diluir a 1 L con agua.

Disolucin de hidrxido de sodio (0,1 M). Pesar aproximadamente 4,0 g de
hidrxido de sodio y disolver en 500 mL de agua, dejar enfriar a temperatura
ambiente y llevar a 1 L.

Disolucin de cido sulfrico (0,03 M). Preparar una disolucin de cido sulfrico
diluyendo 3 mL en 1 L de agua.

Disolucin valorada de cido sulfrico (0,006 M). Diluir 200 mL de la disolucin de
cido sulfrico 0,03 M en 1 L de agua. Titular la disolucin de cido sulfrico
obtenida con una disolucin de 30 mL de agua libre de dixido de carbono y 0,031
8 g 0,000 5 g de carbonato de sodio anhidro, previamente secado por 1 h a 140
C 2 C, y 2 gotas del indicador anaranjado de metilo; titular esta disolucin con
el cido sulfrico hasta que el indicador vire de amarillo a canela.
Calcular la concentracin de masa exacta de la disolucin (1 mL = 0,28 mg de N-
amoniacal orgnico).

Mezcla de indicadores. Pesar aproximadamente 200,0 mg de indicador rojo de
metilo diluir a 100 mL con alcohol etlico, pesar aproximadamente 100,0 mg de
indicador azul de metileno y diluir a 50 mL con alcohol etlico, mezclar las dos
disoluciones en un frasco de vidrio. Preparar mensualmente.

Reactivo para la digestin. Pesar aproximadamente y con precisin 134,0 g de
sulfato de potasio y 7,3 g de sulfato de cobre (II) anhidro, disolver en 800 mL de
agua destilada, agregar cuidadosamente 134 mL de cido sulfrico concentrado,
dejar enfriar a temperatura ambiente y diluir la mezcla a 1 L con agua. Almacenar
la disolucin a una temperatura de 20C para evitar la cristalizacin.

Disolucin reactivo de hidrxido - tiosulfato de sodio. Pesar aproximadamente
500,0 g de hidrxido de sodio y 25,0 g de tiosulfato de sodio pentahidratado
disolver en agua y llevar a 1 L.

Disolucin de hidrxido de sodio (6 M). Pesar aproximadamente 240,0 g de
hidrxido de sodio y llevar a 1 L con agua libre de amoniaco.

Disolucin de nitrgeno amoniacal (1 mL = 1,0 mg de nitrgeno amoniacal), pesar
aproximadamente 3,819 g de cloruro de amonio y aforar a 1 L con agua.

Disolucin de nitrgeno orgnico (0,07 M N-Org). Pesar aproximadamente 6,93 g
0,2 g de cido sulfmico disolver y diluir a 1 L con agua.

Disolucin de hidrxido de sodio para neutralizacin ( 12,5 M). Pesar
aproximadamente 500,0 g 0,5 g de hidrxido de sodio disolver en agua; dejar
enfriar hasta temperatura ambiente y diluir a 1 L con agua.

Disolucin de cido sulfrico para neutralizacin (5 M). Tomar 500,0 mL de cido
sulfrico concentrado disolver en agua; dejar enfriar hasta temperatura ambiente y
diluir a 1 L con agua.

Disolucin de anaranjado de metilo. Pesar 0,05 g 0,005 g del reactivo
anaranjado de metilo y diluir a 100 mL con agua.

EQUIPO Y MATERIALES

1 Para determinacin de nitrgeno tipo Kjeldahl que consta de: Digestor con
sistema de extraccin de humos y destilador con sistema de condensacin para
mantener la temperatura por abajo de 29C.
2 Potencimetro para medicin de pH reproducible hasta 0,02 unidades de pH,
con compensador de la temperatura y sus respectivos electrodos.
3 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg
4 Balanza granataria con precisin de 0,1 g
5 Matraz tipo Kjeldahl de 800 mL
6 Bureta
7 Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad.


Deben tomarse un mnimo de 2,0 L de muestra en un envase de polietileno.
Pueden utilizarse muestras compuestas o simples.

Debe preservarse la muestra con cido sulfrico (1:1) a un pH de 1,5 a 2,0.
Posteriormente mantener a 4C hasta su anlisis.

PROCEDIMIENTO

1 Limpiar el equipo de destilacin antes de utilizarlo, destilando una mezcla (1:1)
agua-disolucin hidrxido - tiosulfato de sodio hasta que el destilado est libre de
amonio. Repetir esta operacin cada vez que el equipo se vaya a utilizar, si no se
emplea en intervalos de menos de 4 h tambin se requiere realizar esta operacin.

Nitrgeno amoniacal

2 Determinar el volumen de la muestra de acuerdo a la tabla 1, si es necesario,
ajustar el volumen aproximadamente 500 mL y neutralizar a pH 7, con hidroxido
de sodio 12.5 M o cido sulfrico 5 M. Colocar la muestra medida en un matraz
Kjeldahl de 800 mL.

1 Tomar una muestra dependiendo de las concentraciones esperadas, de acuerdo
a la tabla 1 diluir con agua hasta 500 mL. Preparar un blanco con 500 mL de agua
y darle el mismo tratamiento que a la muestra como sigue:

2 Aadir 25 mL de la disolucin amortiguadora de boratos y ajustar el pH a 9,5
con disolucin de hidrxido de sodio 6 M utilizando potencimetro o papel
indicador para verificar. Transferir la disolucin a un matraz Kjeldahl y aadir unas
cuentas de vidrio o perlas de ebullicin.

3 Conectar el matraz Kjeldahl al bulbo del aparato de destilacin, destilar la
muestra cuidando que la temperatura del condensador no pase de 29C.

4 Recolectar el condensado en un recipiente que contenga 50 mL de la disolucin
indicadora de cido brico, sumergiendo la punta del condensador o una
extensin del mismo por debajo de la superficie del lquido.
5 La destilacin se completa cuando se hayan recolectado 300 mL de destilado
aproximadamente, incluyendo los 50 mL de la disolucin indicadora de cido
brico.

6 Retirar el matraz colector y titular con solucin de cido sulfrico 0,006 M hasta
el vire del indicador de verde esmeralda a morado. Registrar el volumen gastado
de cido como volumen A.

Nitrgeno orgnico

1 Enfriar el residuo contenido en el matraz Kjeldahl.

2 Digestin: Adicionar cuidadosamente 50 mL de reactivo para la digestin al
matraz Kjeldahl y mezclar perfectamente. Aadir unas cuentas de vidrio o piedras
de ebullicin. Mezclar y conectar al equipo Kjeldahl; permitir la ebullicin de la
muestra hasta que el volumen de la disolucin se reduzca aproximadamente a un
volumen de 25 mL a 50 mL y se observe gran desprendimiento de vapores
blancos (estos vapores pueden oscurecerse cuando la muestra presenta grandes
cantidades de materia orgnica). Si la muestra contiene una cantidad apreciable
de material suspendido, aadir 50 mL adicionales de reactivo de digestin

3 Continuar la digestin durante 30 min ms. En este perodo, la disolucin cambia
de turbia hasta ser transparente e incolora o con una ligera coloracin amarillo
plido. Durante la digestin el matraz Kjeldahl debe permanecer inclinado. Enfriar
el matraz y su contenido, diluir a 300 mL con agua y mezclar.

4 Cuidadosamente aadir 50 mL de la disolucin de hidrxido-tiosulfato de sodio,
para formar una capa alcalina en el fondo del matraz, agitar hasta asegurarse que
est completamente mezclado, el pH de la disolucin debe ser mayor a 11,0.

5 Conectar el matraz Kjeldahl al condensador, destilar la muestra cuidando que la
temperatura del condensador no pase de 29 C.

6 Recolectar el condensado en un recipiente que contenga 50 mL de la disolucin
indicadora de cido brico, sumergiendo la punta del condensador o una
extensin del mismo por debajo de la superficie del lquido.

7 Retirar el matraz colector y titular con disolucin de cido sulfrico 0,006 M hasta
que la disolucin vire de color verde esmeralda a morado. Registrar el volumen
gastado de cido como volumen C.

Blanco
Llevar un blanco durante todos los pasos del mtodo.

CLCULOS

Calcular la concentracin de masa de nitrgeno amoniacal, en mg/L en la muestra
como se indica a continuacin:

) (
()

(NH3-N) es la concentracin de masa de nitrgeno amoniacal;
VA son los mL de cido sulfrico gastados en la titulacin de la muestra;
VB son los mL de cido sulfrico gastados en el blanco;
c(H2SO4) es la concentracin del cido sulfrico en mol/L;
Vm son los mL de muestra, y
Ar(N) masa atmica del nitrgeno.

Calcular la concentracin de masa de nitrgeno orgnico, en mg/L en la muestra
como se indica a continuacin:

) (
()

Donde:
es la concentracin de masa de nitrgeno orgnico;

VC son los mL de cido sulfrico gastados en la titulacin de la muestra;
VB son los mL de cido sulfrico gastados en el blanco;
c(H2SO4) es la concentracin del cido sulfrico en mol/L;
Vm son los mL de muestra, y
Ar(N) masa atmica del nitrgeno.

Calcular la concentracin de masa de nitrgeno total Kjeldahl, en mg/L en la
muestra como se indica a continuacin:

)

()

Donde:
(NTK) es la concentracin de masa de nitrgeno total Kjeldahl;
(N-NH3) es la concentracin de masa de nitrgeno amoniacal, y
(NOrg) es la concentracin de masa de nitrgeno orgnico.

ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE SLIDOS Y SALES
DISUELTAS EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES
TRATADAS - NMX-AA-034-2012.

OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Establece el mtodo de anlisis para la determinacin de slidos y sales disueltas
en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.

EQUIPO Y MATERIALES

Equipo

1. Bomba de vaco
2. Estufa elctrica, para operar de 103C a 105C
3. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg
4. Mufla elctrica para operar a 500C 50C

Material

1. Cpsulas de evaporacin adecuadas al volumen de la muestra
2. Desecador, provisto con un desecante que contenga un indicador colorido de
humedad
3. Crisol Gooch de poro fino con adaptador de hule para el equipo de filtracin
4. Matraz Kitazato de 1 L a 2 L de capacidad
5. Filtro de fibra de vidrio de tamao adecuado al crisol Gooch utilizado con una
porosidad de 2 m o menor
6. Pinzas para crisol
7. Guantes para proteccin al calor
8. Careta para proteccin al calor

REACTIVOS Y PREPARACION DE DISOLUCIONES

Cloruro de sodio
Carbonato de calcio
Almidn en polvo

Disolucin estndar para muestras de control. Agregar la cantidad necesaria de
almidn, Cloruro de Sodio y Carbonato de Calcio de acuerdo con la concentracin
deseada de slidos en las muestras de control y diluir a 1 L. Este patrn debe
prepararse cada vez que se realice el mtodo.

1. Deben tomarse un mnimo de 500 mL de muestra en envases de polietileno y
taparse inmediatamente despus de la colecta. Pueden utilizarse muestras
compuestas o simples.
2. No se requiere de ningn tratamiento especfico en campo.
3. Debe preservarse la muestra a 4C hasta su anlisis.
4. El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 7 das. Sin
embargo, se recomienda realizar el anlisis dentro de las 24 h posteriores a su
colecta. Las muestras deben estar a temperatura ambiente al momento del
anlisis.

PROCEDIMIENTO

Preparacin de cpsulas de porcelana

1. Las cpsulas se introducen a la mufla a una temperatura de 550C 50C,
durante 20 min como mnimo. Despus de este tiempo transferirlas a la estufa a
103C - 105C aproximadamente 20 min.
2. Sacar y enfriar a temperatura ambiente dentro de un desecador.
3. Pesar las cpsulas y registrar los datos.
4. Repetir el ciclo hasta alcanzar el peso constante, el cual se obtendr hasta que
no haya una variacin en el peso mayor a 0,5 mg. Registrar como peso G.

Preparacin de crisoles Gooch

1. Introducir el filtro de fibra de vidrio en el crisol con la cara rugosa hacia arriba,
mojar el filtro con agua para asegurar que se adhiera al fondo del crisol.
2. Los crisoles se introducen a la mufla a una temperatura de 550C 50C,
durante 20 min como mnimo. Despus de este tiempo transferirlos a la estufa a
103C - 105C aproximadamente 20 min.
3. Sacar y enfriar a temperatura ambiente dentro de un desecador.
4. Pesar los crisoles y repetir el ciclo hasta alcanzar el peso constante, el cual se
obtiene hasta que no haya una variacin en el peso mayor a 0,5 mg. Registrar
como G3.

