LIGAMIENTO

Y
MAPAS DE
RECOMBINACIN
1
Descubrimiento del ligamiento:
genes ligados vs independientes
Meiosis, sobrecruzamiento y recombinacin:
variacin gentica y mapeo gentico.
Mapas genticos o mapas de ligamiento:
- frecuencia de recombinacin y distancia
de mapa
- cruzamiento de dos y tres puntos
- aditividad, interferencia y coeficiente de
coincidencia.
Mapas de cromosomas humanos
2
Fenotipo y genotipo
Descendientes
observados
Descendientes
esperados de la
proporcin 9:3:3:1
Prpura/alargado (P- L-)
Prpura/redondo (P- ll)
Rojo/alargado (pp L-)
Rojo/redondo (pp ll)
4831
390
393
1338
3991
1303
1303
435
TOTAL: 6952 6952
Bateson y R.C. Punnet, (1905)
Guisante Color y forma de semilla
P- Prpura, p- rojo
L- alargado, l- redondo
No tena explicacin por modificaciones de las leyes mendelianas
3
T. H. Morgan (Nobel 1934): ligamiento al X en Drosophila -1909-
Sutton y Boveri, 1902
Teora cromosmica de la herencia
Bateson y Punnet, guisante
Herencia
ligada al sexo
4
Mutantes de Drosophila melanogaster
+: salvaje Cy: Curly
ap: aptera vg: vestigial
sd: scalloped
dp: dumpy
D: Dichaete c: curved
+: salvaje w: white
sepia Bar
Estudio del ligamiento con
mutantes
5
A
a
a
B
B
b
b
A b
a B
A B
a b
1/4
1/4
1/4
1/4
SEGREGACIN INDEPENDIENTE DE DOS LOCI EN
DIFERENTES CROMOSOMAS
El 50% de los gametos presentan nuevas combinaciones genotpicas
(A b) y (a B) diferentes de las parentales (AB) y (ab)
Cromosomas en la meiosis Productos meiticos
1 2
A
6
Ligamiento: Asociacin de genes en el mismo
cromosoma formando grupos de ligamientos
Ligamiento total
A
a
a
B
b
b
a
a
b
b
Genotipo F
1


AB / ab
Gametos (100% gametos parentales)
50 % AB
50 % ab
A
B
A
A
B
B
7
Recombinacin:
Recombinacin intercromosmica: genes (loci) en
diferentes cromosomas (leyes de Mendel)










Recombinacin intracromosmica: genes situados
en el mismo cromosoma ---> Entrecruzamiento
A
A
a
a
B
B
b
b
A
A
B
B
A
A
b
b
a
a
B
a
a
b
b
B
Genotipos F
1

A B
-- --
a b
AB
Ab
aB
ab
50%
recom-
binan-
tes
Proporcin 1:1:1:1
8
Entrecruzamiento (Crossover):El intercambio de cromtidas
no hermanas entre cromosomas homlogos durante la
meiosis por un proceso de rotura y reunin del DNA
A
A
a
a
B
B
b
b
A
A
a
a
B
B
b
b
Cromosomas en la meiosis Productos meiticos
Meiosis sin
entrecruza
miento
entre los
genes
A
A
a
a
B
B
b
b
A
A
a
a
B
B
b
b
Recombi-
nantes
Meiosis con
entrecruza
miento
entre los
genes
1
2

3
4
LOCI PRESENTES EN EL MISMO CROMOSOMA
9
Meiosis:
sobrecruzamiento y recombinacin
10
Entrecruzamiento
Janssens (1909) Hiptesis de la quiasmatipia
Entrecruzamientos (chiasmata) entre cromosomas homollogos
en meiosis
Meiosis en
saltamontes
Quiasmas cromosmicos
en diplotene
11
Evidencias de la base fsica de la recombinacin
B. McClintock (Nobel 1983)
y H. Creighton, 1931:
recombinacin intracromosmica
es resultado del intercambio fsico
entre cromosomas homlogos.
Cromosoma
9 del maz
C: granos con color;
c: granos sin color
Wx: granos amilceos;
wx: granos cerosos

