RECUPERACION DE PRODUCTOS

(downstream processing)
(CONCENTRACION Y PURIFICACION)
Dr. Blgo. Carlos Villanueva Aguilar
Microbiologa Industrial y Biotecnologa Microbiana
La comercializacin de nuevos productos obtenidos a travs de la biotecnologa, requiere
de un coordinado acople de operaciones unitarias a fin de desarrollar un proceso eficiente
La recuperacin del producto final requiere una serie de operaciones referidas colectivamente
como downstream processing (SP).
Estas operaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el cultivo, una vez finalizado, para
la obtencin del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas
Es!ema genera" de !n proceso #iotecno"$gico
RECUPERACI%N PRODUCTO& (downstream processing)
(CONCENTRACION Y PURIFICACION)
La recuperacin del producto, es un trmino colectivo, referido a todas las etapas que
se requieren para recuperar o separar los productos tiles de un proceso industrial.
!na etapa de recuperacin cambia la concentracin y"o la pureza de un metabolito.
En el proceso ideal de recuperacin se optimizan ambos par#metros.
T'CNICAS UTI(I)ADAS EN (A RECUPERACI%N DE PRODUCTOS
En tiempos $%$&$'LES las tcnicas utilizadas se tomaron directamente de la Ingeniera
Qumica (extraccin, destilacin, dilisis, cristalizacin, precipitacin, desecacin) con un
intento apro(imado para adaptarlas a los materiales biolgicos.
Para materiales biolgicos, )ab*a que perfeccionar procesos especficos de purificacin
ya que los bioproductos son frecuentemente compuestos muy lbiles. Sus estructuras activas
pueden sobrevivir solamente ba+o condiciones definidas y limitadas de p,, temperatura, fuerza
inica, etc.
%o e(iste una operacin nica, ideal o universal, ni secuencias de operaciones que puedan
ser recomendadas- las operaciones individuales unitarias deben ser combinadas de la forma m#s
adecuada para cada problema particular.
Figura 3.

etodologas utilizadas en los procesos de !"
#$%"%! &# '#()"#'%(I*+
%, !eparacin de las partculas -!#"%'%(I.+ &# !./I&*! &#/ /0Q)I&*1
En muc)os casos, es la etapa inicial al final de una fermentacin. Es la primera etapa en la
recuperacin del producto. Se separa la biomasa celular y los ingredientes insolubles del
sobrenadante del cultivo
El producto final deseado puede ser el propio microorganismo, sin embar.o, en la mayor parte
de los procesos a .ran escala el producto deseado es un metabolito que est# presente e(tra o
intracelularmente.
etabolitos extracelulares2 amino#cidos, #cido c*trico, alco)ol, al.unos enzimas (amilasas
y proteasas) y la mayor parte de antibiticos (penicilina, estreptomicina).
etabolitos intracelulares2 #cidos nucleicos, vitaminas, enzimas y ciertos antibiticos
(.riseofulvina).
Si el metabolito a aislar es intracelular, debe ser liberado de las clulas antes de proceder a
las si.uientes etapas. !na vez el metabolito )a sido separado de las clulas, la seleccin de
etapas adicionales de purificacin depender# del producto deseado.
etabolitos en las c3lulas y en el filtrado del culti4o2 En pocos casos se encuentran (E+.
vitamina /01).
E(isten varios mtodos2 floculacin, flotacin, filtracin, centrifugacin, decantacin .
5, Floculacin y flotacin
0. En la floculacin se producen .randes a.re.ados que sedimentan muc)o m#s r#pidamente ya
que la velocidad de sedimentacin de una part*cula aumenta con su di#metro (ley de Sto3es).
1. 'plicacin2 para clulas aisladas en el ran.o de tama4o de 0 a 05 6m que sedimentan solo muy
lentamente y son dif*ciles de precipitar incluso con la centr*fu.a.
7. En la mayor parte de los casos se a4ade un a.ente floculante, sal inor.#nica, polielectrolitos
or.#nicos o )idrocoloides minerales.
8. La floculacin depende tanto del agente floculante empleado como de otros factores como la
naturaleza de las clulas, de los constituyentes inicos as* como su concentracin.
9. La floculacin puede ocurrir reversiblemente si las car.as sobre la superficie de la clula pueden
neutralizarse por iones de car.a opuesta, e irreversiblemente si se forman, entre las clulas,
puentes de molculas polimricas car.adas.