Preparacin de la muestra

1. Sacar las muestras del sistema de refrigeracin y permitir que alcancen la
temperatura ambiente. Agitar las muestras para asegurar la homogeneizacin de
la muestra.

Medicin para slidos totales (ST) y slidos totales voltiles (SVT)

- Determinacin para slidos totales (ST):

1. En funcin de la cantidad de slidos probables tomar una cantidad de muestra
que contenga como mnimo 25 mg/L de slidos totales, generalmente 100 mL de
muestra es un volumen adecuado.
2. Transferir la muestra a la cpsula de porcelana que previamente ha sido puesta
a peso constante.
3. Llevar a sequedad la muestra en la estufa a 103C-105C.
4. Enfriar en desecador hasta temperatura ambiente y determinar su peso hasta
alcanzar peso constante. Registrar como peso G1.

Determinacin para slidos totales voltiles(SVT):

5. Introducir la cpsula conteniendo el residuo a la mufla a 550C 50C durante
15 min a 20 min, transferir la cpsula a la estufa a 103C - 105C
aproximadamente 20 min, sacar la cpsula, enfriar a temperatura ambiente en
desecador y determinar su peso hasta alcanzar peso constante. Registrar como
peso G2.
6. Cuando se determinen muestras por duplicado o triplicado, los resultados como
mximo pueden tener una variacin del 5 por ciento del promedio de los
resultados.

Slidos suspendidos totales (SST) y slidos suspendidos totales (SST)

Determinacin de los slidos suspendidos totales (SST):

1. Medir con una probeta, un volumen adecuado de la cantidad seleccionada de
muestra previamente homogeneizada la cual depende de la concentracin
esperada de slidos suspendidos.
2. Filtrar la muestra a travs del crisol Gooch preparado anteriormente aplicando
vaco, lavar el disco tres veces con 10 mL de agua, dejando que el agua drene
totalmente en cada lavado.
3. Suspender el vaco y secar el crisol en la estufa a una temperatura de 103C a
105C durante 1 h aproximadamente. Sacar el crisol, dejar enfriar en un
desecador a temperatura ambiente y determinar su peso hasta alcanzar peso
constante registrar como peso G4.

Determinacin de slidos suspendidos totales (SST):

4. Introducir el crisol que contiene el residuo y el disco a la mufla, a una
temperatura de 550C 50C durante 15 min a 20 min. Sacar el crisol, de la mufla
e introducirlo a la estufa a una temperatura de 103C -105C durante 20 min
aproximadamente. Sacar y enfriar a temperatura ambiente en desecador y
determinar su peso hasta alcanzar peso constante. Registrar como peso G5.

Sales disueltas totales (SDT)

La determinacin de las sales disueltas totales es por diferencia entre los slidos
totales menos slidos suspendidos totales.

CLCULOS

Calcular el contenido de slidos totales (ST) de las muestras como sigue:

V
G G
ST
1000 *
1

donde:
ST son los slidos totales, en mg/L;
G1 es el peso de la cpsula con el residuo, despus de la evaporacin, en mg;
G es el peso de la cpsula vaca, en mg a peso constante, y
V es el volumen de muestra, en mL.

Calcular el contenido de slidos totales voltiles (SVT) de las muestras como
sigue:

V
G G
SVT
1000 *
2 1

donde:
SVT es la materia orgnica total, en mg/L;
G2 es el peso de la cpsula con el residuo, despus de la calcinacin, en mg, y

Calcular el contenido de slidos suspendidos totales de las muestras como sigue:

V
G G
SST
1000 *
3 4

donde:
SST son los slidos suspendidos totales, en mg/L;
G3 es el peso del crisol con el disco a peso constante, en mg;
G4 es el peso del crisol con el disco y el residuo seco, en mg, y

Calcular el contenido de slidos suspendidos totales de las muestras como sigue:

V
G G
SST
1000 *
5 4

donde:
SST son los slidos suspendidos totales, en mg/L;
G5 es el peso del crisol con el residuo, despus de la calcinacin, en mg;

Calcular el contenido de sales disueltas totales de las muestras como sigue:

SST ST SDT

donde:
SDT son las sales disueltas totales, en mg/L
ST son los slidos totales, en mg/L
SST son los slidos suspendidos totales, en mg/L

Reportar los valores obtenidos de la muestra control junto con los resultados del
anlisis.

Reportar los resultados, en mg/L.

DETERMINACIN DE METALES PORABSORCIN ATMICA EN AGUAS
NATURALES, POTABLES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -NMX-
AA-051-2001.

OBJETIVO

Establece el mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica para la
determinacin de metales disueltos, totales, suspendidos y recuperables en aguas
naturales, potables, residuales y residuales tratadas.

EQUIPO Y MATERIALES

Equipo

1. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.
2. Espectrofotmetro de absorcin atmica (EAA). Con haz sencillo o doble,
monocromador, detector, fotomultiplicador ajustable al ancho de banda espectral,
intervalo de longitud de onda que contenga las longitudes de los analtos a
analizar y provisto de una interfase con registrador o un adecuado sistema de
datos.
3. Generador de hidruros.
4. Vapor fro.
5. Horno de grafito. Equipo capaz de programar las temperaturas, tiempos y flujos
de gas inerte y alterno en los pasos para atomizar la muestra, debe contar con un
sistema de enfriamiento para controlar la temperatura del horno.
6. Lmparas de: Aluminio, antimonio, arsnico, bario, berilio, bismuto, calcio,
cadmio, cesio, cobalto, cobre, cromo, estao, estroncio, hierro, iridio, magnesio,
manganeso, mercurio, molibdeno, litio, nquel, oro, osmio, plata, platino, plomo,
potasio, podio, rubidio, selenio, silicio, sodio, titanio, vanadio, zinc (adems de
otros elementos de inters en el anlisis de aguas).
7. Horno de microondas, y/o autoclave, y/o placa de calentamiento.
8. Quemadores de 10 cm de 1 ranura, de 10 cm de 3 ranuras y para xido nitroso
de 5 cm o los recomendados por el fabricante del equipo.
9. Celda de cuarzo cilndrica para el generador de hidruros o la recomendada por
el fabricante del equipo.

Materiales

1. Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente
no inico, libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la
noche y volver a enjuagarse con agua libre de metales y dejar secar (con cuidado
especial para el anlisis de trazas).
2. En los casos de que se presenten adherencias en el material debe dejarse
remojando de 12 h a 24 h con HNO3 (1:5), HCl (1:5) o con agua regia (3 partes de
HCl concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) a 70C, despus debe ser
enjuagado con agua libre de metales.
3. En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o
hexano.
4. Papel filtro nmero 40 (o equivalente).
5. Pipetas volumtricas tipo A o micropipetas calibradas.
6. Cajas de petri.
7. Tubos de grafito y accesorios (especficos para el horno de grafito utilizado).
8. Material de consumo que necesite el espectrofotmetro en flama y/o hornony/o
generador de hidruros y/o vapor fro.
9. Membranas de filtracin de 0,45 micras.

REACTIVOS

1. cido clorhdrico concentrado (HCl)
2. cido ntrico concentrado (HNO3)
3. cido sulfrico concentrado (H2SO4)
4. Disolucin de borohidruro de sodio (NaBH4) en hidrxido de sodio (NaOH) a la
concentracin especificada por el fabricante del equipo. Esta disolucin debe
prepararse justo antes de realizar el anlisis.
5. Aire comprimido libre de agua y aceite
6. Acetileno grado absorcin atmica
7. Argn grado alta pureza o absorcin atmica
8. Nitrgeno grado alta pureza o absorcin atmica
9. xido nitroso grado alta pureza o absorcin atmica
10. Disolucin patrn (certificada y/o preparada en el laboratorio 1 g/L 1g/Kg) de:
aluminio, antimonio, arsnico, bario, berilio, bismuto, calcio, cadmio, cesio,
cobalto, cobre, cromo, estao, estroncio, hierro, iridio, magnesio, manganeso,
mercurio, molibdeno, litio, nquel, oro, osmio, plata, platino, plomo, potasio, rodio,
rubidio, selenio, slice, sodio, titanio, vanadio, zinc (adems de otros elementos de
inters en el anlisis de aguas).
NOTA.- Consultar el apndice normativo C.

PREPARACION DE DISOLUCIONES

1. Disolucin patrn intermedia: Preparar las disoluciones patrn de acuerdo al
mtodo tomando una alcuota adecuada de la disolucin patrn certificada.

2. Disoluciones patrn: Demostrar el intervalo lineal con un mnimo de 4
disoluciones y un blanco que estn dentro del intervalo de trabajo.

3. Disolucin patrn para la matriz adicionada: La concentracin depende del
metal a analizar y de la tcnica utilizada, se debe preparar a partir de la disolucin
patrn intermedia.

7 RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

Debe tomarse un mnimo de 500 mL de muestra para metales genricos en su
mayora, en un envase de polietileno o polipropileno. Para la determinacin de
mercurio, arsnico o selenio se necesitan 250 mL en envases separados llenando
hasta el tope.

PROCEDIMIENTO
1. Realizar tres lecturas independientes (por lo menos) para cada muestra, blanco,
patrn, etc.
Las muestras de aguas residuales, requieren en general, un tratamiento previo
antes del anlisis. Los metales totales incluyen las combinaciones de carcter
orgnico e inorgnico, tanto disueltos como en partculas. Las muestras incoloras,
transparentes con una turbiedad < 1 UNT, pueden analizarse directamente sin
digestin. En caso de agua potable habr que concentrar para algunos metales.

2. Preparacin de la muestra para determinacin de metales disueltos y
suspendidos.

2.1 Para la determinacin de metales disueltos, la muestra debe filtrarse en el
momento de su coleccin y/o en el laboratorio a travs de una membrana de poro
de 0,45 micras. Hacer un blanco utilizando una membrana similar, lavada con
agua para asegurarse que est libre de contaminacin. Preacondicionar la
membrana enjuagndola con cido ntrico (1 %) y dndole un enjuague con agua
tipo I antes de utilizarla.

2.2 Para la muestra de metales suspendidos, registrar el volumen de
muestrafiltrada e incluir una membrana en la determinacin del blanco. Antes de
filtrar, centrifugar las muestras con un alto contenido de turbiedad en tubos de
plstico de alta densidad o TFE lavados con cido. Agitar y filtrar a una presin de
70 Kpa a 130 Kpa.

2.3 Despus de la filtracin, acidificar el filtrado a un pH de 2 con cido ntrico
concentrado y analizar directamente.

2.4 La membrana para anlisis de metales suspendidos debe guardarse en una
caja de petri lavada, enjuagada con disolucin cida y seca, si la filtracin se
realiza en campo.

2.5 Si durante el traslado de la muestra o durante el almacenamiento se forma un
precipitado, ste debe redisolverse.

2.6 Para la digestin de la muestra en parrilla de calentamiento y en vaso abierto
transferir la membrana a un vaso de precipitados de 150 mL y aadir 4 mL de
cido ntrico concentrado. Incluir un filtro para la determinacin del blanco. Cubrir
con vidrio de reloj y calentar. El cido caliente disuelve la membrana rpidamente.
Incrementar la temperatura para la digestin del material.

2.7 Calentar casi a sequedad evitando que hierva la muestra, enfriar y lavar el
vidrio de reloj con agua y aadir otros 3 mL de cido ntrico concentrado.
Cubrir y continuar calentando hasta digestin completa, generalmente es cuando
adquiere una apariencia cristalina o no cambia con la adicin del cido.

2.8 Evaporar casi a sequedad (aproximadamente 2 mL), enfriar y lavar el vidrio de
reloj con agua, aadir 10 mL de cido clorhdrico (1:1) y 15 mL de agua por cada
100 mL de dilucin y calentar por otros 15 min para redisolver precipitados que se
hallan formado. Los puntos 2.6, 2.7 y 2.8 pueden variar si se utilizan otras fuentes
de energa (autoclaves u hornos de microondas).

2.9 Enfriar, lavar las paredes del vaso y vidrio reloj con agua y filtrar para remover
el material insoluble que pueda tapar el nebulizador. Ajustar el volumen basado en
la concentracin esperada de los analitos. La muestra est lista para su anlisis.

3 Preparacin de la muestra para la determinacin de metales totales por
digestin en parrilla de calentamiento y en vaso abierto en aguas naturales,
potables y residuales.

3.1 Homogeneizar perfectamente la muestra, verificando que no existan slidos
adheridos en el fondo del contenedor. Inmediatamente despus tomar una
alcuota de 50 mL a 100 mL dependiendo de la naturaleza de la muestra, y
transferir a un vaso de precipitados para digestin.