12
13
Cruzamiento prueba:
AA BB aa bb
A B a b
Aa Bb aa bb
Genotipos P
Gametos P
F
1

Cruzamiento
prueba
ab
AB
Ab
aB
ab
Aa Bb
Aa bb
aa Bb
aa bb
Gametos
Genotipos
A- B-
A- bb
aa B-
aa bb
Fenotipos
X
El cruzamiento prueba permite
inferir las proporciones de los
gametos que se forman en el
doble heterocigoto
14
Genes independientes Genes ligados
recombinacin intercromosmica recombinacin intracromosmica
15
Simbolismo del ligamiento
Notacin de genes:
1. No se conocen las relaciones: AaBb (diheterocigtico)
2. Genes en cromosomas diferentes: A/a B/b
3. Genes en el mismo cromosoma: AB/ab (cis) ;
Ab/aB (trans)
Dihbrido (F2: 9-3-3-1):
sobrecruzamiento
o
entrecruzamiento
X
ligamiento completo
grupos de ligamiento
Tantos como pares de autosomas + X +Y.
Ej: en humanos 22 +1+1 = 24 grupos de ligamiento

16
Notacin para cruzamientos con ligamientos
AA BB x aa bb
A B x a b

A B a b
A B
a b
A a
B b

cis trans
Fase de Acoplamiento Fase de Repulsin
17
cis trans
18
sobrecruzamiento
sin
recombinacin
sobrecruzamiento
y
recombinacin
19
20
Thomas H. Morgan
y su laboratorio de Drosophila
Morgan y el entrecruzamiento
21
y: cuerpo amarillo
w: ojos blancos
m: alas en miniatura

Ligamiento de genes
22
23
Clculo de la frecuencia de Recombinacin
El porcentaje de progenie recombinante que se produce a partir de
un cruzamiento se denomina frecuencia de recombinacin
Frecuencia de Recombinacin= N Prog. Recomb. X 100 %
N Total de Progenie
Ejemplo => Color de torax y pupario en Moscas

10 + 10 x 100 % = 20 %
40 + 40 + 10 + 10
24
FR = recombinantes / total


FR = 50% --> genes independientes (NO ligados)

FR < 50% --> genes ligados (mismo cromosoma)



Prueba del c
2

25
Demostracin 2: caso completo para 1 2 entrecruzamientos
Por qu la frecuencia de recombinacin (FR) entre dos
marcadores no puede superar el 50%?
FR promedio de un doble
entrecruzamiento = 8/16 = 50%
26
Mapas genticos
A. H. Sturtevant ( y C. Bridges)
27
Cartografa Gentica:

La cartografa gentica asigna el lugar cromosmico
de un gen (o locus) y su relacin de distancia con
otros genes (o loci) en un cromosoma dado


A. Sturtevant (1913). La distribucin y el
orden lineal de los genes se pueden
establecer experimentalmente mediante
el anlisis gentico

28
Supuesto:
las frecuencias de entrecruzamiento, y por
tanto la frecuencia de recombinacin,
depende de la distancia entre genes
Unidad de distancia: La unidad de mapa (u.m.) o el
centimorgan (cM) --> La distancia entre genes (loci) en los que
la frecuencia de recombinacin es del 1%
A C B
29
FR y-w: 1,3% FR w-m: 37,2%
1,3
37,2
unidades de mapa gentico
1% recombinantes -> 1 cM 1 um
100 cM = M

-mapa fsico 1 Mb-
MAPA GENTICO
30
Mapa a partir de cruzamientos prueba de
dos puntos (dos loci en el mismo
cromosomas)

Se determina la distancia 2 a 2 entre loci y stas se
suman para estimar la distancia gentica total de un
cromosoma
A B
31
Ejemplo:
Experimento de Morgan
pr = Ojos Prpura
vg = Alas vestigiales
Ambos alelos son recesivos respecto al salvaje