:. Se utilizar la flotacin si no se forma un flculo suficientemente denso, y es el proceso reverso a
la floculacin.
;. La flotacin se consi.ue introduciendo .as en el l*quido. Las peque4as burbu+as de .as adsorben
y atrapan a las clulas y suben a la capa de espuma en la parte superior del recipiente donde
pueden ser reco.idas y sacadas del biorreactor.
6, Filtracin
Separacin f*sica de los microor.anismos presentes en un medio l*quido o .aseoso mediante un
medio poroso. <i#metro de filtro entre 5,=>5,1 ?m
Solo se puede utilizar en productos l*quidos que no presenten part*culas en suspensin o en
productos .aseosos. %o modifican las caracter*sticas del producto
En la primera etapa en el proceso de recuperacin, lo mas frecuente es llevar a cabo al.n tipo
de proceso de filtracin. Los dos principales tipos de filtros son2
Filtros profundos2 filtracin en profundidad
Filtros de membrana2 filtracion superficial- en ambos casos la fuerza motriz es la presin,
creada por sobrepresin o por vac*o.
!n filtro en profundidad se construye a partir de una matriz filamentosa (lana de vidrio o papel de
filtro), la filtracin es debido a que las part*culas a ser removidas quedan atrapadas en la matriz.
Las partculas filtradas son frecuentemente m#s peque4as que los poros del filtro, pero a pesar
de ello son separadas a medida que pasan a travs de los intersticios retorcidos del filtro.
Los filtros en superficie son membranas en las que el tama4o de los poros es m#s peque4o que
las part*culas que van a ser filtradas. Las partculas son, por consi.uiente, separadas sobre las
superficies de los filtros.
Los )on.os filamentosos se filtran frecuentemente a travs de filtros profundos. Los cultivos
bacterianos deben ser filtrados en superficie. En cualquier caso, la velocidad de filtracin, es decir
el volumen de filtrado que puede ser reco.ido en un tiempo determinado, est# influenciada por
numerosos factores2 tama4o de los microor.anismos, su morfolo.*a, la viscosidad del fluido,
temperatura, etc.
!no de los inconvenientes de la filtracin en superficie es la colmatacin. <ebido a que el proceso
depende estrictamente del tama4o del poro y tama4o de la part*cula, a medida que el material
celular se amontona sobre el filtro se forma una capa que reduce la velocidad de filtracin.
!na me+ora considerable en el flu+o que pasa por el filtro se consi.ue por filtracin en
contracorriente2 los slidos que no pasen a travs del filtro son mantenidos en suspensin
mediante un flujo turbulento a travs de la membrana o ajustando palas mviles o mediante un
impulsor en el interior del filtro. El filtrado pasa a travs de la membrana y la biomasa se separa
del filtro y se transfiere con el material que se retiene. &on este mtodo puede obtenerse un
aumento de la velocidad de filtracin de 055 veces en comparacin con la filtracin est#tica.
<ependiendo del tama4o de las part*culas que sean filtradas se reconocen tres tipos principales
de procesos de filtracin2
*smosis re4ersa, para part*culas de 5,5550 a 5,550 6m
)ltrafiltracin, para part*culas de 5,550 a 5,0 6m
icrofiltracin, para part*culas de 5,0 a 05 6m
Las posibilidades de los procesos de ultrafiltracin y smosis re4ersa se dan .eneralmente en
trminos del peso molecular del tama4o de corte. /a smosis re4ersa implica .eneralmente a
sustancias de pesos moleculares menores de 0.555 daltons y la ultrafiltracin a sustancias de
pesos moleculares mayores de 0.555 daltons. El proceso de microfiltracin concierne
principalmente a la separacin de clulas o de fracciones celulares. Se utilizan membranas
fabricadas con steres de celulosa, polivinilfluoruros, policarbonatos, polisulfonas y celulosa.
En los procesos cl#sicos de purificacin utilizados en la industria de antibiticos (micelios de
)on.os y actinomicetos), la biomasa se separa del filtrado del cultivo sobre un filtro de tambor
rotatorio a vac*o que consiste en un tambor rotatorio en cuya parte exterior se enrolla un pao y el
vaco se produce desde el interior del tambor. Para aumentar la eficiencia del proceso de
filtracin, se utiliza una ayuda filtrante como tierra de diatomeas. Para mantener la eficiencia de
filtracin, se utiliza una cuc)illa autom#tica para raspar continuamente del filtro la biomasa +unto
con una fina capa del material de ayuda de filtracin. @r.anizando el tambor en se.mentos, la
ayuda filtrante puede ser lavada a medida que .ira el tambor. Los filtros de tambor a vac*o son
especialmente buenos para suspensiones que conten.an una alta concentracin de slidos (15>
:5A de volumen de micelio).
