TEMA:

INHIBICION DE LA HEMOAGLUTINACIN (IHA)

CATEDRA: VIROLOGA


ESTUDIANTE: LEON MARTIN, OMAR
RAMOS PACHECO JOHN
CAMARENA INGAROCA CARLA
SUAREZ MEZA FREDDY


CATEDRTICO: LIC.TM. JUAN CORTEZ ALEJANDRO

CICLO: VI



HUANCAYO - 2013



OBJETIVO



1. Aprender a desarrollar la tcnica de Inhibicin de la Hemaglutinacin para
determinar el ttulo de un suero problema.

2. Aprender a interpretar los resultados obtenidos al realizarla prueba de IHA

















INTRODUCCIN


Para realizar un diagnstico definitivo se debe realizar una prueba que
demuestre una respuesta especfica del husped hacia este virus, dicha respuesta
est representada por la presencia de anticuerpos y la prueba empleada para ello se
conoce como Inhibicin de la Hemaglutinacin (IHA).
Esta prueba se basa en la unin de un anticuerpo especfico hacia la
hemaglutinina del virin que impida la formacin de puentes entre el ligando viral y el
receptor celular. Este hecho permite identificar plenamente al virus y se conoce
como neutralizacin vrica.


















INHIBICION DE HEMAGLUTINACION

FUNDAMENTO
Estas pruebas se basan en la capacidad de algunos patgenos (p.ej. el virus
de la influenza) para causar la aglutinacin de los eritrocitos. Pueden utilizarse para
detectar el patgeno (pruebas de hemaglutinacin) o los anticuerpos dirigidos contra las
hemaglutininas del microorganismo (inhibicin de la hemaglutinacin). Suelen ser pruebas
especficas de serotipo o subtipo y bastante sensibles.
La inhibicin de la aglutinacin de los eritrocitos recubiertos con antgeno por el antgeno
homlogo es un mtodo sensible y especfico para la identificacin de pequeas cantidades de
antgeno soluble en la sangre o en otros lquidos de los tejidos. El principio de este anlisis es
que, el anticuerpo incubado previamente con antgenos homlogos solubles o de reaccin
cruzada, es inactivada cuando se incuba con eritrocitos recubiertos de antgeno.







APLICACIONES

Diagnostico presuntivo
Catalogar cualitativamente la patogenicidad viral

MATERIALES
Solucin salina fisiolgica una tri aviar
Sangre total de pollo 2%-3%
Tubos 12 x 75 o 13 x 100(26 tubos por grupo)
Suero o plasma de pollo
Vacuna tri aviar
Espejo
Micro pipetas 10-100ml y de 100ml - 1000ml con sus respectivos punteros
Solucin de hipoclorito de sodio 10000ppm
Guantes de ltex
Guardapolvo
Mascarilla
Lentes



PROCEDIMIENTO
1.- Prepara dilucin de la vacuna tri aviar que contenga 4UHA en volumen superficie para
realizar la prueba (por duplicado).




Tubo:
Dilucin: 1/8 1/16
C1 . V1 = C2 . V2
X = 262.5ml vacuna tri aviar + 5625ml de Na Cl
4UHA

2.-Realizar diluciones al doble del suero de pollo desde hasta 1/1024 (obs. No agregar suero
al tubo control)
a. Agregar 300ul de SSF a todos los tubos incluyendo el tubo control.
b. Dispensar en el pozo N 1,300 ul de suero de pollo y mezclar por aspersin y
dispersin de 2-3 veces.
c. Transferir 300 ul de esta dilucin al pozo N 2 mezclar de la misma manera que el
paso b.
d. Repetir sucesivamente este procedimiento hasta el tubo N 10 que corresponder
una dilucin 1/1024 desechar los 300 ul del tubo N 10.







1/8 1/16 . . . . . . . . . . . . . 1/1024
Volumen d cada Reactivo para realizar las diluciones

Pozo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
a)SSF(l) 75 75 75 75 75 75 75 75 75
Dilucin 1.2 1:4 1:8 1.16 1:32 1:64 1:128 1.256 Control
2)4UHA 75 75 75 75 75 75 75 75 -----
3)INCUBARATEMPERATURAAMBIENTEDURANTE10MIN
4)Eritrocitos
al1%(l)
75 75 75 75 75 75 75 75 75



3 .Dispensar 300ul de agente viral Uha (vacuna a todos los tubos a excepcin de tubo control.
Homogenizar y dejar reposar x 10 min.
4. Agregar 300ul de GR. De pollo al 2-3% a todos los tubos sin excepcin.
Dejar en reposo a temperatura ambiente y lecturar cuando el tubo de control. Se produce en
patrn de sedimentacin.
300ul suero de pollo
300ul suero de pollo
300ul SSF
300ul DECANTAR

5.-lectura:
Patrones negativos (sedimentacin)
Patrones positivos (hemaglutinacin)



















RESULTADO


La sangre utilizada en la prctica fue de humano resultando la prueba de
titulacin negativa en el doble procedimiento.

La cuarta unidad hemaglutinante (4 UHA) sali negativa.


Se dispenso el agente viral en seis de los 10 tubos


















CONCLUSIN

La prueba sali negativa por que una de las causas falta de tiempo en la
prctica que no se pudo esperar el tiempo adecuado que repose el
antgeno viral.


Tanto el 4 UHA como los dems salieron negativa.


Se dispenso 6 de los 10 tubos por falta de contenido de agente viral en
el envase.



















PREGUNTAS
1. Por qu usamos para esta prctica 4UHA de antgeno viral?

ES IMPORTANTE LA CONCENTRACION VIRAL

2. Por qu realizamos dilucin seriada del suero y no del Ag. Viral?

POR LA CARGA VIRAL

3. Por qu despus de dispensar el Ag. viral se deja reposar a 10
min?

PARA QUE HAYA UNA POSIBLE REACCION ENTRE EL Ag. VIRAL
Y LOS ANTICUERPOS.


4. la prueba es especfica, sensible, especfica y sensible, ninguna?

ES ESPECFICA

5. H.A se usa glbulos rojos humanos grupo o ?

ES POR QUE EL GRUPO O NO PRESENTA ANTIGENOS COMO LOS DEL
GRUPO A, B, AB; QUE PODRIAN DAR INTERFERENCIAS CON LOS
ANTIGENOS DE LA PRUEBA DE IHA