P pr
+
vg
+
X pr

vg
pr
+
vg
+
pr vg

F
1
pr
+
pr X pr

vg
pr vg pr vg

Fenotipos F
2


pr
+
vg
+
1339
pr vg 1195
pr
+
vg 151
pr

vg
+
154
____
2839

Proporcin no 1:1:1:1. Un
test de c
2
es muy
significativo
32
Metodologa

Normalmente heterocigoto X homocigoto recesivo
(cruzamiento prueba) -> AB/ab X ab/ab.
No se observa en la F
2
la proporcin fenotpica 1:1:1:1, y la
proporcin no es predecible a priori porque depende de la
distancia entre los genes estudiados.
Las dos clases mayoritarias corresponden a los gametos no
recombinantes (parentales), y las minoritarias a los
recombinantes (no parentales).
La frecuencia de recombinacin (recombinantes/total X 100)
refleja la distancia gentica entre los dos genes. Una unidad
de mapa o centimorgan (1cM) = 1% de recombinantes.
Se ordenan tres genes cuyas distancias se han medido dos
a dos.

33
Fenotipos F
2


pr
+
vg
+
1339
pr vg 1195
pr
+
vg 151
pr

vg
+
154
____
2839
305
FR = 305/2839 = 0,107 = 10,7 cM
Proporcin no 1:1:1:1. Un test de c
2
es muy significativo
pr vg
10,7 cM
34
Orden de los genes
Se han estudias tres pares de genes
y estas son las distancias entre ellos:

Distancia A-B = 12;
Distancia B-C = 7; y
Distancia A-C = 5


Cul es el orden de los genes? Las distancias deben ser
aditivas y consistentes entre s

Supongamos las tres ordenaciones posibles
35
Orden de los genes
Ordenaciones posibles
Caso 1: Marcador A est en el medio:




Caso 2: Marcador B est en el medio:



Caso 3: Marcador C est en el medio:
A A C
C B
B
7
12 5
A
B
C
A
12
5
C B
7
A
B
C
A
12
5
B C
7
Aditividad
36
Las distancias de mapa no son completamente
aditivas
A B C
FR = x FR = y
A C
FR < x + y
b pr c
19,5 5,9
23,7
25,4
Distancia experimento dos puntos b-c
La mejor estima distancia,
suma (b-pr) + (pr-c)
37
5,5 um
1,56 + 4,06 = 5,62 y no 5,5
imprecisin de los mapas genticos:
las distancias genticas no son aditivas!
La suma de las distancias cortas es una medida ms precisa
que las distancias mayores calculadas directamente
ADITIVIDAD
38
Mapa de Stutervant inclua 5 genes
B C P R M
00 10
30,7 33,7
57,6
y w
Vermellon Mianiature
eyes wing

Rudimentery
wing
Stutervant
Ubicacin en X
Smbolo
moderno
39
Mapa a partir de cruzamientos prueba de tres
puntos (tres loci en el mismo cromosomas)
A B C
Metodologa

