Miguel Angel Reyes Hernandez PDF

UNIVERSIDAD DE COLIMA
MAESTRA EN CIENCIAS; REA: BIOTECNOLOGA

PATOGENICIDAD DE NEMATODOS ENTOMOPATGENOS
(Nematoda: Steinemematidae, Heterorhabditidae) EN LARVAS
Y PUPAS DE MOSCA DE LA FRUTA Anastrepha ludens Loew
(Diptera: Tephritidae)
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRO EN CIENCIAS; REA: BIOTECNOLOGA
PRESENTA
MIGUEL NGEL REYES HERNNDEZ
ASESORES:
DR. JAIME MOLINA OCHOA
DRA. ASTRID EBEN
Tecomn, Col. Mx. Mayo 2003.
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
OFICIO No. 184/2003.
C. MIGUEL ANGEL REYES HERNANDEZ
EGRESADO DE LA MESTRIA EN CIENCIAS
AREA: BIOTECNOLOGA
P RE S E NT E .
Con fundamento en el dictamen emitido por el jurado revisor del colegiado del rea: de
Biotecnologa de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis de Maestra y en virtud de que
efectu las correcciones y acat las sugerencias que le haban indicado los integrantes del mismo,
se le autoriza la impresin de la tesis " PATOGENICIDAD DE NEMATODOS
ENTOMOPATOGENOS (Nematoda: Steinermatidae, Heterorhabditidae) EN LARVAS Y
PUPAS DE LA MOSCA DE LA FRUTA, Anastrepha ludens Loew (Diptera: Tephrtidae) ",
misma que ha sido dirigida por los C.C. DR. Jaime Molina Ochoa, Profesor - Investigador de la
Universidad de Colima y la Dra. Astrid Eben del Instituto de Ecologa, A.C., de Xalapa,
Veracruz.
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para
obtener el grado de Maestro en Ciencias; Area: Biotecnologa y fue revisado en cuanto a forma
y contenido por los C.C. Dra. Maril Lpez Lavin, M.C. Arnoldo Michel Rosales y M.C.
Salvador Guzmn Gonzlez, Profesores-Investigadores de la Universidad de Colima.
Sin otro particular de momento, me despido de usted muy cordialmente.

ATENTAMENTE
,
IL DEL 2003.
ING. RODOLFO RENTN DELGADO
C.C.P. EXPEDIENTE ACADEMICO DEL ALUMNO
C.C.P. EXPEDIENTE CORRESPONDIENTE.
C.C.P. ARCHIVO.
RVMD/nlpv** Of. No. 184/2003.
2003, 45 ANIVERSARIO DE LA FACULTAD DE DERECHO "
Km 40 Autopista Colima-Manzanillo Tecomn, Colima, Mxico C.P. 28100
Tel. 01 (313) 322 94 05 Ext. 52251 Fax 52252 fcba@tecoman.ucol.mx
ii
AGRADECIMIENTOS

A la Universidad de Colima, particularmente a la Facultad de Ciencias Biolgicas y
Agropecuarias, por permitirme realizar estudios de postgrado.

A la Universidad Veracruzana, especialmente a la Facultad de Ciencias Agrcolas
zona Xalapa, por considerarme dentro de sus programas de formacin de
recursos humanos.

Al Mtro. Octavio Ochoa Contreras, Director General de Desarrollo Acadmico de la
Universidad Veracruzana, por su empata y apoyo para poder concluir
satisfactoriamente la presente.

Le agradezco al Dr. Martn Aluja S. del Instituto de Ecologa, as como al Ing. Julio
Domnguez G. de Moscafrut, por haberme proporcionado larvas de la mosca
mexicana de la fruta para la realizacin del experimento.

Al Dr. Jaime Molina Ochoa y a la Dra. Astrid Eben, por la colaboracin y direccin
de sta tesis.

Al cuerpo acadmico de revisores, M.C. Salvador Guzmn Gonzlez, Dra. Maril
Lpez Lavn y M.C. Arnoldo Michel Rosales; profesores-investigadores de la
Universidad de Colima, por el anlisis crtico del presente documento y las
sugerencias para mejorarlo.

A mi compaero, Gabriel May Mora, por apoyarme en la ejecucin de la parte
experimental de este estudio, asimismo al Q. A. Jess Lpez Guerrero y a la M. C.
Maricruz Abato Zrate, por sus apoyos en la toma de datos del estudio.

A los Doctores Roberto Lezama Gutirrez y Jorge Toledo y al M.C. Martn
Gonzlez Ramrez por sus sugerencias en el desarrollo experimental del estudio.
iii
DEDICATORIA

A mis padres Sr. Isaac Reyes Hernndez y Sra. Magdalena Hernndez Garca,
por su comprensin e impulso en mi vida profesional.

A mi ta Sra. Antonia Ramrez Garca, porque me ha brindado su apoyo para la
realizacin de mis estudios.

A mis hermanos Joel, Nicols, Gernimo y Humberto porque me han enseando
con su ejemplo.

A mi esposa Adela Lunagmez Rocha, porque siempre he recibido todo su apoyo
en mi desarrollo profesional, para mi itaa bee; porque nuestros caminos se han
extendido con nuestros cantos preferidos.
iv

NDICE

NDICE DE CUADROS.vii
NDICE DE FIGURAS......viii
RESUMEN.x
ABSTRACT..xi

I. INTRODUCCIN..1
II. REVISIN DE LITERATURA5
2.1. Importancia de la fruticultura en Mxico...5
2.2. Generalidades sobre las moscas de la fruta5
2.2.1 Principales gneros de moscas de la fruta6
2.2.2 Especies de moscas de la fruta con importancia
econmica en Mxico..6
2.3. Biologa y ecologa de las moscas de la fruta.7
2.3.1 Ciclo biolgico.7
2.3.2 Descripcin de Anastrepha luden Loew.8
2.3.3 Distribucin de Anastrepha luden Loew.8
2.3.4 Plantas hospederas...8
2.4. Manejo integrado de moscas de la fruta..9
2.4.1 Generalidades9
2.4.2 Mecanismos de deteccin..10
2.4.2.1 Muestreo10
2.4.2.2 Trampeo y uso de atrayentes.10
2.4.3 Control legal..11
2.4.4 Control mecnico- cultural..11
2.4.5 Manipulacin del hbitat.11
2.4.6 Tcnica del insecto estril..12
2.4.7 Control qumico12
2.4.8 Mtodos alternativos...13
v
2.4.9 Control biolgico..13
2.4.10. Control biolgico de moscas de la fruta14
2.4.10.1. Parasitoides14
2.4.10.2 Bacterias entomopatgenas.15
2.4.10.3 Hongos entomopatgenos16
2.5 Nematodos...16
2.5.1 Taxonoma17
2.5.2 Morfologa.20
2.5.3 Ciclo biolgico..21
2.5.4 Bacterias simbiticas..23
2.5.5 Variacin de la fase de las bacterias simbiticas...24
2.5.6 Conducta...25
2.5.7 Rango de hospederos.27
2.5.8 Ecologa.27
2.5.8.1 Distribucin geogrfica27
2.5.8.2 Dispersin de juveniles infectivos..29
2.5.8.3 Factores abiticos29
2.5.8.3.1 Radiacin solar..30
2.5.8.3.2 Temperatura..30
2.5.8.3.3 Humedad32
2.5.8.3.4 Textura33
2.5.8.3.5 pH del suelo...34
2.5.8.3.6 Oxgeno..34
2.5.8.4 Factores biticos..35
2.5.9 Principales ordenes de insectos hospederos a
Steinernema y Heterorhabditis36
2.5.9.1 Lepidoptera36
2.5.9.2 Coleoptera.38
2.5.9.3 Diptera40
vi
III. MATERIALES Y MTODOS..45
3.1 Ubicacin del sitio experimental...45
3.2 Material biolgico45
3.2.1 Mosca mexicana de la fruta Anastrepha luden Loew45
3.2.2 Palomilla mayor de la cera Gallera mellonella (L.)45
3.2.3 Nematodos46
3.2.3.1 Multiplicacin de nematodos..46
3.2.3 2 Cuantificacin de nematodos.48
3.3 Experimento de patogenicidad.49
3.4 Experimento de concentraciones letales.50
3.5 Diseo experimental...51
3.6 Anlisis estadstico.51
IV. RESULTADOS.52
V. DISCUSIN...65
VI. CONCLUSIONES72
VII. PERSPECTIVAS DE INVESTIGACIN.73
VIII BIBLIOGRAFA...74
vii
NDICE DE CUADROS
Cuadro.Pg.

1. Gneros y especies de la familia Steinermatidae18

2. Gneros y especies de la familia Heterorhabditidae...20

3. Especies de bacterias simbiticas asociadas con nematodos
entomopatgenos.........26

4. Porcentaje de mortalidad de larvas y pupas de A. ludens
despus de la exposicin de 2000 juveniles infectivos /ml
de cinco especies de nematodos entomopatgenos en suelo
franco arenoso a 25 C..53

5. Valores de la CL
50
, CL
90
, intervalos de confianza, pendiente,
intercepcin y X
2
de H. indica y Steinernema carpocapsae cepas
All y Mexicana sobre estados inmaduros de A. ludens..........60
viii
NDICE DE FIGURAS

FiguraPg.

1. Aplicacin de cinco especies de nematodos entomopatgenos
a una concentracin de 2000JIs/ml en larvas del tercer estadio
de Anastrepha luden; en los promedios que comparten letras
iguales no hay diferencias significativas54

2. Concentraciones de Heterorhabditis indica en la mortalidad de
mosca de la fruta Anastrepha ludens. Los tratamientos que
comparten letras iguales no son significativamente diferentes
(P < 0.05); de acuerdo a la prueba de Tukey...56

3. Concentraciones de Steinernema carpocapsae cepa All; en la
mortalidad de Anastrepha ludens. Los tratamientos que comparten
letras iguales no son significativamente diferentes (P < 0.05); de
acuerdo a la prueba de Tukey57

4. Concentraciones de Steinernema carpocapsae cepa Mexicana;
en la mortalidad de Anastrepha ludens. Los tratamientos que
comparten letras iguales no son significativamente diferentes
(P<0.05); de acuerdo a la prueba de Tukey.58

5. Mortalidad de Anastrepha ludens expuesta a seis concentraciones
de juveniles infectivos de S. carpocapsae cepas Mexicana y AII y
H. indica. Letras distintas indican diferencias estadsticas utilizando
la prueba de Tukey ( P < 0.05)...59
ix

6. Recta de regresin del valor probit de la mortalidad y el logaritmo
de las dosis de H. indica en Anastrepha ludens..61

de las dosis de Steinernema carpocapsae cepa Mexicana en
Anastrepha ludens....62

de las dosis de Steinernema carpocapsae cepa AII en Anastrepha
Iudens.63

9. Rectas de regresin del valor probit de la mortalidad y el logaritmo
de las dosis de H. indica, Steinernema carpocapsae cepas All y
Mexicana en Anastrepha ludens64
x
PATOGENICIDAD DE NEMATODOS ENTOMOPATGENOS
(Nematoda: Steinernematidae, Heterorhabditidae) EN LARVAS
Y PUPAS DE MOSCA DE LA FRUTA Anastrepha tudens Loew

Resumen

La patogenicidad de nematodos entomopatgenos fue evaluada contra
Anastrepha luden (Loew); en condiciones de laboratorio. Al aplicar 2000 Jls/ml a
larvas del tercer estadio de A. Iudens se encontr que Heterorhabditis indica
present una mortalidad acumulada en larvas y pupas de A. tudens del 71.13 %,
S. carpocapsae cepa Mexicana 53.03%, Steinernema carpocapsae cepa All 51.2
%, H. bacteriophora HP88 47.29 % y Steinernema riobrave con 38.26 %. Las
especies H. indica, S. carpocapsae cepas Mexicana y AII y fueron evaluadas a las
concentraciones de 0, 1000,2000,3000,4000,5000,6000 Jls/ml, presentando H.
indica un CL
50
de 7.23; S. carpocapsae cepa Mexicana 19.31 y S. carpocapsae
cepa All 33.22 nematodos cm
2
/suelo. Este estudio demostr variabilidad en la
patogenicidad de las diferentes especies y razas de nematodos evaluados en
contra de estados inmaduros de A. Iudens; donde H. indica, S. carpocapsae cepas
Mexicana y AII muestran tener potencial para ser usadas como agentes de control
biolgico de la plaga.

Palabras claves: Control biolgico, Steinernema, Heterorhabditis, concentracin
letal, cepas, especies.
xi

PATHOGENICITY OF ENTOMOPATHOGENIC NEMATODOS
(Nematoda: Steinemematidae, Heterorhabditidae) AGAINST LARVAE
AND PUPAE OF FRUIT FLY Anastrepha luden Loew

Abstract

The pathogenicity of entomopathogenic nematode was evaluated against
Anastrepha luden (Loew); under laboratory conditions. Cumulative mortality of
larvae and pupae was about 71.13 % with the concentration of 2000 lJs/ml using
the Heterorhabditis indica . Meanwhile, S. carpocapsae Mexican Steinernema
carpocapsae AH, H. bacteriophora HP88 and Steinernema riobrave caused
53.03,51.2, 42.29, and 38.26 % of cumulative mortality, respectively. H. indica, S.
carpocapsae Mexican AII and strains were evaluated using the following
concentrations: 0,1000,2000,3000,4000,5000, 6000 Jls/ml. Mean lethai
concentrations (LC
50
) for H. indica was 7.23, and S. carpocapsae Mexican and Al
strains viere 19.31 and 33.22 nematodes /cm
2
Variability in the expression of
pathogenicity was demonstrated between species and strains of the
entomopathogenic nematode A. luden larvae and pupae. H. ndica, S.
carpocapsae Mexican and AII strains exhibited potential as biological control
against the thirth instar larvae and pupae of Mexican fruit fly.

Key words: Biological control, Steinernema, Heterorhabditis, lethal concentration,
strains, species.
1
I. INTRODUCCIN

La fruticultura en Mxico ocupa un lugar importante en la produccin
agrcola debido a la rentabilidad de los productos frutcolas, comparada con la
obtenida con los cultivos bsicos, generacin de divisas con los frutos de
exportacin, empleos permanentes y el aporte de elementos nutritivos para una
dieta saludable.

Mxico tiene una superficie de 1. 9 millones de hectreas establecidas con
rboles frutales, que producen anualmente 13 millones de toneladas de productos
frutcolas (Aluja, 1993).

El complejo de las moscas de la fruta es considerado como las principales
plagas de los rboles frutales en el mbito mundial por los daos directos al fruto y
por las limitaciones en su comercializacin, lo que provoca prdidas millonarias
(Aluja, 1994; Purcell, 1998). En Mxico, los principales gneros de mosca de la
fruta de importancia econmica son: Anastrepha, Rhagoletis y Toxotrypana de los
que destaca por su importancia el gnero Anastrepha (Hernndez- Ortiz, 1992).

En Mxico las especies de Anastrepha que son consideradas plagas de
importancia econmica por tener un hospedero frutal cultivado o por su impacto
cuarentnario en frutos de exportacin con alto potencial de comercializacin son:
Anastrepha luden (Loew), Anastrepha obllqua (Macquart), Anastrepha serpentina
(Wiedemann) y Anastrepha striata (Schiner) (Aluja, 1994; Gabayet et al., 1996).

El combate de las moscas de la fruta en Mxico se realiza a travs de
diversos mtodos con una tendencia hacia el manejo integrado de la plaga; entre
los principales mtodos de control de la plaga se encuentran: el legal, mecnico-
cultural, la tcnica del insecto estril, qumico y biolgico (Aluja,1994).
2

El control qumico se realiza a travs de la aplicacin de insecticidas-cebo
para el control de adultos y la aplicacin al suelo de insecticidas para matar larvas
y adultos recin emergidos (Aluja, 1994; Penrose, 1993) sin embargo este tipo de
control tiene serios inconvenientes ya que causan contaminacin en sistemas
acuferos, riesgo para los aplicadores y mortalidad de agentes de control biolgico
incluyendo insectos benficos del suelo (hormigas, escarabajos y depredadores)
(Gary y Mussen, 1984; Messing, 1996).

El control biolgico de insectos plaga ofrece una importante opcin para
evitar los problemas causados por el uso de los insecticidas. El control biolgico
de tefritidos plaga ha sido principalmente a travs de las liberaciones masivas de
parasitoides entre los que destacan Diachasmimorpha longicaudata (Ashmead)
(Hymenptera: Braconidae) y Aceratoneuromyia (=Syntomosphyrum) indica
(Silvestri) (Martnez et al., 1992; Sivinski, 1996).

Entre otros agentes de control biolgico de moscas de la fruta se ha
evaluado a la bacteria Bacillus thuringiensis (Berliner) en mosca del Caribe
Anastrepha suspensa Loew (Robacker et a/.,1996) y mosca del olivo Batrocera
olerae (Gmelin) (Alberola et al., 1999) as como tambin el hongo Metarhizium
anisopliae (Metsch.) en la mosca del mediterrneo C. capitata (Wiedemann)
(Garca et al., 1984) y en mosca Mexicana de la fruta Anastrepha ludens (Lezama-
Gutirrez et al., 2000). Asimismo, los nematodos entomopatgenos han sido
reportados atacando a las moscas de la fruta del Mediterrneo (Lindegren y Vail,
1986).

