UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO

FACULTAD QUMICA Y FARMACIA

INFORME DE LABORATORIO

SENSIBILIDAD Y MOTILIDAD BACTERIANA
(Control microbiolgico)
Estudiantes: Maite Castro, Adriana Lubo, Jhon Ruiz, James Castro.
Docente: Antonio Insignares
Laboratorio de microbiologa
RESUMEN
El laboratorio de sensibilidad bacteriana se llev a cabo mediante la utilizacin de los
sensidiscos que tuvieron como principal objetivo medir la sensibilidad de una cepa bacteriana a
uno o varios antibiticos a un tiempo determinado de exposicin.
Mientras que la motilidad fue experimentada por medio de la inoculacin bacteriana en un tubo de
ensayo con agar nutritivo.

Palabras claves: Bacteria, sensibilidad, antibiticos, motilidad, resistencia, flagelos.
1. INTRODUCCION
Sensibilidad bacteriana a los antibiticos
La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la medida de la
sensiblidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define como la menor
concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier
crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas.
Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera
semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y mtodos automatizados o semiautomatizados).
Estos diferentes mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin de
su sensibilidad frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o
Resistente (R) al antibitco.
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS:
Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento
a la doss habitual.
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar
ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto
teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la
posologa).


2. FUNDAMENTOS TEORICO

El estudio de la sensibilidad bacteriana a los antibiticos es una de las funciones ms importantes
de los laboratorios de microbiologa clnica. Dentro de los beneficios que presenta se encuentran:

Dirigir la teraputica una vez que el germen es conocido

Generar una base de datos que permita seleccionar los antibiticos a utilizar en un
tratamiento emprico (aquel en que no conocemos el agente causal)

Desarrollar polticas de uso de antimicrobianos

Vigilar la aparicin de nuevos mecanismos de resistencia

Detectar precozmente la diseminacin epidmica de una cepa, tanto a nivel
hospitalario como comunitario

Clasificacin

Estos mtodos pueden clasificarse en mtodos cuantitativos y cualitativos.

Mtodos cuantitativos son aquellos procedimientos que permiten determinar la concentracin
inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin bactericida mnima (CBM).
Se define CIM como la mnima concentracin de antibitico que en un perodo de tiempo
predeterminado, es capaz de inhibir el crecimiento in vitro de un inculo bacteriano previamente
estandarizado (concentracin conocida de grmenes). Se define como CBM la mnima
concentracin de un antibitico que en un perodo de tiempo predeterminado, es capaz de inducir
la muerte in vitro del 99.9% de una poblacin bacteriana previamente estandarizada. La
determinacin de la CIM puede realizarse por micro o macro dilucin en caldo, dilucin en agar o
E-test (marca comercial).
Mtodos cualitativos (disco difusin) son aquellos procedimientos que permiten clasificar
directamente a un microorganismo como sensible o resistente. Este es uno de los mtodos ms
utilizados en la prctica diaria y es el que los estudiantes podrn realizar durante el curso del
CEFA.



Resistencia bacteriana
Cada antibitico se caracteriza por un espectro natural de actividad antibacteriana. Este espectro
comprende las especies bacterianas que, en su estado natural, sufren una inhibicin de su
crecimiento por concentraciones de su antibitico susceptibles de ser alcanzadas in vivo. A estas
especies bacterianas se les dice naturalmente sensibles a dicho antibitico. Las especies
bacterianas que no se encuentran incluidas dentro de dicho espectro se denominan naturalmente
resistentes.
El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes eliminando las sensibles.
Es lo que se conoce con el nombre de presin de seleccin. El aumento de la frecuencia de las
cepas resistentes va unido casi siempre al uso intensivo del antibitico en cuestin.
La resistencia natural es un carcter constante de todas las cepas de una misma especie
bacteriana. El conocimiento de las resistencias naturales permite prever la inactividad de la
molcula frente a bacterias identificadas (despus del crecimiento) o sospechosas (en caso
de antibioterapia emprica). En ocasiones, constituye una ayuda para la identificacin,
puesto que ciertas especies se caracterizan por sus resistencias naturales. Ejemplos:
Resistencia natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la colistina. Resistencia
natural de la Klebsiella pneumoniae a las penicilinas (ampicilina, amoxicilina).
La resistencia adquirida es una caracterstica propia de ciertas cepas, dentro de una
especie bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio gentico ha sido modificado por
mutacin o adquisicin de genes. Contrariamente a las resistencias naturales, las
resistencias adquiridas son evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la utilizacin
de los antibiticos. En el caso de numerosas especies bacterianas, y teniendo en cuenta la
evolucin de las resistencias adquiridas, el espectro natural de actividad no es ya suficiente
para guiar la eleccin de un tratamiento antibitico. En ese caso, se hace indispensable el
antibiograma.
Una resistencia cruzada es cuando se debe a un mismo mecanismo de resistencia. En
general, afecta a varios antibiticos dentro de una misma familia (Ejemplo: La resistencia a
la oxacilina en los estafilococos se cruza con todas los -lactmicos). En ciertos casos,
puede afectar a antibiticos de familias diferentes (Ejemplo: La resistencia por
impermeabilidad a las ciclinas se cruza con la resistencia al coloranfenicol y al
trimetoprima).
Una resistencia asociada es cuando afecta a varios antibiticos de familias dferentes. En
general, se debe a la. asociacin de varios mecanismos de resistencia (Ejemplo: La
resistencia de los estafiolococos a la oxacilina va frecuentemente asociada a las
quinolonas, aminoglicsidos, macrolidos y ciclinas).