Triple heterocigoto X homocigoto recesivo
(cruzamiento prueba) -> ABC/abc X abc/abc
Si hay ligamiento, no se observa en la F
2
la
proporcin fenotpica 1/8 para cada tipo de gameto
Se agrupan las clases recprocas (aquellas
que tienen un fenotipo mutante en el par recproco, como el par de fenotipos
fenotipos ABC-abc Abc-aBC. Las clases recprocas deben ser de
frecuencia parecida
Orden de los genes:
Los fenotipos no recombinantes (parentales) son los ms frecuentes
Los fenotipos menos frecuentes resultan de un doble entrecruzamiento
Al comparar los fenotipos no recombinantes con los doble
entrecruzados, el gen del medio es el que est cambiado
Distancias de mapa: a la distancia entre genes consecutivos debe sumarse
las frecuencias de los dobles entrecruzamientos
40
dobles recombinantes
gametos parentales
41
42
parentales
recombinantes
sencillos y-w
recombinantes
sencillos w-ec
dobles
recombinantes
P
DR
RS I
RS II
43
Ejemplo de cartografa en maz
Criterios para la construccin de mapas (en genes ligados al sexo y
autosmicos: 1). Un padre debe ser heterocigoto para todos los
caracteres en cuestin.
2). Lo genotipos gamticos producidos por los heterocigotos
deben ser aparentes al observar los fenotipos de los
descendientes.
3) Debemos disponer de una muestra de tamao suficiente.
4) Para cumplir el segundo criterio, el otro padre debe ser
homocigoto recesivo para los tres alelos mutantes.
Em Maz => Genes bm (nervadura marrn), v (brote virescente) y pr
(aleurona prpura) ligados en el cromosoma 5
1- Cul es la situacin de alelos correcta
de los alelos de la planta heterocigota?
44
45
1- Identificar las dos clases no recombinantes
(aquellas que ocurren con mayor frecuencia)
2. Cul es el orden correcto de los genes?
Comprobar las tres posibles ordenaciones para determinar
cual de ellas produce los fenotipos de los dobles
recombinantes
3. Cul es la distancia entre cada par de genes
La distancia de mapa entre genes se calcula teniendo en
cuenta todos los sucesos de recombinacin detectables que
se han dado entre ellos. Tanto sencillos como dobles
46
Situaciones allicas posibles
en el parental heterocigota
47
1 P: + v bm / pr + +
2 DR: v + bm / + pr +
clases recprocas
PARENTALES

RECOMBINATES
DOBLES


RECOMBINANTES
SIMPLES

RECOMBINANTES
SIMPLES
48
Distancia v - pr
Los fenotipos v pr + y + + bm resultan del entrecruzamiento
entre v y pr, este entrecruzamiento sencillo explica el 14,5 % de la
descendencia. Aadiendo el porcentaje de dobles recombinantes
(7,8 %), calculamos que la distancia total entre estos dos genes es
de 22,3 um.
Distancia pr - bm
Fenotipos v + + y + pr bm resultan del
entrecruzamiento sencillo entre pr y bm. Explicando el
35,6 %, con la suma de los dobles recombinates (7,8 %),
la distanica entre pr y bm es de 43,4 um.
22,3 43,4
v pr bm
49
50
Los sobrecruzamientos mltiples,
tienen lugar de manera independiente
o se influyen mutuamente (interferencia)?
INTERFERENCIA
Coeficiente de coincidencia: mide si los entrecruzamientos
son independientes entre s.

Si los mltiples entrecruzamientos suceden
independientemente los unos de los otros, la frecuencia de
los dobles entrecruzamientos ser al producto de la
frecuencia de los intercambios sencillos

Coeficiente coincidencia (CC) = (nmero de dobles
entrecruzamientos observados)/(nmero de dobles
entrecruzamientos esperados)
51
Interferencia
Frecuencia esperada Ent. Dobles = 0.123 x 0.064 =
0.79%
Frecuencia observada Ent. Dobles = 0.52%
Frec
obs
/ Fr
esp
= 0.6 (coeficiente de coincidencia)
Interferencia = 1 - C.C. = 0.4
coeficiente de coincidencia

cdc = DRo / DRe

DR: frecuencia o nmero
interferencia

I = 1 - cdc
I = 1 -> interferencia completa I = 0 -> no hay interferencia
I positiva -> DRo < DRe I negativa ! -> DRo > DRe
52
Relacin entre frecuencia de recombinacin y
entrecruzamiento (o distancia real de mapa)