Diversas especies de Steinernema y Heterorhabditis han mostrado
patogenicidad contra moscas de la fruta, as se tienen reportadas en la mosca del
mediterrneo C. capitata (Poinar y Hislop, 1981; Lindegren y Vail, 1986; Gazit et
al., 2000); mosca del meln, Dacus curcubitae (Coquillet) y mosca oriental de la
fruta, Dacus dorsalis Hendel (Lindegren et al., 1990); mosca de la manzana,
3
Rhagoletis pomonella (Poinar et al.,1977); adems, la mosca de las cerezas,
Rhagoletis indifferens (Patterson y Lacey, 1999); la mosca del Caribe A. suspensa
(Beaver y Calkins, 1984); y la mosca Mexicana de la fruta A. luden Loew (Lezama-
Gutirrez et al., 1996).

Entre las principales cualidades de los nematodos entomopatgenos por los
que se consideran excelentes agentes de control biolgico, se encuentran: el
amplio rango de hospederos, habilidad para buscar activamente al hospedero y
ser inocuos para los mamferos y animales de sangre caliente (Obendorf et al.,
1983, Shapiro y Gaugler, 2002).

Los nematodos entomopatgenos (Nematoda: Steinermatidae y
Heterorhabditidae) se usan comercialmente para el control biolgico de insectos
plaga en una variedad de cultivos, donde se incluyen ctricos, pastos, maz,
arndano y ornamentales (Klein, 1990; Georgis, 1992).

Las distintas especies y razas de Stienernema y Heterorhabditis exhiben
diferencias en potencial infectivo, comportamiento de bsqueda y supervivencia
que impactan en su aplicabilidad en programas de manejo de plagas (Gaugler y
Kaya, 1993; Fazul et al., 2000).

La diferencia en patogenicidad y especificidad ha sido relacionada a su
comportamiento, fisiologa y morfofisiologa (Molyneux, 1985; Lewis et al., 1993;
Ehlers y Gerwien, 1993, Simoes y Rosa, 1996; Doucet et al., 1996; Fazul et al.,
2000), caractersticas morfofisiologicas del insecto (Kondo y Ishibashi, 1987) y a
factores ambientales (Kaya, 1990).

Las larvas del tercer estadio de A. ludens son los individuos inmaduros que
migran del fruto hacia el suelo para pupar, siendo este perodo cuando los
nematodos tienen mayor oportunidad de actuar como agentes de control biolgico
de la plaga.
4

La susceptibilidad de un insecto plaga al ataque de nematodos
entomopatgenos est influenciada por la edad de insecto hospedero, las cepas,
razas y/o gneros y especies de los nematodos. Idealmente, la cepa de nematodo
entomopatgeno ms patgena en contra de una o ms edades del insecto
prueba debe ser seleccionada antes de los ensayos en campo (Fuxa et al., 1988).

Por todo lo anterior, se plante evaluar diferentes especies y razas de
nematodos entomopatgenos en estados inmaduros de Anastrepha luden
primeramente en condiciones de laboratorio, para que posteriormente sean
evaluadas bajo condiciones de campo.

Con relacin a lo anterior, se determin la siguiente hiptesis.

Los nematodos entomopatgenos Heterorhabditis bacteriophora cepa
HP88, Heterorhabdits indica, Steinernema carpocapsae cepas AII, Mexicana y
Steinernema riobrave, tienen patogenicidad diferencial en larvas del tercer estadio
de Anastrepha luden Loew.

Para contrastar la hiptesis se plantearon los siguientes objetivos.

1. Evaluar la patogenicidad de los nematodos entomopatgenos de las
especies de H. bacteriophora cepa HP88, H. indica, S. carpocapsae cepas All y
Mexicana y S. riobrave en contra de larvas del tercer estadio de A. ludens Loew.

2. Determinar las concentraciones letales promedio (CL
50
) de las especies
de nematodos entomopatgenos ms virulentas en contra de larvas del tercer
estadio de A. ludens.
5

II. REVISIN DE LITERATURA

2.1 Importancia de la fruticultura en Mxico.

La produccin frutcola en nuestro pas tiene gran relevancia desde el punto
de vista econmico, ya que se tiene una superficie sembrada de 1,900,000 ha.
Estas producen aproximadamente el 30% del valor total de la produccin agrcola,
entre los frutales que destacan por su importancia sobre la base de la superficie
sembrada se encuentran los ctricos, mango, papaya, manzana, guayaba y
durazno (Aluja y Liedo, 1986). As por ejemplo, la superficie cosechada en el 2001
para el cultivo de naranja fue en 326,580 ha; el limn agrio 87056 ha; pltano
68733 ha y el mango en 162,304 ha (INEGI, 2002).

El mercado de mango fresco en los Estados Unidos de Norteamrica tiene
como principal proveedor a Mxico, que abasteci el 83.1 % del total de
importaciones de esta fruta, durante el perodo de 1996 a 2001 (SEPSA, 2002).

2.2 Generalidades sobre las moscas de la fruta.

Las moscas de la fruta son consideradas como el problema ms grave que
afecta a la fruticultura en el mbito mundial, debido a su abundancia y al nmero e
importancia econmica de los hospederos que ataca, en los que causa daos
directos (larvas en frutos) e indirectos (medidas cuarentenarias) lo que ocasiona
prdidas millonarias (Aluja, 1993; Gingrich, 1993).

Las moscas de la fruta se clasifican dentro del Orden Diptera y la Familia
Tephritidae, en la cual se han reportado aproximadamente 4,000 especies,
encontrndose ms de 160 en Mxico (Christenson y Foote, 1960; Aluja, 1993).
6

2.2.1 Principales gneros de moscas de la fruta.

Los gneros de la mosca de la fruta de mayor importancia econmica en el
mbito mundial son: El de Ceratitis Wiedemann, representado por C. capitata
(Wiedemann) conocida como "Mosca del Mediterrneo", que se ha reportado
atacando cerca de 250 especies de hospederos (Christenson y Foote, 1960;
Liquido, 1992). El gnero Batrocera (o Dacus) Hendel, distribuido en frica, partes
de Europa, Asia y Australia. El gnero Toxotrypana Gerstcker, localizado en
Florida, Mxico y Amrica Central (Landoth, 1984; Landoth et al., 1991). El gnero
Rhagoletis Loew el cual se encuentra distribuido en las zonas templadas y
neotropicales (Boller y Prokopy, 1976) y el gnero Anastrepha Schiner que tiene
reportado a la fecha, alrededor de 185 especies, distribuidas en el continente
americano (Hernndez-Ortiz y Aluja, 1993).

2.2.2 Especies de moscas de la fruta con importancia econmica en
Mxico.

En Mxico, Anastrepha es el gnero de moscas de la fruta de mayor
relevancia; pertenece a la Subfamilia Trypetinae (Norrbon y Foote, 1989), el cual
es endmico del Continente Americano donde se extiende, con 185 especies
desde el Sur de los Estados Unidos de Norteamrica (con especies registradas en
el Sur de Texas y Florida) hasta el Norte de Argentina (Norrbon y Foote, 1989;
Hernndez-Ortiz, 1992; Aluja, 1993).

De las especies reportadas para el gnero Anastrepha, siete son
consideradas plagas de importancia agrcola o cuarentenaria, estas especies son:
Anastrepha Iudens (Loew) (plagas en ctricos y mango); Anastrepha obliqua
(Macquart) (plaga en mango y ciruela mexicana); Anastrepha striata (Schiner)
(plaga en guayaba); Anastrepha serpentina (Wiedemann) (plagas en diversas
sapotaceas); Anastrepha fraterculus (Wiedemann) (plagas en guayaba y ctricos),
Anastrepha grandis (Macquart) (plaga en ciertas curcubitaceas); y Anastrepha
7
suspensa (Loew) (plaga en ctricos y guayaba), (Norrbon y Foote, 1989;
Hernndez-Ortiz- 1992; Aluja, 1993).

2.3 Biologa y ecologa de las moscas de la fruta.

Las moscas de la fruta son organismos con metamorfosis completa. La
duracin de cada una de las fases de desarrollo esta en funcin directamente de
las condiciones ecolgicas de cada lugar. Entre los principales factores biticos y
abiticos que afectan los ciclos de vida de los tefritidos se encuentran el alimento,
la temperatura, la humedad, luz, vegetacin nativa, sustrato de pupacin, sustrato
de oviposicin y enemigos naturales (Hernndez-Ortiz y Aluja, 1993).

Las poblaciones de moscas de la fruta se incrementan cuando el nivel de
humedad es ptimo y decrecen en poca seca. Un factor importante que influye
en la dinmica poblacional de la mosca de la fruta es la temperatura, la cual
favorece la generacin de poblaciones altas en verano y bajas en invierno
(Bateman, 1972; Aluja, 1993).

De acuerdo con las caractersticas ecolgicas y fisiolgicas, las moscas de
la fruta se dividen en: a) especies univoltinas, si tienen una sola generacin por
ao, presentando generalmente diapausa invernal b) especies multivoltinas si
presentan varias generaciones a lo largo del ao (Bateman, 1972).

2.3.1 Ciclo biolgico.

El ciclo de vida de las moscas de la fruta comienza cuando una hembra
fecundada inserta su ovipositor en pericarpio de un fruto y deposita una serie de
huevecillos (1 a 10 dependiendo de la especie). Los huevecillos que son
ovipositados se incuban (antes de eclosionar) por un tiempo de 1 a 7 das.
Posteriormente, de cada huevecillo emerge una larva que se alimenta de la pupa
del fruto hasta completar tres estadios, en un tiempo aproximado de 10 das. Al
8
completar el desarrollo, la larva sale del fruto y se entierra en el suelo donde se
transforma en pupa permaneciendo en esta etapa 15 das, hasta que sale como
adulto que iniciar un nuevo ciclo (Christeson y Foote, 1960; Aluja, 1993).

2.3.2 Descripcin de Anastrepha luden (Loew).

Es de tamao medio y de color caf amarillento. Presenta en el trax una
franja delgada y clara que se ensancha hacia la parte posterior, y dos franjas ms
a los lados que llegan hasta la sutura transversal; frecuentemente con una
mancha difusa en la parte media de la sutura escuto-escutelar; pleura y metanoto
caf amarillento y los dos con una franja caf oscuro o negra. Alas con bandas
plidas amarillentas; bandas costal y banda en S tocndose en la vena R4+5 o
poco separadas. Banda en V separada de la banda en S o conectadas de manera
ligera (Aluja, 1993).

2.3.3 Distribucin de Anastrepha luden (Loew).

A. luden se encuentra ampliamente distribuida en la Repblica Mexicana,
reportndose en los Estados de: Aguascalientes, Baja California Sur, Chiapas,
Coahuila, Colima, Distrito Federal, Durango, Guanajuato, Guerrero, Jalisco,
Mxico, Michoacn, Morelos, Nayarit, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, Quertaro,
Quinta Roo, San Luis Potos, Sinaloa, Sonora, Tabasco, Tamaulipas, Tlaxcala,
Veracruz, Yucatn y Zacatecas (Hernndez-Ortiz, 1992).

2.3.4 Plantas hospederas.

Las moscas de la fruta del el gnero Anastrepha han sido clasificados con
base al nmero de plantas que afectan en: a) Polfagas, cuando se alimenta de
plantas de diferentes familias b) Oligfagas cuando inciden con varios gneros de
la misma familia c) Estenfagas, si se alimenta de varias plantas de un solo
gnero d) Monfagas si las especies tienen un solo hospedero (Hernndez-Ortiz y
9
Aluja, 1983).

Las especies de mayor importancia desde el punto de vista econmico son
las polfagas y las estenfagas; por alimentarse de varias especies de plantas de
importancia econmica (Aluja, 1993,).

Generalmente las larvas de las moscas de la fruta se alimentan de la pulpa
de los frutos, no obstante se han reportado ciertas especies que tambin se
alimentan de las semillas o exclusivamente de ests, como A. sagittata (Stone) en
zapote blanco, Casimiroa edulis Llave y Lex., A. cordata Aldrich en lecherilla
Tabernaemontana alba Mill., y A. creba Stone en canela, Quararibea funebris
(Llave) Vischer (Hernndez-Ortiz, 1992). Al respecto se ha sealado la posibilidad
de que otras especies que posee ovipositores largos y extremadamente delgados
como las especies de los grupos Dentata y Daciformisa presenten hbitos
similares. (Norrbon y Kim, 1988).

2.4 Manejo integrado de moscas de la fruta.

2.4.1 Generalidades.

El manejo integrado de las moscas de la fruta, tiene como objetivo el
manejo de las poblaciones de la plaga, mediante la utilizacin de todas las
tcnicas disponibles, con la finalidad de evitar el dao econmico de la plaga y
minimizando los efectos secundarios de su control (Aluja, 1993).

El manejo integrado de la plaga implica la necesidad de un conocimiento
profundo de los factores que intervienen en el problema, tales como son: el
conocimiento de la vegetacin local y biolgica, hbitos del insecto, el
conocimiento de la fenologa de los hospederos cultivados y silvestres, aspectos
sociales, polticos y econmicos, as como la determinacin del momento oportuno
de control en funcin de los niveles de poblacin de la plaga; entre otros (Aluja,
10
1993;).

2.4.2 Mecanismos de deteccin.

El muestreo de frutos y el trampeo constituyen los principales mecanismos
de deteccin de la plaga, permitiendo conocer la presencia de la plaga, su
distribucin y dinmica de la poblacin; que permiten evaluar las medidas de
control determinadas (Aluja, 1993).

2.4.2.1 Muestreo.

Este se realiza a travs de muestreos de frutos, que permiten detectar,
ubicar geogrficamente y monitorear las poblaciones en estado inmaduro de
moscas de la fruta (Aluja, 1993).

2.4.2.2 Trampeo y uso de atrayentes.

El trampeo se establece como una de las principales actividades del
manejo integral de las moscas de la fruta ya que permite el monitoreo y en
ocasiones el control de la plaga (Aluja, 1993), para lo cual se han utilizado
diferentes diseos y colores de trampas como son: Jackson, Steiner, Nadel,
Harris, Boller, Tablero y McPhail (Steyskal, 1977; Villeda et al., 1988; Sivinski,
1990; Robacker, 1990; Aluja, 1993; Malo, 1994). De las cuales la trampa McPhail
es la que mejores resultados ha demostrado para el monitoreo y/o control de la
plaga (Aluja, 1993).

El atrayente utilizado para cebar las trampas McPhail es el de tipo
alimenticio a partir de protena hidrolizada de maz, semilla de algodn y levadura
de cerveza (Beroza et al., 1960; Aluja, 1993; Epsky et al., 1993) aunque tambin
pueden utilizarse mezclas de melaza, juego de pia y protena hidrolizada (Aluja,
1994).
11

2.4.3 Control legal.

El control legal constituye una parte fundamental en el manejo integrado de
plagas, debido a que sus acciones tienen un efecto importante en la dispersin,
control y erradicacin de las plagas. Respecto al control legal de moscas de la
fruta esta se realiza a travs de cuarentenas, permisos para movilizaciones de
fruta, certificados de origen, constancias tcnicas de la ejecucin de las medidas
de control entre otras; disposiciones todas ellas, emitidas de la Ley de Sanidad
Fitopecuaria de los Estados Unidos Mexicanos decretada el 13 de Diciembre de
1974 y el reglamento de Ley de Sandidad Fitopecuaria de los Estados Unidos
Mexicanos en materia de Sanidad Vegetal, emitido el 18 de Enero de 1980 (Aluja,
1993).

2.4.4 Control mecnico-cultural.

Las prcticas culturales son una importante estrategia para el control de
plagas e insectos (Djerassi et al., 1974). De acuerdo con Aluja (1993) el control
cultural de moscas de la fruta puede llegar a controlar hasta en 60 y 80 % las
poblaciones de la plaga. Dentro de las principales prcticas culturales para el
control de la plaga esta, la recoleccin y destruccin de la fruta cada (Aluja, 1993,
Toledo, 1993), control de maleza, para evitar que las moscas recin emergidas
encuentren donde protegerse de los depredadores e inclemencias del clima,
rastreo del suelo para colocar en la superficie las pupas, as como podas que
permitan un desarrollo adecuado del rbol y frutos evitando un excesivo follaje que
sirvan de refugio para las moscas (Aluja, 1993).

2.4.5 Manipulacin del hbitat.

La manipulacin del hbitat como estrategia del control de moscas de la
fruta fue propuesta por Aluja y Liedo (1986). Como ejemplo de esta tcnica se
tiene que la utilizacin como cultivo trampa de rboles de ciruela mexicana,
12
Spondias purpurea que permite inhibir el ataque de Anastrepha obliqua en el
cultivo de Mangifera indica (Aluja y Birke, 1993).

En trabajos recientes en el cultivo de papaya se encontr que el esquema
del cultivo trampa en combinacin con el trampeo perifrico, tienen gran potencial
para el control de la mosca de la fruta de papaya, Toxotrypana curvicauda (Aluja
et aI., 1997a; Aluja et al., 1997b).

2.4.6 Tcnica del insecto estril.

Fue inicialmente propuesta por Knipling (1955), para el control de la mosca
de la fruta consiste en liberaciones masivas de la plaga, la cual ha sido
previamente esterilizada por medio de radiaciones en estado de pupa (Burk y
Calkins, 1983), este mtodo tambin es utilizado cuando las poblaciones de
mosca son pequeas y aisladas. Asimismo, complementado con otras tcnicas
puede reducir grandes poblaciones de la plaga (Djerassi et al., 1974; Messing,
1996).

Con este mtodo se ha logrado la erradicacin de la mosca del
mediterrneo, C. capitata, utilizndolo tambin para reducir poblaciones
incipientes de adultos de A. suspensa (Holler y Harris, 1993) y como una
estrategia del manejo de A. oblicua y A. ludens (Aluja et al., 1996).