Mecanismos de la resistencia adquirida
El mecanismo gentico de adquisicin de una resistencia puede ser:
La mutacin de un gen implicado en el modo de accin de un antibitico: Este mecanismo afecta
preferentemente a ciertos antibiticos: quinolonas, rifampicina, cido fusdico, fosfomicina,
antituberculosos y a veces cefalosporinas (Ejemplo: La resistencia a las quinolonas por
modificacin del ADN grasa en las enterobacterias).
La adquisicin de genes de resistencia transferidos a partir de una cepa perteneciente a una especie
idntica o diferente: Ciertos Antibiticos estn particularmente afectados por este mecanismo: -
lactmicos, aminoglicsidos, tetraciclinas; cloranfenicol, sulfamidas (Ejemplo: Resistencia a la
ampicilina E. coli y del Proteus mirabilis).
El mecanismo bioqumico de la resistencia puede ser:
Una produccin por la bacteria de enzimas que inactivan el antibitico. Ejemplo: Penicilinasa de
los estafilococos, lactamasa de amplio espectro (BLAE) de las enterobacterias.
Una modificacin del blanco del antibitico. Ejemplo: Modificacin de las Protenas de Enlace
con la Penicilina (PBP) de los estafilicocos resistentes a la oxacilina (llamados estafilococos
"Meti-R"). Neumococos resistentes a la penicilina.
Un mecanismo de efusin: expulsin de la molcula por un transporte activo. Ejemplo:
Estafilococos resistentes a las tetraciclinas.

Los antibiticos
Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida por un microorganismo
capaz de inhibir el desarrollo de otros microorganismos. Los antibiticos modificados por
manipulaciones qumicas an se consideran como tales. Un agente antimicrobiano es activo contra
los microorganismos y puede ser producido en forma natural por microorganismos o
sintticamente en el laboratorio. El trmino agente quimioterpico ha sido empleado para referirse
a agentes antimicrobianos sintticos o no y tambin se refiere a agentes que actan contra clulas
humanas como inmunomoduladores y drogas antitumorales. Los trminos agente antiviral y
agente antimictico son trminos ms especificos, incluidos dentro de la categora ms general de
agentes antimicrobianos.
En lneas generales y en funcin sobre su forma de actuar sobre los microorganismos, hablamos
de dos grandes grupos de antibiticos
Antibiticos primariamente bactericidas: Ejercen una accin letal e irreversible sobre el
microbio (Fosfomicina Vancomicina. B-Lactmicos Polimixina. Aminoglucsidos
Rifampicina. Acido Nalidxico Quinoleinas. Nitrofurantoinas)
Antibiticos primariamente bacteriostticos: Inhiben el crecimiento pero no matan al
microorganismo, permitiendo que las propias defensas del husped pueden eliminar a las bacterias
(Tetraciclina Cloranfenicol. Sulfonamidas Trimetroprim. Lincomicina Clindamicina. Macrlidos)
Motilidad bacteriana
La motilidad es la habilidad de moverse independientemente y espontneamente, esta eficiente
caracterstica ha permitido a los organismos la adquisicin de nutrientes, desplazarse a sitios
ptimospara el desarrollo, evitar depredaciones y otros tantos beneficios.
Un orgnulo encargado de la motilidad en bacterias es el flagelo, aunque no lo parezca el flagelo
es un sistema complejo compuesto devarias partes, cada una tan importante como la otra. Existen
distintas formas flagelares las cuales varian entre las especies ya sea en su numero o localizacin.
Un rasgo sumamente notable es quelos flagelos procariotas son distintos a los eucariotas, los
primeros estn constituidos por miles de subunidades de un solo tipo de protena y su
desplazamiento es rotatorio; y por otro lado, elflagelo eucariota posee 9 + 2 microtubulos formado
por 200 diferentes polipeptidos y se dezplaza como latigo.
La estructura del flagelo esta dividida en 3 segmentos: el cuerpo basal, el gancho y elfilamento; en
conjunto, estas tres estructuras permiten que el flagelo, desde un motor embebido en la superficie
celular, transmita una fuerza de rotacin que genera un empuje mecnico.
De esta manera elflagelo le permite a las bacterias cambiar aleatoriamente de direccin, y a esto se
le llama nado, sin embargo algunas bacterias en su desplazamiento pueden llegar a tener
preferencias, es decir sumovimiento no es azaroso, responde a diversos estmulos como la luz,
oxgenos, pH, temperatura, presin y diferentes compuestos qumicos, a esto se le llama taxis, de
esta manera la motilidad de puedeclasificar como quimiotaxia, fototaxia, escotofobotaxia y
magnetotaxia.

