Guia para Validacion de Metodos

Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito Gua EURACHEM
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Mtodos Analticos
Adecuados a
su Propsito
Gua de Laboratorio para Validacin
de Mtodos y Tpicos Relacionados
Traduccin libre por:
Q. Martha Elba Pedrero Izquierdo
CENTRO NACIONAL DE METROLOGIA
CENAM-MXICO
Primera Edicin en Ingls 1.0 - 1998
8
PREFACIO
El presente documento es una traduccin de la obra original en ingls The Fitness
for Purpose of Analytical Methods resultado del esfuerzo de la Direccin de
Metrologa de Materiales por llevar la informacin al pblico interesado de habla
hispana y crear un foro de discusin sobre la validacin de mtodos, de acuerdo a
la poltica del CITAC (Co-Operation on International Traceability in Analytical
Chemistry).
Se agradece la colaboracin especial de la Q.M. Rocio Arvizu Torres, el M. En C.
Antonio Salas Tellez y el M. En C. Alejandro Prez Castorena quienes durante su
estancia en el Centro Nacional de Metrologa, participaron activamente en esta
traduccin.
Gracias al Dr. Yoshito Mitani Nakanishi, Director del rea de Metrologa de
Materiales, miembro activo del CITAC, por impulsar el desarrollo de este trabajo.
En especial, agradecemos al Dr. Hctor Nava Jaimes, Director del Centro
Nacional de Metrologa, por los comentarios y sugerencias realizados a este
documento.
Se agradece al comit ejecutivo de EURACHEM por permitirnos traducir este
documento.
9
MTODOS ANALTICOS ADECUADOS A SU PROPSITO
Contenido
1. Prefacio
2. Introduccin
3. Qu es la validacin de un mtodo?
4. Por qu es necesaria la validacin de un mtodo?
(a) La importancia de la medicin analtica
(b) El deber profesional del qumico analtico
5. Cundo deben ser validados los mtodos?
6. Cmo deben ser validados los mtodos?
(a) Quin lleva acabo la validacin de un mtodo?
(b) Decidiendo que grado de validacin es requerido
(c) El requisito analtico
(d) Desarrollo del mtodo
(e) Diferentes parmetros de desempeo de un mtodo y lo que muestran
(f) Las herramientas de la validacin
7. Utilizando mtodos validados
8. Utilizando datos de validacin para disear el control de calidad
9. Documentacin de mtodos validados
10. Implicaciones de los datos de validacin para estimar resultados y para
informarlos
11. Referencias y bibliografa
Anexo A Definiciones
Anexo B Protocolo de documentacin del mtodo
Anexo C Grupo de trabajo de EURACHEM
10
MTODOS ANALTICOS ADECUADOS A SU PROPSITO
Gua del Laboratorio para la Validacin de Mtodos y Tpicos Relacionados
1. Prefacio
En el Reino Unido una iniciativa para promover la buena prctica de laboratorio
en las mediciones analticas, ha identificado 6 principios de la prctica analtica
los cuales, tomados en conjunto, constituyen la mejor prctica. Los seis
principios han sido descritos con ms detalle en otra gua
(1)
y son:
1. Las mediciones analticas deben realizarse para satisfacer un requisito
establecido ( i.e. para un objetivo definido).
2. Las mediciones analticas deben realizarse utilizando mtodos y equipos
que han sido probados para asegurar que son adecuados para el propsito
establecido.

3. El personal que realiza las mediciones analticas deber ser calificado y
competente para emprender la tarea asignada (y demostrar que pueden
desempear el anlisis apropiadamente).

4. Deber existir una evaluacin peridica e independiente del desempeo
tcnico del laboratorio.

5. Las mediciones analticas hechas en un laboratorio deben ser consistentes
con aquellas que se realicen en cualquier otro laboratorio.

6. Las organizaciones que hacen mediciones analticas deben tener un sistema
de control de calidad definido y procedimientos de aseguramiento de
calidad.
Estos principios son igualmente relevantes para los laboratorios que trabajan
aisladamente como para aquellos que producen resultados los cuales necesitan
ser comparados con los de otros laboratorios.
La intencin principal de este documento es apoyar a los laboratorios en la
implementacin del principio 2, al dar una gua en la evaluacin de los mtodos
de prueba con la finalidad de demostrar que son adecuados a su propsito.
11
2. Introduccin

2.1 La validacin de un mtodo es un requisito importante en la prctica del
anlisis qumico. Sin embargo, a pesar de su importancia, porque debe
hacerse y cuando, y exactamente que se necesita hacer, parece ser lo
menos importante entre los qumicos analticos. Existen muchas referencias
relacionadas a la validacin de mtodos en la literatura tcnica,
especialmente relacionada a mtodos en particular, pero en la gran mayora
de las veces es sub-utilizada. Algunos analistas ven la validacin de mtodo
como algo que solo puede ser hecho al colaborar con otros laboratorios y por
consiguiente no lo realizan.

2.2 El propsito de esta gua es discutir los aspectos relacionados a la
validacin de mtodo e incrementar el entendimiento de los lectores de lo
que est involucrado, porque es importante, y dar alguna idea de como
puede ser logrado.

2.3 Se espera que esta gua sea del mayor uso para a) gerentes de laboratorio
quienes son responsables de asegurar que los mtodos, bajo su
responsabilidad, estn adecuadamente validados y b) los analistas
responsables de llevar a cabo estudios en mtodos con propsitos de
validacin. Algn otro miembro del personal puede encontrar la gua como
fuente de informacin de soporte, personal antiguo desde un punto de vista
gerencial y personal nuevo desde un punto de vista tcnico.

2.4 La gua est dirigida a los laboratorios que necesitan validar mtodos pero
que trabajan aislados, sin una posibilidad inmediata de participar en
esquemas de intercolaboracin. Esto permite dirigir al lector hacia los
protocolos establecidos donde estos existen y donde no, dando una
introduccin sencilla al proceso involucrado en la validacin y suministrando
algunas ideas bsicas que permitan al lector disear sus propias estrategias
de validacin. Esto incluye las referencias a material bibliogrfico adicional
en aspectos tcnicos especficos de la validacin.

2.5 La gua evita con gran nfasis el uso de la estadstica aunque
indudablemente aquellos con experiencia prctica de estadstica sencilla
encontrarn el proceso de la validacin del mtodo ms fcil para entender
e implementar. Donde es apropiado, las frmulas se han incluido con las
definiciones en el Anexo A.

2.6 El entendimiento del analista sobre la validacin del mtodo est inhibido
por el hecho de que muchos trminos tcnicos utilizados en los procesos
para evaluar mtodos varan en los diferentes sectores de las mediciones
analticas, tanto en trminos de su significado cuanto tambin en la forma
que son determinados. Esta gua no puede decir cuando un trmino se usa
12
correcta o incorrectamente aunque pretende proporcionar alguna
clarificacin. El mejor consejo cuando se usa un trmino sujeto a
malinterpretacin, es establecer que acuerdo se ha usado, as se evita
cualquier confusin por quienes estn usando los datos.

2.7 Notas en el uso de esta gua :

2.7.1 Los trminos ms importantes utilizados en la gua se definen en el
Anexo A. Las definiciones de ISO e IUPAC se han proporcionado siempre
que ha sido posible. Los usuarios deben notar que no hay un acuerdo
universal en la definicin de algunos de los trminos utilizados en la
validacin de mtodo.

2.7.2 En el captulo 6, los cuadros sombreados proporcionan un consejo en
referencia rpida para determinar el desempeo de cada parmetro en el
mtodo. Sin embargo, se reconoce que en muchos casos los laboratorios
no tendrn el tiempo ni los recursos para realizar los experimentos con tal
detalle. Llevando a cabo las operaciones descritas en los cuadros y
utilizando menos replicas que las sugeridas, an as se obtendr
informacin til y esto es ciertamente mejor que hacer ningn trabajo.
Aunque, la informacin obtenida ser menos confiable que si una
replicacin completa ha sido utilizada.

1. Que es la validacin del mtodo ?

3.1 La definicin ISO de validacin se da en el Anexo A. Se puede interpretar la
validacin del mtodo como el proceso de definicin de las necesidades
analticas y la confirmacin de que el mtodo en cuestin ha considerado
capacidades consistentes con las que la aplicacin requiere. Est implcito que
ser necesario evaluar las capacidades de desempeo del mtodo. Esto
concuerda con la interpretacin de la definicin ISO por Morkowski
(2)
. El juicio
de la aptitud del mtodo es importante; en el pasado la validacin del mtodo
tenda a concentrarse en el proceso de evaluacin de los parmetros de
desempeo.

3.2 Est implcito en el proceso de validacin del mtodo que el estudio para
determinar los parmetros de desempeo se realiza usando equipos dentro de
especificaciones, trabajando correctamente y que se encuentre
adecuadamente calibrado. De la misma forma el operador que realiza los
estudios debe ser tcnicamente competente en el campo de trabajo bajo
estudio y debe poseer suficiente conocimiento sobre el trabajo a realizar con el
fin de que sea capaz de tomar decisiones apropiadas de las observaciones
hechas mientras progresa el estudio.

13
3.3 La validacin del mtodo generalmente se considera que esta relacionada
estrechamente con el desarrollo del mtodo, de hecho no es posible determinar
exactamente donde termina el desarrollo del mtodo y cuando empieza la
validacin. Muchos de los parmetros de desempeo del mtodo que estn
asociados a su validacin y por lo general son evaluados, por lo menos
aproximadamente, como parte del desarrollo del mtodo.
4. Por qu es necesaria la validacin de un mtodo?
(a). Importancia de las mediciones analticas
4.1 Millones de mediciones analticas se realizan diariamente en miles de
laboratorios alrededor del mundo. Hay innumerables razones para realizar estas
mediciones, por ejemplo: como una forma de evaluar bienes para propsitos de
comercio, apoyo a la salud, verificar la calidad del agua potable para su
consumo humano, anlisis de la composicin elemental de una aleacin para
confirmar su conveniencia para usarse en la construccin de aeronaves,
anlisis forenses de fluidos corporales en investigaciones criminales.
Virtualmente cada aspecto de la sociedad est apoyada de algn modo por las
mediciones analticas.

4.2 El costo de realizar estas mediciones es elevado y costos adicionales surgen
de las decisiones hechas en base a los resultados. Por ejemplo, si las pruebas
muestran que algn alimento no es adecuado para su consumo pueden resultar
demandas por compensacin; pruebas que confirmen la presencia de drogas
prohibidas podran ocasionar multas, encarcelamiento o an en algunos
pases, la ejecucin. Claramente es importante determinar el resultado correcto
y ser capaz de demostrar que lo es.
(b). El deber profesional del qumico analtico
4.3 Si el resultado de una prueba no es confiable entonces tiene poco valor y la
prueba no tuvo porque haberse realizado as. Cuando un cliente encarga
un trabajo analtico a un laboratorio, se presume que el laboratorio tiene un
conocimiento experto que el cliente no tiene por s mismo. El cliente espera
confiar en los resultados reportados y por lo general solo los cuestiona
cuando surge una disputa. As el laboratorio y su personal tienen una clara
responsabilidad para justificar la confianza del cliente proporcionando la
respuesta correcta a la parte analtica del problema, en otras palabras,
resultados demostrables que son adecuados para su propsito. Esto lleva
implcito que las pruebas realizadas son apropiadas para la parte analtica
del problema que el cliente desea resolver, y que el informe final presenta los
datos analticos de tal manera que el cliente puede entenderlos rpidamente y
sacar conclusiones apropiadas. La validacin del mtodo permite a los
qumicos demostrar que el mtodo es adecuado para su propsito.
14
4.4 Para que un resultado analtico concuerde con el propsito requerido, debe ser
lo suficientemente confiable para que cualquier decisin basada en l pueda
tomarse con confianza. As, el desempeo del mtodo debe ser validado y la
incertidumbre del resultado, a un nivel de confianza dado, estimada. La
incertidumbre deber ser evaluada y establecida de una forma que sea
ampliamente reconocida, consistente de forma interna y fcil de interpretar. La
mayor parte de la informacin requerida para evaluar la incertidumbre se puede
obtener durante la validacin del mtodo. Este tpico se estudia brevemente
en la seccin 6; se listan referencias adicionales en la bibliografa.

4.5 Concerniente a que tan bueno es un mtodo y con cuanta habilidad se ha
usado, un problema analtico puede ser resuelto mediante el anlisis de las
muestras, slo si stas son apropiadas al problema. La toma adecuada de las
muestras es un trabajo que requiere de gran habilidad, requiere entender el
problema y su relacin con la qumica. Un laboratorio, como parte de la
atencin al cliente, debe, siempre que sea posible, aconsejarlo sobre la forma
de tomar las muestras. Obviamente habr ocasiones cuando el laboratorio no
pueda por el mismo tomar o influenciar en la toma de las muestras. En estas
ocasiones los resultados de anlisis tendrn que ser reportados en base a
como se recibieron las muestras, y el informe debe indicar esta distincin
claramente.

5. Cundo deben ser validados los mtodos?

5.1. Un mtodo debe ser validado cuando sea necesario verificar que sus
parmetros de desempeo son adecuados para el uso en un problema
analtico en particular. Por ejemplo :

un nuevo mtodo desarrollado para un problema en particular
un mtodo establecido revisado para incorporar mejoras o extenderlo a un
nuevo problema
cuando el control de calidad indica que un mtodo establecido est cambiando
con el tiempo
un mtodo establecido usado en un laboratorio diferente o con diferentes
analistas o con diferente instrumentacin
para demostrar la equivalencia entre dos mtodos : i.e. un nuevo mtodo y un
mtodo de referencia.
5.2. El alcance de la validacin o la revalidacin requerida depender de la
naturaleza de los cambios hechos al aplicar nuevamente un mtodo a
diferentes laboratorios, en la instrumentacin, en los operadores y en las
circunstancias en las cuales el mtodo va a ser utilizado. Algn grado de
validacin siempre es apropiado an cuando se usan mtodos de referencia
publicados aparentemente bien caracterizados. Este aspecto se considera
con ms detalle en la seccin 7.
15

6. Cmo deben ser validados los mtodos?
(a) Quin lleva a cabo la validacin del mtodo ?
6.1 El laboratorio que utiliza un mtodo es responsable de asegurar que est
validado adecuadamente, y si es necesario de llevar a cabo trabajo adicional
que complemente los datos ya existentes. Por ejemplo, cuando un mtodo ha
sido validado por una organizacin de certificacin, como la AOAC
internacional, el usuario normalmente necesitar nicamente establecer los
datos de desempeo del mtodo para su propio uso.
6.2 Se ha publicado ampliamente lo concerniente a la validacin de mtodos
mediante estudios de colaboracin. Existe un gran nmero de protocolos
relacionados con este tipo de validacin
(3-7)
. Si un mtodo en proceso de
desarrollo tendr un amplio uso, quiz como un procedimiento de referencia
publicado, entonces el estudio de colaboracin involucrando un grupo de
laboratorios es, probablemente, la forma preferida de llevar a cabo la
validacin. Sin embargo, esto no es siempre una opcin adecuada para los
laboratorios industriales. La aplicacin para la cual el mtodo es requerido
puede ser esotrico al punto tal de que ningn otro laboratorio se interese en
colaborar. Aquellos que puedan estar interesados podrn ser competidores.
Siempre que sea imposible o inconveniente para un laboratorio entrar a un
estudio de colaboracin, surgirn preguntas tales como:
Los laboratorios por ellos mismos pueden validar los mtodos?, Cmo?
Los mtodos validados de esta forma sern reconocidos por otros
laboratorios?
Qu clase de reconocimiento puede esperarse para mtodos internos
utilizados en un ambiente de normalizacin?
6.3 Trabajando aisladamente se reduce inevitablemente la cantidad de datos de
validacin que pueden ser adquiridos para un mtodo. Principalmente se
restringe el tipo de informacin de la comparabilidad interlaboratorios. Esta
informacin no siempre se requiere por lo que no es un problema. De ser
necesario, es posible obtener una idea de la comparabilidad de los resultados
de las mediciones de cualquier mtodo dado con otros obtenidos de otro lugar
mediante la medicin de materiales de referencia certificados o comparar el
mtodo contra uno para el cual la validacin se ha realizado.

6.4 La aceptacin o no de los mtodos validados por un solo laboratorio con
propsitos legales depender en cualquier directriz que cubra el rea de la
medicin concerniente. Sera normalmente posible obtener una clara
declaracin de la poltica del cuerpo regulatorio apropiado. El siguiente ejemplo
16
ha sido sustrado de las guas de Inspeccin de Agua Potable del Reino
Unido
(8)
.
Un laboratorio que emplea un mtodo analtico que no est referenciado a un
mtodo completamente validado se esperar que demuestre que el mtodo ha
sido bien documentado y probado con la referencia actual recomendada por el
mtodo de referencia autorizado. Deber demostrar que se ha establecido lo
siguiente :
a. las tolerancias requeridas para todas las mediciones realizadas dentro del
mtodo (volumen, temperatura, masas etc.) ;

b. las formas medidas del determinante, incluyendo la especiacin;

c. el efecto de las interferencias ha sido ampliamente identificado y cuantificado;

d. las fuentes significativas de error y los medios adecuados para controlarlas
han sido identificados.