Actualmente se propone mejorar de manera significativa esta tcnica
mediante la liberacin exclusiva de machos estriles, permitiendo as, una
reduccin de la mitad de costos en la produccin de pupas y evitando la
perforacin por oviposicin de hembras estriles en los frutos (Economopoulos,
1996).

13
Se realiza mediante la aplicacin de insecticida-cebo, que aplicado de
manera oportuna y combinada con otros mecanismos de control, reduce el dao
de las moscas de la fruta (Aluja, 1993). Sin embargo, este tipo de control, causa la
contaminacin en sistemas acuferos, peligro para los aplicadores y mortalidad de
agentes de control biolgico (Messing, 1996) y tambin de insectos benficos
(Gary y Mussen, 1984).

2.4.8 Mtodos alternativos.

Trabajos recientes para el control de moscas de la fruta, se han reportado
en diferentes lneas. La utilizacin de reguladores de crecimiento de plantas, como
el cido giberlico (AG) aplicado en toronjas cv. Mars, permite que sean menos
susceptibles al ataque de A. luden (Greany et al., 1991). Trabajos con reguladores
del crecimiento en insectos, se han utilizado para reducir la fertilidad de huevos de
C. capitata, D. dorsalis y D. cucurbitae (Albrecht y Sherman, 1987) y de A. ludens
(Martnez y Moreno, 1991).

Otros tipos de control de moscas de la fruta, son las cubiertas aplicadas en
toronjas que permiten matar en el interior de las mismas, larvas del tercer estadio
temprano de A. ludens hasta en un 95% (Hallman, 1997).

Tambin con la utilizacin del sistema de enfriamiento rpido en agua (1.1
C) se logra aumentar en un 90% la mortalidad de larvas de A. suspensa en frutos
de carambola, Averrhon carambola (L.) (Gould y Hennessey, 1997).

2.4.9 Control biolgico.

El control biolgico se define como la regulacin de una poblacin de la
plaga a travs de enemigos naturales como son los parsitos, depredadores, y
patgenos y poblaciones antagnicas o competidoras (Djerassi et al., 1974;
Caltagirone, 1981;, Strong et al., 2000)
2.4.7 Control qumico.
14

El control biolgico juega un papel importante en reducir el impacto
negativo de un gran nmero de insectos plaga (Howarth 1991; Shea y Possinghan
2000, Lacey et al., 2001) asimismo el uso de agentes de control biolgico de
plagas ha demostrado ser amigable al ambiente (Batra, 1982) y seguro a los
humanos (Pimentel, 1984); ofreciendo soluciones sustentables a problemas de
insectos plaga (Wiedemann, 1997).

2.4.10. Control biolgico de moscas de la fruta.

2.4.10.1. Parasitoides.

Con respecto a moscas de la fruta; el uso del control biolgico mediante la
liberacin de parasitoides ha permitido la reduccin a poblaciones de Anastrepha
(Aluja et al., 1990; Aluja, 1994). As por ejemplo, en Florida, E. U., la liberacin de
los parasitoides D. longicaudata (Ashmead), D. tryoni (Cameron), Biosteres
(=Opius) vandenboschi (Fullaway, Psytallia incisi (Silvestre) ha permitido la
reduccin de la poblacin de la mosca del Caribe, A. suspensa, hasta un 43%.
(Baranowski et al., 1993).

Posteriormente Sivinski et al., (1996) reportan que con liberaciones
inundativas de D. longicaudata contra A. suspensa produjo disminuciones muy
importantes de los promedios de las capturas de moscas por trampa en las zonas
de liberacin, al comparar sus datos con registros histricos para estas regiones.

Tambin Burns et al., (1996) reportan una disminucin de la captura de A.
suspensa en tres regiones de Florida despus de liberaciones aumentativas de D.
longicaudata. Aunque cuando se determino que el parasitismo en frutos
colectados el registro ms alto fue 8.8 %.

En Mxico se han reportado parasitoides de moscas de la fruta como D.
longicaudata (Ashmead); Bracanastrepha anastrephae (Vierech); Doryctobracon
15
crawfordi (Vierech); Doryctobracon crawfordi (Vierech); Doryctobracon aerolatus
(Szplegeti) Ganaspis carvalhoi (Dettimer); Acerotoneuromyia indicum (Silvestri);
Biosteres arisanus; Pachycrepoides windemia y Doryctobracon toxotrypae
(Muesebeck),: parasitando a A. ludens, A. obliqua, A. serpentina, A. striata y T.
curvicauda (Aluja et al., 1990; Piedra et al., 1993; Aluja, 1994; Aluja et al., 1998).

Dentro de los limitantes de tipo biolgico del empleo de parasitoides de
moscas de la fruta estn: baja fecundidad en comparacin con la de las moscas,
dificultad de parasitar larvas en frutos con corteza larga y/o gruesa. (Sivinski,
1996), prcticas actuales de la agricultura como es el monocultivo, empleo de
insecticidas y la dependencia por parte de los parasitoides de la densidad del
hospedero; puesto que cuando estos son efectivos ya la plaga cruz el umbral
econmico (Gingrich, 1993).

2.4.10.2 Bacterias entomopatgenas.

Dentro de las investigaciones con B. thuriengiensis contra moscas de la
fruta se tienen las realizadas por Robacker et al., (1996) quienes consignan que al
evaluar 55 aislados de Bt en la presentacin en pellet y sobrenadante, contra
larvas del tercer estadio de A. ludens encontraron, que dos aislados de Guatemala
fueron los ms virulentos, alcanzando el 100 % de mortalidad en larvas ms
pupas; le siguieron en efectividad las cepas HD 2 y la HD146 provenientes del
laboratorio del Dr. Howard Dulmage.

Cuando investigaron varios cientos de aislados de Bt contra la mosca del
olivo Batrocera oleae Alberola et al., (1999) encontraron que determinados
aislados fueron txicos en adultos o larvas y algunos para ambos estados de la
mosca del olivo. Asimismo al evaluar los aislados ms txicos en el parasitoide
ms importante de B. oleae; Opius concolor Szepl (Hym. Braconidae) se observo
que solo tres aislados de Bt de 14 examinados presentaron mortalidad significativa
en el parasitoide.
16

2.4.10.3 Hongos entomopatgenos.

Metarhizium anisopliae es el principal hongo evaluado en contra moscas de
la fruta Garca et al., (1984) reportan que M. anisopliae evaluado en contra de C.
captata presento una DL
50
de 8 X 10
6.6
conidias /ml y un TL
50
de 11.4 das.

Al evaluar siete razas de hongos entomopatgenos contra C. capitata,
Castillo et al.,(2000) encontraron que M.anisopliae y Paecilomyces fumosoroseus
raza CG 200 fueron los hongos ms patognicos con valores de DL
50
5.1 y 6.1
X 10
3
conidia/mosca respectivamente. Asimismo al evaluar los extractos se
reporto que M. anisopliae fue el ms toxico, resultando un 90 % de mortalidad a
una concentracin de 25 m/g de dieta y adems de que la fecundidad y fertilidad
fue reducida al 94 y 53 respectivamente comparado con el testigo.

Al evaluar veinte aislados de M. anisopliae contra A. ludens se observ que
la concentracin de conidias de 10
8
UFC/ml se presento una mortalidad
acumulada de larvas y pupas con un rango de 37.9 a 98.75 %. Trece aislados
causaron una tasa de mortalidad mayor del 83.7 % y su LT
50
con rango de 1.8 a
6.2 d. Los aislados Ma2, Ma8 y Mal 6 reportaron un CL
50
de 3.7 a 4.8 X10
5
UFC/ml. En experimentos de campo Ma2 a la concentracin de 2.5 x 10
6
UFC/ml,
reduce la emergencia de adultos entre el 22 y 43 % (Lezama et al., 2000)

2.5 Nematodos.

Los nematodos entomopatgenos son excelentes agentes de control
biolgico por las caractersticas de: tener quimiorreceptores, buscar activamente a
sus hospederos y matarlos rpidamente (Kaya y Gaugler, 1993; Liu y Poinar,
2000); son letales a un amplio rango de insectos de importancia econmica
(Poinar, 1971; Gaugler, 1981; Bathon, 1996), son seguros para mamferos,
invertebrados y plantas (Poinar, 1989; Akhurst, 1990; Boemare et al., 1996) tienen
potencial de reciclado, compatibilidad con muchos agroqumicos (Rovesti y Deseo,
17
1990; Grewal, 1999) y estn exentos de registro en varias regiones del mundo
(Gorsuch, 1982, Ehlers y Hokkanen, 1996; Bedding et al., 1996; Richardson,
1996).

2.5.1. Taxonoma.

Los nematodos se encuentran ubicados en el Phylum Nemata, el cual se
subdivide en las clases Secementa y Adenophora (Poinar, 1975 y 1979). Los
nematodos entomopatgenos conocidos o bien los que tienen posibilidades de
control biolgico se encuentran en cuatro rdenes, por importancia, Rhabditida,
Mermitida, Tylenchida y Aphelenchida (Smart y Nguyen, 1994).

Dentro del orden Rhabditidae se encuentra la mayora de los nematodos
de vida libre incluyendo a las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae,
parsitos facultativos de insectos (Tanada y Kaya, 1993; Smart y Nguyen, 1994).
La familia Steinernematidae comprende dos gneros; Steinernema Travassos,
1927 (Hominick et al.,1997) y Neosteinernema Nguyen y Smart 1994 (Nguyen y
Smart, 1994). La familia Heterorhabditidae comprende l genero Heterorhabditis.

Actualmente han sido descritos y aceptados como validas veintids
especies de Steinernema, una especie de Neostienernema y ocho especies de
Heterorhabditis (Caudrol y 2) (Nguyen y Smart, 1996; Hominick et al., 1997; Kaya
y Stock, 1997).

Los aislados son referidos de manera individual (p.ej. AH, Ham, Pye) local
(p.ej. Mexicana, Umea, Italian) por los insectos hospederos (p.ej. Agrotis,
Rhagoletis) o por cdigos (p.ej. DD-36, P7) (Poinar, 1990); Baker y Capinera
(1997) sealan que los aislados de nematodos usualmente llegan a ser
considerados biotipos o razas que en ocasiones despliegan biologas
significativamente diferentes.
18

Cuadro 1. Gneros y especies de la familia Steinermatidae
Genero
Steinernema
S.

S.

S.
S.

S.
S.

S.

S.

S.
S.
S.
Especie

kraussei (Steiner, 1923) Travassos, 1927.
= Aplectana kraussei Steiner, 1923.
= Steineria kraussei (Steiner, 1923) Travassos, 1927
= Oxysomatium kraussei (Steiner, 1923) Skrjabin,
Shikhobalova, Mozgovoi, 1951
arenarium (Artyukhovsky, 1967) Wouts, Mracek,Gerdin y
Bedding 1982.
= Neoaplectana arenara Artyukhovsky.
= Neoaplectana anomali Kozodoi, 1984.
anomalae (Kozodoi, 1984) Curran, 1989 1967.
afine (Bovien, 1937) Wouts, Mracek, Gerdin y Bedding,
1982
= Neoaplectana affinis Bovien, 1937.
bicomutum Tallosi, Peters y Ehlers, 1995.
carpocapsae (Weiser, 1955) Wouts, Mracek, Gerdin y
Bedding, 1982
= Neoaplectana carpocapsae Weiser, 1955
= Neoaplectana feltiae sensu Stanuszek, 1974, nec
Filipjev1934,
= Neoaplectana feltiae pieridarum Stanuszek, 1974.
feltiae pierdarum (Stanuszek, 1974) Wouts, Mracek,
Gerdin y Bedding,
= Neoaplectana carpocapsae pieridarum Stanuszek,
1974
= Neoaplectana dutkyi Turco, Thames y Hopkins, 1971
dutkyi (Turco, Thames y Hopkins, 1971) Wouts, Mracek,
Gerdin y Bedding, 1982
caudatum Xu, Wang y Li, 1991.
ceratophorum Jian, Reid y Hunt, 1997.
cubanum Mracek, Hernndez y Boemare, 1994.
19
S.

S.

S.

S.

S.

S.
S.
S.
S.
S.
S.
S.
S.

S.
S.
S.

Neosteinemema
feltiae (Filipjev, 1934) Wouts, Mracek, Gerdin y Bedding,
1982
= Neoaplectana feltiae Filipjev, 1934
= Neoplectana bbonis Bovien, 1937
bibionis (Bovien, 1937) Wouts, Mracek, Gerdin y
Bedding, 1982
= Neoaplectana leucaniae Hoy, 1954.
leucaniae (Hoy, 1954) Wouts, Mracek, Gerdin y Bedding,
1982
glaseri (Steiner, 1929) Wouts, Mracek, Gerdin y Bedding,
1982
= Neoaplectana glaseri Steiner, 1929.
intermedium (Poinar, 1985) Mamiya, 1988
= Neoaplectana intermedia Poinar, 1985
karii Waturu, Hunt y Reid, 1997
kushidai Mamiya, 1988
longicaudum Shen y Wang, 1992
monticolum Stock, Choo y Kaya, 1997
neocurtillae Nguyen y Smart, 1992
oregonense Liu y Berry, 1996
puertoricense Romin y Figueroa, 1994
rarum (de Doucet, 1986) Mamiya, 1988
= Neoaplectana rara de Doucet, 1986
riobrave Cabanillas, Poinar y Raulston, 1994
ritteri de Doucet y Doucet, 1990
scapterisci Nguyen y Smart, 1990
= Neoaplectana carpocapsae raza Uruguay Nguyen y
Smart, 1988.
Neosteinemema longicurvicauda Nguyen y Smart, 1994

Hominick et al., 1997
20

Cuadro 2. Gneros y especies de la familia Heterorhabditidae
Genero Heterorhabditis

H.

H.
H.
H.
H.
H.

H.
H.

bacteriophora Poinar, 1976
=Chromonema heliothidis Khan, Brooks y
Hirschmann, 1976
argentinensis Stock, 1993.
brevicaudis Liu, 1994.
hawaiiensis Gardner, Stock y Kaya, 1994.
indica Poinar, Karunaka y David, 1992.
marelatus Liu and Berry, 1996.
= H. hepialius Stock, Strong y Gardner, 1996.
megidis Poinar, Jackson y Klein 1987.
zealandica Poinar, 1990.
Hominick et al., 1997

2.5.2 Morfologa.

Los nematodos entomopatgenos son animales no segmentados, con
sistema excretorio, nervioso, digestivo, reproductivo y muscular pero carente de
sistema circulatorio y respiratorio. Muchos son ms o menos cilndricos en toda la
longitud de su cuerpo y a menudo son llamados gusanos. El tracto alimenticio
consiste de una boca seguida de una cavidad bucal o estoma, esfago, intestino,
recto y ano (Poinar, 1979).

El sistema reproductivo masculino del nematodo se inicia ventralmente
dentro del recto formando la cloaca, tiene uno o dos testculos y posee espculas
que son utilizadas como una estructura copulatoria. El adulto femenino tiene uno o
dos ovarios con la vulva localizada ventralmente cerca de la mitad del cuerpo o
ms posteriormente (Kaya y Stock, 1997). Los adultos tienen una longitud que
parte de 1 a 8 mm mientras la longitud de los juveniles infectivos (Jls) tanto de
21
Steinernema como de Heterorhabitis va de un rango de 440 1500 um (Baker y
Capinera, 1997).

2.5.3 Ciclo biolgico.

Los ciclos de vida de los gneros Steinernema y Heterorhabditis son muy
similares, sin embargo estas similitudes son el resultado de una evolucin
convergente (Poinar, 1993) que de acuerdo a evidencias moleculares no indican
una relacin filogentica estrecha entre las dos familias (Blaxter et al., 1998).

El ciclo de vida de las especies del gnero Steinernema comprende de un
estado de huevo, cuatro estadios juveniles y un estado adulto (machos y hembras)
(Poinar, 1990). Generalmente ocurren dos generaciones completas dentro del
insecto hospedero (Smart y Nguyen, 1994). El tercer estadio conocido como
juvenil infectivo es el que localiza al hospedero al detectar productos de
excreciones, niveles de dixido de carbono y gradientes de temperatura (Gaugler
et aI.,1980; Georgis, 1992; Grewal et al., 1997) as como tambin otros simbiotes
bacterianos, ciertos pHs y valores qumicos (Pye y Burman, 1981).

La entrada del juvenil infectivo en el insecto hospedero ocurre a travs de
las aberturas naturales, boca y ano (Woodring y Kaya, 1988) espirculos (Triggiani
y Poinar, 1976) o a travs de las partes suaves del integumento (Peters y Ehlers,
1994) en adicin, los juveniles infectivos heterorbaditidos debido a que posen un
diente dorsal pueden raspar la cutcula y entrar directamente al hemocel de ciertos
insectos (Georgis, 1992; Kaya y Koppenhofer, 1999).

Cuando un juvenil infectivo entra en el hemocel del hospedero libera la
bacteria asociada que puede ser Xenorhabdus spp. para Stienernema spp.
(Thomas y Poinar, 1979) yPhotorhabdus luminescens para Heterorhabditis spp.
(Boemare et al., 1993a).

22
La bacteria simbitica se multiplica rpidamente en la hemolinfa, invade la
respuesta inmunolgica del insecto, produce una variedad de toxinas no
especificadas (Dunphy 1994,1995; Clarke y Dowds, 1995) que finalmente causan
la mortalidad del insecto por septicemia, generalmente dentro de 24 a 48 horas
(Kaya, 1993, Smart, 1995; Grewal, 2000) aunque segn Lebeck et al., (1993) en
insectos pequeos, la mortalidad del hospedero puede ocurrir en minutos,
presumiblemente debido a un dao mecnico.

