Anlise Orgnica e Espectroscopia

Cromatografia
CROMATOGRAFIA
Cromatografia definida como um mtodo fsico de
separao de dois ou mais diferentes compostos, pela
distribuio entre duas fases, uma das quais a fase
estacionria, chamada de adsorvente, e a outra a fase
mvel, chamada de eluente
CLASSIFICAO
CLAE (HPLC) Slido(Poroso) Lquido(alta presso)
GPC Slido(Poroso) Lquido(alta presso)
CTI Slido(Resina) Lquido
CGL Lquido Gs
CGS Slido Gs
CLS(Coluna) Slido Lquido
CCD(TLC) Slido Lquido
Tipo Fase Estacionria Fase Mvel
Tabela 1: Tipos mais comuns de cromatografia
Cromatografia em Camada Delgada
e Cromatografia em Coluna
Aparato de Tswett
CLASSIFICAO


Fase Mvel

Fase Estacionria

Tipo
Lquido Slido CCD(TLC)
Lquido Slido CLS(Coluna)
Gs Slido CGS
Gs Lquido CGL
Lquido Slido(Resina) CTI
Lquido(alta
presso)
Slido(Poroso) GPC
Lquido(alta
presso)

Slido(Poroso)

HPLC

Tabela 1: Tipos mais comuns de cromatografia

Adsorventes

1. Slica gel (SiO
2
)
Slica gel G - contm gesso (CaSO
4
)
Slica gel H - no tem aditivo
Slica gel F 254 - contm fluorescena 2%, absorve
luz UV a 254 nm.

2. Alumina (xido de alumnio, Al
2
O
4
)
_______________________________________________
papel
celulose
amido
acar
silicato de magnsio
sulfato de clcio
cido silcico
slica gel
florisil
xido de magnsio
alumina
carvo ativado (Norit)
Aumento da
interao
com
compostos
polares
Eluentes

Podemos utilizar como eluente um nico solvente, que
ser capaz de separar todos os componentes de uma
mistura, como tambm uma mistura de solventes.

Srie eluotrpica
____________________________________________
ter de petrleo
ciclohexano
tetracloreto de carbono
benzeno
clorofrmio aumento da
cloreto de metileno polaridade
acetato de etila
acetona
piridina
etanol
metanol
gua
cido actico
_____________________________________________
Interaes
R NH
2
+

-
-
-

O
O
O
Al
+

-
-

O
O
O H
Al
+

-
-
-

O
O
O
Al
C

+ -
O
H OR +
-
OOCR
interao por
coordenao
interao
dipolo dipolo
formao de sais
interao por
ponte de hidrognio
Al
O
O
O

-
-
-

+


Quanto mais polar o grupo funcional, mais forte a ligao
com a slica ou alumina.
Mecanismos de particionamento na
fase estacionria
ABsoro
(dissoluo no meio)
ADsoro
(ligao na superfcie)
Cromatografia em Camada Delgada, CCD
(Thin Layer Chromatography, TLC)

Consiste na separao dos componentes de uma mistura
atravs da migrao diferencial sobre uma camada delgada
de adsorvente retido sobre uma superfcie plana.
A separao resulta das diferentes velocidades com que os
componentes individuais da mistura avanam sobre a
placa.
Cada substncia possui uma interao prpria com a slica
e com o solvente, dependendo dos grupos funcionais
presentes na estrutura.

Etapas bsicas:
Praparao da cromatoplaca; Preparao da amostra;
Eluio; Revelao

rf (rate of flow) ou fr (fator de reteno):

rf = distncia percorrida pelo produto
distncia percorrida pelo eluente
A cromatoplaca


aplicao 1 aplicao 2
fronteira de slica (cuide para
no aplicar prximo borda
que o solvente no chegue at aqui)
marca que indica
a linha de aplicao
(as aplicaes
devem estar a mesma
altura)
(os pontos de aplicao devem estar acima da linha do eluente)
aps a eluio,
faa uma marca que mostre at onde o eluente correu

ter de
petrleo
CaCO
3
mistura de
pigmentos
pigmentos
separados
Cromatografia a Gs
(CG)
Fase estacionria: matriz rgida com carga (+) ou
(-). Separao dos contra-ons.
Troca inica
Separao de acordo com o tamanho das
molculas. Aplicao: polmeros e biomolculas.
Excluso
Ex: slica modificada.
Fase reversa fase estacionria mais apolar e
fase mvel mais polar.
Fase ligada
Fase estacionria: lquido suportado. Partio
Fase estacionria: slica, alumina.
Mecanismos de adsoro: pontes de hidrognio,
dipolo-dipolo;
Ativao da fase estacionria
Fase normal fase estacionria mais polar e
fase mvel mais apolar
Adsoro
Observaes Mecanismo de Soro
Filtros
A
i
r
H
y
d
r
o
g
e
n
G
a
s
C
a
r
r
i
e
r
Coluna
Cromatografia a gs (CG)
sistema de gs
injetor
coluna
detector
sistema de
coleta de dados
Computador
Seringa / amostrador
Injetor
Detectores
Vlvulas
H
RESET
Controle de temperatura
Isotrmico Gradiente
0
40
80
120
160
200
240
0 10 20 30 40 50 60
Time (min)
T
e
m
p

