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4 Aula
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1. Introduo
Os microrganismos, bem como as plantas, esto
sendo usados como fbricas para produzir
substncias qumicas que os organismos no
produzem de forma natural.
Isso possvel por meio da insero de genes nas
clulas, um processo chamado de Engenharia
Gentica.
O desenvolvimento da engenharia gentica est
expandindo as aplicaes prticas da biotecnologia
quase alm da imaginao.
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1. Introduo
Biotecnologia o uso de microrganismos, clulas
ou componentes celulares para fazer um produto.
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1. Introduo
DNA unidade fundamental localizada no ncleo
celular que guarda todas as informaes genticas.
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1. Introduo
DNA formado por 2 hlices composta por
nucleotdeos.
Gene um sequenciamento especfico do DNA
responsvel por uma caracterstica especfica.
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1. Introduo
RNA Formado pelo rompimento de 1 das hlices do
DNA, responsvel pelas informaes genticas de
transmisso.
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1. Introduo
DNA x RNA
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2. Tecnologia do DNA
Recombinante
Um gene de um animal vertebrado, inclusive do
homem, pode ser inserido no DNA de uma bactria
ou um gene de um vrus pode ser inserido em uma
levedura (fungo).
Em muitos casos, pode-se fazer o receptor
expressar o gene, que pode codificar um produto
comercialmente til. Assim, as bactrias com genes
na insulina humana esto agora sendo utilizadas
para o tratamento da diabetes e uma vacina de
Hepatite B est sendo produzida pela levedura
portadora do gene que codifica parte do vrus
causador da doena.
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2. Tecnologia do DNA
Recombinante
As novas tcnicas de DNA recombinante tambm
podem ser utilizadas para produzir milhares de
cpia das mesmas molculas de DNA para
amplificar o DNA, gerando assim DNA suficiente
para vrios tipos de experimentos e anlises.
Essa tcnica tem aplicao prtica na identificao
de micrbios, como os vrus, que no podem ser
cultivados.
O DNA recombinante DNA que foi artificialmente
manipulado para combinar genes de duas
origens diferentes.
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2. Tecnologia do DNA
Recombinante
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2. Tecnologia do DNA
Recombinante
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2. Tecnologia do DNA
Recombinante
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3. Ferramentas da
Biotecnologia
3.1. Seleo
3.2. Mutao
3.3. Enzimas de Restrio
3.4. Vetores
3.5. Reao em Cadeia de Polimerase
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3.1. Seleo
Microrganismos com caractersticas desejveis so
selecionados, por meio de seleo artificial, para
serem cultivados.
A seleo artificial utilizada para escolher as raas
desejadas de animais ou variedades de plantas para
serem cultivadas.
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3.2. Mutao
Mutagnicos so usados para causar mutaes
que possam resultar em um microrganismo com
caractersticas desejveis.
A mutagnese stio-dirigida usada para mudar
um cdon especfico em um gene.
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3.3. Enzimas de Restrio
A engenharia gentica tem as suas razes tcnicas
na descoberta das enzimas de restrio, uma classe
especial de enzimas que clivam o DNA e que
existememmuitas bactrias.
Elas j esto disponveis em kits pr-embaladas
para muitas tcnicas de engenharia gentica
Algumas enzimas de restrio produzem
extremidades coesivas, que so pequenos
fragmentos de DNA de fita simples nas
extremidades de fragmentos de DNA.
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3.3. Enzimas de Restrio
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3.4. Vetores
Os vetores bifuncionais (shutle vectors) so
plasmdeos que podem existir em vrias espcies
diferentes.
Um plasmdeo contendo um novo gene pode ser
inserido em uma clula por transformao.
Um vrus contendo um novo gene pode inserir
aquele gene em uma clula.
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3.4. Vetores
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3.5. Reao em cadeia da
Polimerase (PCR)
A reao em cadeia da Polimerase (PCR) utilizada
para produzir enzimaticamente mltiplas cpias de
um fragmento de DNA desejado.
A PCR pode ser utilizada para aumentar a
quantidade de DNA em amostras at nveis
detectveis. Isso pode permitir o sequenciamento de
genes, o diagnstico de doenas gentica ou
deteco de vrus.
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3.5. Reao em cadeia da
Polimerase (PCR)
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3.5. Reao em cadeia da
Polimerase (PCR)
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3.5. Reao em cadeia da
Polimerase (PCR)
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4. Tcnicas de Engenharia
Gentica
4.1. Introduo de DNA Exgeno nas clulas
4.2. Obtendo o DNA
4.3. Selecionando um
clone
4.4. Fazendo um produto gnico
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4.1. Introduo de DNA
Exgeno nas clulas
As clulas podem captar o DNA livre por
transformao. Os tratamentos qumicos so
utilizados para tornar clulas que no so
naturalmente competentes para a absoro de DNA.