Los juveniles infectivos se alimentan de la bacteria y tejidos del hospedero,
mudan a la cuarta etapa y en consecuencia en machos y hembras de la primera
generacin (Smart, 1995). Las diferencias para l gnero Heterorhabditis es que
los juveniles de la primera generacin llegan a ser hermafroditas y en la segunda
generacin se desarrollan machos y hembras. Despus de aparearse, la hembra
pone huevos emergiendo la primera etapa juvenil que muda sucesivamente
convirtindose en machos y hembras de la segunda generacin (Nguyen y Smart,
1994).

Los adultos de la segunda generacin copulan y producen huevos naciendo
de stos el primer estado juvenil, posteriormente mudan al segundo instar, cuando
los nutrientes del hospedero se agotan, el segundo instar deja de comer
"secuestrando" alrededor de 200 clulas de su bacteria simbitica ( Spiridonov et
al., 1991; Strauch y Ehlers, 1998) dentro de una porcin ventricular del intestino, a
travs del intestino o en el lumen faringeal (Bird y Akhurst,1983; Boff et al., 2000);
mudando al tercer instar y reteniendo la cutcula del segundo instar (Campbell y
Gaugler, 1991).

Despus de la infeccin del insecto hospedero, los juveniles infectivos
abandonan el cadver en bsqueda de nuevos insectos plaga (Smart, 1995;
Ehlers, 1996 Glazer, 1996); que bajo condiciones ideales segn Kaya y
Koppenhofer (1999) ocurre entre los seis y once das en los steinermantidos y
doce y catorce das en los heterohabditidos.
23

Los juveniles infectivos no se alimentan, sin embargo pueden vivir por
varias semanas de las sustancias que tienen almacenadas como los lpidos
(Selvan et al., 1993; Patel et al., 1997) y glyconemo (Patel y Wright, 1997) y
durante varios meses al entrar a un estado cercano al anhidrobitico (Womersley,
1990; Smart y Nguyen, 1994; Grewal, 2000)

2.5.4 Bacterias simbiticas.

La relacin existente entre el entomopatgeno y la bacteria constituye un
ejemplo clsico de mutualismo. La bacteria es incapaz de sobrevivir en el suelo
por lo tanto requiere del juvenil infectivo para su proteccin, donde su casa es el
intestino, al carecer de habilidad de invasin es dependiente del nematodo, para
transportarse dentro del hemocel del hospedero (Morgan et al., 1997) asimismo
recibe la proteccin del nematodo ya que este inhibe las defensas antibacterianas
del hospedero (Kaya y Koppenhofer, 1999).

Por su parte en nematodo recibe los beneficios de la bacteria, debido a que
esta mata al hospedero rpidamente y crea un ambiente favorable para el
crecimiento y reproduccin del nematodo al inhibir el crecimiento de
microorganismos competidores a travs de la produccin de antibiticos (Paul et
al.,1981; Richardson et al., 1988; Li et al., 1995; Hu et al., 1998).

Tambin la bacteria transforma los tejidos del hospedero en una fuente de
comida para el nematodo y asimismo la bacteria sirve como fuente de alimento
para el nematodo (Kaya y Koppenhofer, 1999). Sin la presencia de la bacteria
simbitica en el cadver del insecto, los nematodos son incapaces de reproducirse
(Poinar y Thomas, 1966).

Las especies de Xenorhabdus son gram negativas, anaerobias facultativas
en forma de varilla, clasificadas dentro de la familia Enterobacteriaceae (Thomas y
Poinar, 1979 Grewal et al., 1999). Actualmente se han reconocido cinco especies
24
de Xenorhabdus donde a toda especie de Steinernema lleva una sola especie de
Xenorhabdus; aunque Xenorhabdus puede encontrase con una o ms especies de
nematodos (Akhurst y Boemare, 1988, 1990; Boemare et al., 1993a).

La bacteria Photorhabdus luminescens se encuentra asociada
simbiticamente con todas las especies de Heterorhabditis (Boemare et al., 1993a;
Forst y Nealson, 1996a) sin embargo las investigaciones Liu et al., (1997) sugieren
que P. luminescens sea separada en diferentes especies.

Las especies de las bacterias Xenorhabdus y Photorhabdus presentan
diferencias con relacin a las propiedades bioqumicas y fisiolgicas (Boemare y
Akhurst, 1988; Boemare et al., 1993b). Estas diferencias han sido demostradas
por sus interacciones con nematodos (Akhurts, 1983). De acuerdo a Forst y
Nealson (1996b) entre las principales diferencias de ambas bacterias se
encuentran:

1. Los aislados de Photorhabdus presentan bioluminosidad, los aislados de
Xenorhabdus no la presentan.
2. Los aislados de Photorhabdus convierten el cadver del hospedero a un color
rojo, prpura, naranja, amarillo, ocre y en ocasiones verdes mientras que los
aislados de Xenorhabdus convierten el cadver broceado, ocre, gris, o gris oscuro.
3. Los aislados de Photorhabdus son catalizados positivamente en tanto que los
aislados de Xenorhabdus son catalizados negativamente.
4. Los aislados de Photorhabdus producen antibiticos tales como hidroxistilbinas y
antroquinones donde los aislados de Xenorhabdus producen antibiticos como indoles,
xenorhadinas y xenocouamacinas.

2.5.5 Variacin de la fase de las bacterias simbiticas.

Las bacterias Xenorhabus y Photorhabdus despliegan una forma de
fenotipo inestable conocida como variacin de la fase (Akhurst, 1983). Donde la
25
fase I se caracteriza por la adsorcin de tintes y la produccin de antibiticos
(Akhurst, 1980), y dependiendo de la especie y la raza puede ser pigmentada,
bioluminicente, producir lecitinasa, lipasas, fimbriae, cpsulas y desarrollar
grandes inclusiones de cuerpos de protena cristal (Akhurst y Boemare, 1983;
Smart y Nguyen,1994; Burnell y Dowds, 1996; Kaya y Koppenhofer,1999).

La fase II surge espontneamente durante la fase estacionaria en cultivo in
vitro o durante la reproduccin de nematodos en dietas artificiales (Boemare et
al.,1996) y a diferencia de la fase I; la fase II no produce antibiticos, no adsorbe
tintes y la formacin de cristales de protena es ineficiente (Boemare et al.,1996;
Kaya y Koppenhofer,1999).

La base de la existencia de la fase II es desconocida (Smart y Nguyen,
1994). Ambas fases son igualmente patognicas en larvas de la polilla mayor de la
cera G. mellonella, sin embargo una caracterstica notable es que el juvenil
infectivo tiene siempre exclusivamente simbiotes fase I antes de escapar del
cadver del insecto (Akhurst y Boemare,1990; Burnell y Dowds,1996) adems de
que la fase I es ms favorable en la produccin de nematodos in vitro que la fase
II; especialmente en las asociaciones de Heterorhabditis-Photoharbdus (Ehlers et
al.,1990; Smart y Nguyen,1994; Kaya y Koppenhofer,1999).

2 5.6 Conducta.

Los nematodos entomopatgenos poseen comportamientos que les
permiten buscar e infectar a los insectos hospederos. Las estrategias de bsqueda
del hospedero se dividen en dos categoras; "acechadoras" y "cazadoras"
(Gaugler et al., 1989; Campbell y Gaugler, 1993; Lewis et al. 1992, 1993).

Las especies acechadoras tales como S. carpocapsae y S. scapterisci
tienden a ser estacionarias; como estrategia tienen la de pararse en su cola (Kaya
y Gaugler, 1993 ;Gaugler, 1999) e incluso brincar hacia el hospedero; S.
26
carpocapsae (Campbell y Kaya,1999); estas estrategias le permiten atacar e
infectar insectos mviles que se alimentan en la interfase de la basura del suelo
(Campbell et al., 1996).

Otras especies p.ej. S. glaseri y H. bacteriophora tienen una estrategia de
bsqueda activa y son llamadas " cazadoras" (Kaya y Gaugler, 1993; Lewis et al.,
1993; Gaugler, 1999). La mayora de los nematodos con esta estrategia tienden a
ser muy mviles y explorar grandes reas para los hospederos y asimismo
presentan una alta respuesta a la liberacin de compuestos qumicos liberados por
el hospedero; que son utilizados para su localizacin (Lewis et al; 1993); y estn
adaptados para infectar insectos menos mviles del suelo (Campbell et al.,1996).

La bsqueda del hospedero es un continuo, donde especies como S.
riobrave y S. feltiae presentan caractersticas intermedias ente las especies
"acechadoras" y "cazadoras" (Campbell y Gaugler, 1997; Campbell y Kaya, 2002).

Cuadro 3. Especies de bacterias simbiticas asociadas con nematodos entomopatgenos.
Simbitica Nematodo Referencia
X. nematophilu
X. pionari
X. bovienii
X. bovienii
X. bovienii
X. bovienii
X. japnica
X. sp
X. sp
X. beddingii
P. luminescens
S.carpocapsae
S. Glaser
S.feltiae
S. feltiae
S. affine
S. krausei
S. intermedia
S.scapterisce
S. cubana
S.spp
H. bacteriophora
Akhurst y Boermare 1988.
Yamanaka et al., 1982.
Aguilera y Smart, 1993.
Mrcek et al., 1993.
Boemare et al., 1993.
Boemare et al., 1996
27

2.5.7 Rango de hospederos.

Los nematodos entomopatgenos de los gneros Steinernema y
Heterorhabditis han sido reportados por varios investigadores como parsitos para
un gran nmero de insectos. As se tiene que Poinar (1979) indica que, S.
carpocapsae infecto a 250 especies en 75 familias y 11 rdenes por su parte
Morris (1985) reporta la susceptibilidad de 32 insectos plaga a S. feltiae. Tambin
H. bacteriophora y H. megidis han exhibido parasitismo en un gran nmero de
insectos sin embargo la infectividad mostrada ha sido en cajas de Petri, altas dosis
de infectivos, ptimas condiciones ambientales y donde las barreras ecolgicas y
de comportamiento han sido removidas (Kaya y Koppenhofer, 1999).

En condiciones de campo la infectividad de los nematodos se reduce a
pocas especies y estadios de insectos (Smits, 1996; Georgis, 1992) entre las
principales causas de esta baja infectividad se encuentran el bajo nmero de Jls
que buscan al hospedero (Smits, 1996), efecto de las condiciones ambientales
adversas (Glazer, 1996) y los efectivos mecanismos de defensa del potencial
hospedero (Simoes y Rosa, 1996).

2.5.8 Ecologa.

2.5.8.1 Distribucin geogrfica.

Los nematodos se encuentran distribuidos prcticamente en todos los
continentes con excepcin de la regin Antrtica (Hominick et al., 1996) han sido
aislados en diferentes tipos de suelos desde el nivel de mar a altas altitudes, en
hbitat naturales y agrosistemas perturbados (Hominick y Briscoe, 1990; Kaya y
Koppenhofer, 1999).

Dentro de los stienermatidos dos especies, S. feltiae y S. carpocapsae
parecen tener una distribucin global (Hominick et al., 1996), las otras especies de
28
steinernematidos tienden a una distribucin ms restringida registrndose a nivel
continental o nacional (Hominick et al., 1996).

Especies como S. affines y S. kraussei parece estar restringidas a Europa
(Hominick et al., 1995) donde S. rara y S. ritteri parecen ser restringidas al sur de
Amrica (Hominick et al., 1996).

Con respecto a los heterorhabditidos la situacin es diferente, debido
principalmente a los pocas especies que se han descrito (Hominick et al., 1996).
En este contexto se tiene que H. bacteriophora es actualmente el heterorhabditido
ms ampliamente distribuido geogrficamente, encontrndose en toda Amrica,
Suroeste y Centro de Europa, Australia y Este de Asia (China, Japn y Corea)
(Burnell y Stock, 2000).

Por su parte H. indica tiene una amplia distribucin en los subtropicos y
trpicos, habindose sido aislado en el Suroeste de India (Poinar et al., 1992). Sri
Lanka (Amarasinghe et al., 1994); pennsula de Malasia (Mason et al., 1996);
Indonesia (Griffin et al., 1999; Burnell y Stock, 2000), Cuba y regin del Caribe
(Joyce et al., 1994; Constant et al; 1998) Egipto, Kenia (Stack et al; 2000; Gernier
et al; 1996; Burnell y Stock, 2000) y en las regiones subtropicales y secas de
Japn (Yoshida et al., 1998).

Respecto al rango de hbitat preferido por stienermatidos de acuerdo a
Hominick et al., (1995) la informacin existente es insuficiente y con datos
contradictorios para poder determinar correlaciones. Sin embargo, dentro de las
especies que han mostrado tener un rango amplio de hbitat esta, S. kraussei, ya
que ha sido encontrada en bosques de coniferas y deciduos (Mrcek et al., 1999;
Stock, 2000) y dentro de las especies que han exhibido preferencia por algn
hbitat se encuentran S. feltiae, S. afine y S. intermedium, que han sido
encontrados principalmente en pastizales (Boag et al., 1992, Hominick et al.,
1995).
29

De acuerdo a Kaya y Gaugler (1993) esta preferencia de hbitat puede
reflejar la distribucin de hospedero. Por su parte Hominick et al., (1995) seala
que varias especies deben ser fisiolgicamente y conductualmente adaptada as
que sus especficos requerimientos ecolgicos son satisfechos solamente en
particulares hbitats.

Por su parte los heterorhabditidos la informacin de su hbitat especfico es
dominante por la correlacin entre los miembros de esta familia y suelos arenosos
de la costa (Griffin et al., 1994). Lo anterior apoya la hiptesis de Poinar (1993) de
que los heterorhabditidos provienen de nematodos marinos y los steinermatidos
de nematodos terrestres.

2.5.8.2 Dispersin de juveniles infectivos.

La dispersin de los juveniles infectivos se produce tanto verticalmente
como horizontalmente, ambos pasivamente, (lluvia, viento, tierra; por los humanos
o insectos) o activamente en particular por los nematodos cazadores que es el
principal medio de bsqueda de hospederos (Kaya, 1990; Nguyen y Smart, 1990).
Sin embargo su potencial para dispersarse a grandes distancias est limitado a
cuantos metros por ao como mximo (Poinar y Hom, 1986). La dispersin a
largas distancias puede ocurrir en un numero pequeo y requieren ser
transportados por los insectos hospederos (Parkman y Smart, 1996).

2.5.8.3 Factores abiticos.

Los factores abiticos pueden afectar de una manera significativa la
efectividad de los nematodos entomopatgenos en el control de insectos plaga; al
limitar la bsqueda y entrada al hospedero (Smith, 1999).
30

2.5.8.3.1 Radiacin solar.

Entre los principales factores abiticos que afectan de manera adversa a
los nematodos entomopatgenos se encuentra la luz ultravioleta (Gaugler y
Boush, 1978; Gaugler et al., 1992) reportan que cuando expusieron a la luz solar a
S. carpocapsae este fue inactivado con 60 min., mientras que H. bacteriophora fue
ms sensible y que fue inactivado con 30 min., asimismo sealan que bajo una
lmpara de UV simulando la luz de UV de onda larga e intensidad de la luz solar
los tiempos de inactivacin de S. carpopcapsae fue de 6 min. y H. bacteriophora
fue de 2 min.

Por su parte Fujiie y Yokoyama (1998) mencionan que la luz UV afecta la
sobrevivencia de los Jls de S. kushidia, reportando una mortalidad cercana al 100
con una exposicin de 40 minutos, sealando adems que la actividad insecticida
del nematodo sobre Anomala cuprea (Coleoptera: Scarabaeidae) decrece a 40
min, 5 min. y 10 segundos de exposicin solar. El uso de protectores de la
radiacin ultravioleta extiende la longevidad de los juveniles infectivos (Gaugler y
Boush, 1979).

2.5.8.3.2 Temperatura.

La temperatura puede ser el factor abitico de mayor efecto sobre los
nematodos. Tiene efecto en la supervivenvia, infectividad y patogenicidad
(Blackshaw y Newell, 1987; Griffin y Downes, 1991; Kung et al., 1990; Fujie et al.,
1995; Glazer et al., 1996) el desarrollo, maduracin y reproduccin tambin son
afectados por la temperatura (Dunphy y Webster, 1986; Fan y Hominick, 1991b;
Grewal et al., 1994; Long et al., 2000).

El efecto de la temperatura en la supervivencia de los nematodos varia con
las distintas razas y especies (Grewal et al., 1994; Glazer et al., 1996, Baker y
Capinera, 1997). Temperaturas extremas abajo de 0 C y arriba de 40C son
31
letales a numerosos nematodos, dependiendo el tiempo de exposicin y las
especies (Brow y Gaugler, 1996; Griffin, 1993).

S. riobrave, S. carpocapsae y S. glaseri sobreviven a una exposicin a - 4 C
con valores letales de LT
50
de 2.1, 1.8 y 0.6 das, respectivamente. La incubacin
de S. carpocapsae en glicerol al 20 %, 48 hrs. previas al congelamiento a 20C
mejora la supervivencia de 15 a por lo menos 30 das, asimismo se mantiene la
patogenicidad de los nematodos despus de 24 das a 20C (Brow y Gaugler,
1998).

