INSTITUTO AGRONMICO

CURSO DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA

TROPICAL E SUBTROPICAL






AVALIAO DE MTODO ALTERNATIVO
PARA EXTRAO E FRACIONAMENTO
DE SUBSTNCIAS HMICAS
EM FERTILIZANTES ORGNICOS




ELIEZER AUGUSTO BAETA DE OLIVEIRA




Orientadora: Mnica Ferreira Abreu




Dissertao submetida como requisito parcial
para obteno do grau de Mestre em
Agricultura Tropical e Subtropical, rea de
Concentrao em Tecnologia da Produo
Agrcola








Campinas, SP
Junho 2011
ii
SUMRIO

LISTA DE ABREVIAES E SMBOLOS .................................. iii
RESUMO ................................................................................................................................. iv
ABSTRACT .............................................................................................................................. v
1 INTRODUO ..................................................................................................................... 1
2 REVISO DE LITERATURA .............................................................................................. 3
2.1 Fertilizante Orgnico ........................................................................................................... 3
2.2 Substncias Hmicas ............................................................................................................8
2.3 Controle de Qualidade e Fiscalizao de Fertilizantes ..................................................... 12
2.4 Anlise de Substncias Hmicas em Fertilizantes ............................................................ 14
2.5 Analise Elementar ............................................................................................................. 18
2.6 Justificativa ....................................................................................................................... 19
3 MATERIAL E MTODOS ................................................................................................. 20
3.1 Caracterizao das Amostras e dos Ensaios ..................................................................... 20
3.2 Execuo do Mtodo Conforme IN n 28 ..........................................................................21
3.2.1 Extrao ......................................................................................................................... 21
3.2.2 Fracionamento ................................................................................................................ 22
3.2.3 Determinao do teor de carbono orgnico total nas fraes ........................................ 22
3.3 Execuo do Mtodo Conforme Benites et al. (2003) ...................................................... 23
3.3.1 Extrao ......................................................................................................................... 23
3.3.2 Fracionamento ................................................................................................................ 23
3.3.3 Determinao do teor de carbono orgnico total nas fraes ........................................ 24
3.4 Execuo das Modificaes .............................................................................................. 24
3.5 Anlise Estatstica ............................................................................................................. 25
4 RESULTADOS E DISCUSSO ......................................................................................... 26
5 CONSIDERAES GERAIS ............................................................................................. 33
6 CONCLUSO ..................................................................................................................... 33
7 REFERNCIAS ................................................................................................................... 34
ANEXO I ................................................................................................................................ 40
ANEXO II ............................................................................................................................... 42
ANEXO III .............................................................................................................................. 46

iii
LISTA DE ABREVIAES E SMBOLOS

AAO: Associao de Agricultura Orgnica
AF: cido flvico
AH: cido hmico
COBPM: Compostos Orgnicos de Baixo Peso Molecular
COT: Carbono Orgnico Total
IHSS: International Humic Substances Society
IN: Instruo Normativa
EHT: extrato hmico total
MAPA: Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento
MOL: Matria Orgnico leve

iv
Avaliao de mtodo alternativo para extrao e fracionamento de substncias hmicas
em fertilizantes orgnicos


RESUMO

As substncias hmicas so reconhecidas como principal componente da matria orgnica,
influenciando as propriedades qumicas, fsicas e biolgicas dos solos. A adio destes
compostos no solo pode estimular o crescimento das plantas, porm os humatos comerciais
no parecem conter quantidades suficientes das substncias necessrias para produzir os
efeitos benficos anunciados. A fiscalizao desses produtos de responsabilidade do
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) que define o uso de um mtodo
que deixa a desejar quanto economicidade e a rapidez de resultados. Portanto o objetivo
deste trabalho foi avaliar e propor alternativas ao mtodo oficial de extrao e fracionamento
de substncias hmicas em fertilizantes orgnicos baseado no diferencial de solubilidade em
cido e base. Foram realizados oito ensaios com sete repeties cada em trs amostras de
fertilizantes orgnicos comerciais adquiridos conforme a relao, cido hmico e cido
flvico de cada um. Os ensaios consistiram em modificaes do mtodo proposto pela IN n
28 e BENITES et al. (2003), tendo em evidncia a massa inicial, o extrator, o tempo de
contato do extrator com a amostra e separao das fraes via centrifuga e filtro. Foram
determinados os teores de carbono orgnico total para as fraes cido hmico, cido flvico
e extrato hmico total. Os resultados foram analisados estatisticamente por anlise de
varincia e mdias comparadas por Scott Knott e por contraste. O ensaio recomendado para
quantificao de extrato hmico total, cido hmico e cido flvico o mtodo que consiste
na extrao com pirofosfato de sdio com hidrxido de sdio por 24 horas em uma alquota
referente a 30 mg de carbono orgnico total e fracionamento sob membrana de celulose de
45m. O mtodo recomendado permite a otimizao da rotina analtica em virtude do menor
uso de insumos e do uso de vidraria e equipamentos mais simples.

Palavras chave: cido flvico, cido hmico, carbono
v
Evaluation of alternative method for organic fertilizers extraction and fractionation of
humic substances


ABSTRACT

The humic substances are recognized as a major component of organic matter, affecting the
chemical, physical and biological properties of soils. The addition of these compounds to the
soil can stimulate the plant growth, but the commercial humates appear not to contain enough
quantities of the substances needed to produce the benefits advertised. The inspection of these
products is responsibility of the Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA)
which makes use of a method that leaves much to desire from the point of view of economy
and time required to obtain the results. Therefore, the objective of this work was to evaluate
and to propose alternatives to the official method of extraction and fractionation of humic
substances in organic fertilizers based on its differential solubility in acid and base. Eight tests
were run with seven replicates each in three samples of commercial organic fertilizers
acquired as the ratio of humic acid and fulvic acid in each sample. The tests consisted of
modifications of the method proposed by IN n 28 and BENITES et al. (2003), namely the
initial mass, the extracting solution, the contact time of the extracting solution with the sample
and the separation with centrifuge or filter. The total organic carbon of the humic acid, fulvic
acid and humic extract total fractions were determined. The results were statistically analyzed
by ANOVA and means were compared by Scott Knott and contrast. The recommended test
for quantification of total humic extract, humic acid and fulvic acid is the method that consists
in the extraction with sodium pyrophosphate and sodium hydroxide for 24 hours using rate of
30 mg of to total organic carbon and the separation on a cellulose membrane of 45 m. The
featured method allows for optimization of analytical routine due to its lower inputs and the
use of glassware and simpler equipment.
Keywords: fulvic acid, humic acid, carbon
1

