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XVII Con. Ven. Bot. 2007 FQ-08


Determinacin de metabolitos secundarios presentes en el extracto
etanlico de Lippia origanoides
Determination and of secondary metabolites present in the ethanolic
extract of Lippia origanoides
J.L. Rodrguez, M.E. Sanabria, D. Rodrguez y M.I. Rangel
Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado; Postgrado de Fitopatologa. Apartado de Correos
400 Barquisimeto, estado Lara.
Resumen
Con el objetivo de determinar los metabolitos secundarios (MS) presentes en el extracto etanlico (EE) de
Lippia origanoides, se colectaron muestras de campo. Se secaron y maceraron 250 g de hojas y flores en 2500 mL
de alcohol etlico al 98% y se rotaevaporaron para obtener el extracto puro, al cual se le determin los alcaloides,
aceites esenciales y saponinas, empleando la metodologa de Marcano y Hasegawa (2002) y aplicando el mtodo de
Tswett (1906), se determinaron flavonoides, polifenoles-taninos y antraquinonas, cuantificndose estos ltimos
mas los alcaloides, con el mtodo propuesto por Sanabria et al. (2006). Todos los MS mencionados estuvieron
presentes; se obtuvo una mayor cantidad de antraquinonas y polifenoles-taninos; con respecto a flavonoides y
alcaloides lo que indic las diferencias cualitativas y cuantitativas de los MS en los EE de L. origanoides.
Palabras clave: extracto, determinacin, metabolitos secundarios, Lippia
Abstract
To determine the secondary metabolites present in an ethanol extract of L. origanoides, 250 g of field
samples of leaves and flowers were collected, dried, and macerated in 2500 mL of ethylic alcohol at 98%; then
processed in a rotaevaporater to obtain the crude extract. Alkaloids, essential oils and saponinas were determined
using Marcano and Hasegawa (2002) method, while flavonoides, polifenoles-tannins and antraquinonas were
determined with Tswett (1906) method. Quantitation of the last four metabolites plus alkaloids, was performed
applying the method proposed by Sanabria et al. (2006). All the mentioned metabolites were present in the extract.
A larger quantity of antraquinones and polyphenols-tannins was obtained in the samples which indicated qualitative
and quantitative differences of the metabolites in the ethanol extract of L. origanoides.
Key words: extract, determination, metabolites seconds, Lippia.
Introduccin
Autor para correspondencia correo electrnico: luisfhashion@gmail.com
Los metabolitos secundarios son considerados
compuestos no esenciales para el funcionamiento de la
clula vegetal, por cuanto no participan en las
transformaciones bioqumicas comunes; solo son
imprescindibles a las plantas que los producen, por lo
que su funcin no esta bien entendida. La variabilidad
cualitativa entre especies y familias botnicas se
mantiene, en muchos casos, dependiendo de factores
climticos, fenolgicos, genticos y edficos, con sus
diferentes interacciones (1). Muchos de los compuestos
producidos por las plantas silvestres son aprovechados
por estas para protegerse de condiciones ambientales
adversas, como del ataque de plagas y patgenos en
general, hallndose en mayor proporcin cuando la
planta presenta algn estrs, producido por la alteracin
de alguno de estos factores. Algunos de estos compuestos
como los beta carotenos son aprovechados por el hombre
en la alimentacin animal y como materias primas para
la elaboracin de medicamentos (4). Se han realizado
estudios para determinar cualitativamente, los
metabolitos en plantas silvestres de diferentes especies
y familias, en reas protegidas por su riqueza y
biodiversidad

(3). As mismo, se han determinado los
compuestos metablicos en plantas cultivadas, los
cuales han sido comparados con los de especies iguales
pero manipulados genticamente a fin de atribuir algn
nivel de diferencia a factores diversos y a distintas
condiciones de manejo (2). El objetivo del presente
Rodrguez et al.