3.2 Aadir 3 mL de cido ntrico concentrado y calentar en una placa, evaporar,
cuidando que no hierva, hasta aproximadamente de 2 mL a 5 mL de muestra y
enfriar.

3.3 Adicionar 5 mL de cido ntrico concentrado, cubrir con un vidrio de reloj y
pasar nuevamente la muestra a la placa de calentamiento. Incrementar la
temperatura de calentamiento hasta que exista reflujo de vapores. Continuar
calentando y en caso de ser necesario, agregar mayor cantidad de cido ntrico
concentrado y continuar la digestin.
Cuando la digestin es completa (cuando la muestra tenga apariencia cristalina
constante) retirar la muestra y enfriar.
La digestin puede realizarse en placa trmica y en recipientes de tefln cerrados
usando como fuente de energa autoclave u horno de microondas.

NOTA.- Consultar el apndice normativo E.

3. 4 Por cada 100 mL de volumen de disolucin final adicionar 10 mL de cido
clorhdrico (1:1) y 15 mL de agua, calentar la muestra sin llegar a ebullicin por
espacio de 15 min para disolver precipitados o residuos resultantes de la
evaporacin y llevar al aforo correspondiente (de 50 mL a 100 mL).

Enfriar, lavar las paredes del vaso y vidrio de reloj con agua y filtrar para remover
el material insoluble que pueda tapar el nebulizador. Ajustar el volumen basado en
la concentracin esperada de los analitos. La muestra est lista para su anlisis.
Las concentraciones deben reportarse como metales totales.

Este procedimiento puede variar en la determinacin de arsnico, antimonio,
mercurio y selenio entre otros.

4 Anlisis por aspiracin directa.
4.1 Calibrar el espectrofotmetro de absorcin atmica de acuerdo a lo indicado
manual del fabricante.
4.2 Obtener una grfica con los valores de la curva de calibracin y realizar los
clculos cuantitativos. Analizar el lote de muestras.

4.3 Anlisis de metales en aguas a nivel de trazas por aspiracin directa puede
hacerse por extraccin con solvente (MIBK).

NOTA.- Consultar el apndice normativo F.

5 Anlisis por horno de grafito.
5.1 Calibrar el espectrofotmetro de absorcin atmica, con el aditamento horno
de grafito de acuerdo a lo indicado en el inciso 9.3.3 o manual del fabricante.
Inyectar la cantidad recomendada por el fabricante en el tubo de grafito del blanco
de reactivos y la disolucin de trabajo ms concentrada para optimizar el
programa del horno.

clculos cuantitativos.

5.3 Analizar el lote de muestras.

6 Anlisis por generador de hidruros.

En forma directa para aguas naturales y potables (transparentes) y/o despus
deprevia digestin para aguas residuales.
6.1 Calibrar el espectrofotmetro de absorcin atmica con el aditamento
generador de hidruros de acuerdo a lo indicado en el inciso 9.3.2. o manual del
fabricante.



7 Anlisis por vapor fro.
Para anlisis con cloruro estaoso
7.1 Calibrar el espectrofotmetro de absorcin atmica con el aditamento para
vapor fro

7.2 Estndares, blanco y muestras deben ser tratados con cido ntrico y cido
sulfrico en presencia de permanganato de potasio para oxidar todo el mercurio
presente a forma de Hg2+
El exceso de permanganato de potasio es reducido con cloruro de hidroxilamina.

El mercurio metlico se reduce con cloruro estanoso y el vapor atmico del
mercurio es llevado por medio del sistema aereador a la celda de absorcin para
ser detectado.
Para el anlisis con boro hidruro de sodio.
Los estndares, blanco y muestras, ms un oxidante se conectan al sistema de
vapor fro para ser detectados, ver manual de fabricante.

NOTA.- Consultar el apndice normativo G.



CLCULOS

1. Realizar las grficas de la curvas de calibracin de cada uno de los metales de
acuerdo a las concentraciones esperadas de la muestra.
2. Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin de la recta
que se obtiene de las curvas de calibracin para cada metal empleando la
siguiente ecuacin:
Ecuacin 1:

b mX Y

donde:

Y es la absorbancia de la muestra ya procesada;
m es la pendiente (coeficiente de absortividad), y
b es la ordenada al origen.
Despejar X que debe ser la concentracin de la muestra procesada y tomar en
cuenta los factores de dilucin que se realicen en cada uno de los metales segn
la tcnica utilizada, y se debe obtener la concentracin del metal en la muestra.

DETERMINACIN DE FSFORO TOTALEN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS NMX-AA-029-2001

OBJETIVO

Establece dos mtodos de anlisis para la determinacin de fsforo total en aguas
residuales, naturales y residuales tratadas.

REACTIVOS Y PATRONES
Generales

1. Fosfato monobsico de potasio anhidro (KH2PO4)
2. Disolucin madre de fosfato. Pesar aproximadamente y con precisin 219,5 mg
de fosato monobsico de potasio anhidro previamente secado a 105C durante
dos horas, aforar con agua a 1 L; 1,0 mL = 50,0 g de P como PO4
3. Fenolftalena
4. cido sulfrico concentrado (H2SO4)
5. Persulfato de amonio [(NH4)2S2O8] o persulfato de potasio (K2S2O8)
6. Hidrxido de sodio (NaOH)
7. Disolucin de cido fuerte. Cuidadosamente adicionar 300 mL de cido sulfrico
concentrado a aproximadamente 600 mL de agua. Dejar enfriar y agregar 4 mL
de cido ntrico concentrado y aforar a 1L con agua.

Mtodo cloruro estanoso

1. cido ntrico concentrado(HNO3)
2. Glicerol (C3H8O3)
3. Cloruro estanoso dihidratado (SnCl22H2O)
4. Heptamolibdato de amonio tetrahidratado [(NH4)6Mo7O244H2O]
5. Disolucin de cido fuerte: Cuidadosamente adicionar 300 mL de cido sulfrico
concentrado a aproximadamente 600 mL de agua. Dejar enfriar y agregar 4 mL de
cido ntrico concentrado y aforar a 1L con agua.
6. Disolucin de cloruro estanoso: Pesar aproximadamente y con precisin 2,5 g
de cloruro estanoso dihidratado y disolver en 100 mL de glicerol. Calentar en
bao de agua y agitar con una varilla de vidrio. El reactivo es estable y no requiere
de la adicin de conservadores o almacenamiento especial.
7. Disolucin de heptamolibdato de amonio tetrahidratado: Disolver 25 g de
heptamolibdato de amonio tetrahidratado en 75 mL de agua. Con mucho cuidado
agregar 280 mL de cido sulfrico a 400 mL de agua, enfriar y adicionar al
heptamolibdato de amonio tetrahidratado y diluir a 1 L.

4.3 Mtodo vanadomolibdofosfrico:

1. Carbn activado libre de fosfatos
2. cido clorhdrico concentrado (HCl)
3. Metavanadato de amonio (NH4VO3)
4. Hidrxido de sodio (NaOH)
5. cido clorhdrico (1:1). Agregar cuidadosamente 100 mL de cido clorhdrico
concentrado a 100 mL de agua, lentamente.
La concentracin del cido no es crtica para la determinacin, pero se
recomienda una
6. Disolucin A. Pesar aproximadamente y con precisin 25,0 g de heptamolibdato
de amonio), y diluir en 300 mL de agua.
7. Disolucin B. Pesar aproximadamente y con precisin 1,25 g de metavanadato
de amonio y diluir en 300 mL de agua destilada, calentar hasta ebullicin. Enfriar y
aadir 330 mL de cido clorhdrico concentrado. Dejar enfriar a temperatura
ambiente.
8. Disolucin reactivo vanado-molibdato: Adicionar la disolucin A a la disolucin
B, mezclar y aforar a 1 L.
9. Disolucin de hidrxido de sodio (1N). Pesar aproximadamente y con precisin
40 g de hidrxido de sodio y diluir con 500 mL de agua, agitar y dejar enfriar,
agregar ms agua y en cada ocasin agitar y dejar enfriar hasta que el volumen
final sea de 1 L.

Equipo

1. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.
2. Placa de calentamiento: Una superficie de 30 cm X 50 cm es adecuada.
3. Autoclave: Puede utilizarse un autoclave capaz de alcanzar de 98 kPa a
137 kPa en lugar de la placa de calentamiento.
4. Espectrofotmetro: Para utilizarse de 190 nm a 900 nm y equipado con celda de
1 cm de paso ptico de luz.

Materiales

Embudo de filtracin y papel filtro cualitativo Whatman 42 o equivalente.


1. Tomar un mnimo de 500 mL de muestra en envases de plstico. Pueden
utilizarse muestras compuestas o simples.
2. Si la muestra solamente es analizada para determinar la forma de fsforo
disuelto, filtrar la muestra inmediatamente despus de la colecta a travs de un
papel filtro de poro fino.
3. Conservar en refrigeracin a 4C.
4. El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.

PROCEDIMIENTO

Digestin de la muestra

Preparacin de la muestra por medio de la digestin con persulfato:

1. Usar 50 mL o la porcin adecuada de la muestra bien mezclada. Adicionar una
gota de fenolftalena. Si aparece un color rojo, adicionar gota a gota cido sulfrico
hasta que desaparezca el color. Posteriormente adicionar 1 mL de disolucin de
cido fuerte y 0,4 g de persulfato de amonio o 0,5 g persulfato de potasio.

2. Calentar hasta que rompa la ebullicin y mantenerla sobre la placa de
calentamiento, por 30 min o 40 min o hasta que el volumen final alcanzado sea de
10 mL. Los compuestos organofosforados pueden requerir de 1,5 h a 2 h para su
digestin completa. Enfriar, diluir a 30 mL con agua, adicionar una gota de
fenolftalena, y neutralizar hasta desvanecer a un color rosa plido con la
disolucin de hidrxido de sodio. Alternativamente, calentar por 30 min en un
autoclave u olla de presin de 98 kPa a 137 kPa. Enfriar, aadir una gota de
fenolftalena y neutralizar hasta desvanecer a un color rosa plido con la
disolucin de hidrxido de sodio. Aforar a 100 mL con agua destilada. En algunas
muestras puede formarse un precipitado en esta fase, pero no se debe filtrar.
Mezclar bien para cualquier subdivisin de la muestra. El precipitado
(posiblemente de fosfato de calcio se redisuelve bajo condiciones cidas de la
prueba colorimtrica para determinar fsforo.

Mtodo cloruro estanoso

1 Ajustar el pH de la muestra. A 100 mL de muestra que contenga no ms de 200
g P y libre de color y turbidez adicionar 1 gota de fenolftalena. Si la disolucin
tiene un color rosado, adicionar unas cuantas gotas de disolucin de cido fuerte
para neutralizar.

2 Desarrollo del color en la muestra. Adicionar, agitando fuertemente despus de
cada adicin, 4,0 mL de disolucin de heptamolibdato de amonio tetrahidratado y
0,5 mL (10 gotas) de disolucin de cloruro estanoso. La intensidad del color
depende de la temperatura ambiente de la disolucin final, incrementndose sta
alrededor de 1 % por cada grado centigrado ms de temperatura ambiente. Por lo
que es importante realizar las mediciones a la misma temperatura.

3. Medicin de color. El tiempo en el cual se realiza la medicin es importante
para tener un buen resultado, la medicin debe de efectuarse despus de 10 min
de haber desarrollado el color, pero antes de 12 min, utilizar el mismo intervalo de
tiempo para todas las mediciones, medir la intensidad de color
espectrofotomtricamente a 690 nm y comparar contra la curva de calibracin,
utilizar como blanco agua.

NOTA.- Es necesario tener un blanco de agua y un blanco de reactivos. Debido a
que el color se desarrolla primero de manera progresiva y posteriormente se
desvanece, mantener siempre condiciones iguales de tiempos de desarrollo de
color y medicin para muestras y estndares. Preparar al menos un estndar por
cada lote de muestras o una cada da que se realiza la prueba. La curva de
calibracin es lineal en un intervalo de concentraciones de 0,3 mg/L a 2,0 mg/L.

3 Mtodo cido vanadomolibdofosfrico

1. Ajustar el pH de la muestra. Si la muestra tiene un pH mayor a 10, adicionar una
gota de fenolftalena a 50,0 mL de la muestra y despus eliminar el color rosa con
una disolucin de cido clorhdrico (1:1), antes de diluir a 100 mL.