Las especies de nematodos que son nativas de regiones templadas, (S.
feltiae y H. megidis) tienden a ser ms tolerantes a las temperaturas fras del suelo
en comparacin con las especies aisladas en regiones clidas (S. riobrave) (Kung
et al., 1990; Steiner, 1996; Grewal et al., 1999).

Especies tropicales, como H. indica, sobreviven pobremente a temperaturas
abajo de 15C (Smits, 1996). Sin embargo, las especies adaptadas al calor
pueden tolerar temperaturas altas como 40C como es el caso de H. indica (Smits,
1996), o S. riobrave que puede tolerar exposiciones cortas a 42 C (Grewal et al.,
1999) aunque las altas temperaturas incrementan la tasa de metabolismo y
acortan el lapso de vida (Kaya y Koppenhofer, 1999), Glazer et aL,(1996) y
Shapiro et al., (1996) han reportado nuevos aislados de H. bacteriophora y H.
megidis encontrados en las regiones ridas de Israel, que han exhibido tolerancia
al calor; por su parte Amarasinge et al., 1999 indican que similar comportamiento
en heterorhabidtidos hallados en Sri Lanka.

Gouge et al., (1999) sealan que la temperatura ptima para penetracin y
establecimiento del nematodo depende de los efectos de la temperatura en el
nematodo y el insecto hospedero. Si bien muchas especies de nematodos infectan
insectos en un amplio rango de temperatura, la infectividad se ve reducida arriba
de 30 C y abajo de 15C (Molyneux, 1985- Kaya, 1990; Kung et al., 1991). En
32
general la mortalidad de los insectos se reduce a temperaturas fras (Grewal,
1999) por la disminucin de la habilidad del nematodo para moverse a bajas
temperaturas (Griffin y Downes, 1991).

Las temperaturas ptimas para almacenar los nematodos tambin vara
entre especies. Muchas especies viven largamente a temperaturas fras, aunque
algunas se adaptan a las temperaturas calidas; los nematodos no se almacenan
bien a abajo de 10C (Grewal et al., 1999).

2.5.8.3.3 Humedad.

La humedad es fundamental para mantener el estado de hidratacin,
movimiento e infeccin del nematodo (Womersley, 1990, 1993; Smith, 1999) y a
menudo el factor ms crtico de supervivencia (Klein, 1990).

De acuerdo a Kaya (1990) los steinermatidos pueden sobrevivir a relativa
baja humedad del suelo, similar a la presente normalmente en suelos naturales,
sin embargo su capacidad de bsqueda del hospedero e infectividad puede
reducirse.

Dentro de los steinermatidos Kondo y Ishibashi (1985) encontraron que S.
carpocapsae a 25 y 40 % de h.r. fue efectivo en Spodoptera litura, as como
tambin que a 10, 15 y 50 % de h.r., los Jls no fueron capaces de infectar a los
insectos; no obstante la alta persistencia de los Jls a 25 y 40 % de h.r.; asimismo
observaron que el comportamiento de nictacin no fue afectado por las
condiciones de humedad.

Por su parte Molyneux (1985) menciona que en un suelo de arena y a 7 %
de humedad con 15C el 100 % de S. glaseri sobrevive por 24 semanas y
alrededor del 90 % sobrevive por 32 semanas. Con el 79.5 % de h.r., S.
carpocapsae sobrevive hasta un 90 % durante doce das; en cmaras de
33
humedad simulando condiciones de suelo (Simoes et al., 1973). Cuando S.
carpocapsae y S. glasea fueron colocados en un suelo miganoso a diferentes
humedades del suelo, ambas especies sobrevivieron bien con el 2 y 4 %
respectivamente (Kung et al., 1991).

Brow y Gaugler (1997) al evaluar a 75, 85, 96 y 100 de h.r. nematodos
entomopatgenos en G. mellonella encontraron que H. bacteriophora y S. feltiae
emergen a bajas h. r., pero la h. r. no afecta la emergencia de S. glaseri y S.
carpocapsae; concluyendo que los Jls de los nematodos pueden sobrevivir en
condiciones ambientales adversas por periodo limitados en el cadver del
hospero; pero con las bajas temperaturas y h.r. impide la emergencia y los JIs
eventualmente mueren.

Al exponer directamente S. feltiae y H. megidis de Grecia e Inglaterra a
diferentes h.r. encontraron que no obstante que H. megidis fue superior a S.
feltiae, ambas especies presentaron una pobre tolerancia (minutos); en tanto que
la mejora de sobrevivencia de las especies de Grecia con respecto a las de
Inglaterra no fue evidente (Menti et al, 1997). Oleary y Burnell (1997) tambin
reportan una pobre sobrevivencia para H. megidis raza UK 211, cuando
expusieron a los nematodos directamente a 57 % h.r. durante 3 horas.

En contraste con lo anterior Liu y Glazer (2000) demostraron que JIs de H.
bacteriophora son capaces de sobrevivir a una h.r. > 93 % por extensos periodos
(arriba de 18 das) aunque bajo estas condiciones los Jls no fueron movibles,
decrecieron en tamao y en un 25 % del contenido de su agua. Los autores
concluyen que pueden tener adaptacin con un mnimo nivel de humedad si este,
es sostenido en todo el ao, sugiriendo que H. bacteriophora es capaz de limitar la
anhidribiosis que puede ser inducido por una baja deshidratacin y que tambin
que bajo distintas rgimen de humedad existe considerable variacin en tolerancia
a la desecacin entre aislados de heterorhabditidos.

34
2.5.8.3.4 Textura.

La textura del suelo afecta la mobilidad, persistencia e infectividad del
nematodo (Georgis y Poinar, 1983; Choo y Kaya 1991) siendo las texturas
arenosa y franca la ms favorable (Baker y Capinera, 1997).

Al evaluar las texturas arena limo, limo arcillosa y arcilla durante 16
semanas en S. carpocapsae y S. glaseri, la ms baja supervivencia fue observada
en suelos arcillosos para ambas especies. En suelos arcillosos y limo arcillosos, la
tasa de mortalidad fue de 40-50 % en las primeras dos semanas, estabilizndose
a una tasa de 1- 2 % por semana para S. carpocapsae y 5 % por semana para S.
glaseri con un sostenido decremento para S. glaseri entre 4 y 8 semanas Kung et
al., (1990).

En lo suelos arcillosos, el pequeo dimetro de sus poros (Molyneux y
Bedding, 1986) y la reduccin de la aireacin constituyen los aspectos de mayor
influencia en la supervivencia nematodo (Kaya, 1990). Smits (1996) seala que no
tan solo se ve afecta la supervivencia del nematodo en los suelos arcillosos si no
que tambin se reduce su infectividad.

2.5.8.3.5 pH del suelo.

Kung et al., (1990) al evaluar el efecto del pH del suelo encontraron que la
supervivencia y patogenicidad solo disminuye ligeramente conforme se reduce el
pH de 8 a 4, no sucediendo as cuando existe un pH de 10 ya que entonces se
declina la supervivencia de una manera drstica y no hay muestras de habilidad
para matar larvas de G. mellonella. La acidez del suelo tambin tiene un efecto
importante en el nematodo, Fischer y Fuher (1990) sealan que con un pH abajo
de 4, S. krausse limita su parasitismo en Cephalcia abietis (L.) (Hymenoptera) de
una manera significativa.

35
2.5.8.3.6 Oxgeno.

Los niveles de oxgeno dentro de los nematodos son principalmente
determinado por los niveles de oxgeno del ambiente y el tamao del cuerpo,
debido a que los nematodos no poseen sistema respiratorio y circulatorio (Qui y
Bedding, 2000). La tolerancia de los nematodos a la falta de oxgeno vara
drsticamente entre especies (Grewal, 1999).

En estudios de laboratorio Burman y Pye (1980) encontraron que S.
carpocapsae que puede sobrevivir con niveles bajos de oxgeno (0.5% de
saturacin) solamente 43 das a 20C. En un trabajo posterior Lindegren et al.,
(1986) concluyen que la tasa de respiracin de S. carpocapsae depende de la
temperatura y que el nematodo puede morir a bajas concentraciones de oxgeno
(0.5 % m l / 5 x 10
5
nematodos).

Por su parte Kung et al., (1990) reportan la supervivencia de S.
carpocapsae y S. glaseri decrece significativamente despus de 8 semanas como
las concentraciones de oxgeno experimentadas se redujeron de 20 a 1 %, no
registrndose supervivencia despus de 16 semanas asimismo no se registro
patogenicidad de ambas especies a concentraciones de oxgeno de 1,5, 10
despus de 2 semanas y a 20 % despus de 16 semanas.

De acuerdo a Kaya, (1990) el oxgeno puede llegar a ser un factor limitante
para los nematodos en suelos con alto contenido de arcilla, materia orgnica o
saturados de agua. Sin embargo los estudios de Qui y Bedding (2000)
demostraron que los Jls de S.carpocapsae bajo condiciones de deficiencia de
oxgeno, la supervivencia del nematodo es similar con condiciones aerbicas, y
esta depende principalmente de las reservas de energa del nematodo.

36
La supervivencia y eficacia de los esteinermatidos y heterorhabditidos se ve
limitada en gran medida por la disponibilidad del hospedero (Baker y Capinera,
1997) y la abundancia de los enemigos naturales (Bird y Bird, 1991; Kaya y
Koppenhofer, 1996; Grewal, 1999).

Entre los enemigos naturales se encuentran microartrpodos como
colembolas y caros que consumen con facilidad nematodos entomopatgenos,
dependiendo de esta dieta un adecuado desarrollo y reproduccin de estos
nematfagos (Epsky et al, 1988).

Los hongos tambin pueden atacar de manera fcil a los nematodos no
obstante que tercer estado juvenil retiene la segunda la cutcula del segundo
instar, misma que acta como una barrera contra la invasin de hongos (Kaya,
1990). Entre los hongos nematfagos Kaya y Koppenhofer (1996) mencionan a
Hirsutella rhossiliensis, Arthrobotrys spp. y Monacrosporium spp. que infectan o
atrapan juveniles infecti vos, estos autores tambin sealan que el efecto de
depredadores y hongos nematofagos en los juveniles infectivos no han sido
evaluados en condiciones de campo.

Por su parte Baur et al.,(1998) sealan que cuando los nematodos se
encuentran en desarrollo dentro del cadver pueden ser atacados por distintos
invertebrados carroeros, que pueden afectar el reciclado de los nematodos.

2.5.9 Principales rdenes de insectos hospederos de Steinernema y
Heterorhabditis.

2.5.9.1 Lepidoptera.

La aplicacin de nematodos a la palomilla manzanera Cyda pomonella (L.)
causo de acuerdo a Lacey y Chauvin (1999) una mortalidad de 68 a 100 % con S.
carpocapsae raza All cuando se incubo a 25 C y 70 de h.r.; S. kraussie y H.
2.5.8.4 Factores biticos.
37
marelatus produjeron una mortalidad en la palomilla de 21.7 y 53. 9
respectivamente.

El parasitismo de S. riobrave en prepupas de Helicoverpa zea (Boodie) fue
demostrado por Cabanillas y Raulston (1996) quienes reportan un parasitismo del
95 (200,000 JIs /m
2
) , 81 % (100,000 JIs m
2
),50%(50, 0000 JIs /m
2
) 31 % (25,000
JIs /m
2
) y el 13 % en el control. Adems sealan el nulo parasitismo de
S.carpocapsae en la plaga, as como tambien de que el parasitismo ms alto se
presento cuando S. riobrave se aplico a travs del riego (97 %) o despus del
riego (95%) que cuando los nematodos se rociaron antes del riego (82%).

Cuando nematodos steinermatidos fueron evaluados contra Choristoneura
rosaceana por Blair et al., (1999) encontraron que todos los instares fueron
susceptibles a S. carpocapsae cepa All con valores de DL50 de 13, 5, 3, y 2
juveniles infectivos/caja de Petri, para el tercer-cuarto, quinto-sexto estadios de
larva, respectivamente. S. riobrave 335, S. feltiae UK, S. carpocapsae AII y S.
glaseri 326 causaron el 85, 55, 45 y 8 % de mortalidad de tercer instar cuando fue
expuesto a la concentracin de 25 juveniles infectivos por caja de Petri. En
condiciones de campo las aplicaciones foliares de S. carpocapsae All a tasa de 2
X 10
9
Jls/ha provee el 37,19 y 13 de control de la larva.

En estudios de laboratorio fue evaluada la susceptibilidad de Pseudaletia
unipucta (Haworth) a nematodos entomoptogenos. S. carpocapsae razas A48,
Az150 causaron una mortalidad del 63.3, 46.6 y 23 3 % respectivamente. H.
bacteriophora raza Az23 presento una mortalidad del 40 % y en S. glaseri raza
Az26 se observo una tasa de parasitismo del 40 % pero no presento mortalidad.
Una respuesta linear dosis- parasitismo con una regresin positiva fue observada
en los insectos expuestos a S. carpocapsae A48, Az20 y Az 150 as como tambin
H. bacteriophora Az23; presentando una DL
50
de 26 .2, 62.8 y 320.7 juveniles
infectivos respectivamente (Medieros et al., 2000).

38
Gonzlez et al., (2000) evaluaron la susceptibilidad de estados inmaduros
del gusano minador Mocis latipes (Guene) a H. bacteriophora raza NC con
concentraciones de 0,5,10,20,40,60 y 120 nematodos por larva. Encontrando que
todos los instares y estados de prepupa fueron susceptibles al nematodo con un
rango de mortalidad de 2.5 al 100 %. El rango de mortalidad de pupa fue de 27.5 a
41.3 % conforme la concentracin del nematodo fue incrementndose. H.
bacteriophora presento un valor de CL
50
con un rango de 5.26 a 37.66 nematodos
por larva y TL50 con rango entre 1.5 y 4.3. das.

2.5.9.2 Coleoptera.

La patogenicidad de nematodos en contra de larvas de Ciclocepahala hirta,
fue reportado Converse y Grewal (1998), sealando que S. glaseri razas NJ21,
NJ29, NJ42 a una concentracin de 125 Jls /larva produjo el 100 % de mortalidad
de la plaga, S carpocapsae (All y Mex) y S. scapterisci (Colon) no presentaron
patogenicidad a C. hirta; S. riobrave no causo mortalidad a 25 C pero infecto a
30C con un 45 a 71 %.

La susceptibilidad del escarabajo Leptinotarsa decemlineata (Say) a S.
carpocapsae cepa AII fue evaluada en condiciones de laboratorio con 5.0 X 10
5

nematodos por metro cuadrado para larva, pupa y adultos obtenindose el 100%
de mortalidad en todos los tratamientos, en los tratamientos de campo se encontr
un reduccin de la poblacin del escarabajo del 31 % comparado con el testigo,
existiendo variabilidad entre los distintos sitios de experimento (Stewart et al.,
1998).

Al determinar la interaccin de insecticidas y nematodos en el control de
Diabrotica virgifera Le Conte (Coleoptera Chrysomelidae) se encontr que S.
carpocapsae raza Mexican, frecuentemente presenta sinergismo con los
insecticidas ternofos y fonobos con un incremento promedio del 24 % de la
mortalidad esperada, el sinergismo tambin fue observado con la combinacin del
39
insecticida teflurin y H. bacteriophora raza Lewiston (Nishimatsu y Jackson, 1998)

Choo et al., (1996) evaluaron el control de Diabrotica undecimpunctata
undecimpunctata Mannerheim mediante la combinacin de especies de
nematodos, en laboratorio, S. carpocapsae raza All presento mayor patogenicidad
con un CL
50
de 14.5 Jls /maceta, le siguieron H. bacteriophora raza NCI con 18.4,
S. riobrave con 48.1 y Stienernema sp. raza Hanrim con 98.6. En invernadero solo
la especie S. carpocapsae fue la ms virulenta a 1 X 10
8
y 20.5
8
infectivos/ha los
tratamientos de combinacin de nematodos fueron siempre menos efectivos que
las especies por si solas.

En un estudio para determinar la patogenicidad de S. riobrave, H.
bacteriophora y H. indica con diferentes temperaturas y edades de larvas del
barrenador de raz de la caa de azcar Diaprepes abbreviatus (Coleoptera:
Curculionidae), Shapiro et al., (1999) mencionan que H. ndica con 500 Jls/por
maceta y con todas las temperaturas evaluadas (21,24, y 27 C) presento la mayor
patogenicidad en larvas del 4 instar.

Al continuar los estudios de estos nematodos y plaga Shapiro y McCoy
(2000) evaluaron su parasitismo con diferentes niveles de Jls ( 0,11,22,54 y 108
por cm
2)
en condiciones de invernadero y a dos rangos de temperatura (2- 25C y
26 -30C) reportando que S. riobrave causo mayor mortalidad de larvas (90%),
que H. bacteriophora y H. indica, adems de que fue el ms virulento en el rango
alto de temperatura.

La persistencia y el parasitismo de S.riobrave, H. bacteriophora y H. indica
sobre D. abbreviatus fue determinada en huertos de ctricos en produccin por
McCoy et al.,( 2000) quienes al aplicar de 11 a 216 juveniles infecti vos /cm
2
debajo
del rbol, reportan que las diferentes tasas de nematodos aplicados muestran una
relacin positiva entre el numero de nematodos aplicados por rea y el parasitismo
de la larva enjaulada, sin embargo fueron necesarias tasas altas (> 54 Jls/cm
2
)
40
para lograr un parasitismo significativo con respecto al control; el numero de
nematodos declino a lo largo del tiempo.