Las distancias de mapa no son completamente aditivas porque los
dobles recombinantes entre dos marcadores A y C no se detectan en
un cruce de dos puntos, subestimndose la distancia A y C
A B C
a b c
A b C
a B c
La relacin entre la distancia real de mapa (nmero de
entrecruzamientos) y la frecuencia de recombinacin entre dos
marcadores o loci no es lineal. Cuanto ms lejos estn los marcadores
peor es la estima
La frecuencia de recombinacin (FR) entre dos marcadores no puede
superar el 50%
FR 0,5
A B C
a b c
53
Demostracin 1: Muchos entrecruzamientos entre a y b
Es igual de probable cualquier combinacin,
++,
ab,
a+,
+b,
es como si segregaran independientemente ambos
loci. Luego, la FR mxima es 50%
Por qu la frecuencia de recombinacin (FR) entre
dos marcadores no puede superar el 50%?
54
Mayor distancia entre loci --> Mayor nmero de
entrecruzamientos

Ms Entrecruzamientos ---> Ms Recombinacin
A mayor frecuencia de recombinacin mayor
la distancia entre loci
El nmero de etrecruzamientos por meiosis y por cromosoma
se puede representar por una distribucin aleatoria de
Poisson, con media
!
) (
i
e
i f
i

) 2 1 ln(
) 1 (
2
1
FR
e FR

55
50
40
30
20
10
FR
observada
(%)
=1 =2 =3 =4
50 100 150 200
Unidades de mapa reales
Nmero medio de entrecruzamientos por meiosis
) 1 (
2
1

e FR
Zona de linealidad
FUNCIN DE MAPA
Es una funcin que permite estimar la distancia de mapa mejor que
empleando solamente la frecuencia de recombinacin, pues corrige
los intercambios (entrecruzamientos) no detectados
56
Mapa gentico de
Drosophila melanogaster
4 grupos de ligamiento + Y
Distancias entre los genes
en um, a partir de un
extremo. Distancias largas
calculadas a partir de la
suma de distancias cortas.

57
Mapa gentico
del tomate
(1952 )
58
Importancia mapas de recombinacin
Describir Ias tasas de recombinacin a lo largo del
genoma.
Predecir la transmisin gentica de un gameto.
Localizacin de genes que influyen el fenotipo (QTLs).
Marco de referencia para cartografa fsica.
Marco de referencia para la cartografa de genes
asociados a enfermedades. 59
Mapas genticos vs fsicos
Mapas genticos
mayormente basados
en recombinacin
meitica
raramente en
recombinacin mittica
modelos derivados de
datos genticos
Mapas fsicos
citolgicos: bandas de
politnicos (insectos),
Bandas G (humanos)
Mapas de clones
(1980s)
Secuencia (1990s*)
*Primera secuencia genmica completada en 1977
60
Mapas genticos (de recombinacin)
versus mapas fsicos
61
Mapas fsicos y genticos
Mapas fsicos: la distancia entre marcadores es
una distancia fsica real, basada en pares de
bases o distancias citolgicas

Baja resolucin: Posicin citolgica en los
cromosomas, o fragmentos delecionados o
translocados de cromosomas. Hibridacin in situ.
FISH
Alta resolucin: Mapas de restriccin, electroforesis
en campo pulsante, secuenciacin DNA
62
Escala de mapas
63
Cromosoma de C. elegans
Mapa gentico (recombinacin)
Mapa fsico (secuencia)
--La tasa de recombinacin vara en las diferentes
regiones
--fsicamente ms juntos en el centro ?
--genes en los brazos de evolucin ms rpida --

50 cM
16.7 Mbp
64
Primera secuencia genmica
Fago fX174
5386 nt ssDNA
(codifica para 11
protenas)
Sanger et al, 1977
Nature, 265: 687

65
Frecuencia de recombinacin por unidad de DNA
Especies Tamao haploide Unidades Tamao de la Distancia media
del genoma de Mapa unidad mapa entrecruzamientos
consecutivos


Fago T4 1.6 x 10
5
pb 800 200 pb 1.0 x 10
4
pb
E. coli 4.2 x 10
6
pb 1750 2400 pb 1.2 x 10
5
pb
Levadura 2.0 x 10
7
pb 4200 5000 pb 2.5 x 10
5
pb