6.5 La Asociacin Oficial de Qumicos Analticos (Association of Official Analytical
Chemists - AOAC International) siempre ha sido un partidario de las pruebas
interlaboratorio como el medio preferido para la validacin de mtodos.
Recientemente ha introducido su Programa de Verificacin de Mtodos por
pares (Peer Verified Method Program)
(9)Y
para la validacin de mtodos por
laboratorios trabajando nicamente con uno u otros dos.
(b) Decidiendo que grado de validacin es requerido
6.6 El laboratorio tiene que decidir cul de los parmetros de desempeo del
mtodo necesita ser caracterizado con el fin de validar el mtodo. La
caracterizacin del desempeo del mtodo es un proceso caro e inevitable y
estar sujeto por consideraciones de costo y de tiempo. Empezando con una
especificacin analtica considerada cuidadosamente se tiene una buena base
sobre la cual planear el proceso de validacin, pero es reconocido que en la
prctica esto no siempre es posible. El laboratorio deber hacer lo mejor que
pueda con las limitantes impuestas, tomando en cuenta los requisitos del
cliente, la experiencia existente en el mtodo y la necesidad de compatibilidad
con otros mtodos similares que ya estn en uso por el laboratorio o usados
por otros laboratorios. Algunos de los parmetros podrn ser determinados
durante la etapa de desarrollo del mtodo. A menudo un grupo particular de
experimentos proporcionar informacin de diferentes parmetros, as que,

Y
Nota del traductor: Se hace la traduccin de revisin por pares (peer review), considerando un
panel de revisin de un mximo de tres autoridades en la materia, por medio de la cual dos de
ellas hacen una revisin exhaustiva de la otra para luego intercambiar papeles.
17
con una planeacin cuidadosa el esfuerzo requerido para obtener la informacin
necesaria puede ser minimizado.
6.7 Las implicaciones de las limitaciones discutidas anteriormente son
particularmente crticas cuando el mtodo no va a ser usado rutinariamente.
La validacin de los mtodos que sern usados rutinariamente es un proceso
comparativamente sencillo. Sin embargo, debe el mismo proceso de
validacin ser aplicado a un anlisis ad-hoc?. Claramente los mismos
principios aplican que a una prueba de rutina. Es necesario que sea capaz de
tener un adecuado nivel de confianza en los resultados producidos, de otra
forma, el trabajo no tiene ningn valor. Es difcil encontrar el balance entre las
limitantes de costo y tiempo, y la necesidad del mtodo. En algunas
circunstancias ser ms adecuado destinar el trabajo a otro laboratorio donde
ste pueda ser desarrollado en fundamentos de rutina.
Los requisitos de validacin pueden ser especificados en guas dentro de un
sector particular de mediciones relevantes al mtodo y es recomendable que
donde se encuentren disponibles se realicen. Por ejemplo, la validacin de un
mtodo para anlisis de alimentos debe concordar con la estrategia de validacin
usada por AOAC. Esto asegurar que la terminologa particular de validacin
junto con la estadstica empleada se interpretan de una manera consistente
dentro del sector relevante. El reconocimiento oficial de un mtodo puede requerir
la caracterizacin empleando un estudio de colaboracin. requisitos de regulacin
podrn requerir que un mtodo en particular sea seguido al pie de la letra an
cuando el laboratorio lo considere inexacto o inapropiado. La validacin adicional
ser necesaria para confirmar el desempeo satisfactorio del analista.
(c) Requisitos Analticos
6.9. Enfrentado un problema analtico particular, idealmente, el laboratorio debera
estar de acuerdo en primer instancia con el cliente acerca de las caractersticas
analticas que definen los requisitos de desempeo que un mtodo debe tener
para ser adecuado al momento de resolver el problema analtico. En respuesta
a este requisito, el laboratorio puede evaluar si los mtodos existentes son
adecuados y si es necesario desarrollar un nuevo mtodo. Este proceso
iterativo de desarrollo y evaluacin contina hasta que el mtodo es capaz de
igualarse con el requisito; un desarrollo posterior no es necesario y el trabajo
analtico puede proceder. Este proceso de evaluacin del criterio de desempeo
y la confirmacin de que el mtodo es adecuado se ilustra en la figura 1, es la
validacin del mtodo. La tabla 1 muestra la clase de preguntas que pueden
presentarse al formalizar una solicitud analtica (columna 1), y los
correspondientes parmetros de desempeo del mtodo los cuales pueden
necesitar ser caracterizados (columna 2).
18
Figura 1: Eleccin, desarrollo y evaluacin de mtodos.
6.10 En la realidad una solicitud analtica raramente es acordada formalmente con
anticipacin. Ms an, si est establecida, se har retrospectivamente. Por lo
general los clientes definen sus requisitos en trminos de costo y/o tiempo y
raramente conocen que tanto los mtodos necesitan desempearse, a pesar de
que los requisitos de desempeo para los mtodos pueden ser especificados
cuando los mtodos apoyen un requisito regulatorio o conformen a una
especificacin. Comnmente, se deja a la discrecin del analista el decidir qu
desempeo se requiere del mtodo y a menudo esto significa establecer un
requisito analtico a la par con la capacidad conocida del mtodo. Las limitantes
financieras pueden determinar que el desarrollo de un mtodo, que satisface un
requisito analtico en particular no es econmicamente viable; en tal caso, debe
tomarse una decisin ya sea para que el requerimiento de la solicitud se
encuentre a un nivel ms asequible, o bien, para retomar la justificacin del
anlisis.
NO
Problema que requiere
del anlisis qumico:
establecimiento de las
necesidades analticas
Identificar la existencia del
mtodo o desarrollo de un
muevo mtodo un nuevo
mtodo
Desarrollo del
mtodo
Procede el trabajo
analtico
Incapacidad para
hacer el trabajo:
subcontratar?
Requisitos analticos re-
establecidos en trminos
de lo que se ha
completado
Notas :
La validacin del mtodo consiste de esta
etapa de evaluacin, junto con cualquier
parmetro de desempeo que pueden ser
evaluado en el desarrollo del mtodo.
Adecuado para su propsito.. Sin tener en
cuenta de que datos de desempeo
existentes se disponen para el mtodo, el
ajuste a su propsito ser determinado por
como el mtodo se desempea cuando es
utilizado por un analista designado con el
equipo e infraestructura disponibles.
FIN
SI
SI
SI
NO
NO
Evaluar si el
mtodo cumple
al propsito
como se utiliza
en el laboratorio
Desarrollo
posterior
factible?
Se atena el
requisito analtico?
19
Tabla 1: Elementos de los requisitos analticos y caractersticas de desempeo
relacionadas
Elementos de los requisitos
analticos
caractersticas de
desempeo
relacionadas...
.. con la
seccin
Notas
Qu clase de respuesta se
requiere- cuantitativa o cualitativa?
Confirmacin de la
identidad,
selectividad/especificidad
Limite de deteccin
Limite de cuantificacin
6.13-6.19
6.20-6.23
6.24-6.25
El analito esta dispersado o
localizado?
a)
Si el analito est presente en ms
de una forma, Est interesado en
el analito extrable, libre o total?
Confirmacin de identidad
Recuperacin
6.13-6.19
6.46-6.47
Cules son los analitos de inters
y en que niveles estn presentes?
(%, gg
-1
, ngg
-1
, etc.)?
Confirmacin de identidad
Limite de deteccin
Limite de cuantificacin
Intervalos de trabajo y
lineales
6.13-6.19
6.20-6.23
6.24-6.25
6.26-6.29
Qu tan precisa y exacta debe ser
la respuesta? / Qu grado de
incertidumbre es permitido y como
se va a expresar?
Recuperacin
Exactitud/ veracidad
Precisin de la
repetibilidad
Precisin de la
reproducibilidad
6.45-6.46
6.30-6.36
6.37-6.39
6.37-6.38,
6.40
b)
Cul es la naturaleza qumica,
fsica y biolgica de la matriz?
a)
Cules son las interferencias ms
probables al analito(s)?
Selectividad/especificidad 6.13-6.19
Se requiere de muestreo y
submuestreo (y ser realizado por
el laboratorio)?
a)
Cules son, si existen, las
restricciones en la muestra tamao/
disponibilidad?
a)
Aplican las limitantes de recursos,
personal, tiempo, dinero, equipo y
reactivos, infraestructura del
laboratorio?
a)
Necesitan compararse los
resultados con los de otros
laboratorios?
Robustez
Precisin de la
reproducibilidad
6.45
6.37-6.38,
6.40
Necesitan compararse los
resultados con especificaciones
externas?
Exactitud
Precisin de la
reproducibilidad
6.30-6.36
6.37-6.38,
6.40
Notas:
a) No todos los elementos de los requisitos analticos estn directamente relacionados a los requisitos de validacin del
mtodo. Algunos de ellos indicarn de forma general a las tcnicas en que son aplicables. Por ejemplo, diferentes
tcnicas sern aplicadas de acuerdo a que si el analito est disperso a travs de la muestra o aislado en la superficie.
b) Un elemento esencial de los requisitos analticos es que debe ser posible si un mtodo es adecuado o no para su
propsito inicial y por consiguiente debe incluir la incertidumbre requerida expresada, como incertidumbre estndar o bien
como incertidumbre expandida.
20
(d) Desarrollo del Mtodo
6.11 El desarrollo del mtodo puede tomar varias formas, por un lado puede
involucrar el adaptar un mtodo existente, realizando cambios menores de tal
manera que sea adecuado a su nueva aplicacin. Por ejemplo, un mtodo
requerido para determinar tolueno en agua puede ser adaptado de un mtodo
establecido para benceno en agua. La matriz es la misma y los dos analitos
tienen propiedades generales similares. Es probable que los mismos principios
de aislamiento, identificacin y cuantificacin que son aplicados al benceno
tambin puedan aplicarse el tolueno. Por otro lado, un mtodo se requiere
para determinar benceno en suelo la adaptacin del mtodo de benceno en
agua puede no ser la mejor opcin. La adaptacin de algunos otros mtodos
para determinar compuestos orgnicos en el suelo puede ser un mejor punto de
partida.
6.12 En otro extremo, el qumico analtico puede iniciar con algunas ideas burdas
y aplicar su experiencia y su pericia para disear el mtodo ms adecuado.
Esto puede involucrar una innovacin importante basada en una exploracin
novedosa de las propiedades conocidas del analito o mensurando. Claramente
esto involucra una gran cantidad de nuevo trabajo e inicialmente un cierto grado
de duda de cuando el mtodo final ser exitoso. No es raro que para el
desarrollo de un mtodo se debe trabajar con diferentes ideas simultneamente
y eventualmente escoger la mejor.
(e) Los diferentes parmetros de desempeo de un mtodo y que muestran
Confirmacin de la identidad y la selectividad/especificidad (Ver anexo A
para definiciones)
6.13 En general se dice que los mtodos analticos consisten en etapas de
mediciones las cuales pueden o no proceder de una etapa de separacin. Es
necesario establecer que la seal producida en la etapa de medicin, o alguna
otra propiedad medida, que ha sido atribuida al analito es debida nicamente al
l y no a la presencia de algo qumico o fsicamente similar o que sea el
resultado de una coincidencia. Esta es la confirmacin de la identidad. La
interferencia de otros compuestos con la medicin del analito, depender de
que tan efectiva es la etapa de separacin y la selectividad/especificidad de la
etapa de medicin. La selectividad y la especificidad son mediciones que
garantizan la confiabilidad de las mediciones en la presencia de interferencias.
La especificidad se considera generalmente que es el 100 % de la selectividad
pero el acuerdo no es universal. Cuando la etapa de la medicin no es
especfica, es posible establecer que ciertos analitos no interfieren, habiendo
primero revisado que este es el caso. Es bastante difcil establecer que nada
interfiere ya que siempre existe la posibilidad de encontrar alguna interferencia
21
no reconocida hasta el momento del anlisis. Habr casos en donde las
interferencias qumicas puedan ser identificadas para un mtodo en particular
pero que sean improbables las oportunidades de encontrarlas en la vida real.
El analista debe decidir en qu punto es razonable terminar de buscar
interferencias. Estos parmetros se aplican al anlisis cuantitativo y cualitativo.
6.14 Si las interferencias estn presentes y no pueden ser separadas del analito
de inters o si el analista no esta consciente de las interferencias
presentes, entonces stas tendrn varios efectos. Dependiendo de qu tanto
la identidad del analito se establezca, las interferencias podrn inhibir la
confirmacin, por ejemplo, al distorsionar la seal que surja del analito. stas
tambin pueden tambin tener el efecto de incrementar aparentemente la
concentracin del analito al contribuir a la seal atribuida a l, (o
contrariamente suprimir la concentracin del analito s contribuyen con una
seal negativa). Las interferencias por lo general afectarn la pendiente de
la curva de calibracin de una forma diferente a la que lo hara el analito de
inters, es as que la pendiente de la curva de calibracin del mtodo de
adiciones de estndar puede afectar la linealidad de la curva. Este efecto
tiene el potencial para indicar la posible presencia de una interferencia oculta,
pero no es til si la curva de recuperacin es, inherentemente, no lineal.
6.15 La selectividad de un mtodo, comnmente se investiga mediante el estudio
de su capacidad para medir el analito de inters en porciones de prueba en las
cuales interferencias especficas se han introducido deliberadamente (aquellas
que se creen que estn presentes en las muestras). Cuando no se est seguro
de que las interferencias estn presentes, la selectividad de un mtodo se
puede investigar estudiando su capacidad al medir el analito comparado con
otros mtodos o tcnicas independientes.
6.16 Ejemplos:
6.16.1 Un pico en un cromatograma puede ser identificado como el analito de
inters basado en que el material de referencia contenido el analito genera una
seal en el mismo punto del cromatograma. Pero La seal se debe al analito o
a algo ms que coincidentemente co-eluya ?. Puede ser una de ellas o ambas.
La identificacin del analito por este nico medio no es confiable y algn tipo de
evidencia de apoyo es necesaria. Por ejemplo, la cromatografa puede repetirse
utilizando una columna de diferente polaridad para ver si la seal de la muestra
y la seal generada por el material de referencia an aparece al mismo tiempo.
Cuando el pico se debe a ms de un compuesto, una columna de diferente
polaridad ser un buen medio de separar los compuestos. Si se cuenta con una
cromatografa de gases con deteccin de espectrometra de masas se podr
confirmar la identidad del analito o mostrar la mezcla presente. Algunos
detectores pueden monitorear la pureza del pico.
22
6.16.2 En la espectrometra de infrarrojo, la identificacin de compuestos
desconocidos puede realizarse comparando las absorbancias (i.e. picos) en el
espectro del analito con aquellos espectros de referencia almacenados en una
biblioteca espectral. Una vez que se cree que la identificacin correcta se ha
realizado, un espectro de un material de referencia del analito deber
registrarse exactamente bajo las misma condiciones que para la muestra de
prueba. Si se requiere que la comparacin sea ms exacta (Por ejemplo, el
mayor nmero de absorbancias que se requieren para que coincidan el analito y
el material de referencia) lo mejor es que se tenga confianza de que es una
correcta identificacin. Para asegurarse de un buen ajuste entre el analito y el
material de referencia, se necesita registrar los espectros bajo condiciones
similares y tambin podra de gran utilidad examinar qu tan dependiente es la
forma del espectro con respecto a que tan cuidadosamente el analito fue
separado y preparado para el anlisis de Infrarrojo (I.R.). Por ejemplo, si el
espectro fue registrado como un disco de sal, la distribucin del tamao de
partcula de la porcin prueba en el disco puede influir en la forma del espectro.
6.17 El uso de tcnicas confirmatorias pude ser til como un medio de verificar
identidades y cantidades del analito, mientras ms evidencia se pueda obtener
es mejor. Inevitablemente existe una relacin entre los costos y el tiempo
tomado para la identificacin del analito y la confianza en la cual se puede
decidir que la identificacin se ha hecho correctamente.
6.18 Algunos protocolos de validacin confunden la confirmacin de identidad con
repetibilidad. Mientras que la evaluacin de repetibilidad requiere que la
medicin se realice varias veces por una tcnica, la confirmacin (i.e. la
identidad del analito) requiere que la medicin se realice por varias tcnicas de
preferencia independientes. La confirmacin aumenta la confianza en la tcnica
bajo estudio y es especialmente til cuando las tcnicas de confirmacin operan
con principios significativamente diferentes. En algunas aplicaciones, por
ejemplo, el anlisis de compuestos orgnicos desconocidos por cromatografa
de gases, el uso de tcnicas de confirmacin es esencial. Cuando la tcnica
bajo evaluacin sea especfica, no ser necesario el uso de otras tcnicas de
confirmacin.
6.19 Otro aspecto de la selectividad que debe ser considerado es cuando el
analito puede existir en la muestra en ms de una forma tal que: ligado o
desligado, inorgnico u organometlico, o en diferentes estado de oxidacin.
23
Confirmacin de la identidad y selectividad/especificidad - Referencia Rpida
Qu hace ? ..Cuntas
veces ?
Calcular / determinar Comentarios
Anlisis de muestra
y materiales de
referencia mediante
mtodos
candidatos y otros
mtodos
independientes
1 Use los resultados de las tcnicas
confirmatorias para asegurar la
habilidad del mtodo para
confirmar la identidad del analito y
su habilidad para medirlo solo de
otras interferencias.
Decidir que tanta evidencia
de apoyo es razonable para
dar suficiente confiablidad.
Anlisis de
muestras
conteniendo varias
interferencias
sospechadas en la
presencia del
analito de inters
1 Examine el efecto de las
interferencias -la presencia de la
interferencia incrementa o inhibe la
deteccin o cuantificacin del
mensurando?
Si la deteccin o
cuantificacin se inhibe por
las interferencias, un
desarrollo posterior del
mtodo ser requerido.
Limite de Deteccin (Ver anexo A para definiciones)
6.20 Cuando las mediciones se realizan para niveles bajos del analito o sus
propiedades, i.e. en anlisis de trazas, es importante conocer cual es la
concentracin ms pequea del analito o el valor de propiedad que puede ser
confiablemente detectada por el mtodo. La importancia al determinar esto y
los problemas asociados a ello se elevan del hecho que la probabilidad de
deteccin no cambia repentinamente de cero a la unidad ya que un umbral se
est cruzando. Los problemas han sido investigados con detalle y se ha
propuesto un criterio de decisin. Confusiones extras surgen debido a que no
existe un acuerdo universal actual de la terminologa aplicada. El lmite de
deteccin o la deteccin del lmite no es aceptado ampliamente aunque se
usa en ciertos documentos.
(9,10)
. ISO utiliza como trmino general valor
mnimo detectable del estado variable neto el cual puede ser traducido para los
qumicos como la concentracin mnima neta detectable.
(11)
. IUPAC es
cautelosa en el uso del lmite de deteccin prefiriendo el valor (verdadero)
mnimo detectable
(12)
.
6.21 Para propsitos de validacin es suficiente proporcionar una indicacin del
nivel al cual la deteccin resulta problemtica. Para este propsito la
aproximacin que dice el blanco + 3s es suficiente. Cuando el trabajo est
como apoyo para un acuerdo de regulacin o especificacin que requiere algo
de mejor exactitud, el criterio descrito por IUPAC
(12)
y varios otros
(13-14)
es
apropiado. Se recomienda a los usuarios citar cualquier acuerdo que han
utilizado cuando se establece el lmite de deteccin.
24
Limite de Deteccin (LoD)- Referencia Rpida
Qu se analiza? Qu calcular de los resultados?
a) 10 muestras de blancos independientes medidos
cada uno una vez
b) 10 blancos independientes fortificados a la menor
concentracin aceptable medidos cada uno una vez
Desviacin estndar de la muestra (s) de a)
valores de los blancos, o b) valores de los
blancos de muestra fortificados.
LoD expresa la concentracin del analito
correspondiente a: a), el valor promedio de los
blancos de muestra + 3s o b) 0 + 3s
Este enfoque asume que una seal ms 3s sobre el valor del blanco podra surgir del blanco menos de
1% de las veces, y por lo tanto es probable de que haya surgido de algo ms, como del mensurando. El
inciso a) slo es til cuando el blanco da una desviacin estndar diferente de cero. Y obtener un blanco
verdadero puede ser difcil.
c) 10 blancos independientes fortificados a la
concentracin ms baja aceptable, medidos uno a la
vez.
Desviacin estndar de la muestra s de los
valores de los blancos fortificados
LoD expresa la concentracin del analito
correspondiente al valor del blanco de
muestra+4.65s (derivado de la prueba de
hiptesis)
La concentracin ms baja aceptable se considera que es la mnima concentracin para la cual se
puede alcanzar un grado aceptable de incertidumbre.
Se asume como una prctica normal evaluar la muestra y el blanco por separado y corregir con el
blanco mediante la sustraccin de la concentracin del analito correspondiente a la seal del blanco de
la concentracin correspondiente a la seal de la muestra.
Si las mediciones se han realizado bajo condiciones de repetibilidad, esto tambin da una medida de la
precisin correspondiente de la repetibilidad. (Anexo A, A20)
6.22 Ntese que la media y la desviacin estndar del blanco son dependientes de
la matriz del blanco. El lmite de deteccin del blanco, consecuentemente, ser
dependiente de la matriz. Similarmente cuando este criterio se use para tomar
decisiones crticas, los valores de precisin relevantes necesitarn
determinarse nuevamente a la par el desempeo actual de operacin.
25

Lmite de Deteccin (LoD) - Mediciones Cualitativas - Referencia Rpida

Qu analizar ?