1 INTRODUO


A matria orgnica do solo pode ser dividida em dois grupos fundamentais. O
primeiro constitudo pelos produtos da decomposio dos resduos orgnicos e do
metabolismo microbiano como protenas e aminocidos, carboidratos simples e complexos,
resinas, ligninas e outros. O segundo grupo representado pelas substncias hmicas
propriamente ditas, constituindo aproximadamente 90% da reserva total do carbono orgnico.
As substncias hmicas podem ser classificadas segundo a sua solubilidade, reatividade e
tamanho de suas molculas em humina, cidos hmicos e flvicos. A humina a frao
insolvel tanto em meio alcalino como em meio cido, o cido hmico a frao escura
extrada geralmente em meio alcalino e insolvel em meio cido diludo e os cidos flvicos
so fraes coloridas alcalino-solveis que se mantm em soluo aps a remoo dos cidos
hmicos por acidificao.
A adio de substncias hmicas em solos representa vantagem econmica, mas a
resposta adubao foliar representa uma alternativa por causa das quantidades necessrias
relativamente pequenas. As formas de matria orgnica mais utilizadas so: esterco animal,
palhadas, compostos de lixo, torta de mamona, vermicomposto, lodo de esgoto e compostos
de leonardita e turfa.
A avaliao do potencial de cidos hmicos isolados de diferentes fontes de matria
orgnica sobre o crescimento e desenvolvimento de plantas de interesse agronmico tem sido
explorada em experimentos em casa de vegetao. Efeitos diretos de sua aplicao sobre o
crescimento e metabolismo das plantas tm sido descritos para cidos flvicos e para cidos
hmicos. Trabalhos relatam o efeito sinergtico da interao entre substncias hmicas e
fertilizantes minerais sobre o crescimento de plantas cultivadas em soluo nutritiva,
mostrando efeitos positivos consistentes na biomassa vegetal. Experimentos em reas de
produo apontam resultados positivos e significativos para o aumento de produtividade de
diversas culturas em talhes que receberam adubao foliar com solues de cidos hmicos.
Alguns parmetros em condies de laboratrio so influenciados pelas substncias hmicas,
tais como aumento no comprimento e peso de brotos, influncia na iniciao da raiz, no
crescimento da plntula, da inflorescncia e na absoro de nutrientes.
Devido ao custo relativamente alto na gerao de produtos que contenham substncias
hmicas, parece que perspectivas futuras para uso econmico desses produtos na agricultura
2
so melhores para a aplicao via foliar. Em virtude da necessidade dos fertilizantes para a
produo agrcola nacional e considerando a relevante participao dos mesmos no custo de
produo, a fiscalizao sobre a produo, importao e comrcio de fertilizantes, se faz
necessria para garantir a conformidade dos mesmos colocados disposio dos produtores
rurais. O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) possui a atribuio
legal de fiscalizar a produo e o comrcio de fertilizantes.
Os estabelecimentos produtores e importadores de produtos a granel devem executar o
controle de qualidade das matrias-primas e dos produtos fabricados ou importados, bem
como das operaes de produo. Amostras de fertilizantes so coletadas com a finalidade de
comprovar a conformidade do produto, baseado em mtodos oficiais.
O mtodo recomendado para determinao de substncias hmicas foi oficializado
com a publicao da IN n 28 em 2007 contemplando a determinao do extrato hmico total,
dos cidos hmicos e dos cidos flvicos baseados no procedimento da diferena de
solubilidade e precipitao com cidos e bases. Os mtodos para anlise de fertilizantes so
baseados nos mtodos para solo e na literatura cientfica sendo semelhante s adotadas por
outros pases. Tratando-se de substncias hmicas a metodologia oficial brasileira
semelhante adotada na Espanha. Esse mtodo deixa a desejar quanto aos aspectos de
economicidade e rapidez de resultados.
Os fatores que tem dificultado os avanos no estudo de substncias hmicas em solos
tropicais e fertilizantes orgnicos so a ausncia de ensaios de proficincia, de material de
referncia certificado e a falta de mtodos para extrao, fracionamento e, especialmente
quantificao das fraes hmicas. A International Humic Substances Society (IHSS)
recomenda um mtodo para a extrao das substncias hmicas de material de solo e posterior
fracionamento em cido hmico e acido flvico e humina, baseado na solubilidade diferencial
destas fraes em meio alcalino e cido. Contudo, este mtodo laborioso e deve ser
empregado quando se pretende extrair substncias hmicas com alto grau de pureza para fins
de caracterizao. Nas anlises de rotina sugerida a adaptao deste mtodo de extrao e
fracionamento visando quantificao das fraes hmicas por meio de procedimento
simplificado e de fcil execuo para amostras de solo conforme BENITES et al., (2003).
Alm dos mtodos citados existem outros procedimentos utilizados para fracionamento das
substncias hmicas como a extrao com diferentes solventes orgnicos, a cromatografia de
excluso com base no tamanho molecular, a cromatografia de excluso com base no tamanho
molecular e alta presso, a cromatografia com afinidade por metais, a cromatografia em fase
reversa, a ultrafiltrao, a eletroforese e por diferena de solubilidade e precipitao com
3
cidos e bases, porm o nico procedimento que fraciona as substncias hmicas em cido
hmico e cido flvico dentre os apresentados aquele dado pela diferena de solubilidade e
precipitao com cidos e bases.
Para atender a essa grande e crescente demanda os laboratrios tem, muitas vezes, que
lanar mo de artifcios que acelerem os resultados e, entre eles, esto os mtodos
simplificados. Esses mtodos so bem mais rpidos e econmicos, mas exigem bastante
ateno, porque, sendo muito sensvel, qualquer variao pode resultar em erros.
Portanto a hiptese foi que modificaes do mtodo da IN n 28 e BENITES et al.
(2003) implicam na obteno de resultados semelhantes aos originais para os teores de cido
hmico, cido flvico e extrato hmico total. O objetivo desse trabalho foi propor uma
alternativa simplificada, econmica e com menor gerao de resduos, considerando
princpios do mtodo proposto para amostras de solo conforme BENITES et al. (2003).

