UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS

FACULDADE DE ENGENHARIA-FAEN



Iracema Siqueira
Lucas Dourisboure Neto
Nailene de Freitas Ortega



DETERMINAO DA CONSTANTE DE DISSOCIAO DE UM
AMINOCIDO


Relatrio apresentado
disciplina de Bioqumica de
Alimentos, solicitado pelo
Prof. Dr. Gustavo Graciano
Fonseca no curso de
graduao em Engenharia de
Alimentos.



DOURADOS-MS
2014
1. INTRODUO
As protenas so sintetizadas a partir de 20 aminocidos diferentes,
que possuem em comum a presena de um grupo amino (-NH2), um grupo
carboxla (-COOH), um tomo de hidrognio (H) e um radical R diferenciado
(cadeia lateral), ligados a um tomo de carbono (carbono alfa, quiral ou
opticamente ativo). Apenas dois aminocidos no se encaixam nesta definio,
a Glicina que possui como radical o tomo de hidrognio e a Prolina que
contm o grupo imino (-NH) em substituio ao grupo amino (-NH
2
),
estruturalmente considerada como um iminocido, mas se inclui entre os
aminocidos por apresentar propriedades semelhantes a estes (ROMAN J. A.,
2009).
Existem dois ismeros opticamente ativos nos aminocidos com
carbono assimtrico, D e L, que so imagens especulares um do outro, mas
todas as protenas encontradas nos seres vivos so formadas por L-
aminocidos (MARZZOCO e TORRES, 2007).
A carga eltrica dos aminocidos varia de acordo com o pH, tendo pelo
menos dois grupos ionizveis, que podem existir na forma protonada (-COOH, -
NH
3
+
) ou desprotonada (-COO
-
, -NH
2
), dependendo do pH do meio em que se
encontram. Em solues muito cidas, os dois grupos apresentam-se
protonados, em pH muito alcalino, ambos apresentam-se desprotonados. Em
funo do pH do meio, reflete-se na curva de titulao do aminocido. Quando
o aminocido tem apenas dois grupos ionizveis, como por exemplo, a alanina,
a sua curva de titulao, assemelha-se composio das curvas de titulao
de dois cidos fracos com valores de pK
a
muito diferentes (MARZZOCO e
TORRES, 2007).
Cada aminocido apresenta-se neutro em um valor de pH, sendo que a
carga eltrica total da molcula de um aminocido resulta da soma algbrica
das cargas apresentadas pelos seus grupos ionizveis, que por sua vez,
dependem dos valores dos seus pK
a
e do pH do meio. Ou seja, o grupo
carboxila pode apresentar-se sem carga ou com carga negativa e o grupo
amino neutro ou tem carga positiva. J a curva de titulao de um
aminocido monoamnico e monocarboxlico, iniciado em pH muito cido,
abaixo do pK
a
do grupo carboxila. Assim, com grande excesso de prtons,
tanto a carboxila quanto o grupo amino esto protonados, o que confere
maioria das molculas do aminocido uma carga lquida positiva. medida que
se adiciona lcali, o valor de pH sobe gradativamente, aumentando a
dissociao do grupo carboxila e, consequentemente, a concentrao da forma
com uma carga negativa e uma positiva, ou seja, em sua forma eletricamente
neutra. Ou seja, a forma eletricamente neutra s poder existir acima do pK
a
do
grupo carboxila e abaixo do pK
a
do grupo amino, sendo mais abundante dos
dois valores de pK
a
(MARZZOCO e TORRES, 2007).
Normalmente, o pH onde predomina a forma eletricamente neutra a
mdia aritmtica de dois valores de pK
a
. Este valor de pH chamado de ponto
isoeltrico (pI) do aminocido. No pH equivalente ao pI, os aminocidos
comportam-se como molculas neutras, logo, no migram quando submetidos
a um campo eltrico. Os valores de pka1 e pka2 a serem considerados no
clculo do pI dependem do aminocido considerado. E para aqueles que no
possuem grupamentos ionizveis na cadeia lateral, utilizam-se os valores de
pK
a
dos grupos amino e carboxila para aminocidos com trs grupos
ionizveis, usam-se os valores de pK
a
dos grupos com o mesmo sinal de carga
(MARZZOCO e TORRES, 2007).
De forma geral, a titulao de um aminocido consiste na remoo
gradual de prtons atravs da adio de uma base (como NaOH) e a curva de
titulao corresponde ao grfico dos valores de pH da soluo em funo do
volume de base adicionado. Essa curva revela os valores de pK
a
dos grupos
ionizveis do aminocido. medida que a base adicionada, a curva passa a
apresentar estgios distintos, que dependem da concentrao de cada uma
das formas doadoras de prtons (INSTITUTO DE BIOLOGIA UFF, 2008).

