UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Laboratorio de Gestin Ambiental en la Industria

Alimentaria
Tema:
Medida de la eficacia de los productos de desinfeccin

Profesora: Martnez Tapia, Patricia.
Alumnos:
Farfn Rodriguez, Lucero.
Ttito Carazas, Jorge Luis.

2014-II


I. INTRODUCCIN

II. MATERIALES Y MTODOS
2.1 Materiales
Desinfectante pino y cloro
Estufa
Medio de cultivo : Caldo nutritvo y Agar Plate Count
Beakers 1000ml
Pipetas 5ml
Materiales de vidrio
Paos de limpieza
Mica de 15x15cm

2.2 Metodologa
2.2.1 superficie limpia
1. Se limpi la superficie a desinfectar con solucin detergente.
2. Con la mica se delimit el rea y se procedi a realizar un
raspado con la ayuda del hisopo en toda el rea delimitada.
3. Los microorganismos recogidos en el hisopo se vertieron en el
caldo nutritivo de 10ml, del cual se extrajo 1ml para ser aadido
al siguiente tubo de ensayo de 9ml, el mismo procedimiento se
aplic para el tercer tubo de ensayo con el caldo nutritivo.
4. Se homogeniz las muestras.
5. De cada tubo de ensayo se extrajo 0.1ml el cual se sembr en
el Agar Plate Count
6. Se incubo a 37C por 3das

2.2.2 superficie infectada
1. Se desinfect la superficie limpia con el weter que tiene la
solucin desinfectante, el tiempo fue de 10 minutos para acte
el desinfectante.
2. Con la mica se delimit el rea y se procedi a realizar un
raspado con la ayuda del hisopo en toda el rea delimitada.
3. Los microorganismos recogidos en el hisopo se vertieron en el
caldo nutritivo de 10ml, del cual se extrajo 1ml para ser
aadido al siguiente tubo de ensayo de 9ml, el mismo
procedimiento se aplic para el tercer tubo de ensayo con el
caldo nutritivo.
4. Se homogeniz las muestras.
5. De cada tubo de ensayo se extrajo 0.1ml el cual se sembr en
el Agar Plate Count
6. Se incubo a 37C por 3das
III. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Segn Wildbrett (2000) la operacin de desinfeccin es un conjunto de
operaciones que tienen como objetivo la reduccin temporal del nmero total de
microorganismos vivos y la destruccin de los patgenos y alterantes, inhibiendo
su desarrollo a la vez que injuriando muchas clulas microbianas; pero
previamente se debe de dar una limpieza, que generalmente se realiza con
soluciones de detergentes. En la prctica primero se realiz la operacin de
limpieza y luego se desinfectaron las superficies a evaluar.
Segn Wildbrett (2000) menciona que la toma de muestra por hisopado se realiza
despus de la limpieza y la desinfeccin de la superficie; se recomienda esperar
una seis horas entre el fin de la desinfeccin y la toma de muestras, para limitar el
efecto del desinfectante. En la prctica se realiz una limpieza con agua y
detergente, luego una desinfeccin, sin embargo no se esper seis horas para la
toma de muestra como afirma el mencionado autor.
Para evaluar la eficacia de los desinfectantes se tom una muestra por el mtodo
hisopado para la posterior cuantificacin de los microorganismos, segn el mtodo
expuesto arriba, denominado Mtodo de la Torunda.
Las pruebas se realizaron en el laboratorio de microbiologa de alimentos, debido
a que es un laboratorio de microbiologa, las mesas analizadas potencialmente
presentan gran cantidad de microorganismos y de diferentes variedades, donde un
agente de desinfeccin puede presentar una mejor accin desinfectante que otro
segn el tipo de microorganismo dominante. La presencia de materiales extraos
juega una gran importancia durante la desinfeccin, por tal razn se busc la
eliminacin por lavado de cualquier material extrao para ambos casos. Con esto
se busc reducir el nmero de variables para solo determinar la capacidad de
desinfeccin a diferentes concentraciones y diferentes tipos de desinfectante.



Cuadro 1. Resultados comparativos de la actividad antimicrobiana de los agentes
desinfectantes
Solucin de Pino (Boreal) Solucin de cloro (Clorox)
16 ml 8 ml 12 ml 24 ml
Antes Despus Antes Despus Antes Despus Antes Despus
10^0 : 11 10^0 : 7 10^0 : 27 10^0 : 5
10^0 :
contaminado
10^0 : 5 y
un hongo
10^0 : 16 10^0 : 4
10^-1 : 2 10^-1 : 2 10^-1 : 7 10^-1 : 1 10^-1 : 4 10^-1 : 3 10^-1 : 1 10^-1 : 3
10^-2 : 1 10^-2 : 2 10^-2 : 8 10^-2 : 4 10^-2 : 2 10^-2 : 2 10^-2 : 2 10^-2 : 2