Qu calcular de los datos ?

Blancos de muestra con adicin del analito a
niveles de concentracin en un intervalo.
A cada nivel de concentracin, ser
necesario medir aproximadamente 10
rplicas independientes. Las medidas de las
rplicas a varios niveles deben ser
aleatorias.
Se deber construir una curva de respuesta
de resultados de % positivos (o negativos)
contra la concentracin a partir de la cual
ser posible determinar mediante inspeccin
la concentracin del umbral a la cual la
prueba no es confiable.
6.23 Para mediciones cualitativas, es posible estar en el umbral de la
concentracin por debajo de la cual la especificidad se vuelve poco confiable. El
umbral puede variar si el experimento se repite en otro tiempo con diferentes
reactivos, fortificaciones, materiales para adicin (spiking), etc., en el ejemplo
mostrado en la Tabla 2, la identificacin positiva del analito deja de ser 100 %
confiable por debajo de los 100 g.g
-1
.
Tabla 2: Anlisis Cualitativo. Ilustracin de la determinacin de la
concentracin lmite (umbral).
Concentracin/ gg
-1
No. de replicas Resultados positivos/negativos
200 10 10/0
100 10 10/0
75 10 5/5
50 10 1/9
25 10 0/10
Lmite de Cuantificacin (ver anexo A para definiciones)
6.24 El lmite de cuantificacin (LoQ) estrictamente es la concentracin ms
baja de analito que puede ser determinada con un nivel aceptable de precisin de
repetibilidad y de veracidad. Tambin se define a travs de diversas
convenciones como la concentracin del analito correspondiente al valor del
blanco ms 5, 6 10 desviaciones estndar de la media del blanco. Algunas
veces esto es conocido como lmite de determinacin. LoQ es un valor indicador
y no deber ser usado en la toma de decisiones.
6.25 Observe que ni el LoD o el LoQ representa los niveles a los cuales la
cuantificacin es imposible, simplemente, es el tamao de la comparacin de las
incertidumbres asociadas con el resultado actual en la regin del LoD.
26
Limite de Cuantificacin (LoQ) - Referencia Rpida
Qu se analiza ? Qu calcular de los resultados ?
a) 10 muestras de blancos
independientes medidos una
vez
Desviacin estndar de los blancos de muestra (s)
LoD expresa la concentracin del analito correspondiente a los
valores del blanco de muestra ms : i)5s, ii)6s, iii)10s
Obtener un blanco verdadero puede ser difcil.
b) Fortificar alcuotas del blanco a
varias concentraciones del analito
cercanas al LoD.
Medir, una vez, 10 rplicas
independientes a cada nivel de
concentracin.
Calcular la desviacin estndar s de los valores del analito a cada
concentracin. Graficar s contra la concentracin y asignar un
valor al LoQ mediante inspeccin.
LoQ se expresa como la concentracin mnima del analito que
puede ser determinada con un nivel aceptable de incertidumbre.
Normalmente LoQ forma parte del estudio para determinar el intervalo de trabajo. ste no deber
determinarse por extrapolacin debajo de la concentracin ms baja del blanco fortificado.
Si las mediciones se han realizado bajo condiciones de repetibilidad, tambin da esto una medida de la
precisin de repetibilidad a esta concentracin.
Intervalo de trabajo e intervalo lineal (Ver anexo A para definiciones)
6.26 Para cualquier mtodo cuantitativo es necesario determinar el intervalo de las
concentraciones analticas o los valores de las propiedades sobre los cuales el
mtodo va a ser aplicado. Note que esto se refiere al intervalo de
concentraciones o valores de las propiedades de las soluciones medidos
recientemente ms que de las muestras originales. Al trmino menor del
intervalo de concentracin, los factores limitantes son los valores del lmite de
deteccin y/o cuantificacin. Al trmino superior del intervalo de concentracin,
las limitaciones quedarn impuestas por varios efectos que dependern del
sistema de respuesta del instrumento.
27
6.27 Dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo de respuesta lineal,
en el que, la seal de respuesta tendr una relacin lineal con la concentracin
del analito o el valor de la propiedad. La determinacin del intervalo puede ser
establecida durante la evaluacin del intervalo de trabajo. Note que los clculos
de la regresin por ellos mismos, son insuficientes para establecer la linealidad.
Para hacer esto, una inspeccin visual de la lnea y los residuales puede ser
suficiente. Existen pruebas subjetivas tales como las pruebas de bondad de
ajuste que continan siendo los mejores
(15-17)
. En general las revisiones de
linealidad requieren puntos de al menos 10 diferentes concentraciones o
valores de la propiedad.
6.28 La evaluacin de intervalos lineales y de trabajo puede tambin ser til para
la planeacin del grado de calibracin que es requerido cuando se utiliza el
mtodo de forma rutinaria. Es aconsejable investigar la varianza a travs del
intervalo de trabajo. Dentro del intervalo lineal, un punto de calibracin puede
ser suficiente para establecer la pendiente de la curva de calibracin pero en el
intervalo de trabajo la calibracin con varios puntos (preferentemente ms de
6) ser necesaria. La relacin entre la respuesta del instrumento a la
concentracin del analito no tiene que ser perfectamente lineal para que un
mtodo sea efectivo pero la curva debe repetirse da con da. Observe que el
intervalo de trabajo y el lineal puede no ser el mismo para diferentes tipos de
matrices de acuerdo con el efecto de las interferencias que aparezcan de la
matriz de la muestra.
6.29 Cuando el mtodo utiliza alguna una clase de instrumentacin ser til
considerar la sensibilidad, la resolucin, el umbral de la resolucin, y el tiempo
de respuesta (ver Anexo A).
28
Intervalo de trabajo e intervalo lineal. Referencia Rpida
Qu se analiza? Rplicas Qu calcular de los datos ? Comentarios
1.Blanco ms el
material de referencia
o los blancos de
muestra fortificados a
varias concentraciones
Se necesitan al menos
6 concentraciones ms
el blanco.
1 Grafique la respuesta de medicin (eje y)
contra la concentracin medida(eje x)
Visualmente examinar para identificar el
intervalo de lineal aproximado y los
lmites superiores e inferiores del
intervalo de trabajo.
Despus vaya a 2
Idealmente las diferentes
concentraciones debern
prepararse independientemente,
y no de alcuotas de la misma
solucin madre.
Esto dar una confirmacin
visual si el intervalo de trabajo es
lineal o no.
2. Materiales de
referencia o blancos de
muestra fortificados al
menos de 6 diferentes
concentraciones dentro
del intervalo lineal.
3 Grafique la respuesta de medida (eje y )
contra la concentracin del mensurando
(eje x)
Visualmente examine los puntos
extremos (outliers) los cuales pueden
no ser reflejados en la regresin.
Calcule el coeficiente de regresin
apropiado. Calcule y grafique valores
residuales (diferencia entre el valor actual
de y y el valor predicho por la lnea
recta, para cada valor de x). La
distribucin aleatoria de la lnea recta
confirma la linealidad. Tendencias
sistemticas indican la no-linealidad
despus vaya a 3.
En esta etapa es necesaria
probar un intervalo de trabajo que
se piensa que es lineal y donde
se pretende usar un slo punto
de calibracin.
Es inseguro remover los puntos
extremos sin verificar primero con
otras determinaciones a
concentraciones cercanas.
Si la varianza de las rplicas es
proporcional a la concentracin
entonces utilice un clculo de
regresin de peso en lugar de
uno sin l.
En ciertas circunstancias puede
ser mejor tratar de ajustar los
datos a una curva no lineal. Las
funciones mayores que las
cuadrticas por lo general no se
recomiendan.
3. Repita el
procedimiento para
LoQ (b)
Repita el procedimiento para LoQ
efectivamente forma el trmino menor del
intervalo de trabajo.
Trabaje con concentraciones
bajas sucesivamente hasta que
la exactitud y la precisin sean
aceptables.
29
Exactitud (ver Anexo A para definiciones)
6.30 La exactitud expresa la cercana de un resultado al valor verdadero (La
definicin de ISO 3534-1 se ha asumido en esta gua). La validacin de un
mtodo busca cuantificar la exactitud probable de los resultados mediante el
establecimiento de efectos sistemticos y aleatorios en los resultados.
Normalmente la exactitud se estudia como dos componentes: la veracidad y la
precisin. La veracidad (de un mtodo) es una expresin de que tan cercana
se encuentra la media de un conjunto de resultados (producidos por el mtodo)
del valor real. La veracidad normalmente se expresa en trminos de sesgo. La
precisin es una medida de que tan cercanos estn los resultados unos con
respecto a los otros y por lo general se expresa mediante mediciones tal como
la desviacin estndar la cual describe la dispersin de los resultados.
Adicionalmente una expresin comn de exactitud es la medicin de la
incertidumbre, la cual proporciona una forma simple de expresin de exactitud.
Estos tres diferentes parmetros sern discutidos en su momento
Veracidad
6.31 La asignacin prctica de la veracidad se fundamenta en la comparacin de
los resultados promedio de un mtodo con valores conocidos, esto es, la
veracidad se asigna contra un valor de referencia (i.e. un valor verdadero o un
valor verdadero convencional). Se dispone de dos tcnicas : la revisin con
respecto a los valores de referencia de un material caracterizado o de otro
mtodo caracterizado. Los valores de referencia son idealmente trazables a los
estndares internacionales. Los materiales de referencia certificados por lo
general se aceptan que proporcionan valores trazables y por lo tanto, el valor
de referencia es el valor certificado del MRC. Observe que los valores de
referencia, certificados u otros pueden ser absolutos (trazables al SI) o
convencionales, esto es, acordes para un fin en particular.
6.32 Para probar la veracidad utilizando un material de referencia, determine la
media y la desviacin estndar de una serie de replicas de prueba y compare
con el valor caracterizado del material de referencia. El material de referencia
ideal a emplearse sera uno certificado de matriz natural, lo ms similar a las
muestras de inters. Claramente la disponibilidad de estos materiales es
limitada. Los materiales de referencia para una validacin pueden ser :

Preparados a travs de adicionar materiales tpicos como materiales de
referencia de pureza certificada.
materiales tpicos bien caracterizados, verificados internamente para estabilidad
y conservados para el control de calidad interno.
6.33 La validacin requiere la adecuacin a un propsito por lo tanto, la seleccin
de un material de referencia est basada en el propsito de la validacin. El
material de referencia debe ser apropiado para este uso. Para un trabajo de
30
regulacin es relevante el empleo de un material de referencia certificado e
idealmente con una matriz similar. Para mtodos que se utilizarn por largos
periodos de tiempo, deber utilizarse un material interno de referencia que sea
estable. Para corto plazo o para un trabajo no crtico un estndar preparado o la
adicin de material de referencia es suficiente por lo general.

6.34 Para verificar con respecto a un mtodo alternativo, compare los resultados
de los dos mtodos empleados para la medicin de la muestra o muestras. La
(s) muestra (s) pueden ser materiales de referencia certificados, materiales de
referencia preparados internamente o simplemente, muestras tpicas. Existen
ventajas cuando se usan los MRC puesto que tienen una estabilidad y una
homogeneidad conocidas; adicionalmente muestran el sesgo con respecto a
los estndares internacionales. Pero por otra parte los MRC son caros y pueden
no ser representativos de las muestras.
Nota : Puede ser necesario repetir la verificacin de la veracidad cuando se encuentra
que los materiales tienen matrices radicalmente diferentes o que tienen diferentes niveles
de concentracin del analito con respecto a aquellos inicialmente revisados.
Interpretando mediciones de sesgo
6.35 La figura 2 muestra dos componentes del sesgo, referido aqu como el sesgo
de los componentes del mtodo y del laboratorio. El sesgo del mtodo surge de
los errores sistemticos inherentes al mtodo cualquiera que sea el laboratorio
que lo usa. El sesgo del laboratorio surge de errores sistemticos
caractersticos que son del laboratorio y de la interpretacin que ste hace del
mtodo. Particularmente un laboratorio solo puede estimar el sesgo combinado,
sin embargo, en la verificacin del sesgo, es importante estar al tanto de las
convenciones vigentes para el propsito presente. Por ejemplo en muchas de
las regulaciones para alimentos, los lmites de regulacin son establecidos en
trminos del resultado obtenido por el mtodo de referencia. Por lo tanto el
sesgo surge nicamente del mtodo particular (ver Figura 2) y se compensa y
se compara con otros laboratorios utilizando el mismo mtodo de inters
especial. El sesgo total determinado por un laboratorio particular durante la
validacin debe ser comparado con cualquier sesgo proveniente del mtodo de
regulacin.

6.36 Sin embargo, para la mayora de los propsitos, la aceptacin del sesgo debe
decidirse sobre la base del sesgo total medido contra los materiales apropiados
o los mtodos de referencia, tomando en cuenta la precisin del mtodo,
cualquier incertidumbre en los valores de los materiales de referencia y la
exactitud requerida para el uso final. Se recomiendan las pruebas estadsticas
de significacin.
31
Valor verdadero
Sesgo del mtodo Sesgo de laboratorio
Valor medido
(Media del laboratorio)
Sesgo Total
Nota : El sesgo del laboratorio y el del mtodo se muestra n afectando el valor en la mi sma direc c in. En realidad
este no es siempre el caso.
Media de la prueba de
intercomparacin
Figura 2. Tipos de sesgo.

Exactitud y Veracidad - Referencia Rpida

Anlisis

No de veces

Clculos

Comentarios
a) El blanco
reactivo y el
material de
referencia usando
el mtodo
candidato
10 El valor promedio del analito
proveniente del material de
referencia y restarle el valor
promedio del blanco.

Comparar con el valor verdadero o
aceptado del material de referencia
Da una medicin del sesgo del
mtodo.
Sujeto a la incertidumbre del
blanco de que en realidad
sea un blanco verdadero,
caracterizacin del material
de referencia.
b) El blanco
reactivo y el
material de
referencia/
material de prueba
usando un mtodo
candidato y un
mtodo
independiente,
(preferentemente
un mtodo
primario).
10 El valor promedio proveniente del
material de referencia/ material de
prueba restarle el valor promedio
del blanco.

Comparar con mediciones similares
obtenidas con un mtodo
independiente con un mtodo
primario.

Da una medicin del sesgo del
mtodo relativo al mtodo
independiente/ primario.
El mtodo independiente
puede tener sesgo por el
mismo y por consecuencia
no se puede tener una
medicin absoluta de la
exactitud.

El mtodo primario
idealmente no tiene sesgo
por lo que es una mejor
forma de medir la exactitud.

32
Precisin (ver anexo A para definiciones)
6.37 La precisin se determina normalmente para circunstancias especficas las
cuales en la prctica pueden ser muy variadas. Las medidas de precisin ms
comunes son la repetibilidad y la reproducibilidad. Ellas representan las dos
medidas extremas de precisin que pueden obtenerse. La repetibilidad ( la
precisin ms pequea esperada) dar una idea de la clase de variabilidad
esperada cuando un mtodo se desarrolla por un solo analista, con equipo en
un periodo corto de tiempo, por ejemplo es la clase de variabilidad que se
espera entre resultados si las muestras se analizan por duplicado. Si la muestra
se analiza por varios laboratorios para fines comparativos, entonces una
medicin de precisin ms significativa a usar es la reproducibilidad (esto es la
medida de precisin ms grande encontrada, a pesar de que formalmente se
excluye la variacin con respecto del tiempo). Puede ser posible que para
algunos casos particulares sea ms til la medicin de la precisin intermedia,
por ejemplo la precisin medida entre diferentes analistas, en horarios
prolongados dentro de un slo laboratorio. Esto algunas veces se conoce como
precisin intermedia, pero las condiciones exactas deben ser establecidas. La
precisin se establece por lo general en trminos de la desviacin estndar o
desviacin estndar relativa. La reproducibilidad y la repetibilidad comnmente
dependen de la concentracin del analito y deben determinarse a un nmero de
concentraciones y, de ser relevante, establecer la relacin entre la precisin y la
concentracin del analito. La desviacin estndar relativa ser ms til en este
caso puesto que la concentracin ha sido evaluada en diferentes
concentraciones, lo que significa de debe ser constante sobre el intervalo de
inters proporcionado.