2. Remocin del color de las muestras. Remover el exceso de color en las
muestras por medio de la adicin de 200 mg de carbn activado a una muestra de
50 mL en un matraz Erlenmeyer y agitar por 5 min, posteriormente filtrar para
remover el carbn activado. Comprobar los fosfatos de cada lote de carbn
activado.
3. Desarrollo del color en la muestra. Tomar una alcuota que contenga de 0,05
mg a 1,0 mg de fsforo, en un matraz volumtrico de 50 mL. Aadir 10 mL de la
disolucin reactivo vanado-molibdato y diluir hasta la marca con agua. Preparar un
blanco usando una cantidad de agua equivalente a la alcuota de la muestra.
Despus de 10 min o ms, medir la absorbancia de una muestra contra un blanco
a una longitud de onda de 400 nm a 490 nm, dependiendo de la sensibilidad
deseada. Los intervalos de concentracin para diferentes longitudes de onda son:

TABLA 1.- Longitud de onda

El color es estable por das y su intensidad no se ve afectada por las variaciones
de la temperatura ambiente.

CLCULOS

1. Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin obtenida de la
curva de calibracin y que es representada por la siguiente ecuacin:

b mX Y

donde:
m es la pendiente;
b es la ordenada al origen;
Y es la absorbancia, y
X es la concentracin (mg P/L).

2. En caso de haber dilucin de la muestra a lo largo del desarrollo del mtodo
(digestin y alcuota de muestra), utilizar la siguiente ecuacin:
mg P/L = concentracin x Factor de dilucin
3. Reportar los resultados en mg P/L con dos dcimas, con la precisin
correspondiente.

ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE CLORO TOTAL MTODO
IODOMTRICO NMX-AA-100-SCFI-2008


Esta norma mexicana especifica un mtodo de tipo volumtrico para la
determinacin del cloro total en agua.
El mtodo es aplicable a concentraciones, expresadas en cloro (Cl2),
comprendidas entre de 0.71 mg/L a 15 mg/L.

REACTIVOS
Durante el anlisis, se deben utilizar reactivos de calidad analtica y el agua
especificada en el apartado.

1. Agua, exenta de cloro y de sustancias reductoras.
2. Ioduro de potasio (KI), cristales.
3. cido fosfrico, disolucin, c (H3PO4) 0.87 mol/L.
Se disuelven en agua 64 mL de cido fosfrico ( = 1.69 g/mL), se deja enfriar y
se afora a 1 000 mL.
4. Iodato de potasio, disolucin patrn de referencia, c (1/6 KIO3) = 10 mmol/L.
Se pesan, con una precisin de 1 mg, 0,360 g de iodato de potasio seco. Se
disuelven en agua y se afora a 1 000 mL en un matraz aforado.
5. Tiosulfato de sodio, disolucin valorada, c (Na2S2O3 .5H2O) 10 mmol/L.
5.1. Preparacin. Se disuelven aproximadamente 2,48 g de tiosulfato de sodio en
aproximadamente 250 mL de agua y se afora en un matraz aforado de 1 000 mL.
5.2. Valoracin. Se valora la disolucin diariamente o inmediatamente antes de
usarse de la manera siguiente:
Tomar 200 mL de agua en un matraz Erlenmeyer de 500 mL. Se aade
aproximadamente 1 g de ioduro de potasio y se agregan por medio de una pipeta,
10.0 mL de disolucin de tiosulfato de sodio. Para su valoracin, se adicionan 2
mL de cido fosfrico y 1 mL de disolucin de almidn. Se titula inmediatamente
con la disolucin patrn de referencia de iodato de potasio hasta la aparicin de un
color azul que persista durante al menos 30 s. Se anota el volumen de iodato
consumido.
La concentracin obtenida, c1, expresada en milimoles por litro, de la disolucin
de tiosulfato de sodio, que viene dada por la ecuacin:

Donde
C2 es la concentracin, expresada en milimoles por litro, de la disolucin patrn de
referencia de iodato de potasio, [c (1/6 KIO3) = 10 mmol/L];
V1 es el volumen, en mililitros, de la disolucin de tiosulfato de sodio utilizado para
la valoracin (V1 = 10 mL)
V2 es el volumen, en mililitros, de la disolucin patrn de iodato de referencia
utilizado en la valoracin.
6. Almidn, disolucin de 5 g/L o indicador comercial de concentracin similar.
Disolver 0,5 g de almidn agregndolo lentamente y con agitacin en 100 mL de
agua hirviendo, Preservar con 125 mg de acido saliclico, 400 mg de cloruro de
zinc o una combinacin de 400 mg de propionato de sodio y 200 mg de azida de
sodio.

EQUIPOS Y MATERIALES
Material de uso habitual en laboratorios y
Bureta, provista de punta fina que permita la dosificacin de aproximadamente 30
gotas/mL, capaz de medir hasta 25 mL y graduada en divisiones de 0.1 mL.

MUESTRAS Y MUESTREO
Mantener las muestras almacenadas en la oscuridad.

PROCEDIMIENTO
1. Volumen de muestra
Se inicia la determinacin inmediatamente despus de la toma de muestras. En
todo momento debe evitarse la exposicin a la luz, la agitacin y el calor.
Se toma un volumen de muestra no superior a 200 mL y que contengan no ms de
0.21 mmol/L (15 mg/L) de cloro total. Si la concentracin de cloro total que se
espera sobrepasa este valor, se diluye la muestra con agua y se toma una porcin
de muestra cuyo volumen no exceda los 200 mL.

2. Determinacin
Se introduce la muestra (1) en un matraz Erlenmeyer de 500 mL. Se adicionan, en
este orden, aproximadamente 1 g de ioduro de potasio, 2 mL de cido fosfrico y,
con ayuda de una pipeta, 10,0 mL (V4) de la disolucin patrn valorada de
tiosulfato de sodio y a continuacin 1 mL de la disolucin de almidn.
PRECAUCION - Debe observarse estrictamente el orden en el que se aaden los
reactivos, de lo contrario pueden producirse reacciones no estequiomtricas del
hipoclorito con el tiosulfato de sodio.
Se valora inmediatamente con la disolucin patrn de referencia de iodato de
potasio hasta la aparicin de un color azul que persista al menos durante 30 s. Se
anota el volumen (V3) de disolucin de iodato de potasio consumido.
EXPRESIN DE RESULTADOS

1. Mtodo de clculo
La concentracin de cloro total, c (Cl2), expresada en milimoles por litro, viene
dada por la ecuacin
(

c1, es la concentracin obtenida de la disolucin patrn valorada de tiosulfato de
sodio, expresada en milimoles por litro;
c2 viene definida en el apartado 5.2;
V0 es el volumen de la muestra, en mililitros, antes de la dilucin (si la hubo);
V3 es el volumen, en mililitros, de la disolucin patrn de referencia de iodato de
potasio utilizado en la valoracin;
V4 es el volumen, en mililitros, de la disolucin patrn valorada de tiosulfato de
sodio utilizado en la valoracin efectuada conforme a 8.2 (V4 = 10 mL).

La concentracin en cantidad de materia puede convertirse en concentracin
msica, (Cl2), expresada en miligramos por litro, por medio de la ecuacin:
Donde
(
) (
)

M es la masa molecular, expresada en gramos por mol, del cloro (M = 70.91
g/mol).

CALIDAD DEL AGUA DETERMINACION DEL NUMERO MAS
PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES
FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA,
(NMX-AA-042-1987)

El mtodo se basa en la inoculacin de alcuotas de la muestra, diluida o sin diluir,
en una serie de tubos de un medio de cultivo lquido conteniendo lactosa. Los
tubos se examinan a las 24 y 48 horas de incubacin de 35 o 37C. Cada uno de
los que muestran turbidez con produccin de gas se resiembra en un medio
confirmativo ms selectivo y, cuando se busca E. coli presuntiva, en un medio en
el que se pueda demostrar la produccin de indel.

Mediante tablas estadsticas se lleva acabo l clculo del nmero ms probable
(NMP) de organismos coliformes, organismos coliformes termo tolerantes y E.
Coli que pueda estar presente en 100 cm
3
de muestra, a partir de los nmeros de
los tubos que dan resultados confirmativos positivos.

PRESERVACIN DE LA MUESTRA.

El anlisis bacteriolgico de la muestra debe practicarse inmediatamente despus
de su recoleccin. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse as el
anlisis, se inicie dentro de las dos horas prximas a la recoleccin de la muestra
y en ningn caso, este lapso debe exceder de 24 horas para agua potable y de 6
horas para otros tipos de agua para que sea vlido el resultado del anlisis.
Durante el perodo que transcurra del muestreo al anlisis, se debe conservar la
muestra a 4C, con objeto de inhibir la actividad bacteriana para no obtener
resultados falsos o dudosos.

APARATOS Y EQUIPO

Aparte de los equipos que se suministran estriles, el material de vidrio y el resto
del equipo deben esterilizarse.

Incubadora capaz de mantener una temperatura de 35 + 1C o 37 1C y 44
0.5C.

Estufa capaz de mantener una temperatura de 180 a 200C.

Autoclave u olla de presin o con manmetro.

Potencimetro.

Balanza analtica con sensibilidad de 0.0001 g.

Pipetas serolgicas.
Pipeteros de aluminio o acero inoxidable; se pueden sustituir con papel aluminio o
papel Kraft.

Tubos de ensaye de cristal refractario de 15mm x 150 mm con tapn de baquelita,
aluminio o algodn.

Frascos muestreadores, de vidrio resistente o cristal refractario de 125 cm con
tapn de cristal esmerilado.

Tubos de fermentacin (Durham).

Asas de inoculacin.

Material comn de laboratorio.

REACTIVOS.

Los reactivos que a continuacin se mencionan, deben ser grado analtico a
menos que se indique otra cosa. Cuando se especifique el uso de agua se debe
entender agua destilada in-vitro o agua des-ionizada libre de sustancias que
pueden inhibir el crecimiento bacteriano en las condiciones de prueba.

Caldo lauriltriptosa (medio selectivo)
Debido a que se trata de un medio de doble concentracin, se debern aadir 71.2
g del polvo del medio en un litro de agua , procediendo despus a esterilizar una
vez distribuido el medio en tubos.
Caldo de lactosa
Debido a que se trata de un medio de doble concentracin, se debern aadir 26 g
del polvo del medio en un litro de agua, procediendo despus a esterilizar una vez
distribuido el medio en tubos.
Caldo lactosa verde bilis brillante (medio confirmativo)
Se debern aadir 40 g del polvo del medio en un litro de agua, procediendo
despus a esterilizar una vez distribuido 10 ml del medio en tubos.
Medio EC
Se debern aadir 37 g del polvo del medio en un litro de agua, procediendo
despus a esterilizar una vez distribuido 10 ml del medio en tubos.
Agua de triptona:

Triptona 20.0g
Cloruro de sodio (NaCl) 5.0g
Agua para llevar a 1 L

Disolver los componentes en agua y ajustar a pH. 7.5 distribuir en volmenes de
5ml
Y colocar en autoclave a 115C durante 10 min.

Reactivo de Kovacs para indol:
Reactivo de oxidasa para la prueba de oxidasa:

Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina 0.1g para10 ml
Este reactivo no es estable y debe prepararse para usarse en pequeas
cantidades cada vez que sea necesario.
Solucin amortiguadora de fosfato:
Fosfato monobsico de potasio (KH
2
PO
4
)0.0425g
Cloruro de magnesio(MgCl
2
) 0.19 g
Agua para llevar a 1 L
PREPARACIN DEL MATERIAL.
Para la preparacin de los reactivos, las condiciones de esterilizacin deben ser 121C
y 0.098066 Mpa (1 kg/cm) de presin manomtrica durante 15 minutos. Los tubos de
fermentacin (Durham) no deben contener burbujas de aire despus de la
esterilizacin.
PROCEDIMIENTO

Pruebas presuntivas.

Preparacin de la muestra e inoculacin del medio en uno de los medios
selectivos.

Antes del examen, mezclar perfectamente la muestra agitndola vigorosamente
para lograr una distribucin uniforme de los microorganismos y, dependiendo de la
naturaleza del agua y el contenido bacteriano esperado, hacer las diluciones
necesarias en esta etapa.

Utilizar series que constan de por lo menos tres diluciones: 10 ml, 1ml bien1ml
y 0.01ml
.
Por cada dilucin debe haber 3 5 tubos. Inocular con un volumen mnimo de 5 ml
de muestra.

