Curso: Tcnico em qumica

Disciplina: Bioqumica
Professor: Ivanilton Nery





Carboidratos
Monitoramento da Hidrlise do Amido e Identificao de Acares Redutores.
Relatrio da 1 aula prtica de Bioqumica




Data de realizao da aula prtica: 21 de julho de 2014
Data de entrega do relatrio: 28 de julho de 2014





Introduo
Alm de componentes fundamentais da nutrio animal e humana,
indispensveis para o fornecimento de energia, os carboidratos constituem importantes
matrias-primas para a indstria txtil, do papel e de produtos alimentcios.
Os carboidratos (tambm chamados sacardeos, glicdios, oses, hidratos de
carbono ou acares), so definidos, quimicamente, como poli-hidrxi-cetonas
(cetoses) ou poli-hidrxi-aldedos (aldoses), ou seja, compostos orgnicos com, pelo
menos trs carbonos onde todos os carbonos possuem uma hidroxila, com exceo de
um, que possui a carbonila primria (grupamento aldedico) ou a carbonila secundria
(grupamento cetnico). Sendo formados de tomos de Carbono, Hidrognio e Oxignio
e alguns contm tambm Nitrognio, Flor ou Enxofre.
Os carboidratos subdividem-se em trs grupos:

Os monossacardeos, ou glicdios simples, no so hidrolisveis, isto , no
podem ser divididos em unidades menores. De acordo com o nmero de carbonos da
molcula (3, 4, 5, 6 ou 7), denominam-se respectivamente trioses, tetroses, pentoses,
hexoses ou heptoses. Esses compostos comportam-se como redutores graas presena,
em sua estrutura, de um grupo aldedo (CHO) ou cetona (C=O) livres, casos em que se
denominam, respectivamente, aldoses ou cetoses.

Os oligossacardeos formam-se de unidades de monossacardeos unidas por
meio de ligaes com uma ponte de oxignio, chamadas ligaes glicosdicas. Os
principais oligossacardeos so a maltose, lactose, sacarose, celobiose, gentiobiose
(dissacardeos) e rafinose (trissacardeo). Os dissacardeos que no possuem grupo
carbonlico e cetnico livres, sem sofrerem hidrlise da ligao glicosdica so
denominados de acares no redutores.

Os polissacardeos so polmeros de monossacardeos unidos linearmente por
ligaes glicosdicas ou formando ramificaes. Na maioria dos casos, os
polissacardeos compem-se de vrias molculas de glicose, mas outros
monossacardeos, como a frutose e a galactose, tambm podem formar polmeros. Os
polissacardeos mais importantes e conhecidos so a celulose, o amido e o glicognio.

A anlise desses acares uma atividade rotineira nos laboratrios das
indstrias alimentcias, diversos reativos so utilizados para demonstrar a presena de
grupos redutores, em acares.

O Teste de Fehling um deles. O grupo carbonilo oxidado a carboxilo. O on
metlico reduzido. Os glicdios que contenham um grupo aldedo ou cetona
potencialmente livre existem em soluo aquosa em equilbrio com uma forma enodiol,
que um agente redutor ativo. Em meio ligeiramente alcalino esta forma favorecida e
a sua presena assegura a reduo de ons cobre (II) a cobre (I) com a formao de
hidrxido cuproso que, por aquecimento, se converte em xido cuproso, um composto
insolvel de cor vermelha que precipita. Para manter os ons cobre (II) em soluo em
meio alcalino o reagente de Fehling contm um agente complexante, o on tartarato,
sendo assim esse on age na estabilizao do Cu(OH)
2
.
Materiais e Mtodos
Foram realizadas nesta prtica dois experimentos ao todo. Sendo assim, dividiu-
se em algumas subdivises nesta seo (Materiais e Mtodos) para melhor
esclarecimento do que se deseja ser mostrado. Esta organizao proposta ser composta
de dois subtpicos em Materiais, e mais dois em Mtodos. Totalizando, assim, as
descries dos materiais utilizados para a realizao dos mtodos empregados.
Materiais e Reagentes
Experimento I - Monitoramento da Hidrlise do Amido
Neste primeiro experimento, utilizaram-se os seguintes materiais: vdeo de
relgio, estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio 10 x 150 mm e 15 X 190 mm,
manta de aquecimento, pipetas de 1 ml; basto de vidro; Becker. E utilizou os seguintes
reagentes: soluo de cido Clordrico (HC
(aq)
) com concentrao de 3N, soluo de
Felling A, soluo de Felling B e soluo de Lugol.
Experimento II - Identificao de Acares Redutores
Neste primeiro experimento, utilizaram-se os seguintes materiais: tubos de
ensaio, estante para tubos de ensaio, manta de aquecimento, pipetas de 1 ml; becker. E
utilizou os seguintes reagentes: soluo de Glicose, soluo de Maltose e soluo de
Sacarose, soluo de Felling A, soluo de Felling B.