2. OBJETIVOS

O objetivo do experimento foi realizar a titulao dos aminocidos, a
metionina, a fenilanina e a L-valina, determinando a constante de dissociao
do cido (pka) para o grupo carboxila (pk
a1
) e para o grupo amino (pK
a2
).

3. MATERIAIS E MTODOS

3.1- Materiais
gua destilada
Bqueres
Buretas de 50 ml
Erlenmeyers
Fenilalanina
L-valina
Metionina
Medidor de pH
Soluo de HCl 0,1 M
Soluo de NaOH 0,1 M
3.2- Mtodos
3.2.1- Determinao de pK
a1
da Metionina, Fenilalanina e L-Valina
Em um Erlenmeyer foram adicionados 25 ml do aminocido metionina e
10 ml de gua destilada. Logo aps iniciou-se a titulao com HCl 0,1 M de
acordo com a tabela 1, sendo anotado o pH aps a adio dos volumes do
cido. Aps a titulao foi elaborado um grfico de pH versus volume (ml) de
HCl adicionados para determinar o valor de pka1.
Todo o processo foi feito tambm para os aminocidos fenilalanina e L-
Valina.

3.2.2- Determinao de pK
a2
da Metionina, Fenilalanina e L-Valina
Em um Erlenmeyer foram adicionados 25 mL de metionina e 10 mL de
gua destilada. Logo aps iniciou-se a titulao com NaOH 0,1 M de acordo
com a tabela 2, sendo anotados os valores do pH aps cada adio da base.
Aps a titulao foi elaborado um grfico de pH versus volume (ml) de NaOH
adicionados para determinar o valor de pK
a2
.
Todo o processo foi feito tambm para os aminocidos Fenilalanina e L-
Valina.

4. RESULTADOS E DISCUSSES

4.1- Determinao de pK
a1
da Metionina, Fenilalanina e L-Valina.

Tabela 1- Dados obtidos a partir da titulao dos aminocidos com HCl.
Vol. HCL
0,1M (ml)
pH
Fenilalanina
pH
L-Valina
pH
Metionina
1 0 5,53 6,25 5,31
2 0,5 3,41 4,47 3,43
3 1 3,11 3,92 3,12
4 2 2,90 3,53 2,75
5 4 2,61 3,24 2,39
6 6 2,48 3,06 2,18
7 8 2,42 2,96 1,99
8 9 2,36 2,87 1,93
9 10 2,31 2,83 1,88
10 11 2,17 2,78 1,81
11 12 2,15 2,77 1,76
12 14 2,07 2,75 1,65
13 16 2,06 2,71 1,56
14 18 2,05 2,64 1,48
15 20 1,97 2,59 1,40
16 25 1,95 2,55 1,23

Analisando-se os dados obtidos experimentalmente e que esto
demonstrados na Tabela 1, toma-se como o pK
1
para o grupo carboxila de
cada aminocido o valor onde o pH comea a se tornar aproximadamente
constante, para a titulao com HCl. A adio de HCl ao meio promove a
protonao (adio de H) do aminocido, pois ao adicionar o cido, acontece a
reduo do pH e maior concentrao de ons H
+
em soluo e
consequentemente a prevalncia da forma positivamente carregada.
Segundo a literatura (MARZZOCO e TORRES, 2007), o valor do pK
1
(-
COO
-
) para o aminocido Fenilalanina 2,20, para L-Valina 2,29 e para
Metionina 2,13. Com base no experimento obtivemos pK
1
para a Fenilalanina
de 1,95, para L-Valina de 2,55 e para Metionina de 1,23. Comparando ento
esses valores observamos uma variao razovel que pode ser explicada
pelos erros de medida comum em experimentos laboratoriais.


4.2- Determinao de pK
a2
da Metionina, Fenilalanina e L-Valina.