Incubar los tubos inoculados de 35Ca 38C durante 48horas.
Examen de los tubos
Examinar los cultivos de los tubos despus de un perodo de incubacin de 18 a 24
horas y considerar como resultados positivos a aquellos que muestren turbidez debida
al crecimiento bacteriano y formacin de gas en los tubos internos invertidos
(Durham) junto con produccin de cido si el medio de aislamiento contiene un
indicador de pH. Reincubar aquellos tubos que no muestran alguno o todos estos
cambios y examinarlos nuevamente para detectar reaccionan positivas a las 48 horas.
Pruebas confirmativas.
Resembrar a partir de cada tubo de medio de aislamiento que muestro un resultado
positivo en uno o ms tubos de medio confirmativo para detectar la produccin de gas
e indol.
Para confirmar la presencia de organismos coliformes, incubar un tubo de positivo de
Caldo
Lactosa Verde Brillante o Caldo EC a 37C y examinarlo para ver si hay produccin
de gas dentro de un perodo de 48 horas.
Para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes, incubar otro
tubo con Caldo Bilis Lactosa Verde Brillante o Caldo EC a 44C durante 24horas para
ver si hay produccin de gas.
Para confirmar la presencia de E. coli. Presuntiva, incubar un tubo con agua detriptona
para detectar la formacin de indol a 44C durante 24 horas. Despus aadir de 0.2 a
0.3 ml de reactivo de Kovacs.
El desarrollo de un anillo de color rojo despus de agitar suavemente denota la
presencia de indol.
NOTA: La deteccin de E. coli presuntiva se considera una evidencia satisfactoria de
contaminacin fecal. Sin embargo, pueden efectuarse mayores pruebas para la
confirmacin de E. coli si se considera necesario.
Prueba de oxidasa
Llevar a cabo la prueba con subcultivos puros de los organismos fermentadores
de lactosa, crecidos en medio de agar nutritivo considerar concentracin sencilla y
simple, como sigue:

-Colocar de 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa recientemente preparado en un
papel filtro estril en una caja de Petri.

-Con una varilla de vidrio colocar parte del cultivo en el papel filtro preparado.

-Considerar la aparicin de color azul marino purpreo en un lapso de 10
segundos como una reaccin positiva.

CALCULOS

A partir del nmero de tubos que dan reacciones positivas en los medios de
aislamiento y confirmativo, calcular por referencia a las tablas estadsticas (ver
tabla) el nmero ms probable de organismos coliformes, organismos coliformes
termo tolerantes y E. coli presuntiva en 100 cm
3
de la muestra. Cuando se
emplean de dilucin para hacerlo equivalente.

En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear
para los clculos la siguiente ecuacin:

Indice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados
positivos y negativos cuando se usan: 3 tubos con porciones de 1 cm3 y 3 con
porciones de 0.1 cm3.

REPORTE DE LA PRUEBA

El reporte de la prueba debe hacer referencia a esta norma y dar toda la
informacin
relevante, incluyendo

a.. Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra.

b. La tcnica y medio de cultivo empleados.

c. El tiempo, temperatura y condiciones de la incubacin.

d. Cualquier suceso particular observado en el curso del anlisis y cualquier
operacin
no especificada en el mtodo o considerada opcional que pueda haber influido en
los resultados.

NMX-AA-005-SCFI-2013
ANLISIS DE AGUA MEDICIN DE GRASAS Y ACEITES
RECUPERABLES EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y
RESIDUALES TRATADAS

Este mtodo se basa en la adsorcin de grasas y aceites en tierra de diatomeas,
los cuales son extrados en un Soxhlet empleando hexano como disolvente. Una
vez terminada la extraccin se evapora el hexano y se pesa el residuo que ha
quedado en el recipiente; siendo este valor el contenido de grasas y aceites.


Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a
menos que se indique otro grado.

Cuando se indique agua debe entenderse agua que cumpla con las siguientes
caractersticas: a) resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 mnimo; b) Conductividad,
S/cm a 25C: 5,0 mximo y c) pH: 5,0 a 8,0.

- cido Clorhdrico concentrado(HCl);
- Hexano (C6H14);
- cido Sulfrico concentrado (H2SO4);
- Suspensin de tierra de diatomeas-slice o tierra Slice de aproximadamente
10 g/L de agua;
- cido Clorhdrico (1:1): Mezclar volmenes iguales de Acido Clorhdrico
concentrado y agua.
- Acido Sulfrico (1:1): Mezclar volmenes iguales de Acido Sulfrico concentrado
y agua,
- Aceite de referencia: Pesar aproximadamente y con precisin la cantidad
requerida de una mezcla de aceite de referencia (mezcla de mineral SAE20 y
vegetal mixto) acorde a la cantidad esperada de grasas y aceites en la muestra y
agregar la mezcla a 1 L de agua.

MATERIALES

- Cartuchos de extraccin de celulosa para Soxhlet;
- Papel filtro con tamao de poro fino;
- Embudo Bchner, y Desecador.

EQUIPO

- Equipo de extraccin Soxhlet;
- Bomba de vaco u otra fuente de vaco;
- Estufa elctrica capaz de mantener 103C;
- Estufa elctrica de vaco capaz de mantener 80C;
- Balanza analtica con precisin de 0,1 mg, y
- Equipo de filtracin a vaco.


De la superficie del cuerpo de agua colectar un volumen de aproximadamente 1 L
de muestra en un frasco de vidrio de boca ancha y tapa de cubierta de
politetrafluoroetileno, poliamida, PVC polietileno o metlica. Ya que pueden ocurrir
prdidas de grasas y aceites por el equipo de muestreo, no se permite la colecta
de una muestra compuesta.

Dado que la muestra entera se ocupa en esta prueba, no se pueden tomar
alcuotas de la muestra para realizar otro tipo de anlisis.

En caso de existir la presencia de aceites emulsionados en el agua a muestrear, la
muestra se toma de 20 cm a 30 cm de profundidad, cuando no haya mucha
turbulencia para asegurar una mayor representatividad.

La muestra debe preservarse por acidificacin con cido clorhdrico 1:1 a un valor
de pH menor a 2 y refrigerarlas a 4C.El tiempo mximo de almacenamiento
previo al anlisis es de 28 das.

PROCEDIMIENTO

Medir el pH de las muestras el cual debe ser menor de 2, si no tiene este valor
acidifique con cido clorhdrico 1:1 cido sulfrico 1:1.

Para muestras con un pH menor de 8 unidades generalmente es suficiente con
adicionar 5 ml de cido clorhdrico 1:1 2 mL de cido sulfrico 1:1.

Preparar los matraces de extraccin introducindolos a la estufa a una
temperatura de 103C - 105C a peso constante, enfriar en desecador y pesarlos.

Preparar el material filtrante colocando un papel filtro en el embudo Bchner,
colocar el embudo en un matraz Kitazato y agregar 100 mL de la suspensin de
tierra de diatomeas-slice sobre el filtro, aplicar vaco y lavar con 100 mL de agua.

Transferir el total de la muestra acidificada al embudo Bchner preparado
aplicando vaco hasta que cese el paso de agua. Medir el volumen de la muestra.

Con ayuda de unas pinzas, transferir el material filtrante a un cartucho de
extraccin.

Limpiar las paredes internas del embudo y el frasco contenedor de la muestra, as
como la parte interna de la tapa del frasco con trozos de papel filtro previamente
impregnados de disolvente (hexano) tener cuidado en remover la pelcula de grasa
y los slidos impregnados sobre las paredes; colocar los trozos de papel en el
mismo cartucho.

Secar el cartucho en una estufa a 103C - 105C por un perodo de 30 min.
Transcurrido este perodo colocar en el equipo Soxhlet.

Adicionar el volumen adecuado de hexano al matraz de extraccin previamente
puesto a peso constante y preparar el equipo Soxhlet. Evitar tocar con las manos
el cartucho y el matraz de extraccin, para ello utilizar pinzas guantes de ltex.

Colocar el equipo de extraccin sobre la parrilla de calentamiento, controlar la
temperatura del reflujo y extraer a una velocidad de 20 ciclos/hora durante un
perodo de 4 h.

Una vez terminada la extraccin retirar el matraz del equipo Soxhlet, y evaporar el
disolvente.

El matraz de extraccin libre de disolvente se coloca en el desecador hasta que
alcance la temperatura ambiente.

Pesar el matraz de extraccin y determinar la concentracin de grasas y aceites
recuperables.

Analizar un blanco de reactivo bajo las mismas condiciones de la muestra.

CLCULOS

Calcular las grasas y aceites recuperables (G y A) en la muestra usando la
siguiente ecuacin:

G y A (mg/L)= (A - B) / V

Donde:

A es el peso final del matraz de extraccin (mg);
B es el peso inicial del matraz de extraccin (mg), y
V es el volumen de la muestra, en litros.

Restar al resultado obtenido de la muestra el valor del blanco de reactivo.

Reportar los resultados del anlisis en mg/L.

ANLISIS DE AGUA MEDICIN DEL NMERO DE
HUEVOS DE HELMINTO EN AGUAS RESIDUALES Y
RESIDUALES TRATADAS POR OBSERVACIN
MICROSCPICA

Esta norma mexicana establece el mtodo para la deteccin y enumeracin de
huevos de helminto en aguas residuales y lodos, con el fin de evaluar la calidad
del agua y la eficiencia de los sistemas de tratamiento de la misma.

Esta norma mexicana es aplicable para la evaluacin de la calidad del agua
residual cruda y tratada.

MUESTREO

El muestreo constituye una parte integral y fundamental de cualquier programa de
evaluacin de la calidad del agua, por lo cual, ste debe efectuarse como se
menciona a continuacin y de acuerdo a lo establecido en las normas mexicanas .

Preparar garrafones de plstico inerte de 8 L, previamente desinfectados con
hipoclorito de sodio al 10 % (NaClO).

Lavarlos con agua potable a chorro y enjuagarlos varias veces con agua
destilada.

Se toman muestras de 5 L (volumen total), en estos garrafones de plstico inerte,
los cuales deben ser cerrados y sellados.

REACTIVOS Y MATERIALES

Reactivos (grado analtico)

- cido sulfrico (H2SO4);
- Alcohol etlico (C2H5OH);
- Agua destilada;
- Cloruro de sodio (NaCl);
- ter etlico;
- Formaldehdo al 4 %;
- Hipoclorito de sodio (NaClO) o de calcio aproximadamente al 6 % (no aplica
grado analtico), y
- Sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO).4.7H2O

Materiales

- Aplicadores de madera;
- Barras magnticas;
- Bulbo de goma;
- Esptula;
- Garrafones de plstico inerte con paredes lisas y transparentes de 5 L
decapacidad;
- Gradillas para tubos de centrfuga de 50 ml;
- Guantes de ltex;
- Mascarilla contra gases y vapores;
- Matraz Kitazato;
- Pipetas de 10 ml de plstico;
- Probetas graduadas de 50 ml y de 1 000 ml;
- Recipientes de plstico inerte con paredes lisas y transparentes de 1 000 ml a
2 000 ml de capacidad;
- Tamiz de 150-170 m de poro;
- Tubos de centrfuga de 200 ml, 450 ml o de mayor volumen segn sea la
capacidad mxima de la centrfuga;
- Vasos de precipitados de 1 000 ml.
- celda de Sedgwich-Rafter o cmara de conteo de Doncaster o
cmara de Neubauer o alguna cmara de conteo celular
equivalente, y
- densmetro (hidrmetro), con intervalo de medicin de 1,0 g/mL a
1,4 g/mL; o picnmetro.

APARATOS

- Agitador de tubos, con control de velocidad y adaptable a diversos tubos;
- Balanza granataria;
- Balanza analtica;
- Bomba de vaco con control de velocidad de succin;
- Campana de extraccin;;
- Centrfuga. Capaz de mantener los intervalos de operacin de 1 000 r/min a
3 000 r/min o su equivalente eng;
- Incubadora;
- Microscopio ptico. Equipado para hacer iluminacin campo claro (Kheler),
con
aumento de 10 a 100x y platina mvil (opcional);
- Parrilla con agitacin magntica, y
- Refrigerador.

PREPARACIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA

Preparar los garrafones desinfectados previamente con una de hipoclorito de
sodio o de calcio comercial aproximadamente al 6 % (NaClO Ca(ClO)2).
Lavar los garrafones de plstico rgido con agua y enjuagarlos varias veces con
agua destilada.
Se toman muestras de aproximadamente 5 L, en estos garrafones, los cuales
deben tener tapa hermtica.
Las muestras deben mantenerse a una temperatura de 4C 2C hasta su llegada
al laboratorio.
La muestra debe procesarse dentro de las 48 h despus de su toma, o en caso
contrario, debe fijarse con 10 ml de formaldehdo al 4 %, o bien, preservarse en
refrigeracin para realizar su anlisis antes de 2 meses.