3, (entrifugacin
Separacin de los microor.anismos mediante la fuerza centrifu.a debido a la diferencia de
densidad entre ellos y el medio en el que se encuentran
Las bacterias son normalmente demasiado peque4as para ser separadas con filtros sencillos. Su
separacin por centrifu.acin tambin es dif*cil debido a las peque4as diferencias en densidad
entre las part*culas y la suspensin.
La centrifu.acin no slo se utiliza para separar partculas slidas de la fase lquida sino tambin
para la separacin de fluido/fluido.
Si bien la separacin fluido/partcula es la de mayor importancia, la separacin fluido/fluido
tambin es importante. E+. la separacin del solvente que e(trae el antibitico penicilina de la fase
acuosa mediante una contracorriente continua en dos etapas con acetato de amilo o de butilo a 5>
7B& y p,2 1,9>7,5.
La separacin eficiente de las clulas por centrifu.acin se ve favorecida por un tamao .rande
de las part*culas, una .ran diferencia entre la densidad de las part*culas y el l*quido, una ba+a
viscosidad del l*quido, un radio elevado del rotor de la centrfuga y una alta velocidad angular.
Canto el tama4o de las part*culas, su densidad as* como la viscosidad del l*quido normalmente no
se pueden controlar. 'dem#s, el radio del rotor de la centr*fu.a no puede incrementarse
indefinidamente ya que el estrs mec#nico incrementa con el cuadrado del radio por lo que los
l*mites de se.uridad se alcanzan f#cilmente. Por todo esto y cuando se traba+a con .randes
volmenes se debe recurrir a centr*fu.as de flu+o continuo. En este tipo de centr*fu.as la
separacin de part*culas es m#s eficiente cuanto m#s lento sea el flu+o de la suspensin a
clarificar ya que se incrementa el tiempo que cada part*cula est# e(puesta a la fuerza centr*fu.a.
'l.unos tipos de rotores2 c#mara tubular, recipiente de c#mara mltiple y centr*fu.a de rotor de
discos. Codos los dise4os tienen desventa+as individuales a las que deben ser a4adidas las
.enerales del coste (incluyendo el mantenimiento), consumo de ener.*a y (e(ceptuando las que
incorporan refri.eracin) elevacin de la temperatura.
7, &ecantacin2
Separacin de los microor.anismos presentes en un medio l*quido por accin de la fuerza de la
.ravedad
8, &esintegracin de los microorganismos -')"$)'% (#/)/%'1
Etapa en que los microorganismos son fragmentados por procedimientos qumicos, fsicos o
biolgicos, en los casos que se requiera para la recuperacin del producto.
La seleccin del m3todo depende principalmente de la naturaleza de las clulas. 'unque las
membranas celulares no ofrecen especial resistencia a la ruptura, las paredes celulares var*an
ampliamente a la rotura.
Las bacterias 9ram : y ;ongos son muc)o m#s dif*ciles de romper que las bacterias 9< debido
a la composicin de la pared celular. $ncluso dentro de un mismo microor.anismo las clulas
var*an si.nificativamente en sensibilidad a la ruptura dependiendo de su estado fisiol.ico.
La desintegracin no debe destruir el producto de inters. Por e+emplo, pueden utilizarse #cidos
para romper muc)os microor.anismos pero no pueden ser utilizados si el producto es l#bil a los
#cidos.
5, 3todos =umicos
$ncluyen tratamiento con lcalis o cidos, solventes orgnicos y detergentes.
La lisis bacteriana con lcalis puede realizarse a .ran escala y ba+o costeo siempre y cuando el
producto sea estable a p,2 05,9>01,9. or ejemplo, la )ormona de crecimiento )umano
recombinante se libera f#cilmente de !sc"eric"ia coli por tratamiento con )idr(ido sdico a p,2
00.
El tratamiento con sol4entes orgnicos es un tratamiento sencillo y barato utilizado en el
aislamiento de enzimas en levaduras. %o obstante, e(iste el ries.o que el tratamiento
desnaturalice las prote*nas por lo que se debe c)equear con antelacin.