Hongo 2.7 x 10
7
pb 1000 27000 pb 1.3 x 10
6
pb

Nemtodo 8.0 x 10
7
pb 320 250000 pb 1.2 x 10
7
pb

Mosca de la
fruta 1.4 x 10
8
pb 280 500000 pb 2.5 x 10
7
pb
Ratn 3.0 x 10
9
pb 1700 1800000 pb 9.0 x 10
7
pb
Humanos
Varn 3.3 x 10
9
pb 2809 1200000 pb 6.0 x 10
7
pb
Mujer 3.3 x 10
9
pb 4782 700000 pb 3.5 x 10
7
pb
Mapas genticos versus mapas fsicos
66
Contaje de quiasmas en humanos:

49 quiasmas/cl. ~ 2450 cM en varones

(estimas de ligamiento dan un total de distancia de ligamiento hasta 2644 cM varones
y hasta 4481 cM en mujeres)

Para el genoma humano con 3000 Mb tenemos que

1 cM en varones equivale a 1.13 Mb
1 cM en mujeres equivale a 0.67 Mb

1 cM = 0.9 Mb ~ 1 Mb como media

Ms recombinacin en las zonas telomricas que en las
centromricas y en cromosomas pequeos que en grandes


EQUIVALENCIAS DE DISTANCIA DE LIGAMIENTO Y
FSICA EN HUMANOS
67
Problemas:

- Cruzamientos limitados (estudio de genealogas)
- Tamao de la muestra pequeo
- Genoma muy extenso (muchos cromosomas y distancia)
Cartografa gentica en humanos
68
Cartografa gentica en humanos
Estudios familias
Herencia ligada al cromosoma X
marcadores clsicos.
Autosmicos marcadores clsicos

Cartografa marcador-enfermedad
La caza de genes asociados a enfermedades

Cartografa marcador-marcador
Estudios marcadores polimrficos asignados a
colecciones de familias (CEPH).
DNA (Microsatlites, RFLPs, RAPDs,...)



69
En humanos raramente se encuentran familias con dos enfermedades
hereditarias que segreguen.

Por esto se necesitan puntos del genoma independientes denominados
marcadores que se transmitan mendelianamente.
NECESIDAD DE LOS MARCADORES EN MAPAS HUMANOS
1910-60 Grupos sanguneos 20 loci
1960-75 Protenas sricas 30 loci
1970- Alelos HLA 1 haplotipo
1975- RFLPs de DNA 10
5
loci

1985- Minisatlites (VNTRs) 10
4
loci

1989- Microsatlites (STRs) 10
4
loci

70
Xg Protena grupo sanguneo
Ictiosis (un efermedad de la piel)
Albinismo ocular
Angioqueratoma (crecto celular)
Centrmero
Fosfoglicerato-quinasa
Alfa-galactosidasa
Xm
Deutan (ceguera color rojo-verde)
G6PD
Protano (ceguera color rojo-verde)
Hemofila A
Cartografa a travs de la herencia ligada al cromosoma X
(359 loci se han asignado al X)
71
Mtodo de la puntuacin lod
J.B.S. Haldane y C.A. Smith, 1947, mejorado por Newton Morton, 1955
Lod Score ayuda a demostrar el ligamiento, es el logaritmo de las
probabilidades que favorecen el ligamiento, estima la probabilidad
de que una genealoga dada, en la que se estudian dos caracteres
reflejen ligamiento
1 se calcula la probabilidad de que los datos familiares, en relacin a
dos o ms caracteres, concuerden con la transmisin independiente.
Luego se calcula la probabilidad de que datos familiares idnticos
para estos mismos caracteres resulten del ligamiento con una
frecuencia de recombinacin dada.
La razn de estos valores de probabilidad expresa la probabilidad a
favor en contra de un ligamiento
Un anlisis logartmico de probabilidad que establece un valor de 3 o
mas alto se considera prueba suficiente de ligamiento.
Este anlisis represent un avance importante para asignar genes
humanos a cromosomas concretos y para construir mapas preliminares.
72
Log Of Odds (logaritmo de probabilidades)
Probabilidad de obtener un conjunto de resultados en
una familia basndose en la existencia de segregacin
independiente (por un lado) y en la de un grado
concreto de ligamiento, por otro.
Cociente entre las dos probabilidadesLog
Se pueden sumar los resultados de varios
cruzamientos
Se admite ligamiento si Lod=> 3
Se admite no ligamiento si Lod=<-2