La patogenicidad de las formulaciones de nematodos en paquete esponjas
y vermiculita con una tasa de 2.5 X10
9
nematodos por ha fue determinada en el
picudo negro de la vid Otiorhynchus sulcatus (F.) (Coleoptera: Curculionidae)
encontrando que H. marelatus en la formulacin de paquete esponja reduce la
proporcin de plantas infestadas hasta un 42% y formulacin en vermiculita el 75
% (Wilson et al., 1999).

2.5.9.3 Diptera.

La mortalidad del negro Strobilomya appalachensis Michelsen
(Anthomyridae) del abeto negro, Picea mariana (Mill) B.S. P. fue determinada con
diferentes concentraciones de nematodos, en cajas de Petri, S. carpocapsae All
produjo una mortalidad en larvas del 90 % con 1250 Jls y el 24 % en pupas con
1600 Jls; S. carpocapsae cepa Umea mat el 94 % de larvas con 2200 Jls y el 12
% de pupas con 1560 Jls; S. feltiae presento una mortalidad del 90 % en larvas
con 250 Jls /larva y el 8.3 % de pupas con 1000 Jls. S. glaseri produjo menos del
50 % de mortalidad con 250 Jls/larva (Sveney y Gesner, 1995).

Wosniak et al., (1993) indican que al estudiar la infectividad de tres cepas
de S. feltiae, dos de S. carpocapsae y una de S. glaseri, en larvas del tercer
estadio del gusano de la raz del betabel, Tetanops myopaeformis von Rder,
(Otitidae) encontraron niveles bajos de patogenicidad, ya que los resultados ms
altos fueron para S. carpocapsae 252 (4.4%), S. glaseri 326 (5.5%), S. feltiae SN
(6.4%) y S. feltiae UK (8.6).

Al investigar bajo condiciones de laboratorio 20 especies de
esteinermatidos y heterorhabditidos contra la larva del minador de la hoja
Liriomyza trifolii (Burgess) (Agromyzidae) se obtuvo que el control vario de 48 a
41
98% donde S. carpocapsae mostr ser el ms patgeno; esta forma de control se
plantea como una opcin para prevenir la resistencia de L. trifolii a los plaguicidas
(Hara et al., 1993).

Resultados similares fueron encontrados por Lebeck et al., (1993) quienes
sealan que S. carpocapsae causo el 93.3%, de mortalidad de L. trifolii adems
mencionan que a excepcin de la tercera etapa larvaria y en la pupa temprana en
todas dems etapas de la plaga, S. carpocapsae fue capaz de reproducirse.

En una investigacin bajo condiciones de laboratorio y campo para
comparar especies de Steinernema y Heterorhabditis en el control de la mosca
grulla, Tipula paludosa Miegen (Tipulidae) se encontr que S. feltiae y S. anomali
Kosodoi mostraron mayor patogenicidad que los heterorhaditidos y S. affinis
(Bovien) nunca excedieron el 20% de eficacia. Cuando S. feltiae fue aplicado en
parcelas logr una reduccin significativa del 53% (Ehlers y Gerwien, 1993).

Al jejn de los hongos Bradysia coprophila (Sciaridae) le fueron aplicados
para su control S. feltiae SN, S. carpocapsae AH, B. thuringiensis subsp.
israelensis y el regulador del crecimiento de insectos Kinopreno; S. feltiae reduce
de manera significativa la plaga en comparacin de los dems tratamientos.
Asimismo en condiciones de laboratorio la segunda y cuarta etapa larval de la
plaga fue ms susceptible a S. feltiae que en estadio de pupa (Harris et al., 1995).

En un estudio para evaluar el control de la mosca del champin Lycoriella
auripila Winnertz (Diptera: Phoridae) Grewal y Richardson, (1993) aplicaron S.
feltiae en diferentes concentraciones; reportando que este nematodo es capaz de
reducir la emergencia de la mosca en un 84, 88, 93 y 94 % a 1.5 10
6
, 3 X 10
6
,

6 X
10
6
y 12 X 10
6
Jls de sustrato respectivamente. Asimismo S. feltiae incremento
el promedio en peso y nmero de championes producidos en 8 y 11 %,
respectivamente.

42
Posteriormente Scheepmaker et al., (1998) investigaron la eficacia de
diferentes especies de nematodos entomopatgenos, contra la larva de
champin Megaselia halterata (Diptera: Phoridae) y L. auripila; concluyendo que
S. feltiae es capaz de controlar a M. halterata de manera eficiente una dosis de 3 x
10 nematodos/m
2
.

Gouge y Hague (1995) indican que investigar el desarrollo de S. feltiae en
mosca Bradysia paupera (Sciaridae) encontraron que este es extremadamente
rpido de tal manera que la infeccin ocurre despus de 3 horas y el desarrollo de
adultos en 27 h. despus de la infeccin; los nuevos juveniles infectivos fueron
producidos 48 h. ms tarde. Asimismo, sealan que los juveniles infectivos son
capaces de infectar los hospederos.

En un estudio para evaluar la susceptibilidad de larvas del tercer estadio de
Musa domestica L. Ophyra aenescens, Fannia canicularis y F. femoralis
(Muscidae: Muscinae las dos primeras y Fanninae las restantes se evalu a S.
feltiae (cepas: Breton, Mex, Ali y 42), S. bibionis y H. bacteriophora encontrando
que todas las especies infectan los cuatro hospederos siendo S. feltiae la especie
ms infectiva con mortalidad del 60% (Mullens et al., 1987).

La susceptibilidad de M. domestica fue evaluada a especies de
Heterorhaditis y Steinernema con 100 Jis/larva; la CL
50
para S. feltia razas UNK-36
y SN fue de 18 y 14 JIs/larva respectivamente; S. carpocapsae reporto una CL
50

de 30 JIs/larva, para la raza UNK-34, 55 Jls/larva para la raza Mexicana-1 y 47
JIs/larva para la raza Kapow, S scapterisci presento un CL
50
de 37 JIs/larva. En
larvas de mosca con sustrato de estircol de bovino, se encontraron valores de
CL
50
de 30 Jls/larva para S. feltiae raza UNK-36 y 4 JIs/larva para la raza SN; H
bacteriophora Oswengo presento una CL
50
de 83 JIs/larva y H. megidis raza HF-
85 100 JIs/larva (Taylor et al., 1998)

En lo que se refiere al uso de nematodos entomopatgenos para el control
43
de moscas de la fruta, se reportan las siguientes investigaciones.

Al evaluar la mortalidad de la mosca del mediterrneo C. capitata a
Neoplectana carpocapsae cepa Mexicana y H. heliothidis Poinar y Hislop (1981);
encontraron una mortalidad de adultos de 75 % (n=25) y 85 % (n=17)
respectivamente.
Al analizar la susceptibilidad de la mosca del mediterrneo C. capitata, del
meln, D. curcubitae y la mosca oriental de la fruta D. dorsalis a S. feltiae en
condiciones de laboratorio Lindegren y Vall (1986) encontraron una mortalidad de
larvas que vario del 92 % al 9 % para C. capitata, 85% al 9 % para D. curcubitae y
86 a 0% para D. dorsalis. En estadio de pupa no existi susceptibilidad a
nematodos y con relacin a los adultos solo C.capitata presento el 0.2% en
mortalidad.

En un trabajo bajo condiciones de campo se encontr una mortalidad
significativa al evaluar el parasitismo causado por S. feltiae en prepupas de C.
capitata; usando concentraciones de 5,000, 1,500, 500 y 150 juveniles infectivos
por cm
2
, tenindose una CL
50
de 38 nematodos/cm
2
en un rea superficial del
suelo. (Lindegren et al., 1990).

Gazit et al., (2000) sealan que la patogenicidad de los nematodos fue
investigada en C. capitata; al utilizar 100 JIs/cm
2
encontraron que los mejores
resultados de mortalidad de larvas fueron con las especies S. riobrave raza Texas
(82.5 %) y H. sp.raza IS-5 (81.5%) con orden descendente H. sp. razas IS-21,IS-
23 y IS-25 con el 76.9, 69.9 y 61.5 % respectivamente; H. bacteriophora HP88,
alcanzo el 53.3 %; S. feltiae raza Sf 33.9 %, H. sp. IS-12 el 17.2 %, donde los
menores resultados fueron con S. carpocapsae razas Mexicana y All y S. glaseri
con el 10 %.

Patterson y Lacey (1999) evaluaron la susceptibilidad de la mosca de la
cereza Rhagoletis indifferens Curran a nematodos entomopatgenos en
44
condiciones de laboratorio; al emplear 6350 JIs/ml en cajas de Petri de 9.0 cm de
dimetro; encontraron que S. carpocapsae causo una mortalidad del 83.3 % de
pupas cuando fueron expuestas como larvas; S feltiae logro un 73.3 %; H.
marelatus el 60.0 % y S. riobrave 43.3 %.

El parasitismo de los nematodos entomopatgenos S. feltiae Filipjev cepas
AH, Mexicana y Bretn, S. glaseri Steiner y H. bacteriophora Poinar, en larvas,
pupas y adultos de la mosca del Caribe A. suspensa Loew fue evaluado bajo
condiciones de laboratorio, encontrndose que la cepa All demostr ser la ms
efectiva, la cual con 1,000 infectivos caus un 88.1% de mortalidad en larvas y un
93.4% en adultos, la cepa Mexicana el 90.7 y 91.7%; la cepa Bretn mat el 83 y
70.3% en larvas y adultos respectivamente (Beaver y Calkins, 1984).

Lezama et al., (1996) sealan que al evaluar la susceptibilidad de larvas y pupas
de A. luden Loew a S. carpocapsae cepas All y Tecomn; S. feltiae; S. glaseri
cepa NC, S. riobrave, y H. bacteriophora, a una concentracin de 4,000 Jls/maceta
y 20 larvas, encontraron una susceptibilidad de larvas y pupas del 90% para S.
riobrave, 82.5% para S. carpocapsae cepa All y el 81.25% para S. feltiae la cepa
S. carpocapsae Tecomn, caus el 76% de mortalidad y H. bacteriophora
Tecomn y S. glaseri el 52.5%; concluyendo que S. riobrave y S. carpocapsae
cepa All tiene un gran potencial para el control de A. ludens.
45
III. MATERIALES Y MTODOS

3.1 Ubicacin del sitio experimental.

El estudio se realiz en el laboratorio de Parasitologa de la Facultad de Ciencias
Agrcolas de la Universidad Veracruzana, ubicada en la Zona Universitaria s/n en
Xalapa, Veracruz; Mxico con una temperatura media de 25 1 C, durante el
periodo comprendido entre los meses de septiembre de 2000 a octubre de 2001.

3.2 Material biolgico.

3.2.1 Mosca mexicana de la fruta Anastrepha ludens Loew.

Para la realizacin del experimento se utili zaron larvas del tercer estadio de
A. ludens, criadas con dieta artificial para larvas de acuerdo a la metodologa
propuesta por Domnguez et al., (1997) y proporcionadas por el laboratorio de
produccin masiva de mosca de la fruta de la Secretara de Agricultura, Ganadera
y Desarrollo Rural Direccin General de Sanidad de Vegetal (MOSCAFRUT,
SAGAR-DGSV) de Metapa de Domnguez, Chiapas y el Instituto de Ecologa A.C.
de Xalapa, Veracruz.

3.2.2 Palomilla mayor de la cera Gallera mellonella (L.)

La palomilla mayor de la cera G. mellonella constituye un excelente
hospedero para la reproduccin masiva de nematodos dadas las caractersticas,
tales como su disponibilidad, crianza y alta susceptibilidad a los nematodos
(Woodring y Kaya, 1988). Para la colecta de G. mellonella se emplearon,
colmenas de abejas acondicionadas para tal fin (panales de cra con polen y sin
abejas).

Se utilizaron larvas de de G. mellonella del ltimo estadio. Las larvas en
46
grupos de 50 fueron colocadas en frascos de vidrio con una capacidad de 500 ml
con la tapa perforada, los frascos que contuvieron las larvas fueron incubados
hasta la emergencia de los adultos a una temperatura de 30 1
C. Cada frasco
contuvo como sustrato para la alimentacin de las larvas la dieta semisinttica
propuesta por Woodring y Kaya (1988), a la cual se le hicieron las siguientes
adecuaciones; se le incorpor polen de abeja y se utiliz una mezcla de vitaminas
de uso veterinario como complemento.

Como medio de oviposicin de los adultos se emplearon tres trozos de cera
estampada de 3 cm de ancho por 10 cm de largo. Una vez efectuada la
oviposicin de los adultos sobre trozos de cera, stos se transfirieron a frascos
con dieta; una vez emergidas las larvas, estas se alimentaron con dieta sinttica.
La colecta de las oviposturas se efectu cada ocho das.

3.2.3 Nematodos.

Los nematodos entomopatgenos: Heterorhabditis bacteriophora (Poinar)
cepa HP88, Heterorhabditis indica (Poinar, Karanukar y David) Steinernema
carpocapsae (Weiser) cepas AH y Mexicana y Steinernema riobrave (Cabanillas,
Poinar y Raulston) fueron originalmente obtenidos por donacin de parte de los
doctores Khuong Ba. Nguyen y Grover C. Smart del Departamento de
Entomologa y Nematologa de la Universidad de Florida en Gainesville, Florida,
EE.UU. y reproducidos en el Laboratorio de Parasitologa de la Universidad
Veracruzana en Xalapa, Veracruz.

3.2.3.1 Multiplicacin de nematodos.

La reproduccin masiva de los nematodos se desarroll en larvas del ltimo
estadio de G. mellonella L., de acuerdo a la tcnica descrita por Dutky et al.
(1964), Kaya y Stimmann (1983); Matha y Mracek (1984). Para ello se prepararon
cmaras de inoculacin constituidas por cajas de Petri (10 x 100 mm) de altura y
47
dimetro, respectivamente en las que se coloc en el fondo una pieza doble de
papel filtro Whatman No.2 de 9 cm de dimetro. En cada caja de Petri y por cada
especie de nematodo se colocaron 20 larvas de G. mellonella y 1,000 juveniles
infectivos contenidos en 1 ml de suspensin de agua destilada esterilizada y
desionizada. Las cajas de Petri conteniendo las larvas inoculadas se metieron en
bolsas de plstico para mantener la humedad y se incubaron por un lapso de 120
horas con una temperatura de 25 1C. El paso sucesivo fue separar las larvas
muertas por nematodos y el lavado de las mismas enjuagndolas tres veces en
agua destilada estril. A continuacin se depositaron en trampas de White; donde
se incubaron, reprodujeron y desarrollaron nuevas generaciones de juveniles
infectivos. Los nematodos que emergieron fueron depositados en matraces de 250
ml y conservados bajo condiciones de refrigeracin.

Las trampas White consistieron en tapas de caja de Petri invertidas a las
que se le colocaron encima una doble pieza de papel filtro; fueron colocadas en
charolas de plstico de 13 x 12 x 4 cm de largo, ancho y alto respectivamente, en
las que se verti agua destilada disponiendo de tal forma que el papel filtro entrara
en contacto con el lquido superficial. Se depositaron de 20 a 50 larvas de G.
mellonella tpicamente infectadas por nematodos sobre el papel filtro. Las charolas
se taparon y con el objetivo de facilitar el intercambio gaseoso se hizo una
abertura de 5 cm2 misma que se cubri con una malla de tela de 0.25 de abertura
para prevenir la entrada de insectos, las trampas se incubaron a 25 1 C
(Woodring y Kaya, 1988).

La cosecha y oxigenacin de los nematodos se hizo cada 24 horas a partir
de que los juveniles infectivos comenzaron a emerger, almacenndolos en agua
destilada, esteril y desionizada a una temperatura de 10C para las especies de
Steinernema y 15C para Heterorhabditis, en frascos de cultivo de tejidos de
plstico de 250 ml para permitir la circulacin de aire las tapaderas permanecieron
semicerradas. La densidad de la suspensin en el almacenaje fue inferior de 5,000
juveniles infectivos (Beavers y Calkins, 1984; Woodring y Kaya, 1988; Lindegren et
al., 1990).
48

3.2.3.2 Cuantificacin de nematodos

La cuantificacin de los nematodos se realiz a travs de diluciones
empleando el mtodo propuesto por Woodri ng y Kaya (1988). El primer pas de
esta tcnica fue tomar 1 ml de la suspensin inicial para formar una dilucin 1:100
en agua destilada estril, homogeneizndola manualmente durante 30 segundos.
A continuacin se tom de esta dilucin 1 ml depositndolo en una caja de Petri
de 100 mm x 60 mm de altura y dimetro, respectivamente. El paso consecutivo
fue realizar el conteo de los juveniles infectivos vivos bajo el microscopio
estereoscpico. Esta operacin fue efectuada en cinco ocasiones con el objetivo
de tener mayor precisin en los datos.

La frmula empleada para determinar la concentracin es:

D x C
A = --------------------
B

donde:

A = Mililitros de la suspensin de la concentracin conocida y de la
suspensin a ser diluida.

B = Nmeros de nematodos/ml. En la suspensin a ser diluida.

C = Volumen final en mililitros de la nueva dilucin.

D = Concentracin deseada en la nueva dilucin

C-A = Mililitros de agua a ser agregados para hacer la nueva dilucin
(Woodring y Kaya, 1988)
49
3.3 Experimento de Patogenicidad.

Para la evaluar la patogenicidad de las diferentes especies de nematodos
entomopatgenos en larvas y pupas de A. luden, se utiliz la metodologa de
Lindegren y Vail (1986) y Lezama et al., (1996) por lo cual como unidad
experimental se emple una maceta de plstico con capacidad de 1. 0 l y
dimensiones de 13 X 11 X 9 cm (altura y anchura en la parte superior e inferior,
respectivamente).