2 REVISO DE LITERATURA


2.1 Fertilizante Orgnico

Fertilizante, sinnimo de adubo, que deriva da palavra Dubban, termo do idioma
frncico, falado na Idade Mdia por povos francos e germanos, significa uma interveno
destinada a melhorar a terra. Por volta de 1850, essa palavra j fazia parte do idioma
portugus. Para alguns lingistas, adubo vem do latim ad bero, que quer dizer adjetivo que
se ajusta a adubo quando o assunto terra (DIAS, 2005).
A histria da adubao ocorreu concomitante histria da agricultura. A adubao era
feita com materiais retirados da natureza, como madeira, trapos e at esqueletos humanos
retirados de catacumbas. O adubo passou a ser um produto de primeira necessidade na
agricultura, que ento comeava a se intensificar. O adubo virou negcio na Europa devido ao
avanado estgio de sua agricultura em algumas regies, na medida em que pela primeira vez
se puseram em prtica a compra, a venda e a exportao de adubos naturais. Para aumentar a
produtividade das lavouras, agricultores passaram a aplicar na terra esterco animal, lixo
urbano, lodo de esgotos e estrume humano. Todavia, esses produtos no passavam de meras
fontes alternativas de adubo, cobrindo pouco as necessidades que no paravam de crescer nas
lavouras. A maior parte dos adubos vinha mesmo do estrume animal, com todos os seus
problemas (DIAS, 2005).
4
Atualmente, os cultivos intensivos nas mesmas regies ano aps anos promovem na
camada superficial do solo perdas, seja pela eroso, seja pela prpria cultura que, em parte,
exportada para consumo, como conseqncia a planta comea a ter deficincia nutricional e a
colheita diminui. A nica maneira de resolver esse problema e conseguir de novo boas
colheitas atravs de uma adubao bem feita, dando-se planta os elementos de que
necessita. Atualmente, a abordagem ecolgica e a compreenso de um desenvolvimento
sustentvel face crescente perda do potencial produtivo e indiscriminada degradao dos
ecossistemas assumem grande importncia na pesquisa cientfica. A qualidade do solo
considerada como a capacidade de manuteno da produtividade biolgica, da qualidade
ambiental e da vida vegetal e animal saudvel na face da Terra (DORAN & PARKIN, 1994).
Essa qualidade est estreitamente correlacionada ao sistema de produo e a
sustentabilidade do mesmo, sendo sensvel s alteraes decorrentes das prticas de manejo.
A melhoria da qualidade do solo obtida quando ocorre a melhoria dos atributos qumicos,
fsicos e biolgicos do solo que podem ser atravs da adoo de prticas agrcolas que
favoream a qualidade do solo. A incorporao de matria orgnica pode auxiliar o processo
de regenerao de reas degradadas do ponto de vista fsico, melhoria da estrutura do solo,
reduz a plasticidade e a coeso, aumenta a capacidade de reteno de gua e a aerao,
permitindo maior penetrao e distribuio das razes. A matria orgnica do solo atua
diretamente sobre a fertilidade do solo por constituir a principal fonte de macro e
micronutrientes essenciais s plantas, como tambm indiretamente, atravs da disponibilidade
dos nutrientes, devido elevao do pH, alm de aumentar a capacidade de reteno dos
nutrientes, evitando suas perdas. Biologicamente, aumenta a atividade da biota do solo, sendo
fonte de energia e de nutrientes para a mesma (CANELLAS, 2005).
As formas de matria orgnica mais utilizadas so: esterco animal, palhadas,
compostos de lixo, torta de mamona, vermicomposto, lodo de esgoto e compostos de
leonardita, as quais apresentam caractersticas distintas e desvantagens semelhantes, como
baixos teores em nutrientes e matria orgnica humificada, alto custo e, em alguns casos,
presena de patgenos e elevados teores de metais txicos. Nesse sentido, a turfa apresenta-se
como um material orgnico promissor, pois naturalmente rica em substncias hmicas,
amplamente disponvel em todo o territrio nacional e de baixo custo (FRANCHI et al.,
2003). Segundo Instruo Normativa N 23 de 31 de agosto de 2005 (BRASIL, 2005) a
matria orgnica o composto principal do fertilizante orgnico que definido como produto
de natureza fundamentalmente orgnica, obtido por processo fsico, qumico, fsico-qumico
5
ou bioqumico, natural ou controlado, a partir de matrias-primas de origem industrial, urbana
ou rural, vegetal ou animal, enriquecido ou no de nutrientes minerais.
O interesse pelo consumo de fertilizantes orgnicos no Brasil tem aumentado
significativamente nos ltimos anos, devido principalmente busca de alternativas de manejo
do solo com enfoque orgnico e com aspectos distintos do sistema convencional de uso
intensivo de fertilizantes qumicos. Esse interesse est estreitamente relacionado expanso
do mercado de produtos orgnicos, que, segundo a revista Globo Rural online de 11 de
fevereiro de 2011, o faturamento est em torno de R$ 400 milhes. Segundo a Associao de
Agricultura Orgnica (AAO), produtos orgnicos so aqueles em que o sistema de produo
exclui o uso de fertilizantes sintticos de alta solubilidade e pesticidas (SIMES, 2007).
Segundo CANELLAS (2005) na agricultura familiar, comum encontrar o esterco
curtido (composto) dos animais como a principal fonte de adubao da terra. O processo
modernizador tratou de adubar a planta. No sistema solo, o processo de fornecimento de
nutrientes pela adubao orgnica distinto daqueles em que os adubos industriais so
empregados. Na adubao convencional, so empregados compostos de alta solubilidade e
concentrao. As formulaes e as quantidades de adubos a serem utilizadas so
desenvolvidas buscando fornecer somente o que as plantas necessitam para produzir. Nos
modelos de adubao orgnica, a dinmica diferente. Se, na utilizao dos adubos
industriais, o objetivo suprir as plantas, a adubao orgnica busca o equilbrio entre os
diferentes constituintes do solo. A disponibilizao dos nutrientes contidos nos compostos e
resduos lenta, o que permite a reduo das perdas. Alm disso, observa-se o aumento da
populao de minhocas, insetos, fungos e bactrias benficas ao solo. Esses organismos
vivem associados s razes e podem ser teis s plantas mediante processos simbinticos ou
mesmo pela mineralizao dos resduos. Outro fato que merece destaque a melhoria das
propriedades fsicas do solo, permitindo um melhor desenvolvimento radicular e
consequentemente um melhor desenvolvimento vegetal CANELLAS (2005).
O fertilizante orgnico, ao fermentar e se decompor, gera hmus e compostos minerais
assimilveis pelas plantas. Assim como a matria orgnica, para fornecer os nutrientes,
necessita sofrer um processo de decomposio microbiolgica, acompanhado da
mineralizao dos seus constituintes orgnicos. A transformao de fontes estruturalmente
identificveis como os acares, polissacardeos, protenas em compostos hmicos amorfos
chamado de humificao, e o grau de humificao um parmetro importante para
determinao da qualidade da matria orgnica do solo (ZECH et al., 1997; BAYER et al.,
2002) e de resduos orgnicos (ROVIRA et al., 2002; PLAZA et al., 2005). Em relao
6
resposta de uma dada cultura, a diferena entre aplicar diretamente resduos orgnicos
estabilizados e no estabilizados est na quantidade e poca em que os nutrientes
mineralizados estaro disponveis para as plantas, assim como na intensidade com que ativam
os microrganismos do solo. No caso de adubos orgnicos que tm como objetivo aumentar a
capacidade de troca catinica do solo, o ideal a aplicao de material j humificado
(PLAZA et al., 2003; GRIGATTI et al., 2004). Alm disso, se o composto no estiver
estabilizado, pode causar efeitos txicos para as plantas (ATIYEH et al., 2001). Os compostos
frescos ou no estabilizados podem atingir altas temperaturas devido fermentao e inibir a
germinao de sementes e o alongamento de razes, alm de contaminar o operador, o solo e
os vegetais (SEDIYAMA et al., 2008).
Uma das formas de adubao orgnica mais empregada a aplicao de compostos de
origem animal e vegetal. A compostagem um processo natural de decomposio dos
resduos de diferentes origens, que mediado por uma infinidade de organismos. Tem por
objetivo acelerar a estabilizao da matria orgnica, permitindo que o material resultante
possa ser utilizado como condicionador de solo e fornecedor de nutrientes. Durante o
processo da compostagem, os microrganismos utilizam a matria orgnica como fonte de
energia, nutrientes e carbono. A partir de ento, ocorrem diversas reaes bioqumicas,
formando como resultado final, gs carbnico, calor e material orgnico, normalmente de alta
qualidade para o uso agrcola. Restos de cultivos, lixo e lodo de estao de tratamento e
dejetos da criao de animais podem ser o material a ser compostado. Os nutrientes presentes
no produto final da compostagem so liberados de forma lenta e gradual, diferentemente do
que ocorre com os adubos sintticos. A utilizao de composto de lixo urbano e de lodos da
estao de tratamento de esgoto, com finalidade agrcola, pode ser prejudicial se forem
encontrados metais pesados e microrganismos patognicos nas fontes de matria orgnica ou
no produto final, o composto. Como esses elementos esto presentes em pilhas, borrachas,
tintas e baterias, lixo hospitalar, h necessidade de uma seleo prvia do material a ser
compostado, alm de um rigoroso monitoramento (CANELLAS, 2005).
De maneira geral, o processo de compostagem envolve duas fases distintas. A
primeira, denominada bioestabilizao, ocorre at aproximadamente 50 dias de compostagem
e caracterizada pela reduo progressiva da temperatura do material aps atingir um pico
aproximado de 70 C. Organismos patognicos encontrados nos resduos urbanos, como
salmonelas, so eliminados nesta fase pelo calor gerado pelo prprio processo biolgico. A
fase seguinte denominada maturao e dura aproximadamente 30 dias. A aplicao de
compostos pode aumentar a produtividade das culturas, a capacidade de troca de ctions, o
7
teor de nutrientes disponveis e melhorar as caractersticas da matria orgnica humificada.
Alm do efeito imediato, a aplicao de compostos orgnicos possui efeito residual, podendo
beneficiar culturas subseqentes (CANELLAS, 2005). SEDYAMA (2009) concluiu que o
composto orgnico produzido com palha de caf, bagao de cana-de-acar e dejeto lquido
de sunos foi eficiente na nutrio das plantas de pimento e consequentemente no aumento
na produtividade de frutos.
A vermicompostagem tambm uma prtica muito utilizada para acelerar a
estabilizao da matria orgnica dos resduos orgnicos. As minhocas atuam como
aceleradores do processo de decomposio. De forma semelhante ao observado na aplicao
de compostos os benefcios da aplicao de vermicomposto vo desde o fornecimento de
nutrientes at as melhorias de caractersticas fsicas e biolgicas do solo. YAGI et al., (2003)
aplicaram doses equivalentes a 0, 14, 28, 56 e 70 toneladas ha
-1
de vermicomposto de esterco
bovino e observaram correlao direta entre a dose do fertilizante orgnico e os teores de P,
Mg, K, Ca e o aumento linear no contedo da matria orgnica do solo. Aumentos
significativos no contedo de carbono nas fraes humificadas tambm foram relatados a
partir da aplicao de vermicomposto.
Em reas de produo de sunos, o grande volume produzido de rejeitos necessita de
destino adequado. Muitos agricultores utilizam esse material diretamente nas lavouras com a
finalidade de fornecimentos de nutrientes. SEDYAMA et al. (2008) caracterizou e verificou a
viabilidade da fermentao de esterco suno para uso como fertilizante orgnico.
O esterco bovino talvez seja o material mais costumeiramente utilizado como adubo
orgnico. A partir da aplicao de diferentes doses de esterco bovino, SILVA et al. (2004)
observaram a influncia desse material sobre o teor de gua disponvel e sobre a reteno de
umidade do solo, com aumentos lineares de tais caractersticas. A aplicao do esterco
tambm alterou, de forma linear, o teor de P no solo, aumentou o nmero de espigas
empalhadas comercializveis e o rendimento de gros.
Alm dos resduos de origem animal, a aplicao de matria orgnica de origem
industrial e urbana pode ser tambm de interesse para a agricultura. A utilizao desses
materiais justificada pela necessidade de encontrar um destino apropriado para sua
reciclagem, evitando-se o risco do armazenamento de grandes quantidades de lixos e dejetos e
impacto ocasionado pela emisso desse material nos cursos de gua. A qualidade do material
incorporado ao solo limita, portanto, sua utilizao em larga escala. O uso agrcola do
composto de lixo s pode ser vivel do ponto de vista tcnico, social e ambiental se suas
caractersticas qumicas no possibilitarem alteraes que comprometam a qualidade do solo,
8
das guas e dos produtos resultantes. O uso intensivo de estercos, compostos,
vermicompostos encontra um obstculo na quantidade e no volume que deve ser transportado
at as lavouras. um trabalho penoso com gasto elevado de energia e que, dependendo da
distncia entre a fonte dos estercos e a lavoura a ser adubada, muitas vezes, pode no estar em
conformidade com a racionalidade do agricultor familiar (CANELLAS, 2005).