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demostrado propiedades fungistticas lo cual representa
una alternativa promisoria ante el uso indiscriminado
de agroqumicos en el control de enfermedades.
trabajo fue determinar los metabolitos secundarios
presentes en el extracto etanlico sin desgrasar de
Lippia origanoides, especie silvestre de la que se han
Materiales y mtodos
La investigacin se desarroll en el laboratorio
de Microtcnia e Histopatologa Vegetal de los
Postgrados de Agronoma de la Universidad
Centroccidental "Lisandro Alvarado". Para cumplir con
el objetivo planteado en el presente trabajo, se procedi,
bajo la metodologa de Marcano y Hasegawa (2002), a
colectar muestras de tallo, hojas y flores de Lippia
origanoides para su posterior sometimiento a secado
bajo cobertizo y a temperatura ambiente de 23C a 29C,
durante 15 das. Luego, se pulverizaron 250g de la
muestra en una licuadora convencional Osterizer
MR
y
se pusieron a macerar en 2500 mL de alcohol etlico al
98%, por 48 horas en un envase cubierto con plstico
negro para protegerlo de la luz directa. Posteriormente
se paso el filtrado del macerado por un Rotaevaporador
Brinkmann
MR
, el extracto crudo obtenido se guard en
un frasco mbar bajo refrigeracin (8C) hasta la
realizacin del anlisis.
La prueba cualitativa para los alcaloides
dbilmente bsicos, bsicos, sales cuaternarias de
amonio, aceites esenciales y saponinas, se realiz
siguiendo la metodologa de Marcano y Hasegawa
(2002). Para la extraccin de los alcaloides se empleo
extraccin liquido-liquido, para ello el extracto se
evapor hasta casi la sequedad, se redisolvi con HCl
(10%). Los alcaloides dbilmente bsicos se extrajeron
con cloroformo. En el caso de los alcaloides bsicos la
fase acuosa remanente se alcaliniz con NH
4
OH, antes
de la extraccin con cloroformo. La tercera fase se
analiz para sales cuaternarias de amonio. Se colocaron
tres gotas de las tres fases en una porcin de cromatofolio
de silica/gel y se rociaron con reactivo de Meyer; la
presencia de una coloracin marrn rojiza era indicativa
de los tres tipos de alcaloides.
Los aceites esenciales se determinaron por el olor
caracterstico que le confieren al extracto. Para las
saponinas, el extracto etanlico se agit fuertemente
con agua y se dej reposar por ms de 20 min, la
presencia y persistencia de una espuma indicaba lo
positivo de la prueba. Para la determinacin de los
flavonoides, polifenoles y taninos y las antraquinonas,
se emple la metodologa de Tswett (1906), haciendo
para ello una corrida cromatogrfica de 10 lminas de
silica/gel y 20 gotas del extracto por cada solvente
especifico para cada prueba. As, par los flavonoides se
usaron 10 mL de hexano, luego de desarrollada la
cromatografa, las laminas se observaron bajo luz
ultravioleta donde una coloracin fluorescente blanca
revelaba la presencia de estos metabolitos. Para los
polifenoles, el solvente del cromatograma fue una mezcla
de agua destilada-cido actico (9:1) de agua destilada -
cido actico, el revelado se logr rociando el
cromatograma con cloruro frrico al 1%, una coloracin
parda nos indicaba lo positivo de la prueba. En las
saponinas, el solvente usado fue cido actico y el
revelado mediante una mancha rojiza al rociar la silica/
gel con NH
4
OH. La cuantificacin de los alcaloides,
flavonoides, polifenoles-taninos y antraquinonas
presentes en 1mL del extracto se hizo mediante la
metodologa de Sanabria et al. (2006), para ello se
emplearon cromatogramas de silica/gel con dimensiones
de 6,5 x 2,5 cm y marcados a 0,7 cm de la base donde se
agreg cada gota del extracto. Luego del revelado, se
marc un rea de 0,05 (para alcaloides y polifenoles-
taninos), 0,025 (para antraquinonas) y 0,02 cm
2
(para
flavonoides), donde se observara la presencia de cada
uno de los metabolitos. Se marc, adems, un rea igual
con solvente, como testigo. Las reas se rasparon y
pesaron, calculando la cantidad de cada metabolito por
diferencia de peso. Tambin se determin para esta
prueba, el valor, en porcentaje, del factor de recorrido
(Rf) de cada metabolito en el cromatograma, dividiendo
la distancia del recorrido del metabolito por la distancia
del recorrido del solvente (en centmetros). Los valores
de Rf fueron sometidos a un anlisis estadstico por la
prueba de Tukey, con el programa Statistix
MR
, Versin
8, previa transformacin de los valores por la funcin
log(x).