A cada maceta se le incorpor 300 g de suelo esterilizado y tamizado con
una malla de 4 mm, la humedad del suelo fue ajustada a un 15 % con agua
destilada y estril. En cada maceta se coloc un 1.0 ml de suspensin
conteniendo 2000 nematodos. Dos horas despus se incorporaron por cada
maceta 20 larvas del tercer estadio de A. ludens, emergidas de la dieta dentro de
un lapso de 2 horas. Una vez incorporadas las larvas, las macetas fueron
cubiertas con una tapadera de plstico e inmediatamente incubadas con una
temperatura de 25 1 C y una humedad relativa del 80%. Al tratamiento que
sirvi como control nicamente se le aplic agua destilada y estril.

A los seis das de iniciada la exposicin de las larvas a los nematodos, la
mortalidad de larvas y pupas fue determinada con el objetivo de colectar tanto
larvas como pupas para esto, se procedi a tamizar el suelo de cada una de las
macetas con una malla metlica de 1 mm de abertura, a continuacin las larvas y
pupas fueron disectadas y examinadas bajo el microscopio para observar la
mortalidad y el parasitismo de los nematodos.

Se considera que las pupas estn infectadas por nematodos cuando stas
presentan apariencia flcida y cambien color a naranja, amarillo- castao o negro
(sterneinematidos) o a caf rojizo o rojo ladrillo, prpura, naranja y en ocasiones
verdes (heterorhabditidos) (Kaya, 1993). Asimismo de identificar la presencia de
infectivos juveniles o nematodos adultos en larvas y pupas de A. ludens.
50
(Lindegren y Vail, 1986; Lezama et al. 1996; Patterson y Lacey, 1999).

Las pupas que a los seis das de la exposicin inicial mostraron un color
amarillo blanquecino, desarrollo de brotes de alas y patas cabeza definida, ojos
compuestos, trax y abdomen fueron consideradas no parasitadas y regresadas a
las macetas, las cuales se examinaron a los doce das para establecer la
mortalidad de las mismas. Para cada tratamiento se hicieron cinco repeticiones. El
ensayo fue repetido tres veces.

3.4 Experimento de concentraciones letales.

Para evaluar la mortalidad de larvas y pupas de A. ludens causada por las
diferentes concentraciones de juveniles infectivos de las especies y cepas de
nematodos fue empleada la metodologa de Lindegren y Vail (1986) y Lezama et
al., (1996) por lo tanto se utiliz una maceta de plstico como unidad experimental
con igual caractersticas de tamao, materiales y manejo que la empleada en el
experimento de patogenicidad.

Por cada tratamiento fue colocado en cada unidad experimental, 1 mI de
suspensin de nematodos conteniendo 0 (control), 1000, 2000, 3000, 4000, 5000
y 6000 juveniles infectivos, combinando las concentraciones con las especies de
nematodos Heterorhabditis indica, Steinernema carpocapsae cepas All y Mexicana
que fueron las ms virulentas en el primer estudio. Posteriormente en cada
tratamiento se colocaron 20 larvas del tercer estadio A. ludens.

Para determinar mortalidad de las larvas y pupas de A. ludens causada por
las distintas concentraciones se hicieron observaciones a los seis y doce das
registrando la mortalidad acumulada, de igual manera que en el experimento de
patogenicidad cuando las pupas observadas bajo el microscopio mostraron
desarrollo del insecto fue considerada no parasitadas y regresadas a las macetas
para ser examinadas posteriormente.
51

3.5 Diseo experimental.

Para el experimento de patogenicidad, las unidades experimentales fueron
distribuidas bajo un diseo completamente al azar con siete tratamientos y cinco
repeticiones por tratamiento para cada cepa. Para el experimento de
concentraciones letales se emple un diseo completamente al azar como un
factorial completo con dieciocho tratamientos. Cada tratamiento fue repetido cinco
veces durante el experimento y cada experimento fue repetido tres veces.

3.6 Anlisis estadstico.

Para determinar la mortalidad de larvas y pupas, los datos de cada
experimento registrados como porciento fueron transformados angularmente; para
proceder al anlisis de varianza (ANOVA). Las diferencias de los tratamientos
fueron estimados mediante una prueba de comparacin de medias de Tukey al
95% de confiabilidad (p<0.05) (SAS, Institute, 1996).

Para el experimento de concentraciones letales los valores CL
50
y CL
90

(nmero de Jls/cm
2
de superficie que causan el 50 % y 90 % de mortalidad
respectivamente, de A. luden) fueron determinados utilizando el anlisis Probit
(SAS Institute, 1996). Las diferencias significativas fueron determinadas mediante
el anlisis de varianza y prueba de separacin de medias de Tukey (P < 0.05).

El traslape del 95 % de los limites fiduciales fue utilizado para determinar la
significancia (Fuxa, 1987).

El nivel de significacin para el estudio fue de (P < 0.05). Los datos en el
texto y figuras son presentados como medias y el error estndar de las medias
(ES). La frmula de Abbott's (Abbott, 1925) fue utilizada para corregir la mortalidad
(< 10 %) natural en testigo.
52

IV. RESULTADOS

Patogenicidad de los nematodos entomopatgenos en larvas y pupas
de Anastrepha ludens.

En todas las especies y cepas de nematodos entomopatgenos evaluados
se encontr que son capaces de buscar y causar mortalidad de larvas y pupas de
A. Iudens de manera significativa en comparacin con el testigo en macetas de
300 g con suelo franco arenoso.

En estadio de larva se present una mortalidad con Heterorhabditis indica
del 22.79%, Stienernema carpocapsae cepa Mexicana 15.89 %; Stienernema
carpocapsae cepa All 18.44%, Heterorhabditis bacteriophora cepa HP88 17.16% y
Stienernema riobrave 17.0%. (Cuadro 4). Sin embargo, el anlisis estadstico del
porcentaje de mortalidad de larvas de A. Iudens por nematodos revela que no
existen diferencias significativas entre las distintas especies y razas de los
nematodos evaluados a una concentracin de 2000 Jls/mi.

Cuando se realiz la aplicacin de las especies / cepas de nematodos
entomopatgenos en larvas del tercer estadio de A. Iudens se encontr
patogenicidad en pupas; al realizar la diseccin de estas a los seis y doce das de
establecido el estudio; se revel reproduccin exitosa de nuevos juveniles
infectivos de nematodos entomopatgenos.

Los anlisis de varianza de la mortalidad de pupas de A. Iudens mostraron
diferencias significativas entre especies y el tratamiento control. La especie de
nematodo que present mayor porcentaje de mortalidad de pupas fue
Heterorhabditis indica con 48.34%, siguindole en importancia Stienernema
carpocapsae cepa Mexicana con 37.14%; Steinernema carpocapsae cepa All
32.76 %; Heterorhabditis bacteriophora HP88 30.13 % y Steinernema riobrave
21.26%. El testigo present un 9.10 % de mortalidad natural (Cuadro 4).
53
La comparacin de promedios mediante la prueba de Tukey de la
mortalidad de larvas y pupas de A. luden indican que existen diferencias
significativas (P<0.05) de patogenicidad entre las distintas especies de nematodos
donde la mejor especie fue H. indica con un total de 71.13 %; siguiendo en
importancia S. carpocapsae cepa Mexicana 53.03 %; Steinernema carpocapsae
cepa AII 51.2 %; H. bactenophora HP88 47.29 % la especie que menor porcentaje
de mortalidad present fue Steinernema riobrave con 38.26 %. El testigo presenta
un 9.10 % de mortalidad natural (Fig.1) Las larvas de G. mellonella expuestas a
cada especie o raza de nematodos mostraron un 100% de mortalidad.

Cuadro 4: Porcentaje de mortalidad de larvas y pupas de A. Iudens despus de la
exposicin de 2000 juveniles infectivos /ml de cinco especies de nematodos
entomopatgenos en suelo franco arenoso a 25 C
Porcentaje de mortalidad
Nematodos (cepas) Larva Pupa Total

Heterorhabditis indica
Steinernema carpocapsae Mexicana
Steinernema carpocapsae All
Heterorhabditis bacteriophora HP88
Steinernema riobrave
Testigo

22.79a
15.89a
18.44a
17.16a
17.0a
0b

48.34a
37.14b
32.76b
30.13bc
21.26c
9.10d

71.13a
53.03b
51.2b
47.29b
38.26bc
9.10d

Los tratamientos con porcentaje en la misma columna que tienen la misma letra
no son significativamente diferentes (Tukey P< 0.05). El porcentaje de mortalidad
fue calculado con respecto al testigo (<10%) usando la frmula de Abbott's
(Abbott, 1925). Los datos representan medias.
54

Fig. 1 Aplicacin de cinco especies de nematodos entomopatgenos a una
concentracin de 2000 Jls/ml en larvas del tercer estadio de Anastrepha ludens;
en los promedios que comparten letras iguales no hay diferencias significativas
(P< 0.05) de acuerdo a la prueba de Tukey.

55

Concentraciones letales de los nematodos entomopatgenos en
larvas y pupas de A. luden

En este estudio se evaluaron las especies Heterorhabditis indica, Steinernema
carpocapsae cepa Mexicana y AH, las cuales presentaron mayor patogenicidad en
el primer experimento (superior al 50%). Los resultados de patogenicidad indican
que las tres especies evaluadas exhibieron un alto parasitismo en contra de A.
luden. El ANOVA mostr diferencias estadsticas significativas entre tratamientos o
concentraciones afectando diferencialmente la mortalidad de la mosca de la fruta
A. luden (P < 05).

La comparacin de promedio del porcentaje de mortalidad de A. Iudens
mediante la prueba de Tukey (P< 05) exhibi el efecto de las diferentes
concentraciones de H. indica; sealando que 5000 JIs/ml causaron la mortalidad
ms alta con el 84.16 %, siguindole en orden descendente pero con igual
significancia la concentracin de 6000 Jls/mi con 82.89 %. Las concentraciones de
3000, 4000 y 2000 JIs/ml tuvieron significancia similar produciendo una mortalidad
del 77.78, 77.77 y 73.96 %, respectivamente. La mortalidad ms baja fue
presentada con 1000 JIs/ml al reportar el 67.59 % (Fig. 2).

La especie S. carpocapsae cepa AH presenta la mayor mortalidad con 6000
y 5000 JIs/ml al manifestar el 86.7 y 77.78 %, respectivamente; siguindole en
orden descendente la concentracin de 4000 JIs/ml con el 65.04%. Las
concentraciones de 3000, 2000 y 1000 JIs/ml fueron significativamente similares y
a su vez los menores porcentajes de mortalidad al reportar el 53.55, 49.73 y 38.25
%, respectivamente (Fig. 3).
56

Fig. 2. Concentraciones de Heterorhabditis indica en la mortalidad de mosca de la
fruta Anastrepha ludens. Los tratamientos que comparten letra iguales no son
significativamente diferente (P< 0.05); de acuerdo a la prueba de Tukey.

57

Fig. 3. Concentraciones de Steinernema carpocapsae cepa All; en la mortalidad de
Anastrepha ludens. Los tratamientos que comparten letras iguales no son
significativamente diferente (P< 0.05); de acuerdo a la prueba de Tukey.

58

Fig. 4. Concentraciones de Steinemema carpocapsae cepa Mexicana; en la
mortalidad de Anastrepha luden. Los tratamientos que comparten letras iguales no
son significativamente diferentes (P< 0.05); de acuerdo a la prueba de Tukey.

Por su parte S. carpocapsae cepa Mexicana presento el valor ms alto de
mortalidad con 4000 Jls/ml con el 75.23 %, con igual significancia las
concentraciones de 5000, 6000 y 3000; presentaron el 72.68, 70.13 y 68.85
respectivamente; las mortalidades ms bajas presentadas por esta especie fueron
las obtenidas con 2000 y 1000 Jls/ml al reportar el 52.27 y 48.45 %,
respectivamente. El testigo presenta una mortalidad natural no mayor del 10%
(Fig.4).
Al realizar el anlisis de varianza de la mortalidad, causada por las
concentraciones de nematodos de cada especie, no se encontraron diferencias
estadsticas entre especies. Al aplicar las distintas especies/cepas de nematodos
empleados en este estudio a larvas de G. mellonella; estos mostraron un 100% de
patogenicidad. (Fig. 5).
59

Fig. 5. Mortalidad de Anastrepha Iudens expuesta a seis concentraciones de
juveniles infectivos de S. carpocapsae cepas Mexicana y AH y H. indica. Letras
distintas indican diferencias estadsticas utilizando la prueba de Tukey (P < 0.05).

Los resultados del anlisis Probit para el CL
50
y CL
90
representan el nmero
de Jls que causan el 50 y 90 % de mortalidad respectivamente en la poblacin de
A. Iudens (Cuadro 5). El valor ms bajo de CL
50
fue presentado por la especie H.
indica con 7.23 nematodos por cm
2
de suelo, intervalos de confianza= 0.968 15-
63 y con un CL
90
de 168.13 nematodos por cm
2
de suelo, intervalos de confianza
= 81.26 1047.25 (Fig. 6) le sigue en orden descendente las especies S.
carpocapsae cepa Mexicana que mostr un CL
50
2
de
suelo, intervalos de confianza = 20.84 - 34.15 y un CL90 de 378.77 nematodos por
cm
,
de suelo, intervalos de confianza = 141.85-68701.93 (Fig. 7) Steinernerma
60
carpocapsae cepa All reporta el CL
50
ms alto de las especies evaluadas al
presentar con 33.22 nematodos por cm
2
de suelo, intervalos de confianza 19.91
44.68 y un CL
90
2
de suelo, intervalos de confianza =
100.688 - 629.127 (Fig. 8).

Cuadro 5. Valores de la CL
50
, CL
90
, intervalos de confiaza, pendiente, intercepcin
y X
2
de H. ndica y Steinernema carpocapsae cepas All y Mexicana sobre estados
inmaduros de A. luden

X
2

0.613

1.088

Nematodos
Especie /raza

Heterorhabditis
indica

Steinernema
carpocapsae
cepa Mex

Stienemema
carpocapsae
cepa All

CL
50

7.23

19.31

33.22

Intervalos
de confianza
al 95%

Inferior
superior

0.968 15.63

20.84 34.15

19.91 44.68

CL
90

168.138

378.77

164.58

Intervalos
de confianza
al 95%

Inferior
Superior

81.26
1047.25

141.85
68701.93

100.688
629.127

Pendiente
(ES)

0.938
(0.249)

0.991
(0.356)

1.844
(0.470)

Intercepcin

2.501
0.854 (ES)

1.936
1.234 (ES)

-1.131
1.633 (ES)

1.741

61

Fig. 6. Recta de regresin del valor probit de la mortalidad y el logaritmo de las
dosis de H. indica en Anastrepha ludens.

62

Fig. 7. Recta de regresin valor probit de la mortalidad y el logaritmo de las dosis
de Steinernema carpocapsae cepa Mexicana en Anastrepha ludens.

63

Fig. 8. Rectas de regresin del valor probit de la mortalidad y el logaritmo de las
dosis de Steinernema carpocapsae cepa All en Anastrepha ludens.

64

Fig. 9. Rectas de regresin del valor probit de la mortalidad y el logaritmo de las
dosis de H. indica, Steinernema carpocapsae cepas All y Mexicana en Anastrepha
ludens.

65

V. DISCUSIN

En el presente estudio se encontr variabilidad de respuesta en la
patogenicidad de las diferentes especies y razas de nematodos evaluados, sobre
los estados inmaduros de la mosca Mexicana de la fruta A. ludens.

Los resultados del primer estudio muestran que las especies
Heterorhabditis indica, Steinernema cepas Mexicana y All causaron la mortalidad
ms alta al tener respectivamente el 71.13, 53.03 y 51.2 % de estados inmaduros
de A. ludens a 2000 Jls/ml asimismo que las especies Heterorhabditis
bacteriophora HP88 y Steinernema riobrave presentaron una patogenicidad de
47.29 % y 38.26 respectivamente (Cuadro 4).

Con relacin con lo sealado arriba se tiene que los resultados de H. indica
son relevantes por la patogenicidad exhibida y por no encontrndose a la fecha
reporte de patogenicidad de esta especie en Anastrepha ludens.

Con respecto a S. carpocapsae cepas Mexicana y AII puede observarse
que presenta una patogenicidad aceptable; aunque estos resultados pueden
parecer bajos al ser comparados con los resultados obtenidos por Beavers y
Calkins (1984) quienes reportan que utlizando 1000 Jls por caja Petri de S. feltiae
cepas Mexicana, AH y Breton, encontraron una mortalidad del 90.7 %, 88.1 y 83.0
%, respectivamente, sobre A. suspensa. No obstante, esta alta mortalidad de
larvas hay que considerarla con moderacin ya que por una parte se ha
demostrado que las larvas jvenes de Anastrepha resultan ser ms susceptibles
que las larvas de mayor edad (Toledo et al.,1999) y por otra parte los nematodos
tienen mayor posibilidad de contacto con larvas en las cajas de Petri.

La cepa H. bacteriophora HP88 present una baja mortalidad (47.29%) de
A. ludens, comparada con las especies H. indica (71.13 %) y S. carpocapsae
cepas AH y Mexicana 53.03 % y 51.2 %, respectivamente. Los resultados de
66
patogenicidad relativamente bajos obtenidos de H. bacteriophora HP88 en este
estudio pudieron ser causados por las condiciones de humedad en las que se
realiz el estudio; ya que aunque sta se mantuvo constante a 15 %; es muy
probablemente que no haya sido suficiente para esta especie en particular para
que sobreviviera o fuera altamente infectiva.