PROCEDIMIENTO

Preparacin de soluciones

Disolucin de sulfato de zinc (ZnSO) 4 con gravedad especfica de 1,3
Disolver 800 g de sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO4.7HO) en 1 000 ml de
agua destilada; mezclar en la parrilla magntica hasta homogeneizar totalmente.
Medir la
densidad con el densmetro. Ajustar la densidad a 1,3 agregando sulfato de zinc o
agua destilada, segn sea el caso.

Disolucin de alcohol-cido.
Homogeneizar 650 ml de cido sulfrico (H2SO4) 0,1 N, con 350 ml de alcohol
etlico. Almacenar la solucin en un recipiente hermtico.

Durante el procesado de la muestra se debe utilizar lentes de seguridad,
guantes de ltex y cubre boca para evitar cualquier riesgo de infeccin.

Se debe lavar y desinfectar el rea de trabajo, as como el material utilizado
por el analista, antes y despus del ensayo.

Cuando se efecte la agitacin de las soluciones con ter, sta se debe realizar en
sitios ventilados o dentro de la campana de extraccin, y considerar su
inflamabilidad. Evitar el contacto con los ojos, piel o ropa, ya que es un reactivo
sumamente txico.

Concentracin y separacin de los huevos de helminto

La recuperacin de los huevos de helminto de la muestra se debe realizar
efectuando
los siguientes pasos:

a) Dejar reposar la muestra al menos 3 h o toda la noche o centrifugar a 400 g de
3 min a 5 min.

b) Aspirar por vaco o por decantacin lenta sin agitar cuidando siempre la
integridad del sedimento, desechar el sobrenadante.
Filtrar el sedimento en el tamiz de 150-170 m de poro.
Lavar el tamiz con 5 L de agua (potable o destilada), y recuperar el agua de
lavado junto con el sedimento filtrado.

c) Colocar el filtrado y el agua de enjuague en el garrafn donde originalmente se
encontraba la muestra o en los recipientes utilizados en la centrifugacin.

d) Dejar reposar la muestra al menos 3 h o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min.
e) Aspirar con cuidado el sobrenadante al mximo y desecharlo.
Depositar el sedimento en los recipientes para la centrfuga.
Enjuagar 3 veces el garrafn perfectamente con poca agua potable o destilada, y
colocar en los recipientes para centrifugacin.

f) Centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min.

g) Decantar nuevamente el sobrenadante por vaco. Asegurarse que en el fondo
del recipiente exista el paquete slido; en caso contrario, centrifugar nuevamente.
Resuspender el paquete en 150 ml de la solucin de sulfato de zinc (ZnSO4).
Homogeneizar el paquete con el agitador de tubos o con un aplicador de madera.

h) Centrifugar a 1000 g de 3 min a 5 min, y recuperar el sobrenadante
vertindolo en un recipiente de plstico de 2 000 ml.
Diluir cuando menos en 1 000 ml de agua destilada, y dejar sedimentar al
menos 3 h, o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min.

i) Decantar o aspirar por vaco con cuidado todo el sobrenadante, y resuspender
el paquete slido por agitacin, utilizando poca agua destilada.
Verter la suspensin resultante en un tubo de centrfuga de 200 ml, incluyendo el
agua de enjuague del recipiente y centrifugar a 400 g durante 3 min.

j) Decantar o aspirar por vacio el sobrenadante y resuspender el paquete slido
con agua destilada en un tubo de 50 ml y centrifugar a 480 g durante 3 min.

k) Decantar o aspirar por vacio el sobrenadante por vaco y resuspender el
paquete slido en 15 ml de la solucin de alcohol-cido por medio de un agitador
de tubos, y agregar 10 ml de acetato de etilo.
Agitar suavemente y de vez en cuando destapar cuidadosamente los tubos para
dejar escapar el gas que se desprenda. Por seguridad realizar en sitios ventilados
utilizando la mascarilla o en la campana de extraccin.
Centrifugar una ltima vez a 660g durante 3 min.

m) Aspirar el sobrenadante, dejando menos de 1 ml del mismo y evitando la
prdida del paquete slido; homogeneizar el paquete, y proceder a la
cuantificacin. Por seguridad realizar en sitios ventilados utilizando la mascarilla o
en la campana de extraccin.

Cuantificacin de los huevos de helminto
a) Para evitar la superposicin de las estructuras y de residuos no eliminados,
repartir la muestra en volmenes de 0,1 ml a 1,0 ml, con el fin de facilitar la
lectura.

b) Distribuir cada uno en una celda de Sedgwich-Rafter, o bien, en una cmara de
conteo de Doncaster o cmara Neubauer.

c) Identificar visualmente una a una las estructuras, anotando los generos
identificadas con ayuda de la figura 1.

EXPRESIN DE RESULTADOS

Clculos

Para determinar las revoluciones por minuto (rev/min) de la centrifuga, se utiliza la
frmula siguiente:

donde:

g es la fuerza relativa de la centrifugacin;
K es laconstante cuyo valor es 89,456, y
r es el radio de la centrifuga en centmetros (cm).

La frmula para calcular
ges la siguiente:

()

Expresar el resultado en nmero de huevecillos por litro, tomando en
consideracin la expresin en clculos, o bien expresar el nmero de huevos
contados y el volumen analizado:

donde:

H es el nmero de huevos ledos en la muestra;
HL es el nmero de huevos por litro, y
5 es el volumen de la muestra.

Interferencias

La sobreposicin de estructuras y/o detritus no eliminado en el sedimento, puede
dificultar su lectura. En tal caso, es importante dividir el volumen en las alcuotas
que se consideren necesarias. La falta de experiencia en la identificacin de
especies es tambin un elemento decisivo en el conteo y sobreconteo.

FIGURA 1.- Especies de huevos de helminto

INFORME DE LA PRUEBA

El informe de la prueba debe incluir lo siguiente:
- Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra;
- Los resultados, expresados de acuerdo con lo establecido en el punto 10, y
- Cualquier suceso particular observado durante el curso del anlisis, as como
cualquier operacin no especificada en el mtodo, o considerada opcional, que
pueda haber influido en los resultados.

Materia Flotante
Todo aquel material que quede retenido en una malla entre 2,8 mm y 3,3 mm.de
abertura.
RECOLECCIN DE MUESTRAS

Debe tomarse un mnimo de 3 L de muestra, la cual debe ser simple y tomada
directamente de la descarga. El procedimiento debe realizarse en campo, la
muestra no debe preservarse.

MATERIALES

- Malla de acero inoxidable con abertura entre 2,8 mm y 3,3 mm;
- Recipiente de boca ancha no menor de 7 cm de dimetro, con un volumen que se
encuentre entre 3 L y 5 L;
- Agitador de vidrio con gendarme, y
- Esptula.
PROCEDIMIENTO
Verter aproximadamente 3/4 partes de la muestra a travs de la malla, teniendo cuidado
de que la materia flotante que sobrenada, quede retenida en dicha malla.
Arrastrar con agitador de vidrio una esptula hacia la malla toda aquella materia flotante
que quedara sobre la superficie de la muestra que se est vertiendo o aquella adherida a
las paredes del recipiente.
Interpretacin
Inmediatamente despus de filtrar la muestra, se procede al examen de la malla.
El informe depende de la presencia o ausencia de materia flotante retenida en la malla.
Reportar como ausencia de materia flotante, si al examinar la malla no se observa a
simple vista ninguna partcula retenida. Reportar como presencia de materia flotante, si al
revisar visualmente la malla se encuentran partculas retenidas.

DETERMINACIN DE MATERIA FLOTANTE EN AGUAS
RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS.
DETERMINACIN DE LA DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO
EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES (DBO) Y RESIDUALES
TRATADAS


Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de la
demanda bioqumica de oxgeno (DBO) en aguas naturales, residuales y
residuales tratadas.

NOTA. Se determina la cantidad de oxgeno utilizada por una poblacin
microbiana heterognea para transformar la materia orgnica, en un periodo de
incubacin de 5 das a 20C.


Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a
menos que se indique otro grado.

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.;
b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.

Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4)
Fosfato dibsico de potasio (K2HPO)
Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na4O)
Cloruro de amonio (NHCl)4
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO)
Cloruro de calcio anhidro (CaCl)
Cloruro frrico hexahidratado (FeCl2)
cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
)
Hidrxido de sodio (NaOH)
Sulfito de sodio (Na2SO)
2-cloro-6 (triclorometil) piridina
Glucosa grado patrn primario
cido glutmico grado patrn primario
cido clorhdrico (HCl)
Acido ntrico (HNO
3
)

Disolucin amortiguadora de fosfato.
Pesar aproximadamente 8,5 g de fosfato monobsico de potasio, 21,75 g de
fosfato dibsico de potasio, 33,4 g de sosfato dibsico de sodio heptahidratado y
1,7 g de cloruro de amonio , disolver en 500 mL de agua y aforar a 1 L. El pH de la
disolucin debe ser de 7,2. Desechar el reactivo (o cualquiera de los siguientes
reactivos) si hay algn signo de crecimiento biolgico en el frasco de
almacenamiento.

Disolucin de sulfato de magnesio
Pesar aproximadamente 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado , disolver
en agua y diluir a 1 L.

Disolucin de cloruro de calcio.
Pesar aproximadamente 27,5 g de cloruro de calcio anhidro, disolver en agua y
diluir a 1 L.

Disolucin de cloruro frrico.
Pesar aproximadamente 0,25 g de cloruro frrico hexahidratado, disolver en agua
y diluir a 1 L.

Disolucin de cido sulfrico (0,1N).
Agregar aproximadamente 2,8 mL de cido sulfrico concentrado a 500 mL de
agua, mezclar bien y diluir hasta 1 L.

Disolucin de hidrxido de sodio (0,1N).
Pesar aproximadamente 4,0 g de hidrxido de sodio , disolver en agua y diluir a 1
L.

Disolucin de sulfito de sodio.
Pesar aproximadamente 1,575 g de sulfito de sodio disolver en agua y diluir a 1 L.
Esta disolucin no es estable; por lo que debe prepararse diariamente.

Disolucin patrn de glucosa-cido glutmico.
Secar glucosa y cido glutmico a 103C durante una hora. Pesar
aproximadamente y con precisin 150,0 mg de glucosa y 150,0 mg de cido
glutmico, diluir en agua y aforar a 1 L. Preparar inmediatamente antes de usarla.
Esta disolucin tiene una DBO de 198 mg/L.

Disolucin de cloruro de amonio.
Pesar aproximadamente 1,15 g de cloruro de amonio y disolver en 500 mL de
agua, ajustar el pH a 7,2 con disolucin de hidrxido de sodio y aforar a 1 L. La
disolucin contiene 0,3 mg N/mL.

EQUIPO Y MATERIALES

Equipo de aireacin con difusor

Incubadora: Controlado por termostato a 20C 1C. Eliminar toda la luz para
evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto.

Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

Medidor de oxgeno disuelto

Limpieza del material.

Todo el material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolucin
de cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua. Los detergentes con base de
amoniaco no deben usarse para la limpieza del material.
Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente no
inico, libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la noche
y volver a enjuagarse con agua libre de metales.

Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse
remojando de 12 h a 24 h con HNO (1:1), HCl (1:1) o con agua regia (3 partes de
HCl concentrado + 1 parte de HNO
3
concentrado) solo en los casos que presente
material adherido, despus debe ser enjuagado con agua libre de metales. En los
casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o hexano.

Botellas Winkler de vidrio para incubacin con capacidad de 300 mL de aforo total
y con boca estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de forma cnica.

Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella Winkler

Bureta


En el caso de aguas naturales debe tomarse un mnimo de 1 L de muestra en un
envase de polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales (DBO mayores a 50
mg/L) deben tomarse mnimo 100 mL. Pueden utilizarse muestras simples o
compuestas.

No se debe agregar ningn preservador a las muestras. Solo deben conservarse a
4C hasta su anlisis.

El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 24 h.

PROCEDIMIENTO

Preparacin de agua para dilucin

Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y aadir por cada litro de
agua
1 mL de cada una de las siguientes disoluciones: disolucin de sulfato de
magnesio, disolucin de cloruro de calcio, disolucin de cloruro frrico y disolucin
amortiguadora de fosfatos . Preparar el agua de dilucin diariamente.

Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos 10.2 y
10.3,
de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de
usar el
agua de dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada de 20C. Saturar
con
oxgeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgnica durante 1 h por lo
menos.

Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo
contenido de materia orgnica, es necesario inocular la muestra.

Si se requiere, sembrar el agua de dilucin.