Mtodos
Experimento I - Monitoramento da Hidrlise do Amido
Pesou-se 0,5 g de amido em vidro de relgio. Dispersou-se o amido em tubo de
15 X 190 mm contendo 15 ml de HCl 3N. Retirou-se uma alquota de 1 ml da
suspenso de amido (tempo zero de hidrlise). Colocou-se a suspenso de amido sob
aquecimento (80C) em banho por 60 minutos, retirando alquotas de 1 ml da suspenso
nos seguintes tempos de hidrlise: 10, 20, 40 e 60 minutos. Homogeneizou-se a
suspenso, com auxlio do basto de vidro, de minuto em minuto durante os primeiros
10 minutos. Para cada alquota de 1 ml retirada (0, 10, 20, 40 e 60 minutos), verteu-se
0,5 ml em 2 tubos de ensaio 10 X 150 mm a fim de realizar o Teste de Fehling e o Teste
de Iodo, da seguinte forma:
- Tubo I (tubo contendo 0,5 ml de gua destilada): Adicionou-se ao 0,5 ml de
suspenso, 1 ml de Fehling A e 1 ml de Fehling B ( As 2 solues de Fehling foram
adicionadas nesta ordem e rapidamente uma seguida da outra). Colocou-se o tubo sob
aquecimento em banho por 5 minutos. Observar a mudana de cor.
- Tubo II: Adicionar ao 0,5 ml de suspenso, 1 gota de Lugol. Observar imediatamente
a mudana de cor.
Experimento II - Identificao de Acares Redutores
Adicionou-se a cada um dos 3 tubos contendo as solues de acares, 1 ml de
Fehling A e 1 ml de Fehling B, colocou-se os tubos sob aquecimento em banho por 5
minutos. Observou se houve mudana de cor.

Resultados e Discusso
Assim como na seo anterior, esta seo tambm ser dividida, visando
facilidade de entendimento. A subdiviso neste caso ocorrer somente para separar os
experimentos, uma vez que os resultados e as discusses devem ser apresentados
juntamente.
Experimento I - Monitoramento da Hidrlise do Amido
Nas alquotas dos tubos de numerao I e II foram adicionados reagentes de
Fehling (A e B) e Lugol, respectivamente, como foi descrito na seo de Mtodos.
Observou-se a formao das coloraes de todas as alquotas, aps permaneceram 5
minutos em banho. Os resultados:
AQUECIMENTO DA SUSPENSO DE AMIDO (HIDRLISE CIDA)
Tempo (min) Tubo I Teste de Fehling Tubo II Teste de Iodo

0
No houve formao de
precipitado

Colorao de azul intenso, quase
negro.