2.2 Substncias Hmicas

A matria orgnica do solo pode ser dividida em dois grupos fundamentais. O
primeiro constitudo pelos produtos da decomposio dos resduos orgnicos e do
metabolismo microbiano como protenas e aminocidos, carboidratos simples e complexos,
resinas, ligninas e outros. Essas macromolculas constituem, aproximadamente, 10 a 15% da
reserva total do carbono orgnico nos solos minerais. O segundo grupo representado pelas
substncias hmicas propriamente ditas, constituindo 85 a 90% da reserva total do carbono
orgnico (KONONOVA, 1982; ANDREUX, 1996). A formao das substncias hmicas se
d por inmeros mecanismos e rotas bioqumicas, que so mais ou menos atuantes de acordo
com a quantidade do substrato orgnico e das condies qumicas e ou bioqumicas do meio
onde se processam essas reaes (STEVENSON, 1982). Embora as substncias hmicas no
sejam consideradas polmeros, por no apresentarem uma unidade bsica definida que se
repita regularmente (HAYES et al, 1989), as mesmas se constituem de uma srie de unidades
estruturais aromticas, produzidas pela degradao microbiana de compostos orgnicos, que
se ligam por meio de ligaes covalentes, formando o ncleo da macromolcula (FRUND et
al., 1994; GUGGENBERGER & ZECH, 1994). A partir desse ncleo aromtico so
associados outros compostos existentes no meio, como compostos nitrogenados e substncias
alifticas (SCHNITZER & SCHUTTEN, 1992). Ao longo da macromolcula hmica so
encontrados diversos grupos funcionais, entre os quais esto os grupos fenlicos e
carboxlicos. De acordo com as condies do meio, fora inica e pH, os grupos funcionais da
molcula orgnica podem estar ionizados, representando importante fonte de carga para a
capacidade de troca catinica do solo e fazendo com que esta se comporte como um
polieletrlito (HAYES et al., 1989).
As substncias hmicas podem ser classificadas segundo a sua solubilidade e
reatividade, o que de certo modo, depende do tamanho de suas molculas (Tabela 1). So
classificadas em humina, cido hmicos e flvicos. A humina a frao insolvel tanto no
meio alcalino como no meio cido, o cido hmico a frao escura extrada geralmente em
9
meio alcalino e insolvel em meio cido diludo e os cidos flvicos so fraes coloridas
alcalino-solvel que se mantm em soluo aps a remoo dos cidos hmicos por
acidificao e possuem um maior contedo de grupos funcionais cidos. Alguns autores
consideram ainda os cidos himatomelnicos, que so a frao solvel em lcool dos cidos
hmicos (STEVENSON, 1994). Segundo VAUGHAN & McDONALD (1976), nas
substncias hmicas somente fraes de peso molecular menor so biologicamente ativas.
VAUGHAN & ORD (1981) atravs de estudos tambm indicaram que as fraes de cido
hmico de peso molecular baixo so absorvidas ativamente e passivamente pelas plantas,
enquanto que as de peso molecular maiores do que 50000 g.mol
-1
so absorvidas somente
passivamente. provvel que o cido flvico seja biologicamente mais ativo que o cido
hmico (CHEN, 1990). Esse fato corroborado pelos resultados dos estudos de VAUGHAN
& McDONALD (1976). Os cidos hmicos freqentemente contm fraes de peso
molecular baixo, portanto seu potencial para a atividade biolgica no deve ser subestimado.