Control del agua de dilucin

Utilizar este procedimiento como una comprobacin aproximada de la calidad del
agua de dilucin. Si la disminucin de oxgeno disuelto del agua excede de 0,2
mg/L, obtener agua de mejor calidad mejorando la purificacin o usar agua de otra
fuente. Alternativamente si se requiere inhibir la nitrificacin, almacenar el agua de
dilucin sembrada en una habitacin oscura a temperatura ambiente hasta que la
captacin de oxgeno disuelto se haya reducido lo suficiente para cumplir los
criterios de comprobacin del agua de dilucin. No se recomienda su
almacenamiento cuando la DBO se va a determinar sin inhibir la nitrificacin ya
que pueden desarrollarse microorganismos nitrificantes durante ese tiempo. Si el
agua de dilucin no ha sido almacenada para mejorar su calidad, aadir suficiente
inculo como para un consumo de OD de 0,05 mg/L a 0,1 mg/L en cinco das a
20C. Al Incubar en un frasco Winkler lleno de agua de dilucin durante cinco das
a 20C, el consumo no debe ser mayor a 0,2 mg/L y preferiblemente no menor a
0,1 mg/L.

Control de la glucosa-cido glutmico

Comprobar en cada lote analtico la calidad del agua de dilucin, la
efectividad del inculo y la tcnica analtica mediante determinaciones de la DBO
en muestras estndar de concentracin conocida. Utilizar la disolucin de
glucosa-cido glutmico como disolucin madre de control. La glucosa tiene
una tasa excepcionalmente alta y variable de oxidacin, pero cuando se utiliza con
cido glutmico, dicha tasa se estabiliza y es similar a la obtenida en muchas
aguas residuales municipales. Alternativamente, si un agua residual particular
contiene un componente principal identificable que contribuya a la DBO en lugar
de la glucosa-cido glutmico. Determinar la DBO, utilizar este compuesto de una
disolucin al 2 % de la disolucin de control patrn de glucosa-cido glutmico
utilizando las tcnicas mencionadas.

Fuente de la siembra

Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces de oxidar la
materia orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual domstica, los
efluentes no clorados o sin desinfeccin, los efluentes de las plantas de
tratamiento de desechos biolgicos y las aguas superficiales que reciben las
descargas de aguas residuales que contienen poblaciones microbianas
satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin microbiana suficiente
(por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados, residuos desinfectados,
residuos de alta temperatura o con valores de pH extremos).

Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de
microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema
de tratamiento biolgico de aguas residuales. Cuando se usa como siembra el
efluente de tratamiento biolgico de sistema de aguas residuales se recomienda la
inhibicin de la nitrificacin. Cuando no se disponga de sta, utilizar el
sobrenadante del agua residual domstica despus de dejarlo reposar a
temperatura ambiente durante al menos 1 h, pero no ms de 36 h. Determinar si la
poblacin existente es satisfactoria haciendo la prueba de la siembra en una
muestra para DBO. El incremento del valor de la DBO indica una siembra exitosa.

Control del inculo

Determinar la DBO del material de siembra como para cualquier otra muestra.
Esto es
una siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la dilucin del
material
de siembra (en el agua de dilucin) determinar el consumo de OD de la siembra.
Lo ideal es hacer disoluciones tales de la siembra que la mayor cantidad de los
resultados presenten una disminucin de al menos el 50 % del OD. La
representacin de la disminucin del OD (mg/L) con respecto a los mililitros de
siembra, tiene que ser una lnea recta cuya pendiente corresponde a la
disminucin de OD por mililitro del inculo. La interseccin del eje de las abscisas
(OD) representa el consumo del oxgeno causado por el agua de dilucin y debe
ser inferior a 0,1 mg/L . Para determinar el consumo de OD de una muestra, se
resta el consumo de OD de la siembra, del consumo de OD total. La captacin de
OD total del agua de dilucin sembrada debe oscilar entre 0,6 mg/L y 1,0 mg/L.

Pre-tratamiento de la muestra

Muestras con pH cidos o bsicos

Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico o hidrxido de
sodio de concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms
del 0,5 %. El pH del agua de dilucin sembrada no debe verse afectado por la
dilucin de la muestra.

Muestras que contienen cloro residual

Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomndolas antes
del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuo
detectable de cloro, sembrar el agua de dilucin. Si hay cloro residual, eliminar el
cloro de la muestra y sembrar con inculo . No se deben analizar las muestras
cloradas sin sembrar el agua de dilucin. En algunas muestras, el cloro
desaparece en el lapso de 1 h a 2 h despus de su exposicin a la luz. Esto suele
ocurrir durante el transporte o la manipulacin de la muestra. Para las muestras en
las que el residuo de cloro no se disipe en un tiempo razonablemente corto,
eliminar el cloro residual aadiendo disolucin de sulfito de sodio.

Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de sodio cuantificando el
cloro residual total. Aadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la
disolucin de sulfito de sodio determinada por la prueba anterior, mezclar y
despus de 10 min a 20 min, comprobar el cloro residual de la muestra.

La determinacin de cloro residual se realiza de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-100.

Tcnica de dilucin

Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una captacin
de OD de al menos 2 mg/L despus de 5 das de incubacin, producen los
resultados ms confiables. Hacer varias diluciones (al menos 3) por duplicado de
la muestra preparada para obtener una captacin de OD en dicho intervalo. La
experimentacin con una muestra concreta permite el uso de un nmero menor de
diluciones. Un anlisis ms rpido tal como la DQO, presenta una correlacin
aproximada con la DBO y sirve como una gua para seleccionar las diluciones. En
ausencia de datos previos, utilizar las siguientes diluciones: de 0 % a 1 % para los
residuos industriales fuertes, de 1 % a 5 % para las aguas residuales
sedimentadas y crudas, del 5 % al 25 % para el efluente tratado biolgicamente
y del 25 % al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.

Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta
volumtrica, aadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales
de 300 mL. Aadir cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos
tipo Winkler o al agua de dilucin. Llenar los frascos con suficiente agua de
dilucin, sembrada si es necesario, de forma que la insercin del tapn desplace
todo el aire, sin dejar burbujas.
No realizar diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco).

Determinar el OD inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes
diluciones. En los frascos de los duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar
hermticamente el tapn, poner un sello hidralico y la contratapa e incubar
durante 5 das a 20C.

Determinacin del OD inicial

Mtodo yodomtrico

La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo yodomtrico de
azida modificado, de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana NMX-AA-
012-SCFI (ver Referencia)

Mtodo electromtrico

La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo
electromtrico con electrodo de membrana, de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMXAA-012-SCFI.

Los aceites, grasas o cualquier sustancia que se adhiera a la membrana puede
ser causa de baja respuesta en el electrodo.

Blanco del agua de dilucin.

Emplear un blanco del agua de dilucin como un control aproximado de la calidad
del agua de dilucin no sembrada y de la limpieza de los frascos de incubacin.
Junto con cada lote de muestras, incubar un frasco de agua de dilucin no
sembrada. Determinar el OD inicial y final como se especifica en los incisos 10.7 y
10.10. El consumo de OD no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferentemente no
menor a 0,1 g/L.

Incubacin

Incubar a 20C 1C las botellas de DBO que contengan las muestras con las
diluciones deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin y el
control de glucosa-cido glutmico. En caso de no contar con contratapas,
diariamente se debe verificar que el sello hidrulico est intacto en cada botella
incubada, agregar agua si es necesario.
Determinacin del OD final

Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la
muestra, en los controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser realizada
inmediatamente despus de destapar la botella de Winkler, para evitar la
absorcin de oxgeno del aire por la muestra.

CLCULOS

Calcular la DBO
5

Cuando no se utilice inculo ni diluciones:

Donde:

ODi mg/L =es el oxgeno disuelto inicial, y
OD
5
mg/L= es el oxgeno disuelto al quinto da.

Cuando se emplea una dilucin:

Cuando se utiliza inculo. Sin dilucin:

Con dilucin:

DBO
5
(mg/L) = [(ODi mg/L- OD
5
mg/L) - (C1(B1-B2)(Vt))]/(C2(Vm))

B1 es el OD del inoculo antes de la incubacin en mg/L
B2 es el OD del inoculo despues de la incubacin en mg/L
C1 es el volumen de inoculo en la muestra
C2 es el volumen de inoculo en el inoculo de control
Vt es el volumen total del frasco Winkler
Vm es el volumen de muestra sembrada

Expresar los resultados como CDBO
5
si se inibe la nitrificacin.
Reportar los resultados en mg/L de DBO
5
con dos cifras significativas con la
precisin (media, desviacin estndar) correspondiente.

DETERMINACIN DE CIANUROS TOTALES EN AGUAS
NATURALES, POTABLES, RESIDUALES Y RESIDUALES
TRATADAS


Esta norma mexicana establece dos mtodos de anlisis para la determinacin de
cianuros en aguas naturales, potables, residuales y residuales tratadas.

PRINCIPIO DEL METODO.

Mtodo espectrofotomtrico

El mtodo espectrofotomtrico es utilizado para determinar la concentracin de
cianuros inorgnicos en aguas residuales, potables y aguas naturales. Este
mtodo detecta cianuros inorgnicos que estn presentes tanto en forma de sales
simples solubles como de radicales complejos.

Los cianuros, como cido cianhdrico (HCN), son liberados por el reflujo de la
muestra con un cido fuerte, el cido cianhdrico se adsorbe en una disolucin de
hidrxido de sodio (NaOH). El ion cianuro en la disolucin adsorbente se
determina entonces por espectrofotometra.

En la medicin espectrofotomtrica, el cianuro se convierte en cloruro de
ciangeno (CNCl) por reaccin con cloramina-T a un pH menor de 8 evitando que
se lleve a cabo la hidrlisis de los cianuros. Despus de que la reaccin termina, el
color se forma por la adicin del reactivo cido piridin-arbitrico. La concentracin
de hidrxido de sodio (NaOH) debe ser la misma en los estndares y la muestra
para obtener colores comparables de intensidad.

Mtodo potenciomtrico

Los cianuros son determinados potenciomtricamente en el destilado alcalino del
tratamiento preliminar usando un electrodo selectivo de ion especfico para
cianuros, en combinacin con un electrodo de referencia de doble junta y un
potencimetro que cuenta con una escala expandida en milivoltios o un medidor
especfico de iones.

Ioduro, sulfuros y agentes reductores fuertes interfieren con la respuesta al ion
cianuro. La membrana del electrodo se disuelve en disoluciones de alta
concentracin de CN-, no usarlo en concentraciones por arriba de 25 g CN/Ml.

EQUIPO Y MATERIALES
Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el
presente mtodo.
Balanza granataria con precisin de 0,1 g
Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

Espectrofotmetro. Disponible para utilizarse de 190 nm a 900 nm equipado con
celdas de 1 cm de paso ptico de luz.

Aparato de destilacin por reflujo o equivalente (ver figura 1).

El matraz de destilacin Claissen modificado debe ser de 1 L de capacidad con un
tubo de entrada y un condensador. El adsorbedor de gas puede ser un frasco
lavador de gases Fisher-Milligan o equivalente.
Equipo de vaco para el arrastre de gases en el destilador durante el pre-
tratamiento de la muestra.