6.38 Observe estas afirmaciones de precisin relacionada al anlisis cuantitativo.
El anlisis cualitativo puede tratarse de una forma ligeramente diferente. El
anlisis cualitativo es efectivo en mediciones de pasa o no pasa a un umbral
dado de concentracin del analito. Para mtodos cualitativos la precisin no
puede expresarse como la desviacin estndar o la desviacin estndar
relativa, pero puede expresarse con tasas de falso y verdadero positivas (y
negativas). Estas tasas o relaciones deben ser determinadas a un nmero de
concentraciones por debajo y por encima del nivel del umbral. Los datos
provenientes de una comparacin con un mtodo de confirmacin debern
usarse si se dispone de un mtodo apropiado. Si no se dispone de tal mtodo,
se puede usar en su lugar blancos sin fortificar y fortificados.
% falsos positivos = falsos positivos x 100/total de negativos conocidos
% falsos negativos = falsos negativos x 100/total de positivos conocidos
Note que el qumico analtico biolgico y microbiolgico trata falsos positivos y
falsos negativos de forma ligeramente diferente, haciendo uso de los trminos de
selectividad y especificidad de un modo que contradice el uso qumico.
33

Precisin de Repetibilidad y de Reproducibilidad- Referencia Rpida

Analizar

Repeticiones
(independientes
)

Qu calcular de los datos?

Comentarios
Referencias,
materiales de
referencia o
muestras de blanco
fortificadas a varias
concentraciones en
el intervalo de
trabajo.

a) El mismo
analista, equipo,
laboratorio y un
periodo corto de
tiempo
b) Diferentes
analistas,
equipos, mismo
laboratorio, con
un periodo largo
de tiempo
10

10
Determinar la desviacin estndar
(s) a cada concentracin

Determinar la desviacin estndar (s)
a cada concentracin
Determinar la desviacin
estndar de la repetibilidad a
cada concentracin.

estndar de la
reproducibilidad inter-
laboratorio a cada
concentracin

c) Diferentes
analistas, equipos,
laboratorios, y
periodos largos de
tiempo.
10 Determinar la desviacin estndar (s)
a cada concentracin
estndar de la
reproducibilidad intra-
laboratorio a cada
concentracin

Requiere de un estudio de
colaboracin.

Repetibilidad (Ver Anexo A para definiciones)
6.39 De la desviacin estndar de la repetibilidad
r
, o s
r
, es til calcular el lmite
de repetibilidad r, el cual permite al analista decidir si es significativa la
diferencia entre el anlisis de duplicados de la muestra determinados bajo
condiciones de repetibilidad.
Reproducibilidad (Ver Anexo A para definiciones)
6.40 De la desviacin estndar de la reproducibilidad
R
, o s
R
, es til calcular el
lmite de reproducibilidad R, el cual permite al analista decidir si es significativa la
34
diferencia entre el anlisis de duplicados de la muestra determinados bajo
condiciones de reproducibilidad.
Incertidumbre de la Medicin (Ver Anexo A para definiciones)
6.41 No es el objetivo de esta gua dar una completa discusin acerca de la
incertidumbre. Se pueden encontrar exposiciones detalladas en diversas
fuentes.
(18-20)
La medicin de la incertidumbre es un parmetro simple (usualmente
una desviacin estndar o un intervalo de confianza) expresando el intervalo de
posibles valores sobre la base de la medicin del resultado. La estimacin de la
incertidumbre de medicin considera todos los efectos reconocidos que influyen
en el resultado, las incertidumbres asociadas a cada efecto son combinados de
acuerdo a procedimientos bien establecidos.
La estimacin de la incertidumbre en la qumica analtica debe considerar :
La precisin total del mtodo en un periodo largo de tiempo.
El sesgo y su incertidumbre, incluyendo la incertidumbre estadstica asociada
en las mediciones del sesgo y la incertidumbre del material de referencia o del
mtodo. Ser necesario incrementar la estimacin donde se detecte sesgo sin
corregirlo.
(20)
Incertidumbres de Calibracin. Cuantas ms calibraciones de equipo existan
ms pequeas sern las incertidumbres, comparadas con la precisin total y la
incertidumbre en el sesgo, por lo que solo se necesitar verificarse.
Cualquier efecto significativo que opere junto con lo anterior, por ejemplo la
temperatura o los intervalos de tiempo permitidos por el mtodo puede no ser
ampliamente practicado en un ejercicio de validacin y su efecto puede
necesitar agregarse. Dichos efectos pueden ser cuantificados por estudios de
robustez o estudios relacionados que establecen la medida de un efecto
determinado sobre el resultado.
6.42 Cuando la contribucin de efectos individuales sea importante, por ejemplo
para los laboratorios de calibracin, ser necesario considerar las
contribuciones individuales de los efectos separadamente.
6.43 Sujeto a consideraciones adicionales sobre efectos externos en las pruebas
colaborativas, note que la desviacin estndar de la repoducibilidad forma un
estimado de la medicin de la incertidumbre proveniente del sesgo de los
laboratorios, medida sobre materiales relevantes, y es pequea en
comparacin con la desviacin estndar de la reproducibilidad, la precisin de
repetibilidad interna, es comparable a la repetibilidad del mtodo de referencia y
la precisin intermedia del laboratorio no es tan grande como la desviacin
estndar de la reproducibilidad publicada.
35
Sensibilidad (ver Anexo A para definiciones)
6.44 Esto es efectivamente el gradiente de la respuesta de la curva, i.e. el cambio
en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la
concentracin del analito. Cuando la respuesta se ha establecido como lineal
con respecto a la concentracin, i.e. cuando se ha determinado el intervalo
lineal de un mtodo y la intercepcin de la curva de respuesta, la sensibilidad
es un parmetro til para calcularse y usarse en frmulas para la cuantificacin.
La sensibilidad algunas veces se usa para referirse al lmite de deteccin pero
este uso no esta aprobado generalmente.
Robustez (ver Anexo A para definiciones)
6.45 Una medida de la efectividad del mtodo analtico significa que tan buen
desempeo se ha mantenido a casi una implementacin perfecta. En cualquier
mtodo habr ciertas etapas las cuales, si no se llevan al cabo con suficiente
cuidado, tendrn un efecto severo en el desempeo del mtodo y mucho de los
resultados no funcionarn del todo. Estas etapas deben identificarse,
usualmente como parte del desarrollo del mismo y si es posible evaluar su
influencia en el desempeo del mtodo mediante el uso de pruebas de
robustez. Esto involucra realizar variaciones deliberadas al mtodo y estudiar el
subsecuente efecto en el desempeo. De esta manera es posible identificar las
variables en el mtodo que tiene el efecto ms significativo y en base a ello
controlarlas cuando se aplica el mtodo. Cuando se requiere mejorar el mtodo,
las mejoras se pueden realizar sobre aquellas partes que se conocen como
crticas. La robustez por lo general se evala durante el desarrollo del mtodo,
comnmente por el laboratorio que lo origina antes de la colaboracin con otros
laboratorios. Una tcnica establecida para la robustez se describe por AOAC
(21)
.
Las pruebas de robustez se aplican normalmente para investigar su efecto en
la precisin y en la exactitud del mtodo.
36
Pruebas de Robustez Referencia Rpida
Analizar No de veces Calcular Comentarios
Identificar las variables las cuales
pueden tener un efecto
significativo en el desempeo del
mtodo. Establecer experimentos
(analizando materiales de
referencia, muestras de
composicin conocida o material
de referencia certificado) para
monitorear el efecto en la
exactitud y en la precisin del
cambio sistemtico de las
variables.
Analizar una vez
cada grupo de
condiciones
experimentales
Determinar el efecto de
cada cambio de las
condiciones sobre la
media
Ordene las variables en
orden del mayor al
menor efecto en el
desempeo del mtodo.
Designar el control
de calidad para
controlar las
variables crticas.
Concentrarse en
estas variables
para mejorar el
mtodo.
Recuperacin (ver Anexo A para definiciones)
6.46 Los mtodos analticos no siempre miden todo el analito de inters presente
en la muestra. Los analitos pueden estar presentes en una gran variedad de
formas qumicas en las muestras, no todas ellas, de inters para el analista. El
mtodo debe ser designado deliberadamente para determinar solo una forma
particular del analito. Sin embargo una falla para determinar todo el analito
puede ser el reflejo de un problema inherente en el mtodo. De cualquier forma,
es necesario asegurar la eficiencia del mtodo al determinar todo el analito
presente.
6.47 Debido a que no es usual conocer cuanto de un analito particular est
presente en una porcin de prueba, es difcil estar seguros de que tan exitoso
ha sido el mtodo al extraer el analito de la matriz. Una forma de determinar la
eficiencia de la extraccin es adicionar porciones de prueba con el analito a
varias concentraciones, despus se extraen las porciones fortificadas y se mide
la concentracin del analito. El problema inherente es que el analito introducido
de este modo no estar tan fuertemente unido como aquel que esta
naturalmente presente en la porcin de prueba de la matriz y por consiguiente
la tcnica dar una impresin alta irreal de la eficiencia de extraccin. Sin
embargo, esta es la forma ms comn de determinar la eficiencia de
recuperacin y es reconocido como una forma aceptable de hacerlo. Sin
embargo los inconvenientes de la tcnica deben tenerse en cuenta.
37
Alternativamente es posible realizar estudios de recuperacin de materiales de
referencia, si estos se encuentran disponibles. Estos se han producido a travs
de la caracterizacin de materiales naturales ms que por la caracterizacin de
materiales sintticos donde el analito ha sido adicionado, de esta forma el
estudio de recuperacin deber representar exactamente la extraccin de
porciones de pruebas reales.
(f) Las herramientas de la validacin :
6.48 Blancos : Usar varios tipos de blancos permite asegurar que tanto de la
seal medida se atribuye al analito y que tanto se debe a otras causas. Varios
tipos de blanco estn disponibles al usuario.
6.48.1 Blancos reactivos: Los reactivos usado durante el proceso analtico (
incluyendo solventes usados para la extraccin y la disolucin) se analizan
aisladamente con el fin de ver si contribuyen o no a la seal de medicin. La
seal de medicin surge del analito que puede ser corregida.
Recuperaciones Referencia Rpida
Analizar Repeti
ciones
Qu calcular de los datos? Comentarios
Blancos de matriz o
muestras no fortificadas
con el analito de inters
en un intervalo de
concentraciones
Materiales de referencia
certificados (MRC)
6 Determinar la recuperacin del analito a
varios niveles de concentracin.
Recuperacin (%) =(C1-C2)/C3 X 100
Donde
C1=concentracin determinada en la
muestra fortificada
C2=concentracin determinada en la
muestra no fortificada
C3=Concentracin de la fortificacin.
Determine la recuperacin del analito
relativa al valor certificado
Las muestras fortificadas debe
ser comparadas con la misma
muestra no fortificada para
establecer la recuperacin de la
fortificacin.
La recuperacin de las muestras
fortificadas o blancos de matriz
usualmente ser mejores que en
las muestras reales en las cuales
el analito est ms enlazado a la
matriz.
Dependiendo de como el
material de referencia certificado
fue producido y caracterizado, es
posible obtener un porcentaje de
recuperacin >100 %.
38
6.48.2 Blancos de las muestras: Estas son esencialmente matrices sin analito.
Son difciles de obtener pero son necesarios para obtener un estimado
estadstico de las interferencias que pueden encontrarse en el anlisis de las
muestras.
6.49 Muestras/ materiales de prueba: los materiales de prueba tomados de
muestras reales son tiles debido a la informacin que proporcionan sobre las
interferencias etc., las cuales pueden ser encontradas en la realidad con el
trabajo diario. Si el contenido verdadero del analito de un material es conocido
exactamente puede utilizarse para asignar la exactitud del mtodo. Sin embargo
el contenido real del analito difcilmente se determina a menos que exista la
posibilidad de usar otros mtodos los cuales se conoce que muestran un sesgo
insignificante.
6.50 Materiales/ soluciones fortificadas: estos son materiales o soluciones que
han sido fortificados con el (los) analito (s) de inters. La fortificacin se realiza
por adicin (spiking). Estos materiales o soluciones contienen el analito de
inters y se debe tener cuidado de adicionar niveles de concentracin total
dentro del intervalo de aplicacin del mtodo. La fortificacin con una cantidad
conocida del analito permite el incremento de la respuesta del instrumento
proveniente del analito a ser medido y se calcula en trminos de la cantidad
agregada (asumiendo 100% de recuperacin), a pesar de que no se conocen
las cantidades absolutas del analito que estn presentes en la muestra antes y
despus de la fortificacin. Observe que la mayora de los mtodos de
fortificacin adicionan el analito de modo que no este tan unido a la matriz
como si estuviera naturalmente presente. Se recomienda tener cuidado con las
determinaciones de recuperacin obtenidas por fortificacin, tomando en cuenta
las formas qumicas del analito a ser analizado, para que sean ptimas.
6.51. Materiales adicionados: Estos son similares a los materiales fortificados, de
hecho en algunos casos los trminos son intercambiables. La adicin o el
spiking no debe estar, necesariamente, restringido por el analito de inters.
Puede incluir la adicin de cualquier analito con la finalidad de medir el efecto
de la adicin. Por ejemplo la muestra puede ser adicionada con diferentes
cantidades de una interferencia en particular para juzgar a que concentracin la
determinacin del analito fue afectada. La naturaleza del analito adicionado
(spike) debe ser identificada.
6.52. Materiales con inclusiones: Estos son materiales en los que el analito de
inters esencialmente es ajeno, pero ha sido introducido a todo el material en
algn punto previo a que el material sea muestreado. El analito
consecuentemente est ms unido a la matriz que si se hubiera aadido por
adicin (spiking). El valor del analito depender de las cantidades del analito
en contacto con el material, la relacin de perdida y de captura por la naturaleza
de la matriz y otras prdidas debida al metabolismo. El valor de la muestra con
39
incurrencias para propsitos de calibracin depende de que tan bien el valor del
analito pueda ser caracterizado.
Los siguientes son ejemplos de materiales con inclusiones:
1. Herbicidas en harina de cereal rociado con herbicidas durante su crecimiento.
2. Promotores de crecimiento en carne derivados de la alimentacin del animal
con alimentos que contienen promotores.
3. Ingredientes activos en formulaciones farmacuticas adicionadas en la etapa de
formulacin.
6.53 Materiales caracterizados independientemente: es difcil determinar el
sesgo de un mtodo sin conocer el contenido real del analito en el material de
prueba. Si un material se ha caracterizado por otros medios, por ejemplo
mediante un mtodo que se sabe que posee un sesgo despreciable, entonces
este puede ser usado como un material de referencia, se puede realizar
entonces una comparacin y asignar mediante un anlisis el sesgo del mtodo.
6.54 Patrones (Mediciones) : Cuando el trmino es usado para referirse a una
sustancia usada para propsitos de calibracin o identificacin, es conveniente
referirse a ellos como Materiales de referencia de medida o calibracin.
Tradicionalmente se piensa que son soluciones de una sola sustancia, pero en
la prctica puede ser cualquier material en el que un parmetro o propiedad
particular se ha caracterizado al punto de que puede ser usado para propsitos
de calibracin o de referencia. El trmino patrn incluye accesorios en lo cuales
un amplio intervalo de parmetros fsicos pueden ser calibrados (e.g.
termmetros calibrados por ejemplo). Estrictamente estos son patrones fsicos.*
______________
*Nota del traductor: En espaol el sentido Measurement Standard se utiliza el trmino patrn de
medicin, mientras que para standard Methods se utiliza el trmino de normas. Dentro de los patrones
de medicin se distinguen los materiales de referencia aquellos patrones de medicin que se consumen
en cada medicin o que tienen caducidad. Los materiales de referencia certificados por el NIST se llaman
SRM.
40
6.55 Materiales de referencia. Es algo comn que se confunda el trmino
materiales de referencia con materiales de referencia certificados
(22)
(ver Anexo
A). Los materiales de referencia pueden ser virtualmente cualquier material
tomado como base para referencia y puede incluir reactivos de laboratorio de
pureza conocida, qumicos industriales u otros artefactos. La propiedad o el
analito de inters debe ser estable y homogneo pero no necesita tener un alto
grado de caracterizacin o trazabilidad y certificacin asociados a los materiales
de referencia certificados.
6.56 Materiales de referencia certificados: la caracterizacin del parmetro de
inters en un material de referencia certificado generalmente es controlada ms
estrictamente que para un material de referencia, y adicionalmente el valor se
certifica con una incertidumbre establecida por una institucin reconocida. La
caracterizacin normalmente se realiza usando varios mtodos* para que, tanto
como sea posible, cualquier sesgo en la caracterizacin se reduzca o se
elimine.
6.57 Estadstica : Es til para el anlisis de la variabilidad inherente en las
mediciones analticas. Los analistas deben familiarizarse, con al menos, los
elementos ms bsicos en teora estadstica, tales como: la evaluacin de la
exactitud, precisin, intervalo lineal, lmites de deteccin y cuantificacin y
mediciones de la incertidumbre. Un amplio nmero de libros de introduccin a la
estadstica para qumica analtica se listan en la bibliografa.
6.57.1 Replicacin : Propiamente usado da al analista ms informacin sobre la
estadstica de una medicin en particular. Los experimentos que involucran
anlisis de rplicas deben designarse para considerar todas las variaciones en
condiciones de operacin las cuales pueden ser esperadas durante un uso
rutinario del mtodo. El objetivo debe ser el de determinar la variacin tpica y
no la variacin mnima.
Utilizacin de mtodos validados
7.1 Cuando se usa el mtodo de alguien ms sea uno desarrollado dentro de un
laboratorio, uno publicado o bien hasta un mtodo de regulacin o de
referencia, se deben considerar dos aspectos. Primero : La validacin de los
datos existentes es adecuadas para el propsito requerido o se necesita de una
validacin posterior? y segundo, si los datos existentes son adecuados El
laboratorio es capaz de alcanzar el nivel de desempeo que el mtodo requiere
como posible?. En otras palabras El analista es suficientemente competente?,
Son adecuadas las facilidades y el equipo est disponible?. Si el mtodo se ha
validado mediante pruebas extensivas bajo todas las condiciones de operacin
extremas, entonces un nuevo analista competente operar satisfactoriamente
dentro de los datos de desempeo existentes aunque actualmente es ms
relevante verificar el desempeo del analista contra lo que es requerido por la
especificacin analtica preferentemente que contra los datos publicados
41
existentes. Sin embargo, esto deber al menos verificarse. Esto es, el nivel de
desempeo que el analista puede alcanzar con el mtodo es ms importante
que la comparacin con el nivel de desempeo que los otros analistas han
alcanzado en el pasado.
7.2 Usualmente, los mtodos de referencia se producen generalmente a partir de
estudios de colaboracin y de grupos de referencia, frecuentemente estos
ltimos tienen expertos en estadstica que ayudan a asegurar que los estudios
de la validacin estn correctamente diseados, desempeados y evaluados. El
nivel de validacin de los mtodos se est mejorando pero es peligroso asumir
que nicamente por ser un mtodo de referencia se puede tomar por hecho
que su validacin publicada ser adecuada.
7.3 Similarmente, es comn asumir que los mtodos de referencia pueden usarse
sin prembulos para obtener inmediatamente datos de desempeo como los
publicados cuando cualquier persona realiza el mtodo. Esta no es una
afirmacin segura, pues an en el caso donde alguien familiarizado o experto
en un campo de la qumica que abarca el mtodo necesitar practicar antes de
convertirse en alguien competente. Esto se detallar a continuacin.
7.4 Cuando se usan mtodos validados (o cualquier mtodo) se recomienda que
se sigan las siguientes reglas para asegurar que se alcanza un desempeo
aceptable.
7.4.1 Inicialmente el analista por el mismo debe estar completamente familiarizado
al nuevo mtodo antes de usarlo por primera vez. Idealmente el mtodo debe
ser demostrado al analista por alguien experto en su uso. El analista entonces
debe iniciar bajo supervisin cercana, trabajando con materiales de referencia o
muestras de prctica. El nivel de supervisin disminuir hasta que el analista
muestre que es suficientemente apto para hacerlo por el mismo. Por ejemplo la
aptitud debe establecerse en trminos de la habilidad del analista para alcanzar
los niveles de desempeo establecidos en el mtodo, tales como la
repetibilidad, el lmite de deteccin, etc. Es tpico que alguien a ser entrenado
para usar un nuevo mtodo y procedimientos de entrenamiento de un
laboratorio se designe a mediciones objetivas en lugar de probar la aptitud a
intervalos durante el entrenamiento. En cualquier caso, el analista deber haber
ledo el mtodo y familiarizarse con la teora detrs de las mediciones,
ensayando mentalmente las diferentes etapas, identificando los puntos donde
se puede tomar un descanso y las partes del proceso donde el analista se
deber comprometer a trabajar continuamente. Cundo se necesitan preparar
los reactivos?, Qu tan estables son una vez preparados?, Necesitan
prepararse con anticipacin ?. Una dificultad clsica consiste en pasar varias
horas preparando un nmero de muestras. As mismo involucra una sntesis
complicada el encontrar la preparacin del reactivo requerido para la siguiente
etapa del trabajo. Mientras tanto las muestras se estn degradando...
42
7.4.2 Segundo, se requiere de la evaluacin de cuntas muestras pueden ser
manipuladas a un tiempo. Es mejor analizar pocas muestras pero bien, que
tratar de analizar un gran nmero de muestras y tener que repetir la mayora de
ellas.
7.4.3 Finalmente se debe asegurar que se tiene todo lo que se necesita antes de
iniciar el trabajo. Esto involucra buscar en conjunto el tipo adecuado de equipo,
los materiales de referencia y los reactivos (Con cualquier preparacin
establecida) y quiz la reserva de espacio para equipos de extraccin etc.
7.5 Si es necesario adaptar o cambiar algn otro mtodo validado, la revalidacin
ser necesaria. Dependiendo de su naturaleza, los cambios pueden hacer
obsoleta la validacin original.
8. Utilizacin de datos de validacin para designar el control de calidad
8.1 El control de calidad y el aseguramiento de calidad
(23)
son trminos cuyo
significado vara de acuerdo al contexto. En trminos prcticos el
aseguramiento de calidad se refiere a todas las mediciones realizadas por el
laboratorio para asegurar y regular la calidad, mientras que el control de calidad
describe las mediciones individuales que se relacionan al monitoreo y control de
operaciones analticas particulares.
8.2 La validacin de un mtodo da una idea de las capacidades de desempeo y
las limitaciones del mtodo las cuales son experimentadas durante el uso
rutinario cuando el mtodo se encuentra en control. Para uso cotidiano, los
controles necesitan aplicarse al mtodo para verificar que contina bajo control,
por ejemplo que se est desempeando de acuerdo a lo esperado. Durante la
etapa de validacin el mtodo fue aplicado a un gran nmero de muestras de
contenido conocido. Una vez que el mtodo se usa rutinariamente para
muestras de contenido desconocido, es posible aplicar un control adecuado
mediante la medicin de muestras de contenido conocido, de esta forma se
permite al analista decidir cuando la gran variedad de respuestas obtenidas
realmente reflejan la diversidad de las muestras analizadas o cuando los
cambios inesperados e indeseados ocurren en el desempeo del mtodo. En la
prctica estas muestras conocidas deben medirse con cada lote de muestras
como parte del proceso del control de calidad.
8.3 La clase de revisiones hechas depender de su naturaleza, la frecuencia, lo
crtico del anlisis, el tamao del lote, el grado de automatizacin, la dificultad de
la prueba as como tambin las lecciones aprendidas durante el proceso de
desarrollo y validacin. El control de calidad puede tomar una gran variedad de
formas, tanto dentro del laboratorio (internamente) como entre laboratorios y otros
laboratorios (externamente).
43
8.4 Control de calidad interno: Este control incluye la utilizacin de: blancos,
calibrantes qumicos, muestras adicionadas (con spike), muestras ciegas,
replicado de anlisis y muestras de control de calidad
(21)
. Se recomienda el uso de
cartas de control particularmente para el monitoreo de los resultados de las
muestras de control para el control de calidad.
8.5. Los tipos de control de calidad adoptados deben ser demostrados
suficientemente para asegurar la validez de los resultados. Pueden usarse
diferentes clases de control de calidad para monitorear diferentes tipos de
variacin dentro del proceso. Las muestras de control de calidad analizadas a
intervalos en un lote analtico indicar la desviacin o desplazamiento (drift) del
sistema; el uso de varios tipos de blanco indicarn cuales son las contribuciones a
la seal del instrumento de aquellas del analito, los anlisis por duplicado
verificarn la repetibilidad.
8.6 Las muestras de control de calidad son muestras tpicas las cuales en un
periodo de tiempo son suficientemente estables y homogneas para dar el
mismo resultado ( sujetas a variaciones aleatorias en el desempeo del mtodo
analtico) as como tambin se dispondr de suficiente cantidad de muestra
para realizar suficientes rplicas.
Sobre este periodo de tiempo la variacin aleatoria en el desempeo del
mtodo analtico puede ser monitoreado a travs de monitorear la muestra de
control de calidad, por lo general se utiliza una carta de control.
(25-26)
Se establecen lmites en la carta (convencionalmente lmites de control
colocados a 2 (2s) del valor de la media y lmites de accin se colocan a
3 (3s) del valor de la media. Ver el Anexo A, A28 para la informacin sobre
y s). Una vez graficados los valores de control de calidad con los lmites
asignados segn las reglas existentes, podr observarse si el control de calidad
es satisfactorio. Mientras que el valor para la muestra de control sea aceptable
es probable que los resultados que se encuentren en el mismo lote que esta
muestra sean considerados como confiables. La aceptabilidad del valor
obtenido con la muestra de control de calidad se deber verificar desde el inicio
del proceso analtico para que en el caso de un problema solo se invierta un
poco de tiempo en lugar de desperdiciar tiempo en anlisis poco confiables de
las muestras.
8.7 Con el fin de establecer lmites reales en las cartas de control, los clculos
iniciales de la media y de la desviacin estndar deben reflejar la forma en que
el mtodo pretende usarse diariamente. De este modo las lecturas deben imitar
todas la posible variaciones en las condiciones de operacin: diferente analista,
variaciones en la temperatura del laboratorio, etc. Si no se hace esto, la
desviacin estndar ser irrealmente pequea, resultando en lmites en la carta
que no sern posibles de obtener en el uso normal.