Los detergentes permeabilizan las clulas bacterianas al solubilizar las membranas celulares. 'si
se ori.inan a.u+eros por donde salen al e(terior prote*nas y otras molculas. Sin embar.o los
deter.entes son caros, desnaturalizan la mayor*a de las prote*nas y a menudo aparecen como
contaminantes en el proceso subsecuente de purificacin.
Para la e(traccin de clulas de levadura se utiliza la plasmlisis que se consi.ue mediante la
adicin de una concentracin alta de cloruro sdico.
6, 3todos biolgicos
#e utiliza la lisis enzimtica.
or ejemplo2
La pared celular de las bacterias Dram E se )idroliza con el enzima lisozima que se aisla de
la clara de )uevo. La pared celular de las bacterias Dram > se )idroliza con lisozima y #&$%.
La pared celular de las levaduras se )idroliza con una combinacin de uno o m#s de los
enzimas -5,31<glucanasa, -5,>1<glucanasa, mananasa y =uitinasa,
Los tratamientos enzim#ticos son muy espec*ficos y las condiciones para la lisis son suaves.
En la actualidad, los costes limitan el uso de los enzimas como a.entes l*ticos celulares en la
industria.
!na variante que se utiliza en levaduras es la autolisis en la cual los enzimas autol*ticos
end.enos de las levaduras llevan a cabo la destruccin de su propia pared celular. La adicin de
cloruro sdico, acetato de etilo o cloroformo y la incubacin durante 18) a 89B& aumenta la
velocidad del proceso autol*tico.
3,< 3todos fsicos
La desinte.racin por ultrasonidos se utiliza ampliamente en el laboratorio, pero debido a su alto
coste no es adecuada para procesos a escala industrial.
@tro mtodo f*sico incluye repetidos ciclos de con.elacin y descon.elacin pero en este caso
muc)as de las clulas permanecen intactas. $ndustrialmente los mtodos f*sicos m#s empleados
de desinte.racin celular suponen la accin mec#nica.
Los molinos de bolas llevan a cabo la ruptura de las clulas mediante la accin de bolas de vidrio.
Las clulas y las bolas de vidrio se mezclan +untas y se someten a una alta velocidad de
mezclado en una vasi+a de reaccin. La ruptura se produce cuando una bola de vidrio fuerza una
clula contra las paredes de la vasi+a. &on este mtodo se consi.ue una velocidad m#(ima de
ruptura de apro(imadamente el =5A de las clulas.
@tro enfoque es el uso de )omo.eneizadores. En tales artilu.ios el material biol.ico se coloca
ba+o una fuerte presin )idrost#tica (alrededor de 955 atmsferas) y la presin se libera
bruscamente permitiendo que el l*quido sal.a por una v#lvula, lo que ocasiona la lisis celular.
(, 3todos de aislamiento -!#"%'%(I.+ &# '#!$*! (#/)/%'#!1
!na vez lisadas las clulas, los restos celulares se retiran por centrifugacin de .ran
capacidad a ba+a velocidad o por filtracin en membrana.
'l final obtenemos un l*quido libre de clulas que es el que sufre los tratamientos posteriores para
aislamiento y en su caso purificacin del producto de inters.
&, (oncentracin y "urificacin del producto
5, (romatografa
El uso de mtodos cromato.r#ficos implican unas de las etapas m#s caras en la recuperacin del
producto
Cales mtodos son de especial valor para la purificacin de materiales biol.icos sensibles y
encuentran un amplio uso en la preparacin de materiales farmacuticos, reactivos de
dia.nstico y reactivos para investi.acin.
Los distintos mtodos cromato.r#ficos que e(isten se.n su mecanismo de separacin son2
filtracin en .el (peso molecular), cromato.raf*a de adsorcin (interacciones )idrofbicas),
cromato.raf*a de intercambio inico (car.a), cromato.raf*a de afinidad (actividad biol.ica) y
electroenfoque (punto isoelctrico).
6, #xtraccin
&uando se aplica a los bioproductos, tiene funcin de separacin y concentracin,
El caldo acuoso de fermentacin que contiene el producto deseado se mezcla con un solvente
inmiscible en el que se disuelva preferentemente y del que pueda ser m#s f#cil y espec*ficamente
recuperado.
!na vez se )a concentrado el producto deseado en la fase solvente puede ser adicionalmente
purificado.
La e(traccin con solventes )a sido utilizada ampliamente en la industria de antibiticos
(penicilina) utilizando solventes (acetato de amilo o de butilo).