En el Cuadro 1 se observan las diferencias en el recuento de colonias en los
diferentes desinfectantes y a su vez, en diferentes concentraciones. Para el caso
de la solucin de Pino de 8 ml, se observa una clara disminucin del nmero de
colonias para las tres diluciones, en cambio para la misma solucin desinfectante
y an ms concentrada (16 ml) se observa que solo en la muestra 10
0
hay una
disminucin del nmero de colonias, ya que en las siguientes diluciones la
cantidad de colonias no slo se mantiene, sino que incluso aumenta en una
unidad. Esto indica que no hubo una correcta siembra del desinfectante, pues a
una menor concentracin ste tuvo buen efecto bactericida, o tambin una posible
contaminacin en la muestra.
Para el caso de la solucin de cloro en la solucin menos concentrada (12 ml) se
observ una ligera disminucin del nmero de colonias en la segunda y tercera
dilucin, mientras que en la primera se registr contaminacin y a los X das se
visualizaron cinco colonias y la presencia de un hongo. En la solucin de cloro de
mayor concentracin (24ml) si hay una gran diferencia en el nmero de colonias
para la primera dilucin, de 16 colonias al inicio a 4 colonias, evidencindose su
efecto bactericida. Para el caso de las siguientes diluciones el nmero se
mantiene e incluso aumenta, probablemente por causas ya mencionadas como
errores cometidos durante la siembra.
Para ambos desinfectantes se observa un mayor efecto bactericida en las ms
altas concentraciones, sin embargo el desinfectante ms eficaz por haber
eliminado la mayor cantidad de cultivos microbianos, fue la solucin de pino. Este
resultado se basa en la composicin de cada desinfectante. Para la solucin de
pino, el agente activo es el amonio cuaternario (al X%) mientras que para la
solucin de cloro, es el hipoclorito de sodio al 4%.
Segn Kahrs (1995) el cloro tiene propiedades de blanqueamiento y germicidas y
se usa corrientemente para la desinfeccin, el saneamiento o para purificar el
agua. Los desinfectantes y agentes de saneamiento a base de cloro se
encuentran fcilmente, son baratos, tienen un amplio espectro antimicrobiano y
representan un riesgo mnimo para el medio ambiente. Las soluciones acuosas de
cloro (que se obtienen al disolver hipocloritos, como en la prctica) tienen una
rpida accin bactericida; tambin tiene un efecto virulicida relacionado con la
destruccin de sistemas esenciales de enzimas.
Cuando el cloro se pone en solucin, siendo este un agente oxidante reacciona
inmediatamente a los iones metlicos, a varios radicales y a la materia orgnica.
Al terminarse esta reaccin, la cantidad de cloro que sigue activa, rpidamente
interacta con los agentes patgenos en un proceso que resulta desinfectante.
Casi todos los desinfectantes a base de cloro acuoso han sido reemplazados por
compuestos a base de cloro orgnico (Kahrs, 1995).
En la prctica se realiz el conteo de cultivos microbianos pero no se determin
con exactitud de que microorganismo se trataba, de acuerdo a Kahrs (1995) las
bacterias, virus y esporas muestran una resistencia variable a los desinfectantes
clorados. Tambin seala que este tipo de desinfectantes son muy eficaces
cuando no hay materia orgnica en las superficies que se estn desinfectando, tal
como las mesas del laboratorio. Otros factores que influyen en la eficacia de estos
desinfectantes son la concentracin, el pH, la presencia de protenas naturales y
de amonaco.
Para el caso de la solucin de pino que tena como compuesto activo el amonio
cuaternario, Kahrs (1995) seala que los amonios cuaternarios sintticos son
surfactantes catinicos, que se usan como limpiadores/desinfectantes y como
detergentes suaves. Utilizados en soluciones acuosas como la utilizada en la
prctica, combina la limpieza y desinfeccin en una sola aplicacin. Son ms
eficaces en un medio ligeramente alcalino. Cuando han sido diluidos
correctamente, son desinfectantes eficaces, no txicos y biodegradables. An con
estn en contacto con aguas duras y/o un poco de materia orgnica, muestran un
amplio espectro de actividad antibacteriana, fungicida , antivrica y esporicida. Sin
embargo, los amonios cuaternarios son ineficaces contra Mycobacterium
tuberculosis.
Segn la empresa CLOROX COMPANY (http://www.clorox.com.pe/), que elabora
ambos productos (CLOROX y PINESOL), el CLOROX, cuando los usas
diariamente matas el 99.9% de los grmenes. Y el PINESOL es un poderoso
limpiador y desinfectante, adems desodoriza, elimina la grasa y la suciedad,
elimina el 99.9% de los grmenes, desinfecta contra Salmonella entrica,
Staphylococcusaureus, virus de Influenza A (Hong Kong cepa)
y Trichophytonmentagrophytes (hongo del pie de atleta) y su tiempo de accin es
10 minutos.
La principal diferencia entre estos seria que, el CLOROX es un desinfectante
clorado, mientras que el PINESOL es limpiador y desinfectante que segn Garzon
(2004) los desinfectantes clorados tienen un efecto rpido sobre una gran
variedad de microorganismos, y son relativamente barato y son los ms
apropiados para la desinfeccin general de las plantas de productos alimenticios.
Deben usarse en concentraciones de 100 a 250 miligramos de cloro disponible por
litro, y pierden su eficacia ante la presencia de residuos orgnicos.



IV. CONCLUSIONES

El test en uso es un mtodo de eficacia de los productos desinfectantes que
relaciona directamente el efecto bactericida en el conteo de cultivos
microbianos.
La solucin desinfectante ms eficaz fue la solucin de pino que tiene como
agente activo el amonio cuaternario.
A mayor concentracin del agente desinfectante (cloro y amonio
cuaternario) mejor efecto bactericida.
Dado a los recuentos en las placas, crecimiento mayor de
microorganismos, despus del proceso de desinfeccin, se podra concluir
que puede haber existido un error en el conteo o el proceso de
desinfeccin no fue el adecuado.


V. BIBLIOGRAFA
Kahrs, R.F. 1995. Principios generales de la desinfeccin. Revista Ciencia y
Tecnologa. Vol 14 (1). Pgs.: 143-163. Consultado el 28/09/14. Disponible
en: http://www.oie.int/doc/ged/D8972.PDF.
GARZN, 2004. Uso de Desinfectantes. Disponible en:
http://www.saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica/Todo%20IIH/007%20
Desinfectantes.pdf. Consultada el 19/09/14
Wildbrett, G. 2000. Limpieza y Desinfeccin en la Industria Alimentara.
Editorial Acribia S.A. Zaragoza Espaa.