Os poros produzidos em protoplastos e em clulas
animais por aplicao de uma corrente eltrica no
processo de eletroporao podem permitir a entrada
de novos fragmentos de DNA.
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4.1. Introduo de DNA
Exgeno nas clulas
O DNA exgeno pode ser introduzido em clulas
vegetais injetando partculas cobertas de DNA para
o interior das clulas.
O DNA exgeno pode ser injetado em clulas
animais com o auxlio de uma micropipeta de vidro.
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4.1. Introduo de DNA
Exgeno nas clulas
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4.1. Introduo de DNA
Exgeno nas clulas
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4.2. Obtendo DNA
As bibliotecas de genes podem ser produzidas a
partir de clivagem de todo um genoma com enzimas
de restrio e da insero dos fragmentos em
plasmdeos bacterianos ou fagos.
O DNA sinttico pode ser produzido in vitro por
mquinas de sntese de DNA.
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4.2. Obtendo DNA
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4.2. Obtendo DNA
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4.3. Selecionando um clone
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4.3. Selecionando um clone
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4.4. Fazendo um Produto
Gnico
E. coli utilizada para produzir protenas para
Engenharia Gentica porque ela facilmente
multiplicada em cultura e a sua genmica bem
conhecida.
Devem ser feito esforos para assegurar que a
endotoxina de E. coli no contamine produtos
destinados ao ser humano.
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4.4. Fazendo um Produto
Gnico
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5. Aplicaes da
Engenharia Gentica
5.1. Aplicaes Teraputicas
5.2. Aplicaes Cientficas
5.3. Aplicaes Agrcolas
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5.1. Aplicaes Teraputicas
As clulas podem ser modificadas por engenharia
gentica de modo a produzirem uma protena de
superfcie de um patgeno que pode ser utilizada
como uma vacina.
Os vrus animais podem ser modificados por
engenharia gentica para carregarem um gene que
codifica uma protena de superfcie de um patgeno.
Quando o vrus utilizado como uma vacina, o
hospedeiro desenvolve uma resposta imune contra
o patgeno.
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5.2. Aplicaes Cientficas
As tcnicas de DNA recombinante podem ser
utilizadas para aumentar o conhecimento disponvel
do DNA para sequenciamento gentico e para
terapia gnica.
As sondas de DNA podem ser utilizadas para
identificar rapidamente um patgeno em um tecido
corporal ou em alimentos.
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5.3. Aplicaes na Agricultura
As clulas de plantas com caractersticas desejveis
podem ser clonadas de modo a produzirem muitas
clulas idnticas.
Essas clulas podem ser utilizadas na produo de
plantas completas, a partir das quais podem ser
obtidas sementes.
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5.3. Aplicaes na Agricultura
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5.3. Aplicaes na Agricultura
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6. Questes de Segurana e
tica na Engenharia Gentica
Para evitar a liberao acidental de microrganismos
modificados por engenharia gentica so utilizados
padres rgidos de segurana (biossegurana).
Alguns microrganismos utilizados em engenharia
gentica foram alterados de modo que eles so
incapazes de sobreviver fora do ambiente de
laboratrios.
As culturas de alimentos alterados por engenharia
gentica devem ser seguras para consumo e para
serem liberados no meio ambiente.
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6. Questes de Segurana e
tica na Engenharia Gentica
A tecnologia gentica suscita questes ticas:
Empregadores e companhias de seguros podem ter
acesso aos registros genticos de uma pessoa?
Ser que algumas pessoas se tornaro alvos para
reproduo ou esterilizao?
O aconselhamento gentico est disponvel para
todos?
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6. Questes de Segurana e
tica na Engenharia Gentica
Assim como a inveno do microscpio, o desenvolvimento
das tcnicas de DNA recombinante est causando mudanas
profundas na cincia, na agricultura e na sade humana.
Com esta tecnologia de pouco mais de 30 anos de idade,
difcil prever exatamente quais sero as mudanas que
ocorrero.
Provavelmente dentro de mais 30 anos, muitos dos
tratamentos e dos mtodos de diagnsticos discutidos aqui
tenham sido substitudos por tcnicas muito mais poderosas,
baseada na capacidade sem precedentes de manipular o
DNA com preciso.