44
8.8 El uso de varios tipos de blanco permite al analista asegurar que los clculos
hechos para el analito pueden corregirse para remover cualquier contribucin
de la respuesta que no se le atribuya al analito.

8.9 Las rplicas de anlisis proporcionan un medio de verificar los cambios en la
precisin del proceso analtico, los cuales podran afectar el resultado de forma
adversa. Las replicas pueden estar anexas al lote (para verificar la repetibilidad)
o pueden analizarse aleatoriamente (para verificar el desplazamiento).
8.10 Los anlisis ciegos son una forma efectiva de realizar anlisis repetidos y
proporcionan una ruta para verificar la precisin. Consiste en analizar porciones
de prueba por duplicado dentro de un lote analtico, dadas posiblemente por el
laboratorio supervisor. Se llaman de esta forma debida a que el analista no esta
advertido de la identidad de las porciones de prueba o que son rplicas, por lo
que de esta forma el analista no tendr ideas preconcebidas acerca de
resultados particulares con los que la muestra pueda estar relacionada.

8.11 Los calibrantes qumicos y los materiales de referencia situados en intervalos
dentro de un lote analtico permiten verificar que la respuesta del analito durante
el proceso analtico es estable.
8.12 Es responsabilidad de la gerencia del laboratorio establecer y justificar un
nivel apropiado de control de calidad basado sobre una evaluacin de riesgo,
tomando en consideracin la confiablidad del mtodo, lo crtico del trabajo y la
facilidad en repetir el anlisis si no se trabaja adecuadamente la primera vez. Es
ampliamente aceptado que para un anlisis de rutina, un nivel de control de
calidad interno del 5% es razonable, por ejemplo por cada 20 muestras
analizadas deber existir una muestra de control, sin embargo para mtodos de
rutina robustos con un gran nmero de muestras un nivel menor de muestras de
control puede ser razonable. Para procedimientos ms complejos un nivel del
20% no es usual y en ocasiones hasta el 50% puede requerirse. Para anlisis
poco frecuentes un sistema de validacin completo debe realizar en cada
ocasin. Esto puede involucrar el uso de materiales de referencia que
contengan una cantidad certificada o conocida del analito, seguida de rplicas
de anlisis de la muestra y la muestra con adicin de material de referencia
(spike) (una muestra con una cantidad conocida del analito que
intencionalmente se ha agregado). Aquellos anlisis realizados con frecuencia
debern ser objeto de procedimientos sistemticos de control de calidad
incorporando el uso de cartas de control de calidad o muestras de control.
8.13 Control de calidad Externo: Pruebas de Aptitud
Las pruebas de aptitud tcnica (conocidas tambin como evaluaciones de
calidad externa). Una forma reconocida por un laboratorio para monitorear su
desempeo contra sus requisitos propios y contra la norma de laboratorios
similares es mediante la participacin peridica en esquemas de pruebas de
aptitud. Estas pruebas ayudan a resaltar el desempeo de la reproducibildad
45
entre los laboratorios y entre los errores sistemticos, por ejemplo el sesgo.
Tambin pueden usarse para determinar la repetibilidad aunque tambin puede
verificarse de manera efectiva usando controles internos. Las pruebas de
aptitud y otros tipos de intercomparacin se aceptan como medios importantes
de monitoreo de la trazabilidad a niveles nacionales e internacionales. Los
grupos de acreditacin reconocen el beneficio de estos esquemas y alientan a
los laboratorios para que participen en pruebas de aptitud como parte integral
de sus protocolos de aseguramiento de calidad. Es importante monitorear los
resultados de estas pruebas como una forma de verificar el aseguramiento de
calidad y tomar las acciones necesarias. En ciertos casos los grupos de
acreditacin pueden especificar la participacin en un esquema de prueba de
aptitud en particular como un requisito de acreditacin. El valor de las pruebas
es tan bueno como los esquemas mismos. A menudo puede que no existan
esquemas disponibles que sean relevantes a los tipos de anlisis que el
laboratorio desea verificar, especialmente si se est trabajando aisladamente.
9. Documentacin de los mtodos validados

9.1 Una vez que el proceso de validacin est completo es importante documentar
los procedimientos para que el mtodo pueda ser implementado claramente y
sin ambigedades. Existe un gran nmero de razones para hacerlo, las diversas
evaluaciones del mtodo realizadas durante el proceso de validacin asumen
que cuando se use el mtodo ser usado de la misma forma cada vez. De no
ser as, el desempeo actual del mtodo no corresponder a aquel predicho
por la validacin de los datos. De esta forma, la documentacin debe limitar su
visin de introducir variaciones accidentales al mtodo. Adems la
documentacin adecuada es necesaria para propsitos de auditora y de
evaluacin y puede requerirse para propsitos contractuales o regulatorios.

9.2 La documentacin apropiada del mtodo ayudar a asegurar la aplicacin del
mtodo de manera constante cada vez que se use.

9.3 Puesto que la calidad de documentacin de un mtodo tiene un efecto directo
en que tan consistentemente puede aplicarse, en consecuencia, tiene tambin
efecto en la reproducibilidad y con la estimacin de la incertidumbre asociada a
ella. De hecho la contribucin de la incertidumbre asociada con mtodos
documentados inapropiadamente puede ser tan grande que haga que el
mtodo se invalide. Cualquier anomala en la documentacin se debe resolver
antes de obtener un estimado propio de la incertidumbre que puede obtenerse.

9.4 No es sencillo documentar un mtodo apropiadamente. La informacin debe
aparecer en un orden de acuerdo a lo que el usuario espera que necesitar. Un
fallo comn es asumir que cualquiera entender la mecnica del mtodo de la
misma forma que una persona que ha desarrollado y documentado el mtodo.
Esta afirmacin de conocimientos puede ser peligroso. Una forma til de probar
46
si la documentacin es para un colega de trabajo competente es la forma
descrita anteriormente. Si el mtodo corresponde a su intencin entonces
deber ser establecido para el uso de una gran variedad de analistas y para
entregar resultados constantes, pero si este no es el caso se requerir de un
reajuste para describir los procedimientos mas detalladamente y reducir la
ambigedad.

9.5 Varias normas de referencia proporcionan una gua de que clase de
informacin debe incluirse cuando se documenta un mtodo. Desde el punto de
vista qumico probablemente las ms tiles son las series ISO 78 las cuales
describen la documentacin para diferentes tipos de mtodos de anlisis
qumicos (los grupos de regulacin producen, validan y documentan un gran
nmero de mtodos cada ao produciendo estos estndares para el beneficio
de sus propios comits). ISO 78/2
(27)
aconseja el mtodo de documentacin
para mtodos qumicos generales. Un diagrama basada en esta norma se
incluye en el anexo B. la norma indica un orden lgico del material con
encabezados recomendados y sugiere la clase de informacin que debe
aparecer en cada encabezado. Cuando se utilicen estas normas el lector
deber notar la necesidad de ser flexibles para que haya la consistencia.
Mientras que es deseable que todos los mtodos deban tener el mismo formato
de documentacin, tambin ser reconocido que no todos los mtodos
garantizan el mismo grado de detalle y frecuentemente ser apropiado omitir
algunas de las secciones recomendadas de la documentacin.
9.6 Un laboratorio que documenta sus propios mtodos puede verse beneficiado
al desarrollar su propio estilo. As como tambin al presentar informacin
relevante de un modo lgico y sencillo, esto tambin permite que un mtodo de
escritura complicada pueda difundirse a diversos autores. El esquema generado
por varios autores puede ser revisado por su consistencia utilizando una solo
autoridad de revisin.

9.7 Los mtodos documentados forman una parte importante del sistema de
calidad de un laboratorio y deben ser objeto de un grado de control de
documentacin apropiado. El propsito de esto es de asegurar que solo los
mtodos y procedimientos que han sido autorizados como convenientes para
su uso son de hecho utilizados. Por lo tanto como parte del proceso de
documentacin se debe elaborar la informacin que permita al usuario juzgar en
que momento el mtodo se ha autorizado para su uso y cuando est completo.
Otra clase de informacin que debe estar disponible es la concerniente al
nmero de versin y fecha del mtodo, el autor, cuntas copias existen y las
restricciones del copiado.

9.8 Con el tiempo los mtodos requerirn actualizacin. Por ejemplo, la tecnologa
que sostiene el procedimiento puede haber sido mejorada pero su
documentacin necesita arreglos. El control de la documentacin permite un
fcil retiro de los mtodos obsoletos y la edicin de mtodos revisados. En
estos das el proceso de control de documentacin es ampliamente simplificado
47
usando un procesador de palabras. Los cambios pueden realizarse solo si se
autoriza. Esto puede verse controlado en el procesamiento de palabras donde
los archivos relevantes pueden difundirse con acceso de lectura nicamente y
limitar el acceso a la escritura.

10. Implicaciones de la validacin de los datos para calcular resultados y
para realizar informes.
10.1 Es importante que el analista sea capaz de interpretar los datos generados
durante el anlisis de las muestras al usar un mtodo validado, en respuestas
que se relacionen directamente con los problemas del cliente. Las
caractersticas del desempeo establecidas durante el proceso de validacin
ayuda a hacer esto. Los datos de precisin para la repetibilidad y para la
reproducibilidad pueden usarse para establecer si las diferencias encontradas
durante el anlisis son significativas. Los controles de calidad basados en la
validacin de los datos pueden usarse para confirmar que el mtodo esta bajo
control y que se estn produciendo resultados significativos. La estimacin de la
incertidumbre de las mediciones est asociada con el desempeo del mtodo y
permite la expresin del resultado en un intervalo de valores en los cuales el
valor verdadero de la medicin puede decirse que se encuentra en un nivel de
confianza aceptado.