Tabela 1 - Algumas propriedades qumicas importantes das diferentes fraes

Propriedades cidos flvicos cidos hmicos Humina
Peso molecular (D) 640 5000 10000 100000 >100000
CTC (cmol
c
kg
-1
) ~1400 ~500 <500
Fonte: adaptado de BENITES et al. (2003)

Substncias hmicas so amplamente reconhecidas como principal componente da
matria orgnica, influenciando indiretamente as propriedades qumicas, fsicas e biolgicas
dos solos (Tabela 2). A maior parte do carbono orgnico da superfcie do planeta encontra-se
na matria orgnica humificada, ou seja, nas substncias hmicas. Alm de fornecer
nutrientes para as plantas por meio da mineralizao (processo definido genericamente como
a transformao das formas orgnicas dos elementos em formas inicas atravs da ao das
enzimas dos microrganismos), as substncias hmicas tambm podem estimular diretamente
o desenvolvimento e o metabolismo das plantas atravs de mecanismos ainda no totalmente
elucidados. Em solos, a adio de compostos contendo substncias hmicas pode estimular o
crescimento de plantas pelo efeito do fornecimento de nutrientes minerais e presumivelmente
por causa dos efeitos das substncias hmicas, mas os humatos comerciais aplicados aos solos
agrcolas normalmente produtivos em taxas recomendadas por seus produtores no parecem
conter quantidades suficientes das substncias necessrias para produzir os efeitos benficos
10
anunciados. Aumentos de produo, com o uso de tais produtos, no parecem ser suficientes
para compensar os maiores custos de produo dos fazendeiros (CHEN & AVIAD, 1990).

Tabela 2 - Propriedades gerais das substncias hmicas e efeitos causados no solo

Propriedades Substncias hmicas Efeitos no solo
Cor
Apresentam colorao variando
de amarelo at escuro
Interferncia no matiz e no croma
do solo; reteno de calor
Reteno de gua
Podem reter at 20 vezes a sua
massa
Proteo contra eroso;
armazenamento de gua no solo
Unio de partculas
slidas
Cimentam partculas do solo,
formando agregados
Formao de estruturas no solo;
porosidade do solo; densidade do
solo
Complexao
Formam complexos especficos
(Cu
++
, Mn
++
, Zn
++
, Al
+++
) e no
especficos (Ca
++
, Cd
++
)
Detoxificao de ons txicos
(Al
+++
) aumenta a mobilidade de
ons
Insolubilidade em gua
Devido sua associao com
argilas e sais de ctions di e
trivalentes
Pouca matria orgnica perdida
com a gua de percolao
Efeito tampo
Tem funo tamponante em aplos
intervalos de pH
Ajuda a manter o equilbrio da
soluo do solo
Troca de ons
A acidez total das fraes isoladas
do hmus varia de 300 a 1400
cmol
c
kg
-1

Responsveis pela capacidade de
troca de ctions e de nions no solo
Mineralizao
A decomposio da matria
orgnica libera ons e molculas
(CO
2
, NH
4
+
, NO
3
-
, PO
4
-3
e SO
4
-2
)
Fornecimento de nutriente para o
crescimento das plantas
Adaptado de CANELLAS (2005).

ROSA (2009) prope o uso de substncias hmicas proveniente do carvo mineral
brasileiro. Entretanto, a adio de substncias hmicas em solos no econmica, mas a
resposta adubao foliar tem um maior potencial econmico por causa das quantidades
necessrias relativamente pequenas. Devido ao custo relativamente alto da gerao de
produtos que contenham substncias hmicas, parece que perspectivas futuras para uso
econmico desses produtos na agricultura so muito melhores para a aplicao de adubao
foliar (CHEN & AVIAD, 1990). MELO (2008) caracterizou em termos de propores de
substncias hmicas diversos fertilizantes orgnicos e condicionadores de solo como fontes de
substncias hmicas normalmente utilizadas na agricultura tais como o esterco bovino, o
esterco suno, o esterco de galinha, composto orgnico, material hmico comercial, substrato
orgnico e lodo de esgoto. A utilizao agrcola de resduos slidos, como adubo orgnico,
deve ser realizada segundo critrios tcnicos. Nesse caso, a quantificao dos teores de N
mineral e de N potencialmente mineralizvel presente nos resduos orgnicos critrio
importante para definir as doses de resduos a serem adicionadas nas lavouras (ABREU
11
JNIOR et al., 2005 citado por MELO, 2008). Novas pesquisas devem ser realizadas, para
estudar outras concentraes de cidos hmicos, mais adequadas ao fornecimento na forma
slida em recobrimento de sementes, bem como tratamento adicional para aumentar sua
disponibilidade (CONCEIO, 2008).
Efeitos diretos de sua aplicao sobre o crescimento e metabolismo das plantas tm
sido descritos para cidos flvicos (VAUGHAN & MALCOM, 1989) e para cidos hmicos
(CHEN & AVIAD, 1990). Vrios trabalhos relatam o efeito sinergtico da interao entre
substncias hmicas e fertilizantes minerais sobre o crescimento de plantas cultivadas em
soluo nutritiva, mostrando efeitos positivos consistentes na biomassa vegetal. A avaliao
do potencial de cidos hmicos isolados de diferentes fontes de matria orgnica sobre o
crescimento e desenvolvimento de plantas de interesse agronmico tem sido amplamente
explorada em experimentos em casa de vegetao (CHEN & AVIAD, 1990). Experimentos
em reas de produo apontam resultados positivos e significativos para o aumento de
produtividade de diversas culturas em talhes que receberam adubao foliar com solues de
cidos hmicos (BROWNELL et al., 1987). Na ltima dcada, estudos envolvendo associao
de substncias hmicas com bactrias diazotrpicas endofticas em plantas de interesse
agrcola tm intensificado devido as suas potencialidades como agente de promoo de
crescimento e proteo de plantas (OLIVARES, 2005). O recobrimento de sementes se
mostra como opo de inoculao de bactrias diazotrficas endofticas, da espcie
Herbaspirillum seropedicae (Z67), para garantir a sobrevivncia dessas bactrias, no
recobrimento, at a emisso das razes pelas plantas. A adio de cidos hmicos, bactria e o
uso conjunto estimularam o crescimento vegetal. Os cidos hmicos estimularam a
colonizao da microbiota nativa (CONCEIO, 2008).
Segundo CHEN (1990), alguns parmetros em condies de laboratrio so
influenciados pelas substncias hmicas, tais como aumento no comprimento e peso de
brotos, enraizamento, crescimento da plntula, inflorescncia e absoro de nutrientes. Efeitos
diretos ou indiretos favorveis tambm so observados, em resposta aplicao de
substncias hmicas. Tais efeitos nas colheitas agrcolas estavam relacionados aos aumentos
na concentrao de cidos flvicos na soluo do solo, o que favoreceu crescimento vegetal
ou aumentou as concentraes de micronutrientes solveis. Os efeitos diretos requerem
absoro pelo tecido da planta, tendo efeito em suas membranas, resultando em melhor
transporte de elementos nutricionais. Esses efeitos so: aumento da sntese de protenas e na
atividade de enzimas, atividade semelhante ao hormnio vegetal, aumento da fotossntese, e
efeitos indiretos na solubilizao de micronutrientes (ex: ferro, zinco, mangans) e alguns
12
macronutrientes (ex: K, Ca e P), reduo de nveis ativos de elementos txicos e aumento de
populao microbiana. Segundo NARDI (1991), os efeitos estimuladores do crescimento de
plantas se refletem na acelerao das taxas de crescimento radicular, incremento de biomassa
vegetal, alteraes na arquitetura do sistema radicular, tais como incremento da emisso de
plos radiculares e de razes laterais finas, resultando no aumento na rea
superficial/comprimento do sistema radicular. CANELLAS (2002) observou efeito positivo
para milho na atividade de H
+
-ATPase na membrana plasmtica atravs da expresso dessa
enzima, no crescimento radicular e no crescimento radicular lateral. BALDOTTO (2009)
verificou efeito positivo no crescimento vegetativo na fase de aclimatao de abacaxizeiro
proveniente de cultura in vitro.

