UNFV-OBSTETRICIA

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Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL
FACULTAD DE MEDICINA HIPOLITO UNANUE




TEMA: Espectrofotometra
PROFESORA: Guadalupe D Rigo
INTEGRANTES:
Chuquisuta Estacio, Frescia Celeste
Cullar Ors, Edith
Daz Garca, Susy Juana
ESCUELA PROFESIONAL: Obstetricia
CICLO: Segundo ao
AO:







INTRODUCCIN
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En este primer informe de bioqumica a cerca de Espectrofotometra
analizaremos conceptos esenciales para una adecuada aplicacin de la ley de
Lambert-Beer y su representacin grfica en la curva de calibracin para
hallar la concentracin desconocida y en el espectro de absorcin
determinaremos la longitud de onda as arrojando resultados que nos
permitir comprender con mayor facilidad la ley mencionada.

Para su mejor comprensin explicaremos a detalle los conceptos de cada
factor y los objetivos. Y ya con conocimientos previos, posteriormente podremos
hacer un adecuado uso del espectrofotmetro.
















ESPECTROFOTOMETRA
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Es el mtodo de anlisis ptico ms usado en el rea de investigacin y se
define como la medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe un
sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a las
mediciones a una determinada longitud de onda.

Espectrofotmetro
Es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Su eficiencia,
resolucin, sensibilidad y rango espectral, dependern de las variables de
diseo y de la seleccin de los componentes pticos que lo conforman. Aunque
pueden variar en diseo, en especial con la incorporacin de ordenadores para
el anlisis de datos, todos los espectrofotmetros constan, segn se indica en la
figura, de:

1. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una determinada
longitud de onda: filtros, prismas, redes de difraccin.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o
tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plstico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o slice fundido,
porque el vidrio no transmite la radiacin UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las seales luminosas en
seales elctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.


Absorbancia
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La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que
nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el
logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It / I0.
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la
transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una
determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.

Transmitancia
La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la
cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la
muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, I0 , y se representa
normalmente en tanto por ciento: % T = It / I0 x 100
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la
concentracin no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa.


La ley Lambert Beer o de la absorcin
Da informacin cuantitativa de cmo es que la atenuacin de la radiacin
depende de la concentracin de las molculas que la absorben y de la distancia
que recorre el rayo en el medio absorbente. Cuando la luz atraviesa una
solucin de analito, la intensidad de radiacin disminuye como consecuencia de
la excitacin de analito. Cuanto mayor sea la trayectoria del rayo en la solucin
de analito de una concentracin dada, habr ms especies que absorban la
radiacin y la atenuacin ser mayor. Esta ley afirma que la cantidad de luz
que sale de una muestra es disminuida por tres fenmenos fsicos:

La cantidad de material de absorcin en su trayectoria (concentracin)
La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia
de la trayectoria ptica)
La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea
absorbido por el material (absorbencia o coeficiente de extincin)

Esta relacin puede ser expresada como: A = dc
A = Absorbencia
= Coeficiente molar de extincin
d = Distancia en cm
c = Concentracin molar

Curva de calibracin
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Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se
preparan soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la
absorbancia a la longitud de onda elegida. Si es vlida la ley de Beer, para esa
sustancia a esas concentraciones, la relacin debe ser una recta, que pase por el
origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a
diversos factores.







Espectro de absorcin
Es la medida de la cantidad de luz absorbida por un compuesto en funcin de la
longitud de onda de la luz. Se representa por un grfico de absorbancia en
funcin de la longitud de onda o de la frecuencia. Es necesario conocer el
espectro de absorcin de la muestra que se quiere determinar para definir cul
es la longitud de onda de la radiacin incidente, que causar la absorcin
mxima de la especie y as obtener la mejor sensibilidad en su cuantificacin en
un espectrofotmetro.








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INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Grfica N1 : Espectro de absorcin de anaranjado de metilo

En esta grfica mediante las coordenadas de absorcin y longitud de
onda se obtiene el valor de al que el compuesto presenta la mayor absorbancia
(mx), en otras palabras el punto ms elevado de la grfica alude a la
mayor absorcin de luz.

Grfica N2 : Curva de calibracin de anaranjado de metilo

Mediante los valores postulados de absorbancia y concentracin nos fue
posible graficar la curva de calibracin aproximada, que nos sirve para
hallar la concentracin desconocida de una solucin, teniendo como dato
nicamente su absorbancia.















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CONCLUSIONES

La espectrofotometra es de gran utilidad en el anlisis de sustancias,
mediante la aplicacin de sus fundamentos que nos ayudan a determinar
diferentes concentraciones.

El espectrofotmetro es importante, ya que a partir de una solucin con
soluto desconocido y sustancia conocida nos permite comparar la
radiacin absorbida o transmitida; as como la determinacin de cidos
nucleicos incluyendo ADN / ARN, enzimas.

Se logr llevar a la prctica la ley de Lambert Beer, empleando la curva
de calibracin para determinar la concentracin de una muestra que solo
presentaba absorbancia.

Por medio de la espectrofotometra y empleando la tcnica del espectro
de absorcin se puedo observar el factor de absorbancia en determinada
longitud de onda, y la mayor absorcin de luz de una sustancia.













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BIBLIOGRAFA

CONNOR, K.A., "Curso de anlisis farmacutico", Ed. Reverte. 1980.

MIONES, J., "Manual de tcnicas instrumentales", Crculo editor
Universo. 1978.

Skoog, Douglas A. Qumica Analtica,.Edit Mc Graw Hill 7 ed. Mxico
2001.Pg. 282