10
Formao de precipitado
vermelho
Colorao azul intenso, quase
negro.

20
Formao de precipitado
vermelho/ sobrenadante azul-
escuro
Colorao escura, com uma leve
tonalidade avermelhada.

40
Formao de precipitado
vermelho em maior
quantidade/ sobrenadante azul
mais claro
Colorao amarelada

60
Formao de mais precipitado
vermelho/ diminuio do
sobrenadante azul claro
Colorao amarelada mais fraca

Tubo I
O amido um homopolisacardeo no-redutor que, quando tratado com cido
quente, ocorrem sucessivas hidrlises at que suas molculas sejam convertidas
totalmente em sua ose fundamental, a glicose. Durante esse processo, so encontrados
como produtos intermedirios dextrinas e oligossacardeos. Para comprovao da
hidrlise cida do amido, utiliza-se como prova a mudana de colorao da soluo
durante o processo, j que a glicose um acar redutor, pois possu uma nica
hidroxila livre.
Com a reao do reagente de Fehling A com o reagente de Fehling B tem-se:
2Cu(OH)
2
+ C
2
H
4
O
8
Cu
2
O + C
5
H
5
(OH)
6
COOH + 2H
2
O
O reagente de Fehling consta de duas solues que devem ser misturadas no
momento do uso: soluo A de colorao azul clara (Sulfato de cobre cristalizado
pentahidratado + gua destilada) + soluo B de colorao transparente (Hidrxido de
Potssio + tartarato duplo de sdio e potssio + gua destilada). Assim, tem-se: soluo
A + soluo B = colorao azul forte.
Atravs da tabela pode-se observar que as alquotas do tubo I que permaneceram
mais tempo em banho formaram um precipitado vermelho. Esse resultado deve-se ao
fato de que, com o passar do tempo, o amido foi hidrolisado formando glicose que, por
sua vez, um acar redutor. A glicose reagiu com o Cu II, presente no reagente de
Fehling A, que com mais os cinco minutos de aquecimento foi reduzido a Cu I,
formando o precipitado vermelho: xido de cobre II.
Tubo II
A reao com iodo utilizada para a pesquisa do amido, que forma um
complexo colorido com o iodo. A amilose d origem a uma colorao negro-azulada,
enquanto a amilopectina origina uma colorao vermelho-violcea. As dextrinas,
dependendo do seu tamanho e complexidade molecular, desenvolvem diferentes
coloraes com o iodo: as dextrinas maiores podem desenvolver cor azul intenso, as de
tamanho intermedirio do colorao avermelhada e as menores desenvolvem colorao
mais clara ou at incolor em presena de iodo. Assim, durante a hidrlise do amido,
teremos uma diminuio gradual da intensidade da cor da soluo frente ao iodo,
indicando o aumento da hidrlise do polissacardeo original.
A tabela acima comprova a progressiva transformao do amido em glicose na
presena de cido clordrico e calor, ou seja, a hidrlise do amido. Este resultado pde
ser observado atravs do reagente lugol que, na presena de amido, torna a soluo
muito escura e, em sua ausncia, uma colorao mais clara, amarelada.
O lugol uma soluo de I
2
(1%) em equilbrio com KI (2%) em gua destilada.
O amido constitudo por dois polissacardeos estruturalmente diferentes: amilose e
amilopectina. A molcula da amilose no apresenta ramificaes e, no espao, assume
conformao helicoidal (forma de hlice). A ligao entre os tomos de carbono das
unidades de glicose so do tipo alfa 1-4. A amilopectina apresenta estrutura ramificada,
sendo que os "ramos" aparecem a cada 24-30 molculas de glicose. A ligao entre as
unidades de glicose tambm do tipo alfa 1-4 na mesma cadeia. Porm, unindo duas
cadeias aparecem ligaes do tipo a 1-6. A colorao observada na reao entre o iodo e
o amido desenvolvida pela ocluso (aprisionamento) do iodo nas cadeias lineares da
amilose. Como a amilopectina no apresenta estrutura helicoidal, devido presena das
ramificaes, a interao com o iodo ser menor, e a colorao menos intensa.
Experimento II - Identificao de Acares Redutores
Acares Teste de Fehling
Glicose Soluo vermelho-tijolo
Sacarose Soluo azul-escura com precipitado vermelho tijolo
Maltose Soluo vermelho tijolo
Os acares redutores (como a frutose, glicose e maltose) possuem grupos
aldedos e cetonas livres na sua estrutura podendo assim sofrer reao de oxidao, j os
acares no redutores (como a sacarose) possuem esses agrupamentos interligados por
uma ligao glicosdica e se tornam redutores a partir do momento em que sofrem
hidrlise cida.
Glicose
A glicose um exemplo caracterstico da estrutura de glicdios mais simples.
Caracteriza-se corretamente pela sua capacidade redutora, que pode ser facilmente
observada atravs da mudana de cor de indicadores de oxirreduo, que so misturas
coradas com a capacidade de apresentarem cores distintas, conforme esto no estado
oxidado.

Molcula de glicose
A soluo inicialmente de colorao azul-escuro foi colocada na chapa
aquecedora e esperado o aquecimento. Com o aumento da temperatura a soluo
adquiriu a cor vermelho tijolo.