2.3 Controle de Qualidade e Fiscalizao de Fertilizantes

O controle de qualidade dos fertilizantes teve incio com a chegada de Franz Dafert,
qumico austraco contratado pelo imperador D.Pedro II para ser o organizador e o primeiro
diretor do Instituto Agronmico de Campinas. Dafert criou no Instituto Agronmico um
laboratrio para aferir a qualidade dos adubos qumicos, devido ao comrcio inescrupuloso
que vendia adubos de m qualidade e por preos altos. J havia, ento, um grande nmero de
fazendeiros convencidos das necessidades dos adubos minerais, mas esses adubos eram caros
(DIAS, 2005).
Neste cenrio em que os fertilizantes so fundamentais para a produo agrcola
nacional e considerando a relevante participao dos mesmos no custo de produo, a
fiscalizao sobre a produo, importao e comrcio de fertilizantes, se faz necessria para
garantir a conformidade dos mesmos colocados disposio dos produtores rurais. O
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) possui a atribuio legal de
fiscalizar a produo e o comrcio de fertilizantes, conforme disposto na Lei n 6.894 de 16
de dezembro de 1980 que dispe sobre a inspeo e fiscalizao da produo e do comrcio
de fertilizantes, corretivos, inoculantes, estimulantes ou biofertilizantes, destinados
agricultura (BRASIL, 1980), regulamentada pelo Decreto n 4.954, de 14 de janeiro de 2004
(BRASIL, 2004).
Segundo o decreto, independentemente do controle e da fiscalizao do Poder Pblico,
os estabelecimentos produtores e importadores de produtos a granel devero executar o
controle de qualidade das matrias-primas e dos produtos fabricados ou importados, bem
como das operaes de produo. facultado aos estabelecimentos a realizao de seus
13
controles de qualidade por meio de laboratrios de terceiros cadastrados junto ao MAPA,
contratados para este fim. Amostras de fertilizantes so coletadas com a finalidade de
comprovar a conformidade do produto. As anlises so feitas em laboratrios oficiais ou
credenciados pelo MAPA, seguindo os mtodos oficiais previstos na Instruo Normativa n
28 de 27 de julho de 2007 (IN n 28) (BRASIL, 2007).
O mtodo publicado para determinao de substncias hmicas recente e foi
oficializado com a publicao da IN n 28 que contempla a determinao do extrato hmico
total, dos cidos hmicos e dos cidos flvicos. Essa instruo normativa atualiza a Portaria
n 31 de 8 de junho de 1982 que no previa a anlise de substncias hmicas, apenas a
determinao do teor de matria orgnica.
A Instruo Normativa N 23 de 31 de agosto de 2005 (BRASIL, 2005) normatiza as
especificaes, garantias, tolerncias dos fertilizantes orgnicos. Assim, fertilizante orgnico
definido como produto de natureza fundamentalmente orgnica, obtido por processo fsico,
qumico, fsico-qumico ou bioqumico, natural ou controlado, a partir de matrias-primas de
origem industrial, urbana ou rural, vegetal ou animal, enriquecido ou no de nutrientes
minerais. Os critrios exigidos como especificao e garantias dos fertilizantes orgnicos no
incluem as substncias hmicas, apenas o teor de carbono orgnico total, a umidade e a
capacidade de troca de ctions. As substncias hmicas so declaradas como outros
componentes e para tal existe uma tolerncia aceitvel que pode ser at 20 % quando os teores
declarados forem inferiores ou iguais a dois por cento ou duas unidades, e at 15 % para os
teores declarados superiores a dois por cento ou duas unidades.
As normas atualmente em vigor para fertilizantes orgnicos e organominerais tratam
superficialmente de atributos que indiquem a qualidade agronmica desses produtos como,
por exemplo, teores de cidos hmicos (DOMINGUES, 2007). No entanto, constata-se que
existe demanda por uma regulamentao mnima que estabelea um padro de qualidade dos
materiais produzidos. A revista Globo Rural de outubro de 1996, pginas 29 a 33, relatou que
produtores de hmus de minhoca esto encontrando competidores que claramente adulteram
seus produtos com o intuito de aumentar a sua quantidade produzida e comercializada. A
adulterao inclui a mistura de solo, o qual no se constitui um condicionador fsico e
qumico, descaracterizando a ao potencial do adubo orgnico. Outra fonte de adulterao a
ser considerada a oriunda da adio de carvo vegetal (SIMES, 2007). Apesar de trabalhos
terem mostrado que os subprodutos dessa produo (fino de carvo e extrato pirolenhoso) so
promissores para utilizao na agricultura (TSUZUKI et al., 2000; MIYASAKA et al., 2001).
Entretanto ZANETTI et al. (2003) utilizando os subprodutos da produo do carvo vegetal
14
na formao de porta-enxerto de limoeiro Citrus limonia Osbeck, verificaram diferentes
influncias no desenvolvimento das plantas, porm nenhum efeito benfico foi observado.