10.2 Es importante que el analista tenga acceso a los datos de validacin que
pueden usarse para apoyar la validez de los resultados. Aunque esta
informacin sea proporcionada o no al cliente. Muy a menudo el cliente no tiene
las habilidades tcnicas para apreciar el significado de los datos, en tales
circunstancias quiz sea ms seguro dar los datos a solicitud.
10.3 Los mtodos de validacin, la variabilidad y la incertidumbre de medicin
necesitan tratarse cuidadosamente en ciertas circunstancias, por ejemplo en
contextos legales o forenses. Puede ser mejor estar abierto a la existencia de
incertidumbre aunada a la medicin y estar preparados para justificar las
mediciones hechas bajo el amparo de que se conoce una incertidumbre.
10.4 Se debe tener cuidado cuando se trata de usar un resultado analtico con su
incertidumbre inherente para tratar de decidir cuando la consigna original a
partir de la cual la muestra fue tomada, cumple o no con la especificacin o el
lmite. Tales decisiones pueden no ser responsabilidad del analista. Sin
embargo el analista puede necesitar proporcionar un consejo tcnico para
asistir en el proceso de toma de decisiones.
10.5 Cuando se reportan los resultados el analista debe decidir cuando se debe
corregir por cualquier sesgo que haya sido afectado o cuando informar
resultados sin correcciones pero con el conocimiento de la existencia de un
sesgo.
48
10.6 Se debe tener cuidado cuando se reportan resultados como no detectados.
Este enunciado en si no proporciona informacin y debe ser acompaado de
una explicacin de lo que es el lmite de deteccin en esa instancia. Algunas
veces es apropiado informar un valor numrico a pesar de que este puede estar
por debajo del lmite de deteccin.
10.7 Como se ha explicado mucha de la informacin requerida para evaluar la
incertidumbre se obtiene a partir del proceso de validacin. Se asume que antes
de que el mtodo sea usado sobre muestras desconocidas, el laboratorio debe
demostrar que puede alcanzar los parmetros de desempeo establecidos en el
mtodo, que tiene datos de control de calidad satisfactorios y que posee
resultados satisfactorios de los materiales de referencia. En cada caso los
factores extras que se necesiten tomarse en cuenta en la evaluacin de la
incertidumbre del resultado de una medicin de muestra desconocida son
cualquier diferencia de la composicin en la matriz y de la muestra usada en la
validacin de un mtodo. Esto debe incluir diferencias que afectarn en la
recuperacin del analito o la produccin de interferencias que afectarn el
resultado de la medicin.

10.8 Cuando se requiere declarar la incertidumbre con los resultados es
conveniente citar una incertidumbre expandida aplicando un factor de cobertura
apropiado. Por ejemplo un factor de 2, se aproxima a un nivel de confianza del
95%.
49
11. Referencias y Bibliografa
(a) Referencias citadas en el texto
1. The Managers Guide to VAM, UK Department of Trade and Industry, Valid
Analytical Measurement Programme
2. Characterisation and Validation of Test Methods, J.S. Morkowski, paper
presented at the EUROLAB Symposium, Berlin, 5-7 June 1996.
3. Guidelines for Collaborative Study - Procedures to Validate Characteristics of
a Method of analysis, AOAC International, revised May 1994, originally
published J. Assoc. Off. Anal. Chem. 72, 694-704 (1989).
Note 3, 4, & 6 are effectively the same text but differ slightly editorially.
4. Harmonised Protocols for the Adoption of Standardised Analytical Methods and
for the presentation of their Performance Characteristics, (IUPAC), Pure &
Appl. Chem., 1990, 62(1), pp. 149-162.
5. Pocklington, W.D., Guidelines for the development of standard methods by
collaborative trial, LGC, 5th Edition, 1990. ISBN 0 948926 03 1.
6. Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method-Performance
Studies, (IUPAC), Pure & Appl. Chem., 1995, 67(2), pp. 331-343.
7. ASTM E 1060 - 85: Standard Practice for Interlaboratory Testing of
Spectrochemical Methods of Analysis.
8. UK Drinking Water Inspectorate (DWI) Information Letter 8/93.
9. AOAC Peer Verified Methods Program - Manual on policies and procedures,
AOAC International, Arlington VA 22201-3301, USA
10. International Conference on Harmonisation, Draft Guideline on Validation of
Analytical Procedures: Definitions and Terminology, Federal Register, Volume
60, pp.11260, March 1 1995.
11. ISO 11843-1:1997. Capability of detection - Part 1 Terms and definitions.
12. Nomenclature in evaluation of analytical methods, including detection and
quantification capabilities (IUPAC Recommendations 1995). Pure & appl.
Chem., 1995, 67, 1699 - 1723.
13. Detection in analytical Chemistry - Importance, Theory, and Practice. L. A.
Currie, ACS Symposium Series 361, American Chemical Society, Washington,
DC 1988. Various chapters are recommended, particularly Ch4 (Kirchmer
50
C.J.) and Ch 16 (Kurtz D.A. et al.).
14. Analytical Methods Committee, Recommendations for the Definition,
Estimation and Use of the Detection Limit, The Analyst, 1987, 112, 199-204.
15. Sahai, H., Singh, R.P., The Use of R
2
as a Measure of Goodness of Fit: An
Overview, Virginia Journal of Science, 1989, 40(1), 5-9.
16. Analytical Methods Committee, Uses (Proper and Improper) of Correlation
Coefficients, The Analyst, 1988, 113, 1469-1471.
17. Miller, J.N., Basic Statistical Methods for Analytical Chemistry Part 2.
Calibration and Regression Methods, A Review, The Analyst, 1991, 116, 3-14.
18. ISO/IEC (with BIPM, IFCC, IUPAC, IUPAP, OIML): Guide to the expression of
uncertainty in measurement, 1993. ISBN 92 67 10188 9.
19. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, 1st Ed, 1995, EURACHEM
20. Ellison, S.L.R., Williams, A., Measurement Uncertainty: the Key to the Use of
Recovery Factors?, from The Use of Recovery Factors in Trace Analysis,
edited by Parkany, M., pub. Royal Society of Chemistry, 1996. ISBN:0-85404-
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21. Youden, W. J., and Steiner, E. H., "Statistical Manual of the AOAC",
Association of Official Analytical Chemists, 1975.
22 ISO/IEC Guide 30:1992. Terms and definitions used in conjunction with
reference materials.
23. ISO 8402:1994. Quality - Vocabulary .
24. Harmonised guidelines for internal quality control in analytical chemistry
laboratories, (IUPAC), Pure & Appl. Chem., 1995, 67(4), pp.649-666,
25. ISO 7870:1993. Control charts - General guide and introduction.
26. British Standard BS 5700:1984, + AMD 5480:1987. "Guide to process control
using quality control chart methods and cusum techniques". (complements BS
5701:1980 and BS 5703:1980).
27. ISO 78-2:1982. Layouts for standards - Part 2: Standard for chemical analysis
(under revision).
51
(b) Bibliografa relacionada al desarrollo y validacin del mtodo en
sectores especficos.
Sector
A Manual on Analytical Quality Control for the Water
Industry, NS30, Water Research Centre, UK, 1989, ISBN
0 902156 85 3
Anlisis de agua en el
ambiente.
AOAC International - AOAC Peer-verified Methods
Program.
Anlisis de comida
ASTM D 2777 - 86: Standard Practice for Determination
of Precision and Bias of Applicable Methods of Committee
D-19 on Water.
Anlisis ambiental,
precisin, sesgo.
Codex Alimentarius Commission on Methods of Analysis
and Sampling (CX/MAS 95/3; 1995); Criteria for evaluating
acceptable methods of analysis for Codex purposes.
Anlisis de comida
Green, J.M., A Practical guide to Analytical Method
Validation, Analytical Chemistry News & Features,
1/5/96, pp305A - 309A.
Farmacuticos
Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for
Methods Validation, Food and Drug Administration, 1987.
Farmacuticos
Reviewer Guidance, Validation of Chromatographic
Methods, Center for Drug Evaluation and Research, Food
and Drug Administration, 1994.
Farmacuticos
ICH Topic Q2 Validation of Analytical Methods, The
European Agency for the Evaluation of Medicinal
Products:
ICH Topic Q 2 A - Definitions and Terminology
(CPMP/ICH/381/95)
ICH Topic Q 2 B - Methodology (CPMP/ICH/281/95)
Farmacuticos
USA - Environment Protection Agency - Report on
Minimum Criteria to Assure Data Quality, July 1989.
General QA
Anlisis ambiental
Validation of methods for the analysis of soils from
potential contaminated land. Recommendations of the
Working group on Soil Analysis, UK Department of the
Environment
Anlisis ambiental
52
(c) Otras referencias y bilbiografa
Relevancia
Analytical Methods Committee, Uncertainty of
measurement: Implications of its use in analytical science,
The Analyst, 1995, 120, 2303-2308.
Incertidumbre de la
Medicin
Association of Public Analysts, "A Protocol for Analytical
Quality Assurance in Public Analysts' Laboratories", APA,
London, 1986.
General QA
ASTM C-26 Proposal P 207. Proposed Terminology
Relating to Precision and Bias Statements in Test Method
Standards.
Terminologa,
precisin, sesgo
ASTM C 1009 - 83: Standard guide for Establishing a
Quality Assurance Program for Analytical Chemistry
Laboratories Within the Nuclear Industry.
General QA
ASTM D 4210 - 89: Standard Practice for Intra laboratory
Quality Control Procedures and a Discussion on reporting
Low-level Data.
Control de calidad
(CC)
ASTM D 4621 - 92b: Standard Guide for Accountability
and Quality Control in the Coal Analysis Laboratory.
QA, CC
ASTM D 4697 - 87: Standard Guide for Maintaining Test
Methods in the User's Laboratory.
QA, CC
ASTM E 1212 - 92: Standard Practice for Establishment
and Maintenance of Quality Control Systems for non-
destructive Testing Agencies.
General QA, CC
ASTM E 882 - 87: Standard Guide for Accountability and
Quality Control in the Chemical Analysis Laboratory.
CC
BS 4778:Part 2:1991. Quality vocabulary, part 2 - Quality
concepts and related definitions.
Terminologa
Caulcutt, R., Boddy, R., Statistics for Analytical
Chemists, Chapman and Hall, London, 1991.
Estadstica
Compendium of Chemical Technology (IUPAC
Recommendations), Blackwell Scientific, 1987, ISBN 0-
632-01767-8.
Terminologa
53
Dell, D., Views on method validation, Methodol. Surv.
Biochem. Anal., 1990, Vol. 20, pp. 9-22.
Validacin del
mtodo.
Dietrich, C. F., Uncertainty, calibration and probability,
2nd edition 1991, Adam Hilger, London.
Incertidumbre de la
Medicin
Dux, J. P., "Handbook of Quality Assurance for the
Analytical Chemistry Laboratory", Van Nostrand Reinhold,
New York, 1986.
General QA
Relevancia
EAL-G4 - Accreditation for Chemical Laboratories -
Guidance on the interpretation of the EN 45000 series of
Standards and ISO/IEC Guide 25, edition 1, 4/93
(originally EURACHEM/ WELAC GD1/WGD2).
General QA
Estimating uncertainties in testing - A guide to estimating
and reporting uncertainties of measurement in testing -
1st edition, October 1994 - British Measurement and
Testing Association (BMTA).
Incertidumbre de la
Medicin
Garfield, F. M., "Quality Assurance Principles for Analytical
Laboratories", Association of Official Analytical Chemists",
Arlington VA, 1992.
General QA
General Guidelines for use with a Protocol for Quality
Assurance of Trace Analysis (2nd draft), UK DTI VAM
Programme.
General QA
Gnzler, H., Accreditation and Quality Assurance in
Analytical Chemistry, Pub. Springer Verlag, 1994. ISBN
3-540-60103-1.
General QA
incluyendo captulo
en la validacin de
los mtodos.
ISO VIM (International vocabulary of basic and general
terms in metrology), 2nd edition, 1993.
Terminologa
ISO 3534-1:1993. Statistics - Vocabulary and symbols -
Part 1: Probability and general statistical terms.
Estadstica,
terminologa
Part 2: Statistical quality control.
Estadstica,
terminologa
Part 3: Design of experiments.
Estadstica,
terminologa
54
ISO 5725-1:1994. Accuracy (trueness and precision) of
measure-ment methods and results - Part 1. General
principles and definitions.
Terminologa,
exactitud
measure-ment methods and results - Part 2. Basic
methods for the determination of repeatability and
reproducibility of a standard measurement method.
Exactitud
measure-ment methods and results - Part 3. Intermediate
measures of the precision of a standard measurement
method.
Exactitud
measure-ment methods and results - Part 4. Basic
methods for the determination of the trueness of a
standard measurement method.
Exactitud
measure-ment methods and results - Use in practice of
accuracy values.
Exactitud
ISO 7873:1993. Control charts for arithmetic average
with warning limits.
Estadstica, CC
ISO 7966:1993. Acceptance control charts.
Estadstica, CC
ISO 8258:1991. Shewhart control charts.
Estadstica, CC
ISO/CD 5725-5. Accuracy (trueness and precision) of
measurement methods and results - Part 5. Alternative
methods for the determination of the precision of a
standard measurement method.
Exactitud
Relevancia
ISO/DIS 11095 (April 1993). Linear calibration using
reference materials.
Materiales de
referencia y para
calibracin,
ISO/IEC Guide 2:1991. General terms and their
definitions concerning standardisation and related
activities.
Terminologa
ISO/IEC Guide 32 (in preparation). Calibration of chemical
analyses and use of certified reference materials.
Materiales de
referencia y para
calibracin
ISO/IEC Guide 33:1989. Uses of certified reference
Materiales de
55
materials.
Referencia
ISO/TAG4/WG3:1993. Guide to the Expression of
Uncertainty in Measurement.
Incertidumbre de la
Medicin
Kateman, G., Buydens, L., Quality Control in Analytical
Chemistry, J Wiley & Sons, 1991.
General QA, CC
Mesley, R. J., Pocklington, W. D., Walker R. F., "Analytical
Quality Assurance - A Review", Analyst, 1991, 116 (10),
975-1092.
General QA
Miller, J. C., and Miller, J. N., "Statistics for Analytical
Chemistry", Ellis Horwood, Chichester, 1988.
Estadstica
Murdoch, J., "Control Charts", Macmillan 1979.
Estadstica, CC
NATA - Technical Note #17 - Requirements for the
Format and Content of Test Methods and Recommended
Procedures for the Validation of Test Methods.
Documentacin de
mtodos, validacin
general de mtodos
Nomenclature for the Presentation of Results of chemical
analysis (IUPAC Recommendations 1994), Pure & Appl.
Chem., 1994, 66(3), pp. 595-608,.
Terminologa,
Estadstica
Parkany, M., Quality Assurance for Analytical
Laboratories. Special publication 130, Royal Society of
Chemistry, UK. ISBN 0-85186-705-7
General QA
Prichard, E., Quality in the Analytical Chemistry
Laboratory, ACOL, Wiley.
General QA
Taylor, B. N., Kuyatt, C. E., Guidelines for evaluating and
expressing uncertainty in NIST measurement results,
NIST technical note 1297, 1994, National Institute of
Standards and Technology.
Incertidumbre de la
Medicin
Taylor, J. K., "Quality Assurance of Chemical
Measurements", Lewis Publishers, Michigan, 1987. ISBN
0-87371-097-5
General QA
Validation of test methods - General principles and
concepts (sic), Committee paper EAL/GA(96)58,
European Accreditation of Laboratories, Oct. 1996
Validacin del
mtodo
WECC Document 19 1990.
Incertidumbre de la
Medicin
56
ANEXO A- Definiciones
Contenido
A1 Exactitud
... de un instrumento de medicin
A2 Sesgo
A3 Curva de Calibracin
A4. Reactividad cruzada
A5 Discriminacin
... Umbral
A6 Error
... de medicin
Aleatorio
Sistemtico
A7 Falsos Negativos/Positivos
A8 El ajuste al propsito
A9 Media limitante
A10 Lmite de Deteccin
Concentracin neta mnima
detectable
Lmite de Decisin
Lmite de Determinacin
A11 Lmite de Cuantificacin
Lmite reportable
A12 Linealidad
A13 Mensurando
A14 Medicin
... Procedimiento
Mtodo de ...
A15 Precisin
Intremedia
A16 Prueba de aptitud
A17 Calidad
... Aseguramiento ... Control
Control de calidad interno
A18 Intervalo
de medicin y de trabajo
A19 Recuperacin
A20 Material de referencia
Certificado...
A21 Repetibilidad
... de los Resultados de las
Mediciones
..De un instrumento de medicin
.. Desviacin Estndar
.. Lmite r
A22 Reproducibilidad
...Desviacin estndar
...Lmite R
A23 Tiempo de respuesta
A24 Resultado de una medicin
A25 Pruebas de Robustez
A26 Selectividad
... en anlisis
A27 Sensibilidad
A28 Especificidad
A29 Desviacin Estndar
A30 Trazabilidad
A31 Veracidad
A32 Incertidumbre (de las
mediciones)
Incertidumbre Estndar
Incertidumbre Estndar
Combinada
Incertidumbre
Expandida
Factor de cobertura
A33 Validacin
Mtodo...
A34 Valor
De Referencia Aceptado
Verdadero
Verdadero convencional
A35 Verificacin
57
A1 Exactitud
Es la proximidad de concordancia entre el resultado de una medicin y el
resultado del valor de referencia aceptado.
Nota: El trmino exactitud cuando se aplica a un grupo de
resultados de prueba, involucra la combinacin de componentes
aleatorios y errores sistemticos comunes o componentes del
sesgo.
[ISO 3534-1]
La cantidad referida a las diferencias entre la media de un grupo de
resultados o un resultado individual y el valor el cual se acepta como el
valor verdadero o correcto para la cantidad medida.
[IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985]
A1.1 Exactitud (de un Instrumento de Medicin)
Aptitud de un instrumento de medicin para dar respuestas cercanas al
valor verdadero.
Nota: En este contexto la exactitud es un concepto cualitativo.
[IUPAC Orange Book]
A2 Sesgo:
El valor esperado de los resultados de prueba y el valor de referencia
aceptado.
Note: El sesgo es un error total sistemtico en contraste con el
error aleatorio. Puede existir uno o ms componentes del error
sistemtico que contribuyen al sesgo. Una mayor diferencia
sistemtica con respecto del valor de referencia aceptado es
reflejada por un valor de sesgo ms grande.
[ISO 3534-1]
Caracteriza el error sistemtico en un procedimiento analtico dado y es la
desviacin (positiva o negativa) de la media de los resultados analticos del
valor verdadero (conocido o asumido).
La diferencia entre la media limitante () y el valor verdadero (); i.e., =
- .
[IUPAC Orange Book]
A3 Curva de Calibracin:
58
Representacin grfica de la seal de medicin con una funcin de la
cantidad del analito.
[AOAC - PVMC]
A4 Reactividad cruzada:
Respuesta (del mtodo) a anlogos, metabolitos, u otros componentes no
requeridos que pueden estar presentes en la matriz (ces).
[AOAC - PVMC]
A5 Discriminacin
La habilidad de un instrumento de medicin para responder a pequeos
cambios en el valor del estmulo o seal de entrada.
[VIM 1984]
A5.1 Umbral de discriminacin:
El cambio ms pequeo en un estmulo o seal de entrada que produce un
cambio perceptible en la respuesta de un instrumento de medicin.
Nota: El umbral de discriminacin puede depender de, por ejemplo,
el ruido (interno o externo), la friccin, la humedad, la inercia, etc.
[VIM 1984]
A6 Error (de Medicin):
El resultado de una medicin menos un valor verdadero del mensurando.
Nota: Puesto que no puede ser determinado un valor verdadero, en la prctica se utiliza
el valor convencionalmente verdadero.
[VIM 1993]
El valor de un resultado menos el valor verdadero.
A6.1 Error Aleatorio:
Resultado de una medicin menos la media que resultar de un nmero
infinito de mediciones del mismo mensurando realizadas bajo condiciones
de repetibilidad.
Nota: El error aleatorio es igual al error menos el error sistemtico.
Debido a que solo se puede realizar un nmero finito de
mediciones, es posible determinar solo un estimado del error
aleatorio.
[VIM 1993]
59
La diferencia entre el valor observado (x
i
) y la media limitante (); i.e. = x
i
- .
[IUPAC Orange Book]
A6.2 Error Sistemtico:
Media que resultara de un nmero infinito de mediciones del mismo
mensurando llevadas a cabo bajo condiciones de repetibilidad menos un
valor verdadero del mensurando.
Nota: El error sistemtico es igual al error menos el error aleatorio.
De forma parecida, el valor verdadero, el error sistemtico y sus
causas no pueden ser conocidas.
[VIM 1993]
A7 Falsos Negativos / Positivos:
Para mtodos cualitativos la relacin de los falsos positivos/negativos
puede ser determinada. Los datos de un mtodo de comparacin
confirmatorio debern proporcionarse si tal mtodo(s) se aplica a la(s)
misma (s) matriz (ces) e intervalo(s) de concentracin. En la ausencia de un
mtodo de comparacin, poblaciones de muestras fortificadas negativas y
positivas deben ser analizadas. Los falsos positivos/negativos pueden
determinarse de la siguiente forma :
Relacin de falsos positivos (%) = falsos positivos X 100/Negativos totales
conocidos
Relacin de falsos negativos (%) = falsos negativos X 100/Positivos totales
conocidos
[AOAC Research Institute - Performance tested Methods Programme,
Procedure]
A8 Adecuacin al propsito:
Grado al cual los datos producidos por un proceso de medicin permiten
al usuario el realizar decisiones correctas tcnica y administrativamente
para un propsito establecido.
[IUPAC Orange Book]
A9 Media limitante:
El valor asinttico o media poblacional de la distribucin que caracteriza la
cantidad medida; el valor que es alcanzado mientras el nmero de
observaciones se aproxima al infinito.
[IUPAC Orange Book]
60
A10 Limite de Deteccin:
El menor contenido que puede ser medido con una certeza estadstica
razonable.
[AOAC - PVMC]
La menor concentracin del analito en una muestra que puede detectarse,
pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones establecidas de
la prueba.
[NATA Tech Note#13]
El lmite de deteccin, expresado como concentracin c
L
, o como cantidad
q
L
, se deriva de la medicin ms pequea x
L
, que puede ser detectada con
certeza razonable para un procedimiento analtico dado. El valor de x
L
est dado por la ecuacin:
x
L
= x
bl
+ ks
bl
donde x
bl
es la media de las mediciones del blanco y s
bl
la desviacin
estndar de las mediciones del blanco, y k es un factor numrico elegido
de acuerdo al nivel de confianza deseado.
Tambin puede conocerse como Concentracin neta mnima detectable,
o Lmite de Determinacin /Limite de Decisin, las cuales se definen
como:
La concentracin neta verdadera o la cantidad del analito en el material a
analizarse la cual llevar con una probabilidad de (1-), a la conclusin de
que sobre la concentracin del analito en el material analizado es mayor
que la del blanco matriz.
[ ISO/DIS 11843-1]
y
El menor contenido de analito, si est presente, que ser detectado y que
puede ser identificado.
[AOAC - PVMC]
Este tema es tratado con gran detalle por IUPAC
[12]
.
61
A11 Lmite de Cuantificacin:
(El contenido) igual o mayor que el menor punto de concentracin en la
curva de calibracin.
[AOAC - PVMC]
Tambin se conoce como Lmite Reportado:
La menor concentracin de un analito que puede ser determinada con una
precisin aceptable (repetibilidad) y exactitud bajo las condiciones
establecidas de la prueba.
[NATA Tech Note #13]
Conocida tambin como Lmite de Cuantificacin:
Los lmites de Cuantificacin son caractersticas del desempeo que
marcan la habilidad de un proceso de medicin analtica para cuantificar
adecuadamente un analito.
Nota: La habilidad para cuantificar se expresa generalmente en
trminos de la seal valor(verdadero) del analito que producir
estimados teniendo desviacin estndar relativa (RSD)
especificada, comnmente del 10%.
As: L
Q
= k
Q
Q
Donde L
Q
es el Lmite de Cuantificacin,
Q
es la desviacin
estndar en ese punto, y k
Q
es el multiplicador cuyos recprocos
igualan la RSD seleccionada y cuantificada. . La IUPAC da un
valor para k
Q
de 10, en falta de mejores aproximaciones.
[IUPAC Orange Book]
A12 Linealidad:
Define la habilidad del mtodo para obtener resultados de la prueba
proporcionales a la concentracin del analito.
Nota: Se infiere que el intervalo lineal es el intervalo de
concentraciones del analito sobre las cuales el mtodo da resultados de
pruebas proporcionales a la concentracin del analito.
[AOAC - PVMC]
62
A13 Mensurando:
Magnitud particular sujeta a medicin.
Nota: La especificacin de un mensurando puede requerir
indicaciones acerca de magnitudes tales como tiempo, temperatura
y presin.
[VIM 1993]
A14 Medicin:
Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar el valor de una
magnitud.
[VIM 1993]
A14.1 Procedimiento de Medicin:
Conjunto de operaciones, descritas especficamente, para realizar
mediciones particulares de acuerdo a un mtodo determinado.
Nota: Un procedimiento de medicin es usualmente descrito con ese
nombre, tiene suficientes detalles que permiten al operador efectuar
una medicin sin informacin adicional.
[VIM 1993]
A14.2 Mtodo de Medicin:
Secuencia lgica de operaciones, descrita genricamente, utilizada en el
desarrollo de las mediciones.
[VIM 1993]
A15.1 Precisin:
Es la proximidad de concordancia entre los resultados de pruebas
independientes obtenidos bajo condiciones estipuladas.
Nota: La precisin depende slo de la distribucin de los errores
aleatorios y no los relaciona al valor verdadero o el valor
especificado. La medida de la precisin generalmente se expresa
en trminos de imprecisin y calculada como una desviacin
estndar de los resultados de la prueba. Una menor precisin se
refleja por una desviacin estndar grande. Los resultados de
prueba independientes significan los resultados obtenidos de tal
forma que no son influenciados por cualquier otro resultado previo
sobre el mismo o similar objeto de prueba. Las mediciones
cuantitativas de la precisin dependen en forma crtica de las
condiciones estipuladas. Las condiciones de Repetibilidad y
63
Reproducibilidad son series particulares de condiciones extremas
estipuladas.
[ISO 3534-1]
Una medicin de la reproducibildad de las mediciones dentro de un grupo ,
esto es la dispersin de un grupo con respecto a su valor central
[IUPAC Compendium de Chemical Technology, 1985]
A15.2 Precisin Intermedia:
La precisin Intermedia se expresa con la variacin de los laboratorios:
diferentes das, diferentes analistas, diferente equipo, etc.
[ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95]
A16 Pruebas de aptitud:
La evaluacin peridica del desempeo de los laboratorios individuales y
grupos de laboratorios que se logra mediante la distribucin de materiales
tpicos otorgados por un organismo de prueba independiente, para que los
participantes realicen su anlisis sin supervisin.
[IUPAC Orange Book]
A17 Calidad: *
La totalidad de rasgos y caractersticas de un producto o servicio que se
refieren a su capacidad para satisfacer necesidades declaradas o implcitas
[ISO 8402:1994]
A17.1 Aseguramiento de la Calidad :
Todas aquellas actividades sistemticas planeadas dentro del sistema de
calidad, demostradas como necesarias que proporcionan una confianza
adecuada para que una entidad satisfaga sus requisitos de calidad.
[ISO 8402:1994]
A17.2 Control de Calidad:
Las tcnicas operacionales y actividades que son usadas para satisfacer
los requisitos de calidad.
[ISO 8402:1994]
A17.3 Control de Calidad Interno:
Establecimiento de procedimientos que debe seguir un laboratorio para el
monitoreo continuo de operaciones y los resultados de las mediciones con
el fin de decidir si los resultados de las mediciones son lo suficientemente
confiables para ser publicados.
[IUPAC Orange Book]
________________
*Nota del traductor
64
Segn la publicacin Tcnica CNM-MMD-PT-003 la calidad se define por Conjunto de caractersticas de un
elemento que le confiere aptitud para satisfacer necesidades explcitas e implcitas
A18 Intervalo (Medicin - Trabajo):
Conjunto de valores del mensurando para los cuales el error de un
instrumento de medicin esta supuestamente comprendido dentro de
ciertos lmites.
[IUPAC Orange Book]
A19 Recuperacin:
La fraccin de analito adicionada a una muestra de prueba (fortificada o
con spike) previa al anlisis, muestras fortificadas y sin fortificar, el
porcentaje de recuperacin (%R) se calcula de la siguiente manera:
%R = [(CF-CU)/CA] x 100
Donde CF es la concentracin de analito medida en la muestra fortificada;
CU es la concentracin de analito medida en la muestra sin fortificar; CA es
la concentracin de analito adicionada (valor medido, no determinado por el
mtodo) en la muestra fortificada.
[AOAC-PVMC]
A20 Material de Referencia (MR):
Material o substancia en la cual uno o ms valores de sus propiedades son
suficientemente homogneas y bien definidas, para ser utilizadas para la
calibracin de aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin o para
asignar valores a los materiales.
El trmino material de referencia describe materiales que a menudo se
llaman patrones de medicin, por ejemplo sustancias qumicas utilizadas
para fines de calibracin o identificacin. Se deben tomar precauciones
cuando se utiliza el trmino standard ya que se utiliza en dos contextos
diferentes. El trmino puede referirse a measurement standard en el
sentido de material de referencia o puede referirse a las normas escritas
tales como Standard Methods Es importante asegurar que la distincin
este siempre clara.
*Nota del traductor: En espaol el sentido Measurement Standard se utiliza el trmino patrn de
medicin, mientras que para standard Methods se utiliza el trmino de normas. Dentro de los
patrones de medicin se distinguen los materiales de referencia aquellos patrones de medicin que
se consumen en cada medicin o que tienen caducidad. Los materiales de referencia certificados
por el NIST se llaman SRM.
[ISO/IEC Guinde 30 - 1992, 2.1]
65
A20.1 Material de Referencia Certificado(MRC):
Material de referencia acompaado de un certificado, en el cual uno o
ms valores de las propiedades estn certificados por un procedimiento
que establece trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la cual
se expresan los valores de la propiedad y en el que cada valor certificado
se acompaa de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza.
[ISO/IEC Guide 30 - 1992, 2.2]
A21 Repetibilidad:
Precisin en condiciones de repetibilidad, i.e. condiciones bajo las cuales
se obtienen resultados independientes de una prueba con el mismo
mtodo, con los mismos accesorios de laboratorio, en el mismo laboratorio,
por el mismo operador usando el mismo equipo en intervalos de tiempo
cortos.
[ISO 3534-1]
A21.1 Repetibilidad (de resultados de mediciones):
La proximidad de la concordancia entre los resultados de mediciones
sucesivas del mismo mensurando realizadas bajo las mismas condiciones
de medicin.
[IUPAC Orange Book]
A21.2 Repetibilidad (de un instrumento de medicin):
Aptitud de un instrumento de medicin para proporcionar indicaciones
prximas entre s por aplicaciones repetidas del mismo mensurando bajo
las mismas condiciones de medicin.
[IUPAC Orange Book]
A21.3 Desviacin Estndar de la Repetibilidad:
La desviacin estndar de los resultados de una prueba obtenidos bajo
condiciones de repetibilidad
Note: Es una medida de la de dispersin de la distribucin de los
resultados de prueba bajo condiciones de repetibilidad. Similarmente la
varianza de repetibilidad y coeficiente de
variacin de la repetibilidad puede definirse y utilizarse como la medicin
de la dispersin de
resultados de una prueba bajo condiciones de repetibilidad.
[ISO 3534-1]
A21.4 Lmite de Repetibilidad r:
66
El valor menor que o igual que, al cual la diferencia absoluta entre los dos
resultados de pruebas individuales obtenidos bajo condiciones de
repetibilidad se espera exista con una probabilidad de 95%
La repetibilidad (lmite de) se da por la frmula:
r t
r
=
2
donde t
es el valor de t de Student de dos colas para = a una