Tabela 2- Dados obtidos a partir da titulao dos aminocidos com NaOH.
Vol. NaOH
0,1M (ml)
pH
Fenilalanina
pH
L-Valina
pH
Metionina
1 0 5,17 6,04 5,04
2 0,5 7,19 7,74 6,05
3 1 7,59 8,08 7,00
4 2 8,04 8,37 7,41
5 4 8,45 8,74 7,85
6 6 8,72 8,95 8,14
7 8 8,88 9,08 8,34
8 9 8,96 9,14 8,43
9 10 9,07 9,20 8,54
10 11 9,18 9,24 8,60
11 12 9,26 9,28 8,66
12 14 9,45 9,35 8,78
13 16 9,67 9,40 8,88
14 18 9,97 9,47 9,00
15 20 10,42 9,52 9,09
16 25 11,73 9,64 9,32

Analisando-se os dados obtidos experimentalmente e expressos na
Tabela 2, toma-se como o pK
2
para o grupo amino da glicina o valor onde o pH
torna-se aproximadamente constante, com a adio de NaOH ao meio h a
desprotonao (retirada de H) do aminocido. Pois ao adicionar a base no
aminocido, ocorre o aumento do pH e menor concentrao de ons H
+
em
soluo e consequentemente a prevalncia da forma negativamente carregada.
Segundo a literatura (MARZZOCO e TORRES, 2007), o valor do pK
2
(-
NH
3
+
) para o aminocido Fenilalanina 9,31, para L-Valina 9,74 e para
Metionina 9,28. Com base no experimento obtivemos Pk
2
para a Fenilalanina
de 11,73, para L-Valina de 9,64 e para Metionina de 9,32. Comparando ento
esses valores observamos uma variao razovel para L-Valina e Metionina
que pode ser explicada pelos erros de medida comum em experimentos
laboratoriais. J para o aminocido Fenilalanina houve uma variao maior que
a esperada o que pode ter sido causada por algum erro do analisador.
O ponto isoeltrico (PI) dado por: (pK
a1
+ pK
a2
)
2
Portanto, a partir dos dados avaliados tem-se:
Para Fenilalanina: (1,95+11,73) = 6,84
2

Para L-Valina: (2,55+9,64) = 6,09
2
Para Metionina: (1,23+9,32) = 5,27
2
Obteve-se ento o ponto isoeltrico de cada um dos aminocidos, que
o ponto eletricamente neutro do aminocido.
Abaixo tem a curva de pH obtida atravs dos dados experimentais para
cada aminocido:



Figura 1- Curva de pH versus volume de Fenilalanina adicionada de HCl e NaOH.



-2
0
2
4
6
8
10
12
14
-30 -20 -10 0 10 20 30
FENILALANINA
pH
Linear (pH)

Figura 2- Curva de pH versus volume de L-Valina adicionada de HCl e NaOH.



Figura 3- Curva de pH versus volume de Metionina adicionada de HCl e NaOH.

Observa-se claramente nas figuras 1, 2 e 3 que quanto maior o volume
de cido (HCl) adicionado, o valor de pH diminui na mesma proporo,
0
2
4
6
8
10
12
14
-30 -20 -10 0 10 20 30
L-VALINA
pH
Linear (pH)
deixando a soluo com os aminocidos cada vez mais cida. J quando h a
adio de base (NaOH) o valor de pH aumenta e a soluo se torna cada vez
mais bsica. Portanto a presena dos grupos amina e carboxila nos
aminocidos os fazem ter um comportamento tanto de cido como de base,
como o caso da Fenilalanina, L-Valina e Metionina.

5. CONCLUSO

Com base no experimento realizado na aula prtica pode-se concluir
que a titulao dos aminocidos ilustra o efeito do pH sobre suas estruturas,
assim pode-se observar o ponto isoeltrico que encontrado quando o pH
em que a molcula no apresenta carga eltrica lquida. Outra caracterstica
importante dos aminocidos a protonao e desprotonao da molcula
quando adicionado de um cido ou de uma base, de onde se pode obter os
valores de pK
a1
do grupo carboxila e pK
a2
do grupo amino.



6. REFERNCIA BIBLIOGRFICA

INSTITUTO DE BIOLOGIA UFF; Titulao de aminocidos e estudo do efeito-
tampo, 2008.
Disponvel em:
< http://www.uff.br/gcm/GCM/graduacao_arquivos/Apostila.pdf>
Acesso em: 18/08/2014 s 19h00min.

MARZZOCO,A.; TORRES,B.B.; Bioqumica Bsica. 3ed. Ed. Guanabara
Koogan, 2007.

ROMAN, J. A.; Biomolculas Protenas, 2009.
Disponvel em:
<http://www.agronomiaufs.com.br/index.php/material-de-aula/category/18-
205012-bioquimica-para-agropecuaria?download=106%3Aenzimas>
Acesso em: 18/08/2014 s 17h30min.