2.4 Anlise de Substncias Hmicas em Fertilizantes

De maneira geral, os fertilizantes so avaliados pelo teor e pela forma qumica dos
nutrientes presentes, atravs dos quais sero supridas as exigncias nutricionais das plantas. A
anlise qumica dos fertilizantes minerais permite avaliar suas especificaes e verificar se
esto de acordo com aquelas previstas na legislao ou garantidas pelo fornecedor. Atravs de
tcnicas tradicionais, esse controle analtico em geral satisfatrio, pois os fertilizantes so
insumos constitudos basicamente por compostos qumicos simples de frmula qumica
definida. Fertilizantes como fosfito de amnio, uria, cloreto de potssio, entre outros,
apresentam caractersticas qumicas como solubilidade, comportamento cido base e
temperatura de decomposio que podem ser inferidas a partir de textos de qumica
(RODELLA & ALCARDE, 1994).
A situao mais complexa com relao aos fertilizantes orgnicos e materiais
orgnicos em geral. Neles predominam compostos de alto grau de complexidade, que so os
compostos orgnicos. Compostos orgnicos podem ser vagamente caracterizados como
compostos que contm carbono. Essa classificao, contudo, suficientemente ampla para
incluir uma variedade imensa de compostos qumicos que podem apresentar muito pouco em
comum, alm de conter carbono em suas molculas. Quando se utilizam, na agricultura,
fertilizantes e produtos orgnicos, pretende-se usufruir benefcios que os adubos minerais no
podem proporcionar, mas que tambm no so oferecidos indistintamente por qualquer
material orgnico. A anlise qumica que atravs de mtodos simples se mostra adequada aos
fertilizantes minerais, requer recursos mais sofisticados para avaliar fertilizantes e materiais
orgnicos. A situao se mostra ainda mais complicada, quando se pretende aplicar resduos
industriais ou tratamento de esgotos urbanos em solos agrcolas (RODELLA & ALCARDE,
1994).
Vrios parmetros tm sido propostos para a determinao do grau de humificao de
compostos: relao envolvendo teores de cido hmico e flvico, aucares redutores, carbono
total e capacidade de troca de ctions SAVIOZZI et al. (1988). A maioria do conhecimento
sobre anlise de fertilizantes orgnicos advm dos estudos efetuados para anlise de solo,
como os processos de fracionamento e identificao de cido hmico e flvico. Os mtodos
15
aplicados a fertilizantes so adaptaes ou aplicaes diretas de metodologias estabelecidas
para analise de solo (ALLISON, 1965).
A caracterizao das propriedades qumicas das sustncias hmicas implica o seu
isolamento e separao dos constituintes inorgnicos do solo, gua ou sedimentos. O extrator
ideal deve retirar completamente as substncias hmicas sem alterar suas caractersticas e
deve ainda ser usado em qualquer tipo de solo, gua ou sedimento (STEVENSON, 1994).
Alm destas caractersticas essenciais, preciso adicionar mais duas: o extrator deve ser
barato e no deve ser txico s pessoas e ao ambiente. Infelizmente tal extrator no existe.
No obstante, pode ser empregada uma srie de diferentes extratores para obteno das
substncias hmicas. O primeiro procedimento de que se tem notcia de extrao e
fracionamento de substncias hmicas foi o de ARCHARD em 1786 (STEVENSON, 1994),
que atravs do uso de uma soluo alcalina sobre uma turfa, obteve um extrato escuro que,
depois de acidificado, produziu um precipitado amorfo e tambm escuro chamado cido
hmico (do latim: humus, terra). Na verdade, no se tinha uma soluo e sim, uma disperso
coloidal.
Solues aquosas de base forte como NaOH, KOH ou Na
2
CO
3
0,1 ou 0,5 mol l
-1
na
razo de solo:extrator de 1:5 at 1:10 (m/v) so eficientes para extrair substncias hmicas do
solo com um rendimento de at 67 % do total da matria orgnica quando usados de forma
seqencial. O NaOH, Na
2
CO
3
, Na
4
P
2
O
7
e o cido frmico possuem rendimentos de at 80,
30, 30 e 55% respectivamente. Diante da grande diversidade de procedimentos, a
International Humic Substances Society (IHSS) recomenda como extrator padro o NaOH na
concentrao de 0,5 ou 0,1 mol L
-1
. O solo possui vrios interferentes como Ca
2+
e outros
ctions polivalentes, Al
3+
e Fe
3+
que diminuem a eficincia da extrao alcalina.
Tratando-se o extrato alcalino (extrato hmico total) com HCl concentrado at pH~1,
forada a precipitao da frao de massa molecular relativa e aparentemente mais elevada, os
cidos hmicos. A frao das substncias hmicas que permanece solvel representa os
cidos flvicos que so compostos por molculas de massa molecular aparente mais baixa que
os cidos hmicos e com maior contedo de grupos funcionais cidos. Por fim, as substncias
hmicas que no so extradas do solo representam a frao humificada fortemente ligada
frao mineral do solo, e denominada humina. Os cidos hmicos, flvicos e humina podem,
ento, ser classificados com base na solubilidade em meio alcalino (CANELLAS, 2005).
A solvatao dos grupamentos funcionais extrados com soluo de base diluda
devida ao mecanismo de repulso eletrosttica das cargas negativas presentes nos grupos
funcionais cidos da estrutura molecular das substncias hmicas. Esses grupamentos
16
funcionais so dissociados no valor de pH da soluo extratora (geralmente entre 11 e 13).
Apesar da grande capacidade de extrao da soluo alcalina, possvel identificar algumas
desvantagens associadas ao seu uso, como por exemplo: (i) a dissoluo de slica do material
silicatado do solo representa um contaminante no indiferente da amostra de substncias
hmicas e (ii) a dissoluo de biopolmeros de tecidos vegetais frescos e a sua incorporao
junto ao material humificado. Foi postulado ainda que, em condies alcalinas, pode ocorrer a
produo de alteraes na estrutura molecular do material humificado atravs da possibilidade
de ocorrncia de reaes de auto-oxidao e de condensao entre grupos nitrogenados dos
aminocidos e compostos similares aos das substncias hmicas (CANELLAS, 2005).
Os dados apresentados por KROSSHAVN et al. (1992) validam a uso do
fracionamento qumico como ferramenta para anlise qualitativa da matria orgnica,
avaliando o efeito da extrao com NaOH das diferentes fraes humificadas atravs da
tcnica de Ressonncia Magntica Nuclear do
13
C e no observaram alteraes significativas
nas principais regies do espectro. Alm disso, a soma dos espectros da frao dos cidos
hmicos, flvicos e humina corresponderam ao espectro obtido da matria orgnica do solo
sem extrao, isolamento e purificao das substncias hmicas.
Uma maneira amplamente adotada para diminuio dos riscos de ocorrncia de
reaes de autocondensao consiste em realizar a extrao da matria orgnica sob atmosfera
de N
2
. A troca da atmosfera livre por uma inerte diminui a possibilidade de reao da soluo
com O
2
dissolvido na soluo. O borbulhamento da soluo alcalina por 15 minutos
suficiente para reduzir a concentrao de O
2
livre na soluo. TAN et al. (1991) no
observaram efeitos importantes do uso da atmosfera inerte sobre caractersticas
espectroscpicas de cido hmicos. As mudanas no so evidentes.
Durante o isolamento de substncias hmicas, uma estratgia para evitar possveis
alteraes na estrutura qumica do material hmico consiste no uso de sais neutros que so
extratores mais suaves. Por isso, tais extratores apresentam uma eficincia de extrao bem
menor do que a da base forte. O pirofosfato de sdio a pH 7 vem sendo usado como agente
complexante de ctions polivalentes que, pela formao de complexos insolveis, permite a
solubilizao das substncias hmicas. O uso do pirofosfato pode diminuir o fenmeno da
auto-oxidao, mas extrai material hmico com um contedo maior de silcio e ainda
incorpora unidades de fosfato nas estruturas das substncias hmicas (FRANCIOSO et al.,
1998).
As quantidade e as caractersticas das substncias hmicas extradas com os extratores
mais comuns como NaOH e Na
4
P
2
O
7
e a distribuio de cidos hmicos e flvicos variam
17
consideravelmente de acordo com o tipo de solo ou de resduo orgnico avaliado. Quanto ao
tempo de extrao a IHSS padronizou o tempo de 12 horas, no entanto, verificaram que com
quatro horas de extrao so isolados 90% das substncias hmicas alcalino solveis tanto
com base forte como com o sal neutro (DICK et al., 1999 citado por CANELLAS, 2005).
Um dos fatores que tem dificultado maior estudo de substncias hmicas em solos
tropicais a falta de mtodos para extrao, fracionamento e, especialmente quantificao das
fraes hmicas. A IHSS recomenda um mtodo para a extrao das substncias hmicas de
material de solo e posterior fracionamento em cido hmico, acido flvico e humina, baseado
na solubilidade diferencial destas fraes em meio alcalino e cido (SWIFT, 1996). Contudo,
este mtodo laborioso e deve ser empregado quando se pretende extrair substncias hmicas
com alto grau de pureza para fins de caracterizao e pesquisa associados s tcnicas de
espectroscopia na regio do ultravioleta, na regio do visvel e na regio do infravermelho
alm da ressonncia magntica nuclear e cromatografia gasosa e espectrometria de massas.
BENITES et al. (2003) sugere a adaptao desta metodologia de extrao e
fracionamento visando a quantificao das fraes hmicas por meio de procedimento
simplificado e de fcil execuo em amostras de solo. O procedimento foi testado em solos do
Brasil com resultado satisfatrio para o emprego em rotina. Os resultados demonstram que a
tcnica razoavelmente replicvel, sendo encontrado coeficiente de variao mdio de 15 %.
O somatrio das fraes apresenta variao entre 90 e 105 % do teor de carbono orgnico
total. Este procedimento permite a realizao de 36 amostras por semana por operador. Neste
mtodo, ao contrrio do que se faz no procedimento usado para extrao de substncias
hmicas para fins de caracterizao, no so eliminados os compostos orgnicos de baixo
peso molecular (COBPM) como os cidos oxlico, ctrico, mlico, e nem a matria orgnica
leve (MOL) que constituda por resduos orgnicos parcialmente humificados em vrios
estdios de decomposio e apresenta um tempo de residncia no solo que varia de um a
cinco anos (JANZEN et al., 1992 citado por XAVIER, 2006). Desta forma, estas formas
orgnicas estaro contidas em uma das trs fraes hmicas determinadas e isto pode limitar o
mtodo para solos onde haja quantidade muito grande destas formas. Os COBPM ocorrem na
maioria dos solos cultivados e so produtos secundrios no metabolismo de compostos de alto
peso molecular, como carboidratos, lipdeos e peptdeos, so co-extrados com cidos flvicos
e por isso a utilizao do termo frao cido flvico utilizada para mostrar que o carbono
determinado nesta frao no exclusivamente formado por substncias hmicas. Da mesma
forma, como no feita a purificao dos cidos hmicos, esta frao denominada frao
acido hmico, por conter compostos no humificados co-extrados.
18
Alm dos mtodos citados anteriormente, ROCHA (2003) fez um levantamento de
procedimentos utilizados para fracionamento das substncias hmicas citando a extrao com
diferentes solventes orgnicos, a cromatografia de excluso com base no tamanho molecular,
a cromatografia de excluso com base no tamanho molecular e alta presso, a cromatografia
com afinidade por metais, a cromatografia em fase reversa, a ultrafiltrao, a eletroforese e
por diferena de solubilidade e precipitao com cidos e bases. O nico procedimento que
fraciona as substncias hmicas em cido hmico e cido flvico dentre os apresentados por
ROCHA (2003) aquele dado pela diferena de solubilidade e precipitao com cidos e
bases.