Para la separacin de enzimas en estado activo no pueden ser utilizados los solventes or.#nicos
pero s* pueden ser utilizados sistemas acuosos en fase mltiple preparados en una solucin de
sales con pol*meros )idrof*licos (polietilen.licol>de(trano). En ambas fases el a.ua es el
componente principal, pero ambas fases no son miscibles por lo que los enzimas pueden
separarse f#cilmente sin prdida de actividad.
3, "recipitacin, (ristalizacin y?o &esecacin2 )ltimas etapas2
(ristalizacin y precipitacin
La cristalizacin a ba+a temperatura es una forma muy suave de purificacin.
Se utiliza principalmente para la purificacin de compuestos de ba+o peso molecular (antibiticos).
Por e+emplo, la Penicilina D es .eneralmente e(tra*da del caldo de fermentacin con acetato de
butilo y cristalizada por adicin de acetato pot#sico en solucin etanlica.
&esecacin
Secado del material biolgico. !s en muc)os casos el m3todo final. Los productos son llevados
a una forma estable adecuada para su mane+o y almacenamiento.
La sensibilidad al calor de la mayor parte de los productos biolgicos si.nifica que los nicos
mtodos que pueden ser utilizados son los que conducen a la eliminacin de a.ua con elevacin
m*nima de la temperatura.
La termoestabilidad de los productos (enzimas o preparaciones farmacuticas) en al.unos casos,
es me+orada por la adicin de azcares u otros estabilizantes inertes.
La liofilizacin es el m3todo de desecacin m#s suave debido a que el agua es sublimada a
partir de una masa congelada. Fuc)os productos farmacuticos son liofilizados (vacunas,
fracciones de plasma, )ormonas y preparaciones de enzimas, as* como in.redientes muy l#biles
y caros para dia.nosis). Cambin se liofiliza cultivos microbianos vivos (cultivos para inoculacin
en las industrias l#cteas).
#, 'endimiento
Las prdidas en la recuperacin dependen de la sensibilidad de las sustancias al proceso y del
nmero de etapas de purificacin.
El promedio de prdidas atribuidas a la purificacin est# en torno al 15A pero en casos e(tremos,
con ciertos tipos de metabolitos intracelulares, puede lle.ar a ser el G5A.
El rendimiento final es solamente un factor, ya que el coste de los productos =umicos, el e=uipo
y los salarios deben ser considerados en el c#lculo .lobal.
Los productos que resultan de los proceso biotecnol.icos pueden ser muy variados. La variedad
estar# dada por2
a, /a naturaleza =umica del mismo2 sustancias simples (alco)oles, #cidos or.#nicos)- prote*nas,
sustancias con actividad teraputica (antibiticos, )ormonas) etc.
b, #l 4olumen de produccin y la concentracin del producto en el caldo de fermentacin2 los
llamados commodities (etanol, #cido c*trico, etc.) se obtienen de a cientos o miles de ton."a4o
y en altas concentraciones en la fermentacin. Fientras que los agentes terap3uticos de @ltima
generacin ()ormonas, factores de coa.ulacin, etc.) se producen slo al.unos 3."a4o y su
concentracin en la produccin es ba+a. Esto determina la escala de produccin.
c, /os re=uerimientos de pureza del producto final. Las molculas a ser utilizadas en salud
)umana requerir#n una pureza final muy diferente a las enzimas a ser utilizadas en los polvos
para lavar de un acidulante para alimentos.
&on estos criterios podemos a.rupar a los productos tal como se muestra en la $abla 5
$abla 5. (aractersticas de algunos productos biotecnolgicos
En la $abla 6 vemos los volmenes de produccin de ciertos productos.
$abla 6. "roduccin mundial aproximada de algunos
productos biotecnolgicos
En la $abla 3 vemos las concentraciones de productos en los caldos lue.o de la etapa de
produccin.
$abla 3. (oncentraciones tpicas de algunos productos 8iotecnolgicos
a la salida del 8iorreactor
En la Fig, 6 vemos como tanto 4olumen -6,a1 como concentracin -6,b1 inciden en los precios
finales de estos productos.
Por supuesto la ubicacin de un producto en este .r#fico no es fi+a.
El me+or e+emplo son los antibiticos. La concentracin de los mismos en los caldos fue
increment#ndose a medida que se conoc*a m#s del producto, se me+oraba la productividad de las
cepas, se desarrollaban nuevas metodolo.*as de produccin y as* fue aument$ndose el volumen y
bajando los precios.