DIFICULTADES
- Repulsin a acoplamiento
- Penetrancia incompleta
- Multifactorialidad
73
MAPADO FSICO
El anlisis de ligamiento determina posiciones relativas, pero
no localizaciones cromosmicas precisas. El mapa fsico da
distancia fsica real, basada en pb, posicin citolgica en los
cromosomas, o fragmentos de cromosomas.

Mapado fsico de baja resolucin:

hibridacin in situ cromosmica
hbridos de clulas somticas

Mapado fsico de alta resolucin:

Marcadores moleculares: RFLPs, VNTRs, STRs, RAPDs
STSs, ESTs
Ensamblaje de clones contiguos


74
HIBRIDACIN IN SITU EN CROMOSOMAS
Sonda telomrica en humanos Sonda centromrica en ratn
(Fluorescena sobre Ioduro de propidio) (Autoradiografa, marcaje con H
3
)
Sonda centromrica del cr. 5 humano Pintado cromosmico con diferentes
sondas marcadas.
75
Hibridacin de
clulas somticas
(George Barsky, 1960)
Medio HAT

A: aminopterina (inhibe sntesis
de DNA de novo)
H: hipoxantina
T: timidina


HGFRT: hipoxantina guanina
fosforribosil transferasa
TK: timidilato kinasa ratn: HGFRT+TK-;
humana: HGFRT-TK+ (cromos. 17)
76
Prueba de sintenia: correlacin entre la presencia o
ausencia de cada cromosoma con la presencia o ausencia
de cada producto gnico.
asignacin de genes a cromosomas
A: cromosoma 5 C: ninguno
B: cromosoma 3 D: cromosoma 1
77
78
Cartografa de genes mediante
anlisis moleculares
Marcadores moleculares
Determinan mapas fsicos del genoma
Se pueden rastrear en genealogas multigeneracionales y
asignar su ubicacin concreta en los cromosomas.
Luego los genes se pueden analizar en relacin a estos
marcadores, estableciendo su posicin a lo largo del
cromosoma.

79
CARTOGRAFIADO CON MARCADORES MOLECULARES
y otros tipos

RFLPs: polimorfismos para la longitud de los fragmentos de restriccin

SSLPs: polimorfismos para la longitud de secuencias sencillas.
Incluimos los mini y microsatlites

SNPs: polimorfismos de un nico nucletidos: generacin de microarrays
y chipDNA

STS: sequence tagged site: sitios de secuencia especfica

Por delecin gnica

Hibridacin in situ: pintado de cromosomas (chromosome painting) y
kariotipado espectral (sky)

Secueciacin: el maximo cartografiado de nucletidos posible
80
MARCADORES MOLECULARES Y ANLISIS DE
LIGAMIENTO: RFLPs (Random Fragment Length Polymorphisms)
81
VNTRs o MINISATLITES
(Variable Number of Tandem Repeats)
sospechosos
muestra
82
83
RAPDs: DNA POLIMRFICOS AMPLIFICADOS AL AZAR
(Random Arbitrarily Primed DNA)
84
STRs: REPETICIONES EN TANDEM CORTAS o
MICROSATLITES (Short Tandem Repeats)
85
ENSAMBLAJE DE CONTIGS POR STSs (SITIOS
ETIQUETA DE SECUENCIA) (Sequence Tagged Sites)
86
MAPAS DE ESTs: SITIOS ETIQUETA
QUE SE EXPRESAN (Expression Sequence Tags)
87
MAPAS FSICOS COMO MARCO PARA CLONADO
POSICIONAL
Citolgico


STSs
RFLPs
ESTs
clones en YAC
88
MAPA DEL CROMOSOMA 1
89