confianza dada (El nivel de confianza normalmente establecido es de 95%
donde el valor es 1.96), y
r
es la desviacin estndar medida bajo
condiciones de repetibilidad (Vase A20.3).
[ISO 3534-1]
A22 Reproducibilidad:
Precisin en condiciones de reproducibilidad, i.e. condiciones bajo las
cuales los resultados de prueba se obtienen con el mismo mtodo, en un
material idntico, en diferentes laboratorios por diferentes operadores
usando diferentes equipos.
Nota: Una afirmacin vlida de reproducibilidad requiere de la
especificacin de las condiciones modificadas. La reproducibilidad
puede ser expresada cuantitativamente en trminos de la
dispersin de los resultados.
[ISO 3534-1]
A22.1 Desviacin Estndar de la Reproducibilidad:
La desviacin estndar de los resultados de prueba obtenidos bajo
condiciones de reproducibilidad
Nota: Es una medida de la de dispersin de la distribucin de los
resultados de prueba bajo condiciones de reproducibilidad.
Similarmente la varianza de reproducibilidad y coeficiente de
variacin de la reproducibilidad puede definirse y utilizarse como la
medicin de la dispersin de
resultados de una prueba bajo condiciones de reproducibilidad.
[ESO 3534-1]
A22.2 Lmite de Reproducibilidad R:
El menor valor que o igual a, al cual la diferencia absoluta entre dos
resultados de pruebas individuales obtenidos bajo condiciones de
reproducibilidad puede esperarse con una probabilidad de 95%
La reproducibilidad (lmite de) se da por la frmula :
67
R t
R
=
2
donde t
es el valor de t de Student de dos colas para = a una

confianza dada (El nivel de confianza normalmente establecido es de 95%
donde el valor es 1.96), y
R
es la desviacin estndar medida bajo
condiciones de reproducibilidad (vase A21).
[ISO 353 4-1]
A23 Tiempo de Respuesta:
El intervalo de tiempo que comprende el instante en el cual una seal de
entrada es sometida a un cambio brusco especificado y el instante en el
cual la seal de salida alcanza dentro de lmites especificados un valor en
rgimen estable y sostenido.
[VIM 1984]
A24 Resultado de una Medicin
Valor atribuido a un mensurando, obtenido por medicin
Nota: Cuando se proporciona un resultado, se debe aclarar si se
refiere a: la indicacin, al resultado no corregido, al resultado
corregido y si se trata de una media obtenida a partir de varias
mediciones. Una expresin completa del resultado de una medicin
incluye informacin acerca de la incertidumbre de la medicin.
[VIM 1993]
A25.1 Prueba de Robustez:
Estudio intra-laboratorio para estudiar el comportamiento de un proceso
analtico cuando se efectan pequeos cambios en el ambiente y/o en las
condiciones de operacin, similares a aquellas que pudieran surgir en los
diferentes ambientes de prueba. La prueba de robustez permite obtener
informacin de los efectos de cambios menores de una forma rpida y
sistemtica.
[AOAC - PVMC]
A25.2 (Robustez):
La robustez de un procedimiento analtico es una medida de su capacidad
de permanecer inalterado por variaciones pequeas pero deliberadas en los
parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de su confiabilidad
durante su uso normal.
A26 Selectividad (o Especificidad):
68
La habilidad de un mtodo para determinar exactamente y especficamente
el analito de inters en la presencia de otros componentes en la matriz bajo
condiciones establecidas de la prueba.
[NATA Tech Note #13]
A26.1 Selectividad (en un anlisis):
Selectividad Cualitativa- Hasta que punto otras sustancias interfieren en la
determinacin de una sustancia de acuerdo a un procedimiento dado.
[IUPAC Compendium de Chemical Terminology, 1987]
Selectividad Cuantitativa - Un trmino usado en conjuncin con otros
sustantivos (i.e. constante, coeficiente, ndice, factor, nmero) para la
caracterizacin cuantitativa de interferencias
[IUPAC Compendium de Chemical Terminology, 1987]
A27 Sensibilidad:
El cambio en la respuesta de un instrumento de medicin dividido por el
correspondiente cambio del estmulo.
Nota: El estmulo puede ser por ejemplo la cantidad del
mensurando presente. La sensibilidad puede depender del valor de
estmulo. Aunque esta definicin se aplica claramente al
instrumento de medicin, tambin puede aplicarse al mtodo
analtico en conjunto, tomando en cuenta otros factores como el
efecto de los pasos para una concentracin.
[VIM 1984 y IUPAC Orange Book]
A28 Especificidad :
La habilidad de un mtodo de medir solo lo que se espera que mida
[AOAC - PVMC].
La especificidad es la capacidad de determinar el analito inequvocamente
en la presencia de componentes los cuales se espera que estn presentes.
Comnmente puede incluir impurezas, degradantes, matriz, etc.
A29 Desviacin Estndar:
Es una medicin del grado de dispersin de los valores al rededor de su
media en una
distribucin de valores.
La desviacin estndar de la poblacin para n valores esta dada por :
69
=
( ) x
n
i
i
n