Lo mismo puede ocurrir con los agentes terap3uticos de ltima .eneracin.
Por ello )ablar de SP (doAnstream processing) en /iotecnolo.*a no es referirnos a al.o invariable.
Las etapas y metodolo.*as a emplear est#n determinadas por todo lo dic)o, pero de cualquier manera
se puede trazar un esquema .eneral que sea aplicable a cualquier proceso.
El esquema puede simplificarse como se muestra en la Figura 3
#strategias de diseBo de procesos de !"
Para todos aquellos productos de la 8iotecnologa tradicional )ay un .ran conocimiento
tecnol.ico y de las propiedades b#sicas de las molculas a purificar tanto como del entorno en que
se encuentran lue.o de la etapa de produccin.
%o ocurre lo mismo con los productos de @ltima generacin ya que, por las necesidades
comerciales para aprovec)ar la ba+a competencia, el elevado precio, y dada la ba+a escala actual de
produccin, la estrate.ia es lle.ar r#pido con el producto al mercado con la tecnolo.*a de SP que se
posea (por lo .eneral la desarrollada a escala de laboratorio). Esta estrate.ia posibilita un buen
posicionamiento en el mercado que permite, posteriormente, el desarrollo de nuevas tecnolo.*as de
cambio de escala y SP. @tra vez el e+emplo de este tipo de evolucin son los antibiticos.
Las estrategias de diseBo de procesos de !" para los productos conocidos pueden resumirse en2
0. (onocer las propiedades fsicas y =umicas bsicas del principio acti4o y caractersticas
del producto final (por e+emplo definir pureza requerida). El uso determina la pureza. Para
agentes teraputicos se requiere un alto .rado de pureza del principio activo. Se tolera un
m#(imo de 055 ppm de impurezas de 05 p."dosis, adem#s de estar libre de pir.enos.
1. &efinir perfectamente el material de partida. En la $abla 7 se muestra un e+emplo de
caracterizacin de material de partida para la purificacin de un producto. Fuc)as veces la
metodolo.*a de SP condiciona etapas de produccin. Por e+emplo, pueden e(istir componentes
del medio de cultivo (por lo .eneral subproductos como a.ua de )idrolizado de ma*z, e(tracto de
malta, sueros animales, albmina otros) que posean sustancias muy similares al producto final
que, por lo tanto, interfieren en la purificacin del mismo. En este caso se debe eliminar ese
componente del medio de cultivo.
$abla 7. &aracter*sticas .enerales del material de partida
para realizar SP
3, $razar diferentes es=uemas tentati4os de !" y lle4arlos a etapas de laboratorio y piloto,
'l.unas re.las que se si.uen para ello son2
a, #legir en etapas sucesi4as procesos basados en diferentes propiedades fisico=umicas.
Por e+emplo si una primera etapa es cromato.raf*a de intercambio inico (propiedad2 car.a) se
puede se.uir con una cromato.raf*a de filtracin por .eles (propiedad2 tama4o).
b, !eparar las impurezas =ue estn en mayor proporcin en las primeras etapas. Por esta
causa la etapa de separacin siempre finaliza en una concentracin, ya que el a.ua es por lo
.eneral la impureza mayoritaria (mayor del G5A en cualquier proceso fermentativo).
c, /uego de la concentracin usar en las primeras etapas de purificacin propiamente dic;a
un m3todo de alta resolucin (por e+emplo cromato.raf*a de afinidad). Estos mtodos poseen
un alto rendimiento aunque no brinden la mayor pureza. En cierta medida lo que se )ace es
se.uir concentrando para reducir la cantidad de muestra a tratar en las etapas posteriores.
d, &eCar el proceso ms compleCo (y por lo .eneral m#s caro) para el final. Se usan estos
mtodos cuando tenemos la sustancia a purificar concentrada y pre>purificada.
Holviendo al dia.rama ori.inal de SP en la Figura 3 podemos ver al.unos mtodos usados en cada
una de esas etapas.
Figura 3 . Fetodolo.*as utilizadas en los procesos de SP
&omo podemos observar, la economa de los procesos biotecnolgicos depende en .ran medida
de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal manera que la correcta seleccin de estas
operaciones tiene un fuerte impacto en el (ito del proceso.
'eferencias bibliogrficas
0. /iotecnolo.*a > /ioprocesos $$. $ntroduccin a los procesos biotecnol.icos !eparacin y
purificacin en 8iotecnologa (I<oJnstream processin.K)