O tartarato de sdio e potssio forma um sal com o Cu+2 (azul anil) que sofre posterior reduo a
tartarato e xido cuproso (Cu2O de colorao vermelho tijolo) que precipita e o acar redutor oxidado
formando um sal sdico como produto


Sacarose
Por ser um dissacardeo, a sacarose no possui o poder redutor da glicose. Isso
acontece uma vez que os grupos funcionais encontrados na molcula esto ocupados na
ligao glicosdica, como mostrado na figura a seguir.



Molcula de sacarose

A ligao glicosdica pode ser hidrolisada, mas muito estvel: uma soluo
aquosa de sacarose mantm-se estvel durante vrios anos.
A soluo inicialmente de colorao azul-escuro foi colocada na chapa e
esperado o aquecimento. Com o aumento da temperatura houve a formao do
precipitado vermelho-tijolo, mas a soluo permaneceu azul-escuro.
A pequena quantidade de precipitado formada, portanto, deve-se a provvel
hidrlise da sacarose devido temperatura de aquecimento, quebrando uma pequena
parte das molculas de sacarose em molculas de monossacardeos. O que tornou
possvel a reduo de parte do cobre. A variao da cor da soluo pode ser explicada
pela mudana de nox do cobre da soluo de Fehling. A cor vermelha deve-se a
formao de Cu
2
O.
Maltose
A maltose um dissacardeo resultante da ligao glicosdica entre duas D-
glicoses. A ligao glicosdica da maltose representada por (14), porque ocorre
entre a hidroxila do carbono anomrico (C1) de uma D-glicose com a hidroxila do C4
de outra D-glicose. Dessa forma, a segunda glicose permanece com seu carbono
anomrico (C1) livre que lhe confere a caracterstica de ser um acar redutor.
A colorao apresentada de O resultado positivo para testes com soluo de
Fehling o resultado da hidrolise de um amido pela enzima maltase, resultando duas
molculas de glicose por molcula de maltose, diferentemente da sacarose um acar
redutor, mesmo sendo um dissacardeo.

Molcula de maltose

Concluso

Pode-se concluir a prtica com xito, pois o objetivo proposto pela prtica foi
alcanado, realizando em laboratrio conceitos visto em aula, como hidrlise cida do
amido e o teste de Fehling na visualizao de acares redutores.

Atravs da prtica, comprovou que ao aquecer de uma soluo de um
polissacardeo (na prtica, o amido) em presena de HCl, este pode sofrer hidrlise das
ligaes glicosdicas, chamada de hidrlise cida. Molculas de amido so convertidas
para molculas de glicose, sendo assim quanto mais minutos passados, mais houve a
hidrlise do amido, dando positivo para acar redutor pelo teste de Felling (atravs da
colorao avermelhada, causada pela formao de Cu
2
O ). No teste do Iodo, durante a
hidrlise do amido, teve-se uma diminuio gradual da intensidade da cor da soluo
frente ao iodo, indicando o aumento da hidrlise do polissacardeo original.

No teste para acares redutores, observou-se o que era esperado, a identificao
de acares redutores e no redutores. Para acares redutores o teste apresenta uma
colorao vermelho-tijolo (como ocorreu com a glicose e maltose) e apresentando uma
colorao azul-escura para acares no redutores (como visto com a sacarose) e que
essa diferenciao est relacionada aos seus grupos funcionais disponveis, assegurando
a reduo de ons cobre presentes no reagente de Fehling.

Bibliografia
LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princpios de Bioqumica. 2. ed.
So Paulo: Sarvier, 2000.

SOLOMONS, T.W.G. Qumica Orgnica. LTC, Rio de Janeiro. 1985. V.2

BIOMANIA. Carboidratos:
Disponvel em: < http://www.biomania.com.br/bio/conteudo.asp?cod=1772>.
Data de acesso: Dia 27 de julho de 2014 s 15 horas e 56 minutos.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA.Departamento de
Engenharia Qumica. Disciplina de Bioqumica. Glcideos. Disponvel em: <http
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_grad2005_2/constituint
es/links/glicidios.htm>
Data de acesso: Dia 27 de julho de 2014 s 12 horas e 13 minutos.

TCNICO LISBOA. TESTES PARA A IDENTIFICAO DE GLCIDOS.
Disponvel em:
<https://fenix.tecnico.ulisboa.pt/downloadFile/3779571247465/TESTES>
Data de acesso: Dia 27 de julho de 2014 s 13 horas e 01 minutos.