Electrodo selectivo para cianuros
Electrodo de referencia
Potencimetro
Parrilla de agitacin magntica
Generales

Cromato de potasio (K
2
CrO
4
)

Cianuro de potasio (KCN)
Acido sulfurico
Acido sulfamico
Cloruro de magnesio hexahidratado
Hidroxido de sodio
Nitrato de bismuto
Nitrato de plata
Carbonato de plomo
Papel indicador de sulfuros (nitrato de plomo, acetato de plomo, etc)
Cloruro de sodio
Disolucin madre de cianuros. Pesar aproximadamente y con precisin 1,6 g de
hidrxido de sodio y 2,510 g de cianuro de potasio , disolverlos en 500 mL de agua
y llevar a 1 L con agua.
NOTA 1.- El KCN es altamente txico, evite cualquier contacto o inhalacin.
Valorar contra la disolucin estndar normalizada de nitrato de plata (0,019N) y
titular usando la disolucin de cianuros. Comprobar la normalidad semanalmente
ya que la disolucin estndar normalizada de Nitrato de Plata gradualmente se
degrada (1 mL=1mg CN- aproximadamente).
Disolucin diluida de hidrxido de sodio (0,04 N).
Pesar aproximadamente 1,6 g de hidrxido de sodio, disolver y llevar a 1 L con
agua previamente hervida por dos horas para eliminar la presencia de CO.
Disolucin de hidrxido de sodio (1N).
Pesar aproximadamente 40,0 g de hidrxido de sodio, disolver en 500 mL con
agua previamente hervida por 2 h y llevar a 1 L.
Disolucin de nitrato de bismuto.
Pesar aproximadamente 30,0 g de nitrato de bismuto , disolver en 100 mL de
agua, mantenindose en agitacin, adicionar 250 mL de cido actico glacial (ver
inciso 5.24). Agitar hasta que se disuelva el nitrato de bismuto y aforar a 1 L con
agua.
Disolucin de cido sulfmico.
Pesar aproximadamente y con precisin 40,0 g de cido sulfmico, disolver en 500
mL agua y llevar 1 L de agua.
cido sulfrico (1:1). Aadir lentamente 500 mL de cido sulfrico concentrado a
500 mL de agua.
NOTA 2.- Esta es una reaccin exotrmica.
Disolucin de cloruro de magnesio (II).
Pesar aproximadamente y con precisin 510,0 g de cloruro de magnesio, disolver
y llevar a
1 L con agua.
Disolucin estndar normalizada de nitrato de plata (0,019 N).
Pulverizar aproximadamente 5,0 g de cristales de nitrato de plata y secar hasta
peso constante a 40C. Pesar aproximadamente y con precisin 3,270 g de nitrato
de plata seco, disolver y llevar a 1 L con agua.Valorar contra la disolucin de
cloruro de sodio (0,01N) por el mtodo argentomtrico utilizando cromato de
potasio como indicador.
Disolucin patrn de cloruro de sodio (0,01N).
Secar aproximadamente 10 g de cloruro de sodio a 140C. Pesar
aproximadamente
y con precisin 0,584 5 g de la sal seca disolver y aforar a 1 L con agua.

Disolucin indicadora de Cromato de potasio.
Pesar aproximadamente 50,0 g de Cromato de potasio y disolver en la menor
cantidad de agua. Adicionar una alcuota de la disolucin estndar normalizada de
nitrato de plata suficiente para definir la formacin de un precipitado rojo. Dejar
reposar por 12 h filtrar y llevar a aforo en un matraz volumtrico de 1 L.
Cloramina-T soluble en polvo
cido clorhdrico concentrado (HCl)
cido actico glacial (CHCOOH)
cido barbitrico
Acetato de sodio trihidratado
Piridina
Disolucin de cloramina-T.
Pesar aproximadamente 1,0 g de cloramina-T llevar a 100 mL. Preparar
semanalmente y guardar en refrigeracin.
Disolucin estndar de cianuros.
Basados en la concentracin determinada para la disolucin madre de, calcular el
volumen requerido (aproximadamente 10 mL) para preparar 1 L de una disolucin
de 10,0 g CN/mL y aforar con la disolucin diluida de hidrxido de sodio. Tomar
una alcuota de 10 mL de la disolucin de 10,0 g CN /mL y aforar a 100 mL con la
disolucin diluida de hidrxido de sodio (1,0 mL = 1,0 g CN-). Preparar
diariamente y mantener en una botella de vidrio cerrada.
Disolucin de cido piridn-barbitrico.
Pesar aproximadamente 15,0 g de cido barbitrico , colocar en un matraz, lavar
los lados del matraz con mximo 5 mL de agua. Adicionar 75 mL de piridina y
mezclar. Adicionar 15 mL de cido clorhdrico concentrado, mezclar y dejar
enfriar a temperatura ambiente. Diluir a 250 mL con agua y mezclar hasta que el
cido barbitrico se disuelva. La disolucin es estable por aproximadamente seis
meses si se guarda en frascos mbar y en refrigeracin; desecharse si se
presentan precipitados.
Disolucin amortiguadora de acetato de sodio.
Pesar aproximadamente y con precisin 410,0 g de acetato de sodio trihidratado,
disolver en 500 mL de agua. Adicionar cido actico glacial para ajustar a un pH
de 4,5 aproximadamente 500 mL.

- Mtodo potenciomtrico

Nitrato de potasio (KNO)3
Hidrxido de potasio (KOH)

Disolucin estndar de cianuros.
Basados en la concentracin determinada para la disolucin madre de cianuros
(ver inciso 5.12), calcular el volumen requerido (aproximadamente 25 mL) para
preparar 1 L de una disolucin de 25,0 g CN-/mL y aforar con la disolucin diluda
de hidrxido de sodio
Tomar una alcuota 100 mL de la disolucin de 25,0 g CN- /mL y aforar a 1 L con
la disolucin diluida de hidrxido de sodio (1,0 mL = 2,5 g CN-). Preparar
diariamente y mantener en una botella de vidrio cerrada.

Disolucin de nitrato de potasio.

Pesar aproximadamente y con precisin 100 g de nitrato de potasio y disolver en 1
L con agua, ajustar a pH 12 con hidrxido de potasio. Esta disolucin se utiliza
para llenar el electrodo de referencia.


Debe colectarse un mnimo de 1 L de muestra en recipientes de plstico o vidrio.

Las muestras deben preservarse por adicin de disolucin de hidrxido de sodio
hasta que el pH de la muestra sea mayor o igual a 12 en el momento de la colecta.
Las muestras deben refrigerarse a 4C hasta el anlisis. El Tiempo mximo de
almacenamiento previo al anlisis es de 14 das.

CALIBRACIN

Espectrofotmetro. Calibrar el equipo de acuerdo con las instrucciones
especficas del fabricante.

Curva de calibracin para un intervalo de trabajo de 0,02 g CN/mL a 0,20 g
CN/mL:
Tomar 4 alcuotas diferentes de la disolucin de trabajo que contengan de 1 g CN
a 10 g CN 0,20 g CN y llevar a matraces volumtricos de 50 mL (0,02 a /mL).
Diluir a 40 mL con la disolucin diluda de hidrxido de sodio (0,04N). Utilizar 40
mL de la disolucin de hidrxido de sodio como blanco. Desarrollar el color de las
disoluciones estndares y el blanco como se indica en la seccin 10.2.1, medir
la absorbancia a 578 nm, en celdas de 1 cm de paso ptico de luz

Graficar los valores de absorbancia obtenidos contra la concentracin de las
disoluciones estndar, evaluar la calidad de la curva obteniendo el coeficiente de
correlacin.


Potencimetro.

El equipo debe calibrarse de acuerdo a las instrucciones especficas del fabricante

Curva de calibracin para un intervalo de trabajo (0,025 a 2,5 g CN /mL).
Preparar una serie de 4 estndares de CN/mL a 2,5 g CN que contengan de
0,025 g CN /mL, aforados a 100 mL con disolucin diluida de hidrxido de sodio,
y preparar en blanco.

Transferir 100 mL de cada disolucin estndar de cianuros en vasos de 250 mL,
mezclar usando un agitador magntico.

Sumergir el electrodo de ion selectivo y el electrodo de referencia en cada solucin
patrn la cual debe estar en permanente agitacin, iniciar con la de menor
concentracin (0,025 g CN /mL).

Los electrodos deben permanecer en la disolucin estndar hasta que la lectura
se estabilice. Despus de la lectura lavar el electrodo con agua.

Graficar el potencial medido (MV) contra el logaritmo negativo de la concentracin
de cianuros. (-log CN)

PROCEDIMIENTO

Procedimiento de destilacin

Colocar 500 mL de muestra o una alcuota (o una cantidad de muestra que no
contenga ms de 10 mg/L de cianuro), en un matraz de ebullicin de 1 L. Tomar
una alcuota de 10 mL de hidrxido de sodio (1N), colocarla dentro del tubo de
adsorcin, aadir agua hasta que la espiral est cubierta. No utilizar un volumen
total de la disolucin de adsorcin mayor de 225 mL. Montar el equipo de
destilacin tal como se muestra en la figura 1.

Ajustar la bomba de vaco, empezar con un flujo de aire lento que entre por el
matraz tipo Claissen y dejar que se estabilice en dos burbujas de aire por segundo
desde el tubo de entrada.

Utilizar papel de nitrato de plomo para revisar que la muestra no contenga
sulfuros. Si el papel se torna negro, la prueba es positiva; en este caso, tratar la
muestra por adicin de 50 mL de la disolucin de nitrato de bismuto a travs del
tubo de entrada de aire despus de que la tasa de entrada de aire est estable.
Mezclar por 3 min antes de la adicin de cido sulfrico. Otra forma de eliminar los
sulfuros es colocar una trampa con una disolucin de acetato de plomo (PbOAc)
al 3 % para capturar a los sulfuros previo a la disolucin alcalina, o bien
adicionando 50 mg de carbonato de plomo (PbCO) a la disolucin alcalina para
precipitar el sulfuro.

Si se sospecha que las muestras contienen NO
3
y/o NO
2
adicionar 2 g de cido
sulfmico 50 mL de disolucin de cido sulfmico despus de que la tasa de
entrada de aire se ha estabilizado. Mezclar por 3 min antes de la adicin de cido
sulfrico.

Lentamente aadir 50 mL de cido sulfrico (1:1) a travs del tubo para agregar
reactivos. Lavar el tubo con agua y dejar el flujo de aire para que mezcle el
contenido del matraz por 3 min. Verter 20 mL de la disolucin de cloruro de
magnesio (II) dentro del tubo de entrada de aire y lavar con vapor de agua.

Calentar la disolucin hasta hervir. Permitir el reflujo por lo menos 1 h apagar la
fuente de calor y continuar con el flujo de aire por lo menos durante 15 min ms.
Despus enfriar el matraz de ebullicin, desconectar el adsorbedor y cerrar la
bomba de vaco.

Drenar la disolucin del adsorbedor dentro de un matraz volumtrico de 250 mL.
Lavar el adsorbedor con agua y aadir el agua del lavado al matraz. Aforar con
agua y homogeneizar.

Procedimiento de anlisis

Mtodo espectrofotomtrico. Desarrollo de color

Tomar una alcuota de la disolucin de adsorcin en un matraz volumtrico de 50
mL y diluir a 40 mL con la disolucin diluda de hidrxido de sodio , aadir 1 mL de
la disolucin amortiguadora de acetato de sodio y 2 mL de la disolucin de
cloramina-T , mezclar por inversin un par de veces.

Permitir que la disolucin se estabilice durante 2 min.

Adicionar 5 mL del reactivo de cido piridn-barbitrico , y aforar con agua, mezclar
perfectamente y permitir que la muestra se estabilice durante 8 min y no ms de
15 min y medir la absorbancia a 578 nm.

Utilizar el mismo blanco que el utilizado en la calibracin con estndares.

Mtodo potenciomtrico. Ion selectivo
Encender el potencimetro y permitir que se estabilice durante 30 min.

Calibrar el potencimetro.

Una vez que se realiz la curva de calibracin, tomar 100 mL de la muestra
destilada (disolucin del adsorbedor) o porciones diluidas a 100 mL con
disolucin diluda de hidrxido de sodio en un vaso de 250 mL.

Ajustar la temperatura de la muestra y la de los estndares, de preferencia a
temperatura ambiente. Cuando se midan lecturas de concentraciones bajas,
primero lavar el vaso y el electrodo con volmenes pequeos de muestra.

Mezclar cada disolucin usando un agitador magntico.

Sumergir los electrodos en la muestra.

Los electrodos deben permanecer en la disolucin hasta que la lectura se
estabilice

Retirar los electrodos, lavarlos con agua y secarlos, realizar esta operacin entre
cada lectura

CLCULOS

- Mtodo espectrofotomtrico

Calcular la concentracin de CN- utilizando la siguiente ecuacin:

A son los mg obtenidos (50 mL de volumen final), calculados con la ecuacin de la
recta de la curva de calibracin;
B es el volumen de la disolucin adsorbente en la destilacin, en mL;
C es el volumen original de la muestra usado en la destilacin, en mL, y
D es el volumen de la disolucin adsorbente usada para realizar el desarrollo de
color, mL.

Reportar los resultados en mg de CN- /L con la precisin correspondiente.

- Mtodo potenciomtrico

Hacer una grfica con los valores de la curva de calibracin y obtener el
coeficiente de correlacin el cual debe ser mayor a 0,997.

Calcular la concentracin de la muestra a partir de la ecuacin de la recta:

y= mX + b

donde:

m es la pendiente;
B es la ordenada al origen;
Y es el potencial (mV), y
X es el log de la concentracin de CN- (expresada en mg/L).

Una lnea recta con pendiente de 59 a 59,2 mV indican una buena operacin del
instrumento y del electrodo.

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DETERMINACIN DE LA DEMANDA QUMICA DE OXGENO EN AGUAS

NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS NMX-AA-030-

es la concentracin de masa de nitrgeno orgnico;

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