La hiptesis del efecto de la humedad en la relativa infectividad de H.
bacteriophora HP88; esta sustentada por los estudios de Lui y Glazer (2000) sobre
la sobrevivencia a la desecacin de los nematodos heterorhabditidos donde
encontraron que los juveniles infectivos de H. bacteriophora requieren un periodo
gradual y ms grande de adaptacin que los steirnermatidos y asimismo
presentan una variacin considerable de tolerancia a la desecacin entre las
diferentes cepas de Heterorhabditis. As como tambin lo sealado por Csontos
(2002) respecto a que H. bacteriophora en suelos arenosos con baja humedad no
es capas de moverse hacia el hospedero.

Por otra parte la patogenicidad del 47.29 % de H. bacteriophora mostrada
en el suelo franco arenoso utilizado en este estudio, contrasta con lo reportado por
Lezama et al., (1996) quienes encontraron hasta un 82.5 % de mortalidad en A.
Iudens en un suelo arenoso migajonoso a 15 % de humedad. Sin embargo, ellos
utilizaron H. bacteriophora cepa NC y una concentracin de 4000 Jls/ml.

Respecto al bajo porcentaje de mortalidad (38.26 %) exhibida por S.
riobrave en contra de Anastrepha ludens, esta puede ser atribuida a la
concentracin de 2000 JIs/ml utilizada; ya que Lezama et al., (1996) en un estudio
similar reportan hasta un 90 % de mortalidad de Anastrepha ludens con una
concentracin de 4000 Jls /ml. Asimismo se tienen los estudios de Converse y
Grewal (1998) que indican que al evaluar diferentes especies de nematodos con
diversos rangos de temperatura y concentraciones de nematodos en contra el
gusano Cyclocephala hirta (Coleoptera: Scrabaidae) encontraron que la
patogenicidad de S. riobrave esta en funcin a las altas temperaturas y
67
concentraciones de nematodos (30C y 6250 Jls/larva). Adems, por su parte
Gazit et al., (2000) reportan que la infectividad de S. nobrave cepa Texas en
contra de larvas del tercer estadio de C. capitata alcanz ms del 80 de mortalidad
con 100JIs/cm mencionando que la patogenicidad de esta especie depende de
tasa nematodo/larva sealando que probablemente sea por el nmero de
nematodos que son requeridos para infectar una larva.

Los resultados obtenidos en este estudio revelan que el mayor porcentaje
de mortalidad de A. Iudens, causado por las diferentes especies de nematodos fue
en el estado de pupa. Estos resultados difieren con los encontrados por Lezama et
al. (1996) quienes encontraron que la mayor patogenicidad de los nematodos
entomopatgenos en A. Iudens se manifest en el estado de larva. Similares
resultados en moscas han sido reportados por Kaya (1984) en Composilura
concinnata (Mg.); Beaver y Calkins (1984) en A. suspensa; Lindegren y Vail (1986)
en C. capitata, Lindegren et al.(1990) en C. capitata, Dacus curcubitae y Dacus
dorsalis y Gazit et al. (2000) en C. capitata.

Los nematodos entomopatgenos penetran usualmente al hospedero a
travs de las aberturas naturales del cuerpo como la boca y el ano (Renn, 1998;
Glazer y Salame, 2000); espirculos (Triggiani y Poinar, 1976) o directamente a
travs de las partes suaves del integumento (Bedding y Molyneux, 1982; Peter y
Ehlers, 1994; Koppenhofer et al., 2000).

El alto porcentaje de patogenicidad de los nematodos evaluados en este
estudio sobre las pupas de Anastrepha ludens se debi a que se emplearon larvas
del tercer estadio prximas a pupar y aunque la patogenicidad se manifest en
estado de pupa; la infectividad se produjo en estadio de larva. Estos resultados
son consistentes con los encontrados por Geden et al. (1986) en mosca
domstica, Musca domestica (Diptera: Muscidae). Aunque tambin pudo ser que
la patogenicidad de los nematodos en las pupas sea el resultado de la penetracin
de los mismos en las membranas intersegmentales antes de que la escloritizacin
68
de la cutcula fuera completada (Fraenkel y Bnaskaran, 1973).

Por otra parte la patogenicidad de los nematodos en el estado de pupa
encontrados en mis resultados coincide con los reportados por Patterson y Lacey
(1999) quienes descubrieron que S. carpocapsae; S. feltiae. S. riobrave; H.
bacteriophora y H. marelatus causaron una mortalidad de pupas en la mosca de la
cereza (R. indefferens) entre 40 y 72 % con 6300 JIs/ml. De igual manera,
Saunders y Webster (2000) reportan un 10 a 30 % de pupas muertas del gusano
del cono Strbilomyia appalachensis Michelsen (Diptera: Anthomyiidae) con H.
megidis a una concentracin de 1250 a 2500 JIs/ml, respectivamente; indicando
que los JIs fueron capaces de penetrar la pupa pero fueron necesarios niveles
altos del inculo.

La penetracin de los Jls de la familia Heterorhabditidae se ve favorecida
por la presencia de un diente dorsal mediante el cual puede raspar la cutcula y
entrar directamente al hemocel de ciertos insectos (Bedding et al., 1983; Georgis,
1992). Por su parte los JIs de la familia Stiernernematidae carece de este diente
dorsal. Esta diferencia en ambas familias no ha evidenciado diferencias en la
capacidad de penetracin de los JIs, los estudios de Mrcek et al.,(1988) as lo
demuestran. En los resultados de este estudio se encuentra esta tendencia.

El uso de ensayos de dosis- respuesta para comparar la eficacia de
diferentes nematodos bajo condiciones especificas fue recomendado por Fan y
Hominick (1991a).

Con relacin al experimento de concentraciones letales se puede observar
que las tendencias de patogenicidad de las especies seleccionadas son
congruentes con las que se presentaron en el primer estudio. Igualmente, H.
indica, S. carpocapsae cepas AII y Mexicana mostraron un porcentaje
relativamente constante sobre los rangos de las dosis (Fig. 5).
69

En funcin al CL
50
puede observarse que H. indica fue la especie con
mayor patogenicidad sobre Anastrepha luden, al presentar el CL
50
ms bajo con
7.23 nematodos por cm
2
de suelo; le siguen en orden descendente las especies S.
carpocapsae cepa Mexicana con un CL
50
2
de suelo y
S. carpocapsae cepa All con un CL
50
2
. En estos
resultados se destaca la patogenicidad de H. indica que tiene un CL
50
dos veces
ms bajas que S. carpocapsae cepa Mexicana y ms de tres veces que S.
carpocapsae cepa All. Al realizar el anlisis de esta patogenicidad se encontr que
no existen diferencias significativas en las tres especies basndose en el traslape
de sus lmites de confianza (Fig. 7 9).

El valor de la pendiente se relaciona de manera positiva con la
homogeneidad de respuesta. De acuerdo a esto se puede observar que S.
carpocapsae cepa AII presenta la pendiente ms alta con 1.69; le sigue en orden
descendente S. carpocapsae cepa Mexicana con 0.99 y H. indica con 0.93.
Respecto a estos valores se tiene que las pendientes con valores bajos son
aceptadas como una caracterstica tpica de ensayos de dosis-respuesta
obtenidas en entomopatgenos con endotoxinas (Burgues y Thompson, 1971;
Renn y Wright 2000).

H. indica ha mostrado gran potencial como agente de control biolgico en
otras insectos plaga as lo demuestran los trabajos de Berry et al., (1997) quienes
sealan que H. indica fue la mejor especie de entre siete especies o razas de
nematodos evaluados en escarabajo colorado en papa, Leptinotarsa decemlineata
(Say) (Coleoptera:Chrysomelidae). Asimismo Shapiro et al., (1999) determinaron
que H. indica fue la especie ms virulenta en la supresin del barrenador de la
caa de azcar Diaprepes abbreviatus (L).

Las estimaciones de CL
50
de la especie S. carpocapsae cepa Mexicana se
tiene los trabajos de Epsky y Capinera, (1994) quienes encontraron un CL
50
con
un rango de 4 a 91 nematodos por larva de Agrotis ipsilon (Hanfnage,) Spodoptera
70
frugiperda (J.E. Smith) y G. mellonella (L.). Por su parte Lindegren et al., (1993)
obtuvo un CL
50
de 8.2 nematodos por larva de G. melonella empleando S.
carpocapsae cepa All con esta misma especie; Castillo y Marban (1996) reportan
un CL
50
de 13.5 nematodos por larva de broca del caf (Hypothemus hampei
Ferr.).

Dentro de los insectos del Orden Diptera se han utilizado S. carpocapsae
(S.feltiae) en contra de Musca domestica estimndose un CL
50
de 75 nematodos
por larva (Geden et al., 1986). Por su parte Taylor et al. (1998) con esta misma
especie de nematodo y hospedero obtuvieron un CL50 de 58 nematodos por larva.
Respecto a las moscas de la fruta se tiene los trabajos de Lindegren y Vail (1986)
quienes establecieron un CL
50
de 560, 920 y 1290 nematodos por larvas del tercer
estadio de C. capita, D. dorsalis y D.curcubitae, respectivamente. Asimismo
indican un CL
50
equivalente a 38 nematodos por cm
2
; este valor como puede
observarse es mayor de lo encontrado para las especies evaluadas en este
estudio.

De lo anteriormente expuesto se puede percibir que existe dificultad para
comparar directamente los resultados encontrados en esta investigacin con otros
estudios debido a las diferencias entre especies, razas y cepas de nematodos as
como tambin como por la diversidad de hospederos empleados.

En conclusin los resultados encontrados en la investigacin permiten
comprobar la hiptesis de patogenicidad diferencial de las especies evaluadas en
larvas y pupas de Anastrepha ludens.

Por otra parte es importante destacar la patogenicidad exhibida en los
estados inmaduros de A. ludens de las especies de nematodos S. carpocapsae
cepa Mexicana y AII y H. indica. Donde esta ltima sobresale por presentar el CL
50

ms bajo colocndola de esta manera con gran potencial en la utilizacin como
agente de control biolgico de la mosca Mexicana de la fruta.
71

Con base en lo anterior es importante continuar la evaluacin de estas
especies bajo condiciones de campo a fin de determinar su infectividad,
patogenicidad, persistencia e impacto en el ecosistema y as poder determinar su
viabilidad de uso como agentes de control biolgico dentro de un programa de
manejo integrado de la mosca Mexicana de la fruta A. ludens.
72

VI. CONCLUSIONES

Los nematodos entomopatgenos Heterorhaditis bacteriophora cepa HP88,
Heterorhabditis indica, Steinernema carpocapsae cepas All y Mexicana y
Steenernema riobrave son capaces de infectar y parasitar larvas de tercer estadio
y pupas de Anastrepha ludens.

Existen diferencias de patogenicidad entre las cepas de nematodos
entomopatgenos. Sobresali la especie H. ndica con respecto a las dems
especies en los estados de larva y pupa de la mosca Mexicana de la fruta
Anastrepha ludens.

Las especies Heterorhabditis indica, Steinernema carpocapsae cepas
Mexicana y All mostraron la mayor patogenicidad en la mosca de la fruta.

Los nematodos entomopatgenos evaluados tienen potencial como agentes
de control biolgico de larvas y pupas de la mosca Mexicana de la fruta.

La concentracin dependiente de la mortalidad usada en A. ludens mostr
que varias especies de nematodos son canditadas para ser usadas en el manejo
integrado de la plaga.
73

VII. PERSPECTIVAS DE INVESTIGACIN

Es necesario evaluar los nematodos entomopatgenos, de este estudio
bajo condiciones ambientales a fin de observar su comportamiento en infectividad,
patogenicidad y persistencia en Anastrepha ludens.

Es conveniente evaluar la patogenicidad estas especies de nematodos
entomopatgenos en Anastrepha oblicua, Anastrepha serpentina y Anastrepha
striata.

Es necesario evaluar el impacto de los nematodos entomopatgenos en los
enemigos naturales de larvas, pupas y adultos de Anastrepha ludens.

Estimar el costo de produccin y aplicacin de los nematodos
entomopatgenos utilizados como agentes de control biolgico en el manejo
integrado de la mosca de la fruta Anastrepha ludens Loew.
74
VIII. BIBLIOGRAFA

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DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
PRESENTE
En atencin a que el C. Miguel Angel Reyes Hernndez, alumno egresado de la
Maestra en Ciencias, rea Biotecnologa, ha realizado todas las correcciones al
manuscrito de tesis que present al cuerpo acadmico de revisores, constituido
por los C. Dra. Maril Lpez Lavn, MC. Arnoldo Michel Rosales y el MC. Salvador
Guzmn Gonzlez, profesores investigadores de la Universidad de Colima. As
como las indicadas por los asesores, Dr. Jaime Molina Ochoa y Dra. Astrid
Eben, le solicito su atenta gestin ante quin corresponda, para que se autorice la
impresin del documento de tesis titulada: Patogenicidad de nematodos
entomopatgenos (Nematoda: Steinernematidae, Heterorhabditidae) en
larvas y pupas de la mosca de la fruta, Anastrepha ludens Loew (Diptera:
Tephritidae), as como se realicen las gestiones y trmites ante las autoridades
pertinentes para que el candidato opte al Grado correspondiente.
Esta tesis ha sido dirigida por el Dr. Jaime Molina Ochoa y la Dra. Astrid Eben de
la Universidad de Colima y del Instituto de Ecologa, A. C., de Xalapa, Veracruz,
respectivamente.
Agradezco su atenta gestin anticipadamente, reciba mi consideracin distinguida.
Atentamente
Estudia*Lucha*Trabaja
c.c.p. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado. Director de la FCBA.
c.c.p. Archivo.
c.c.p. Interesado.
Dr. Sergio Aguilar Espinosa.
Coordinador del Posgrado en Biotecnologa
de la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias
de la Universidad de Colima.
P r e s e n t e
Se le informa que la tesis titulada Patogenicidad de nematodos
entornopatgenos (Nematoda: Steinernematidae: Heterorhabditidae) en larvas y
pupas de mosca de la fruta Anastrepha ludens Loew (Diptera: Tephritidae), que
presenta el C. Miguel Angel Reyes Hernndez, alumno del programa de Maestra en
Ciencias, rea: Biotecnologa, rene los requisitos de forma y contenido, por lo cual
autorizo al alumno para que haga llegar a usted el documento, con el fin de que sea
revisado por el H. cuerpo acadmico que el Consejo Tcnico del Posgrado designe.
Agradeciendo de antemano la atencin a la presente, quedo de usted.
Atentamente
Xalapa. Ver. a 11 de Diciembre de 2002.
Dra. Astrid Eben
Asesora de tesis.
Investigadora del Instituto de Ecologa, A.C.
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AGROPECUARIAS
TECOMAN, COL., 28 100. TEL/FAX: (3 13) 324-42-37
COORDINADOR DEL POSGRADO DE LA F.C.B.A.
PRESENTE
Por este conducto hago de su conocimiento, que despus de haber revisado el
contenido del nuevo documento de tesis del C. Miguel Angel Reyes Hernndez, titulado:
Patogenicidad de nemtodos entornopatgenos (Nematoda: Steirnernematidae:
Heterorhabditidae) en larvas y pupas de mosca de la fruta Anastrepha ludens Loew
(Diptera: Tephritadae), considero que rene los elementos suficientes de estructura y
contenido de un documento de tesis de Maestra en Ciencias, por ello doy mi aprobacin
para su edicin.
Sin otro particular, quedo de usted,
AT E NT AME NT E
11 de Abril de 2003
c.c.p. Ing. Rodolfo V. Morentn Delgado.- Director de la F.C.B.A.- Para su conocimiento.
c.c.p. Interesado.
c.c.p. Archivo
Dr. SERGIO AGUILAR ESPINOZA
RESPONSABLE DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
PRESENTE
Por medio del presente informo a Usted, que he concludo la revisin de
tesis de maestra del C. MIGUEL ANGEL REYES HERNNDEZ titulada:
PATOGENICIDAD DE NEMATODOS ENTOMOPATGENOS (Nematoda:
Steinermatidae; Heterorhabditidae) EN LARVAS Y PUPAS DE LA MOSCA DE
LA FRUTA Anhastrepha ludens Low (Diptera: Tephritidae); en la cual se han
incorporado las observaciones y recomendaciones sugeridas; por lo tanto expreso
mi aprobacin para que se realice la impresin final y contine con los
trmites correspondientes para la obtencin del grado de MAESTRO EN
CIENCIAS.
Agradeciendo de antemano su atencin a la presente, quedo de usted.
ATENTAMENTE
Dr. MARIL LPEZ LAVN *
Integrante del Comit Evaluador
Ccp. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado.
Director de la FCBA
Ccp. Interesado
COORDINADOR DEL POSGRADO DE LA F.C.B.A.
PRESENTE
En atencin a que el C. MIGUEL ANGEL REYES HERNNDEZ,
alumno egresado de la Maestra en Ciencias, rea Biotecnologa, ha realizado
todas las correcciones al manuscrito de la tesis titulada PATOGENICIDAD
DE NEMATODOS ENTOMOPATGENOS (Nematoda: Steinernematidae,
Heterorhabditidae) EN LARVAS Y PUPAS DE MOSCA DE LA FRUTA
Anastrepha ludens Loew (Diptera: Tephritidae) y en virtud de que rene todas
las caractersticas de forma y fondo, doy mi aprobacin para su edicin.
Agradeciendo de antemano su atencin a la presente, quedo de usted
HEL ROSALES
omit Evaluador
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