3. MATERIALES

Caja de Petri con agar nutritivo
Escobilln de algodn estril
Cultivo de bacterias
Mechero
Sensidisco para antibiograma (VANCOMISIN VA Y AMPISILIN AMB)
Asa de punta
Tubo de ensayo con agar.

4. PROCEDIMIENTO

SENSIBILIDAD BACTERIANA
Humedecimos un escobilln estril en un cultivo bacteriano y luego en forma de estras muy
unidas inoculamos el agar contenido en la caja de Petri, luego con una pinza estril colocamos
dos sensidiscos con diferentes antibiticos, sellamos marcamos y finalmente llevamos a la
incubadora para pasadas 24 y 48 horas observar resultados.

MOTILIDAD BACTERIANA

Tomamos una muestra de bacteria con la ayuda de un aza de punta que fue introducida en un tubo
de ensayo con agar nutritivo con sumo cuidado de que esta inoculacin fuese de forma vertical y
que el aza saliera por el mismo punto por donde entr. Dejamos incubando por 24 y 48 horas para
obtener resultados


5. DISCUSIN

Las bacterias presentaron resistencia a los medicamento en la exposicin a estas durante 24 horas
como se observa en la figura 1 , mientras que transcurrido 48 horas el aro que se form al rededor
del sensidisco de Vancomisin nos dice que este est impidiendo el crecimiento bacteriano
difundindose la sustancia en un radio que recubre el sensidiscos en ese campo se asla una
bacteria responsable de un proceso infeccioso podemos decir que es positivo.
El antibitico penetro hacia el interior de la clula destruyendo la pared celular y posteriormente
la membrana plasmtica produciendo la lisis de esta.

En la parte de motilidad figuras 2 y 3 se observa el recorrido llevado a cabo por las bacterias en
forma de trenzas esto es producto de que las bacterias cuentan con flagelos que son los
encargados de la motilidad bacteriana que consta de filamento y un cuerpo basal. Las bacterias al
mover cambian constantemente de direccin constantemente. La modulacin de la direccin de
la rotacin flagelar constituye la base de la quimiotaxis.

El espacio es producto del gas que se desprendi de por

CONCLUSIONES
La sensibilidad bacteriana es una prueba fcil de estudio de bacteriana frente a la reaccin de
medicamentos.

La resistencia bacteriana no solo depende del tipo de antibitico sino el tiempo de exposicin a
este.

Si se presenta un aro al redor del sensidisco la prueba es positiva. Por tanto son sensible.

Si el sensidisco no produce cambios en el cultivo bacteriano es porque estos son resistentes por
tanto no inhibe su crecimiento.


PREGUNTAS

Cul es el mecanismo de accin del medicamento presente en los sensidiscos utilizados?
Rta: Los medicamentos utilizados fueron: vancomisin y ampisilin
VANCOMISIN VA
AMPISILIN AMB

1. BIBLIOGRAFA

Ferraro, M.J. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2000. Methods for Dilution
Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard-Fifth
Edition. Vol 20, N 2, M7-A5 NCC

































6. RESULTADOS
Observaciones a las 24 horas.




















Observaciones a las 48 horas


Figura 1
Se observa los sensidiscos sin
mayor cambio en el poco
crecimiento de bacteriano.
Figura 2
Podemos ver que trascurrida
las 24 horas las bacterias
tuvieron un grado de
movilidad visible.



Figura 4
Presento la formacin de un
aro alrededor de uno de los
dos sensidiscos.

Figura 2
La motilidad de las bacterias
estuvo dirigida en diferentes
sentidos y se nota un espacio
en el agar