2
1
En la prctica generalmente se analiza una muestra y no toda la poblacin.
La desviacin estndar s para la muestra est dad por:
s =
( ) x x
n
i
i
n
2
1
1
A30 Trazabilidad:
Propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn por la
cual pueda ser relacionado a referencias determinadas, generalmente
patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena
ininterrumpida de comparaciones teniendo todas incertidumbres
determinadas.
[ISO/IEC Guide 30 - 1992, 3.8]
A31 Veracidad:
Es la proximidad de concordancia entre el valor promedio obtenido de una
serie de resultados de prueba y un valor de referencia aceptado.
Note: La medida de la veracidad se expresa por lo general en trminos de
sesgo. La referencia a la veracidad como exactitud de la medida
no se recomienda normalmente.
[ISO 3534-1]
A32 Incertidumbre (de Medicin) :
Parmetro asociado al resultado de una medicin, que caracteriza la
dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuido al
mensurando.
Nota: El parmetro puede ser, por ejemplo, una desviacin
estndar ( o un mltiplo dado de ella), o la mitad de un intervalo de
confianza determinado. La incertidumbre de la medicin
comprende, en general, de muchos componentes. Algunos de estos
pueden ser evaluados a partir de las distribucin estadstica de los
70
resultados de series de mediciones y pueden ser caracterizados por
desviaciones estndar experimentales. Los otros componentes, que
tambin pueden ser caracterizados por las desviaciones estndar,
son evaluados a partir de distribuciones de probabilidad supuestas,
basadas en la experiencia u otra informacin. Se entiende que el
resultado de una medicin es el mejor estimada del valor del
mensurando y que todos los componentes de la incertidumbre,
incluyendo aquellos provenientes de efectos sistemticos, tales
como los componentes asociados con correcciones y patrones de
referencia, contribuyen a la dispersin.
[VIM 1993]
A32.1 Incertidumbre Estndar
u(x
i
) - La incertidumbre del resultado de una medicin expresada como una
desviacin estndar.
[ISO GUM]
A32.2 Incertidumbre Estndar Combinada :
u
c
(y) - La incertidumbre estndar de los resultados de una medicin
cuando el resultado es obtenido a partir de los valores de un nmero de
otras magnitudes, igual a la raz cuadrada positiva de trminos, siendo
stos las varianzas o covarianzas de estas otras cantidades ponderadasde
acuerdo a como varan los resultados de la medicin con estas cantidades.
[ISO GUM]
A32.3 Incertidumbre Expandida
U - Magnitud que define un intervalo alrededor del resultado de una
medicin que puede esperarse para abarcar una fraccin grande de la
distribucin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mensurando.
Nota 1 La fraccin puede ser relacionada con la probabilidad de
cobertura o nivel de confianza del intervalo.
Nota 2 Par asociar un nivel especfico de confianza con el intervalo
definido por la incertidumbre expandida, se requiere hacer
suposiciones explcitas o implcitas con respecto a la distribucin de
probabilidad caracterizada por el resultado de medicin y su
incertidumbre estndar combinada. El nivel de confianza que puede
ser atribuidos este intervalo slo puede conocerse para el alcance al
cual tales suposiciones sean justificadas.
71
Nota 3. Una incertidumbre expandida U es calculada a partir de una
incertidumbre estndar combinada u
c
y un factor de cobertura k
usando:
U = k x u
c

[ISO GUM]
A32.4 Factor de Cobertura
k - Factor numrico usado como multiplicador de la incertidumbre estndar
para obtener una incertidumbre expandida.
Nota: El factor de cobertura se encuentra tpicamente en el intervalo de 2 a
3.
[ISO GUM]
A33.1 Validacin:
Confirmacin, mediante examinacin y suministro de evidencia objetiva, de
que los requisitos particulares para un uso especfico de inters son
satisfechos.
[ISO 8402:1994]
A33.2 Validacin de un Mtodo:
1. El proceso de establecimiento de para establecer las caractersticas de
desempeo y limitaciones de un mtodo y la identificacin de las aquellas
influencias que podrn modificar estas caractersticas y a que grado. Qu
analitos puede determinar el mtodo?, En qu matrices en la presencia de
qu interferencias?. Dentro de estas condiciones que niveles de precisin
y exactitud pueden alcanzarse.
2. El proceso de verificacin de que un mtodo es apropiado a su propsito,
por ejemplo para resolver un problema analtico particular.
Nota: 1.Es aplicable cuando un mtodo se desarrolla sin tener en
mente un problema analtico en particular. 2 es aplicable cuando el
mtodo se est desarrollando con un propsito especfico. En
qumica analtica otro uso comnmente encontrado del trmino de
validacin es en el contexto de instrumentacin. La Validacin de
Instrumentos se usa para describir el proceso de establecer que
un instrumento a cualquier momento dado es capaz de
desempearse de acuerdo a la especificacin de su diseo. Estos
procesos podrn alcanzarse mediante calibraciones o verificaciones
de desempeo.
A34 Valor:
72
A34.1 Valor de Referencia Aceptado:
Valor que sirve como referencia en concordancia para comparaciones y
se deriva como:
a) Un valor terico o establecido basado en principios cientficos;
b) Un valor asignado o certificado, basado en trabajo experimental de
algunas organizaciones nacionales o internacionales;
c) Un valor de consenso o certificado basado en trabajo experimental en
colaboracin bajo el auspicio de un grupo cientfico o de ingeniera.
d) Cuando a), b), y c) no estn disponibles, la experimentacin de la
cantidad (mensurable), i.e. la media de una poblacin especfica de
medidas.
[ISO 3534-1]
A34.2 Valor verdadero:
Valor consistente con la definicin de una determinada magnitud particular.
Nota: Este es un valor que sera obtenido de una medicin perfecta. Por
naturaleza, los valores verdaderos son indeterminados. El artculo
indefinido un preferido en lugar del artculo definido el, es
utilizado en conjunto con valor verdadero porque puede haber
muchos valores consistentes con la definicin de una cantidad
particular dada.
[VIM 1993]
A34.3 Valor verdadero convencional:
Valor atribuido a una cantidad particular y aceptada, algunas veces por
convencin, como tener una incertidumbre apropiada para un propsito
dado.
Nota: Valor Verdadero Convencional algunas veces es
denominado como valor asignado, mejor estimado del valor, valor
convencional o valor de referencia. Frecuentemente, un nmero de
resultados de las mediciones de una cantidad es usado para
establecer un valor verdadero convencional.
[VIM 1993]
Un Valor Verdadero Convencional (de una cantidad) es un valor atribuido a
una cantidad particular y aceptada algunas veces por convencin como
tener una incertidumbre apropiada para un propsito dado.
Nota: No debe confundirse con el valor de referencia
[IUPAC Orange Book]
A35 Verificacin:
73
Confirmacin mediante examinacin y suministro de evidencia objetiva, de
que los requisitos especficos se han cumplido.
[ISO 8402:1994]
ANEXO B. PROTOCOLO DE DOCUMENTACIN DEL MTODO
La adecuada documentacin de los mtodos es discutida en el captulo 9 de esta
gua. El siguiente formato se incluye como referencia como un despliegue
conveniente. Esta basado en ISO 78-2
(27)
, pero contiene sugerencias adicionales
sobre la calibracin, el control de calidad y control de la documentacin.
B0 RESUMEN DE ACTUALIZACIN Y REVISIN
Esta seccin tiene un doble propsito. Primero pretende disminuir los cambios
menores a ser realizados al texto del mtodo sin la necesidad de una revisin
exhaustiva y una reimpresin del mtodo. Segundo, es recomendado que cada
mtodo debiera ser revisado peridicamente para ver si contina siendo
adecuado a su propsito y el resumen sirve como un recordatorio para que esto
sea realizado. Este resumen debe ser situado antes que el mtodo justo en la
portada.
B0.1 ACTUALIZACIONES
Cualquier cambio escrito a mano al texto del mtodo deber aceptarse como
cambios proporcionados cuando tambin se encuentre escrito en la tabla siguiente
(la escritura a mano se considera aceptable), propiamente autorizada. Quedar
implcito que la autorizacin respalda el hecho que los efectos de los cambios en
la validacin del mtodo han sido investigados y no causan problemas y que los
cambios se han hecho a todas las copias del mtodo.
# Seccin Naturaleza del cambio Fecha Autorizacin
1 3.4 Cambio en la tasa del flujo de 1.2 ml.min-1 8/2/96 DGH
B0.2 REVISIN
74
En cualquier momento determinado se espera que la fecha a la cual el mtodo fue
previsto para estar en uso, est entre las fechas de revisin y de prxima revisin
como se muestra en la tabla. Un tiempo de dos aos se ha sugerido como un
intervalo adecuado.
Fecha de revisin Observaciones de la revisin Fecha siguiente de revisin Autorizacin
75
B1 TTULO
Formato preferido:
Determinacin de A (analito o mensurando) (en presencia de B [interferencia]) en
C (matriz) usando D (principio).
B2 ALCANCE
Esta seccin permite al usuario potencial examinar rpidamente si el mtodo es o
no adecuado para la aplicacin deseada. Se debern cubrir los siguientes
aspectos:
El (los) analito(s) que pueden determinarse por este mtodo;
La forma en que el (los) analito(s) son determinados- especiacin,
total/disponible etc.;
La (s) matriz (ces) de la muestra entre las que el (los) analito (s) pueden ser
determinados;
El intervalo de concentraciones con las cuales se puede usar el mtodo
Las interferencias conocidas que previenen o limitan el trabajo del mtodo;
Las tcnicas utilizadas por el mtodo
El tamao mnimo de muestra.
B3 PRECAUCIONES DE ADVERTENCIA Y SEGURIDAD
Las precauciones detalladas pueden establecerse en las secciones relevantes,
pero se debe hacer hincapi en la existencia de materiales peligrosos y la
necesidad de precauciones. Incluya devoluciones nulas.
Proporcione advertencias adecuadas de cualquier peligro involucrado con:
Manipulacin de la muestra;
Manipulacin o preparacin de solventes, reactivos, materiales de referencia u
otros materiales;
Operacin del equipo;
Requisitos para ambientes de manipulacin especiales (por ejemplo campanas
de extraccin)
Consecuencias de escalamientos de experimentos (lmites de explosin)
B4 DEFINICIONES
Defina cualquier trmino poco usual, utilice definiciones ISO siempre que sea
posible. Cite las fuentes. Las estructuras analticas deben incluirse si son
relevantes.
76
B5 PRINCIPIO
Sobresalte el principio por el cual la tcnica analtica opera. Un diagrama de flujo
puede ayudar. Esta seccin debe ser escrita de tal forma que con un vistazo al
resumen se pueda entender como funciona el mtodo. Incluya una explicacin de
los principios de los clculos. Cuando sea apropiado clarificar el trabajo del
mtodo o los clculos, incluya detalles relevantes de cualquier reaccin qumica
relevante (por ejemplo, esto puede ser importante cuando una derivacin est
involucrada o en una titulacin)
e.g. La concentracin proviene de una curva de calibracin de 6 puntos
mediante, la lectura de la concentracin correspondiente a la absorbancia de las
muestra, la correccin con el valor del blanco y la multiplicacin por el factor de
concentracin.
B6 REACTIVOS Y MATERIALES
Liste todos los reactivos, materiales, blancos, muestras de control de calidad,
patrones y materiales de referencia certificados requeridos para el proceso
analtico, enumerados para una referencia posterior. Liste:
Detalles de cualquier material peligroso, incluyendo instrucciones para su
depsito;
Grado analtico;
La necesidad de calibracin y materiales de control de calidad provenientes de
lotes independientes;
Detalles en la preparacin, incluyendo la necesidad de prepararse
anticipadamente.
Requisitos de contencin y almacenamiento
Vida en almacn de un material puro y de reactivos preparados;
Concentracin requerida, notaciones sobre p/v, p/p, o v/v
Requisitos de etiquetado:
Disposicin de residuos peligrosos.
B7 APARATOS Y EQUIPO
Describa el equipo individual y como estn conectados con suficiente detalle para
evitar instalaciones dudosas. Liste los requisitos mnimos de desempeo y
verificacin, las referencias cruzada para la seccin de calibracin y cualesquiera
manuales relevantes del instrumento. Numrelos para una referencia posterior.
Para uso de vidrio incluya el grado cuando sea aplicable (tenga en mente que el
uso de un grado en particular puede requerir justificacin y una prueba de
cumplimiento puede ser requerida). Incluya los requisitos ambientales (campanas
de extraccin etc.).
Los diagramas simples y de flujo pueden ayudar a que sea esto ms claro.
77
B8 MUESTREO Y MUESTRAS
Esta seccin no pretende incluir la seleccin de muestras, las cuales
probablemente se describirn por separado en un plan de muestras.
Incluya suficiente detalle para describir como se recibe la porcin de prueba con la
muestra por el laboratorio. Incluya los detalles del almacenamiento, las
condiciones y los detalles de depsito.
Esta etapa es particularmente complicada por lo que puede justificarse una
seccin separada del mtodo.
B9 CALIBRACIN
Identifique las partes crticas del proceso analtico. stas tendrn que controlarse
con operaciones cuidadosas y calibraciones. Las referencias cruzadas a las
secciones relevantes anteriores.
Incluya el equipo de calibracin- Qu necesita ser calibrado?, Cmo?, Con
qu?, Cada cuanto tiempo?. Considere la trazabilidad apropiada para los
calibrantes.
B10 CONTROL DE CALIDAD
Explique que forma de control de calidad consider, la frecuencia de las revisiones
del control de calidad durante el anlisis de los lotes, criterio de aceptacin y
rechazo, acciones a tomar en el caso de un rechazo. Las referencias cruzadas a
las secciones relevantes anteriores.
B11 CALIBRACIN
Describa el procedimiento analtico, las referencias cruzadas de las secciones
previas incluyendo el nmero de reactivos, aparatos e instrumentacin. Cuando
los parmetros son expresados (tiempo, temperatura) que sean crticos al sistema,
mencione tambin la referencia cruzada de la parte relevante de la seccin de
calibracin. Indique en que parte del procedimiento analtico del control de calidad
deben desempearse los procedimientos de control de calidad y procedimientos
de calibracin.
B12. CLCULOS
Exponer las frmulas para calcular los resultados asegurndose de que todos los
trminos estn claramente identificados y derivados. Indique los requisitos de
revisin y de referencia cruzada para el control de calidad.
78
B13 REPORTE DE PROCEDIMIENTOS INCLUYENDO LA EXPRESIN DE LOS RESULTADOS
Indique como se deben reportar los resultados, incluyendo cifras decimales,
unidades finales, la incertidumbre, el intervalo de confianza, etc.
B14 REFERENCIAS NORMATIVAS
Cualquier referencia que de un respaldo fundamental al mtodo. Utilice el formato
CHEMABS.
B15 (APNDICE EN) VALIDACIN DEL MTODO
Dependiendo del volumen de los datos que apoyen la validacin, ser apropiado
listarla o proporcionar la referencia en un archivo por separado. Por ejemplo: Para
un intervalo lineal como se establece en la seccin 3 alcances debern haber
datos antecedentes, ya sea en este apndice o en un documento por separado
que mostraran como se obtuvo este intervalo.
B16. (APNDICE EN) INCERTIDUMBRE DE LA MEDICIN
Las fuentes principales de incertidumbre relacionadas al mtodo debern
identificarse y los valores asignados listados. Aquellas contribuciones que no se
usaron en los clculos finales porque se consideraron insignificantes debern ser
mencionadas. La incertidumbre total se deber listar junto con la explicacin de
cmo fue obtenida. Un tratamiento ms detallado deber estar en un documento
de referencia cruzada.
79
ANEXO C. GRUPO DE TRABAJO DE EURACHEM
Este documento se ha realizado por el grupo de trabajo de EURACHEM de un borrador original
producido por LGC. Los miembros del grupo EURACHEM son:
Prof P de Bievre IRMM, Blgica
Dr D Bttger Hoechst AG, Alemania
Dr C Eastwood Zeneca Specialties, UK
Prof J Hlavay University of Veszprem, Hungra
Mr M Holmgren SP, Suecia (Eurolab Secretariat)
Dr W Horwitz Food and Drug Administration, USA
Dr M Lauwaars AOAC International, The Netherlands
Dr B Lundgren SP, Suecia
Prof L Massart Vrije Universiteit Brussel, Blgica
Prof J Miller University of Loughborough, UK
Dr J Morkowski EMPA, Suiza
Dr B te Nijenhuis Working Party on Analytical Chemistry (Secretary), The Netherlands
Ms B Nyeland National Environment Research Institute, Dinamarca
Dr R Philipp BAM, Alemania
Dr P Radvila EMPA St Gallen, Suiza
Prof J Smeyers-Verbeke Vrije Universiteit Brussel, Blgica
Dr R Stephany RIVM, The Netherlands
Dr M Suchanek Prague Institute of Chemical Technology, Repblica Checa
Ms C Vandervoorst Dr L Willems Instituut vzv, Blgica
Dr H Verplaetse Ministry of Economic Affairs - Central Laboratory, Blgica
Ms H Wallien VTT, Finlandia
Dr M Walsh The State Laboratory, Irlanda
Prof W Wegscheider Leoben University of Mining & Metallurgy, Austria
Dr D Westwood Environment Agency, UK
Mr H J van de Wiel RIVM, The Netherlands

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es el valor de t de Student de dos colas para = a una

es el valor de t de Student de dos colas para = a una

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