(
d
e
g

C
)
Forno
Tipos de coluna
Camada interna
porosa aberta
Coluna capilar
empacotada
(diam. > 1 mm)
Coluna tubular
aberta revestida
Colunas
Empacotadas
Capilares
Detectores
Universal e seletivo; Alta sensibilidade;
Anlise quali e quantitativa;
Massas (MSD)
Seletivo para compostos contendo tomos
eletronegativos;
Muito usado na anlise de compostos
organoclorados;
Captura de Eltrons (ECD)
Universal, simples, preo moderado;
Sensibilidade e linearidade altas;
Ideal para anlise de traos de compostos
orgnicos;
Ionizao de Chama (FID)
Simples, robusto e barato;
Sensibilidade e linearidade moderadas;
Apropriado para anlise de rotina, mas no para
traos;
Uso comum na anlise de lquidos orgnicos
volteis ou gases;
Condutividade Trmica
(TCD)
Caractersticas Detector
FATOR DE RESPOSTA
Embora as reas dos picos sejam relacionadas com a frao molar de
cada componente na fase mvel, elas no podem ser
quantitativamente relacionadas, j que a resposta do detector varia
com a classe do composto.
Fatores de correo: massa (W
f
) e frao molar (M
f
)
100 100 194.4 207.1 Total
29.9 28.5 55.4 0.89 61.9 Acetato de
etila
11.2 11.9 23.2 1.00 23.2 Benzeno
37.7 28.1 54.6 0,70 78.0 Heptano
21.2 31.5 61.2 1.39 44.0 Etanol
% Molar
(no-corrigido)
% Molar
(A x Mf/194 x
100)
A x Mf Mf Area
(A)
(mm
2
)
Composto
Exemplo de emprego de fatores de correo
Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
(CLAE)
High Performance Liquid
Chromatography (HPLC)
A CLAE (HPLC) um tipo de cromotatografia caracterizada
pelo uso de presso para empurrar uma fase mvel atravs
de uma coluna onde uma fase estacionria permitir a
separao de misturas complexas com alta resoluo
Sistema CLAE da Varian
Sistema de
distribuio de
solvente
Detector
UV/Vis
Reservatrio
de solventes
para CLAE
Coluna
Injetor
Detector de arranjo de diodos Workstation
Fique ligado
nestas 4 telas
Sistema de distribuio de solventes
Sistema de distribuio de solvente
Injetor
%A %B %C Fluxo Presso
{H
2
O} {MeOH} (mL/min) (atmos.)
Ready
Bomba ternria
A
C
B
Do reservatrio
de solventes
C
o
l
u
n
a
Para o
detector
Para a coluna
Para o injetor
Atravs da bomba
carregar
injetar
Detector UV/Vis
ABS AUFS RunTime EndTime
0.001 2.000 238 0.00 min 10.0 min
Ready
Detector policromtico
(arranjo de diodos)
Espectro UV
Cromatograma
Reset
Ready
Espectro UV
{mostra abs. UV}
Cromatograma
{picos, R
t
}
A
B
S
.
Time
A
B
S
.
Wavelength
UV
max
UV
max
R
t
R
t
Solues aquosas de
compostos inicos
Mede a variao na
condutividade trmica
Condutividade
Trmica
Oxidantes e redutores Oxidao e reduo Eletroqumico
Universal
Mede variaes no ndice
de refrao da fase mvel
ndice de Refrao
Compostos
fluorescentes
Mede a emisso Fluorescncia
Compostos aromticos
e outros cromforos
Mede a transmitncia UV/visvel
Aplicaes Princpio Detector
Cromatografia de fase reversa vs.
cromatografia de fase normal
Fase normal Fase reversa
Fase estacionria Polar (silicagel) No-polar (C18)
Fase mvel
No-polar
(solvente orgnico)
Polar
(aquoso/orgnico)
Movimento da amotra Apolar: mais rpida Polar: mais rpida
Separao baseada
em
Polaridades diferenes
(grupos funcionais)
Diferena na cadeia
hidrocarbnica
Fases estacionrias
Superfcie polar
O O O
| | |
OSiOSiOSiOH
| | |
O O O
| | |
OSiOSiOSiOH
| | |
O O O
bulk (SiO
2
)
x
surface
Superfcie no-polar
Silicagel
O O O
| | |
OSiOSiOSiOR
| | |
O O O
| | |
OSiOSiOSiOR
| | |
O O O
bulk (SiO
2
)
x
surface
Silicagel derivatizada
Onde R = C
18
H
37
a
cadeia hidrocarbnica
(deriv. de slica
octadecilsilanol ou
C18)
fase normal fase reversa
6 meses; 3 meses; Tempo de
treinamento
Excelente, separao de
at 50 componentes;
Excelente, separao de at
200 componentes;
Capacidade
analtica
Boa, confiabilidade de
coleta e capacidade de
automatizao;
Pobre, at razovel;
Capacidade
preparativa
Min at muitas horas; min at poucas horas; Tempo de anlise
10
-9
g; 10
-12
g;
Limite de
deteco
Lquidos ou slidos,
inicos ou covalentes;
M = 32- 4.000.000 g.mol
-
1
;
Gases, lquidos ou slidos;
M = 2 -1200 g.mol
-1
;
Tipo de amostra
Amostra solvel na fase
mvel;
Amostra ou derivado voltil,
termicamente estvel na
temperatura de operao;
Requisitos para a
amostra
CLAE CG Fator