Resultados y discusin
Todos los metabolitos, excepto los alcaloides
bsicos, se encontraron presentes en la planta de L.
origanoides. Castillo et al. (2005) reportaron, en esta
misma planta, la presencia de alcaloides, flavonoides,
aceites esenciales, polifenoles y taninos; diferencias que
posiblemente se deban a la poca de coleccin, con
diferentes caractersticas climticas, y estados
fenolgicos de la planta distintos, lo que indica la
variabilidad cualitativa entre los metabolitos de una
misma especie. Casanova et al. (2005) reportaron
diferencias cualitativas para los extractos etanlicos en
plantas cultivadas, sugiriendo que losI
mismos varan tanto en plantas silvestres como
en las cultivadas, debido a la interaccin de los factores
citados anteriormente.
En la Figura 1 se muestra la similitud estadstica
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de los factores de retencin/recorrido (Rf) que existen
entre los flavonoides y alcaloides, con 29 y 35%,
respectivamente, con respecto a los obtenidos para las
antraquinonas 46% y los polifenoles-taninos 60%, lo que
nos indica que dentro de cada gran grupo de compuestos
existen diferentes tipos de cada metabolito. En el
Cuadro 1, se observan los valores de la cuantificacin
de los metabolitos, con un mayor nivel de polifenoles-
taninos y antraquinonas, y menor en flavonoides. Al
analizar el contenido en base al peso, se nota que los
polifenoles son proporcionalmente mas altos y las
antraquinonas las mas bajas, lo que indica que el peso
de los metabolitos es igualmente diferente y su cantidad
no est necesariamente relacionada con su peso. Esta
variacin cualitativa y cuantitativa puede tambin
deberse a diversos factores genticos y ambientales.
II
III
III
I
0
15
30
45
60
75
R
f
(
%
)
P y T Ant F Alc
Metabolitos
Polifenoles y Taninos Antraquinonas
Flavonoides Alcaloides
II
III
III
I
0
15
30
45
60
75
R
f
(
%
)
P y T Ant F Alc
Metabolitos
Polifenoles y Taninos Antraquinonas
Flavonoides Alcaloides
Figura 1. Valores de factor de recorrido (Rf) de los metabolitos secundarios presentes en el extracto etanlico de
Lippia origanoides. Los nmeros romanos indican la significancia (p<0,05) de las diferencias.
Cuadro 1. Cuantificacin de los metabolitos secundarios presentes en 1 mL del extracto etanlico de Lippia
origanoides.
Metabolitos Peso del metabolito(mg) Porcentaje del metabolitos en la Muestra
Alcaloides 263,46 68
Flavonoides 22,13 77
Polifenoles y Taninos 1410,00 92
Antraquinonas 1412,50 55
Conclusiones
La presencia de los metabolitos secundarios en
las plantas silvestres, caso especfico Lippia origanoides
se debe a la interaccin de una serie de factores que
determinan en un momento especifico la variabilidad y
estabilidad de dichos compuestos, es recomendable
determinar la presencia de los mismos y luego
cuantificarlos para evitar el gasto innecesario de
reactivos. La diferencia existente entre alcaloides y
flavonoides con los polifenoles- taninos y antraquinonas,
en relacin a los valores de los factores de recorrido,
porcentaje del metabolito en la muestra y peso del
metabolito, puede indicar que sean estos ltimos
compuestos los que tienen efecto sobre los patgenos,
tal como se ha sugerido en otros trabajos, pudiendo
utilizarse como alternativas promisorias en el control
de enfermedades en plantas de importancia agronmica.
Rodrguez et al.
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Literatura citada
1. Albornoz, A. 1980. Productos naturales, sustancias y drogas
extradas de las plantas. Caracas. 84p.
2. Casanova. R, J. Castillo, Y. De Freitez, M. Sanabria y D.
Rodrguez. 2005. Metabolitos secundarios en dos tipos
de Jengibre (Zingiber oficinale Rocoe). Proceeding of
the interamerican society for tropical Horticulture. Vol.
49. Boca chica. Republica Dominicana. 48p
3. Castillo. J, M. Sanabria, D. Rodrguez y O. Crescente. 2005.
Metabolitos secundarios en plantas silvestres del parque
nacional Terepaima, Estado Lara. Memorias del XVI
Congreso Venezolano de Botnica. Vol 17. Maturin. 280p.
4. Romero, A. 2004. Nuevas fuentes de antioxidantes naturales.
Ministerio de Ciencia y Tecnologa. Caracas, Venezuela.
191p.