2.5 Analise Elementar

A composio elementar das substncias hmicas afetada diretamente por diversos
fatores entre eles o pH, tipo de material, vegetao e a idade do material de origem
(STEVENSON, 1994). A anlise elementar amplamente utilizada para a caracterizao de
substncias hmicas, entretanto uma tcnica limitada quanto a informaes sobre a estrutura
das substncias hmicas. Essa tcnica um recurso auxiliar, o qual permite comparaes
entre classes e origens de diferentes materiais hmicos, alm de ser til para avaliar a
eficincia dos procedimentos de extrao e purificao (HUFFMANN et al., 1985).
A anlise da composio elementar das substncias hmicas fornece informaes
sobre os seus principais elementos constituintes. Os principais elementos presentes nas
substncias hmicas so o carbono e o oxignio (Tabela 3). A composio elementar a
propriedade mais estvel e fundamental das substncias hmicas (CANELLAS, 2005).

Tabela 3 - Algumas propriedades qumicas importantes das diferentes fraes

Propriedades cidos flvicos cidos hmicos Humina
C (%) 42 47 51 62 >62
O (%) 45 50 31 36 <30
N (%) 2,0 4,1 3,6 5,5 >5
Fonte: adaptado de BENITES et al. (2003)

Um dos procedimentos mais empregados para quantificao de substncias hmicas
a determinao do teor de carbono orgnico total. O procedimento baseia-se na oxidao do
on Cr
2
O
7
2-
, em presena de cido sulfrico. A determinao do on dicromato remanescente
19
por titulao com on ferroso leva ao clculo do consumo de oxidante e, consequentemente,
ao teor de carbono. A reao de oxidao pode se processar apenas sob o calor de diluio do
cido sulfrico ou, ainda, ser acelerada por uma fonte externa de aquecimento. Em se tratando
de um composto orgnico como a glicose, a reao de oxidao se processa facilmente. Para
materiais orgnicos mais complexos, como as substncias hmicas, com grau de condensao
elevado, a extenso da oxidao depender da natureza do composto, tempo de reao,
intensidade do calor fornecido, presena de catalisadores. Quando se objetiva determinar o
carbono orgnico total, as condies preconizadas visam atingir a mxima eficincia na
reao (RODELLA & ALCARDE, 1994). As fraes hmicas normalmente so expressas
como equivalente em carbono (BENITES et al., 2003) ou adota-se coeficientes que
multiplicam o teor de carbono referente frao hmica analisada (BRASIL, 2007).

2.6 Justificativa

A metodologia para anlise de fertilizantes baseada nos mtodos para solo e na
literatura cientfica semelhante s adotadas por outros pases. Tratando-se de substncias
hmicas o mtodo oficial brasileiro (BRASIL, 2007) semelhante ao mtodo adotado na
Espanha (ESPANHA, 1991). Esse mtodo deixa a desejar quanto aos aspectos de
economicidade e, rapidez de resultados, entretanto considerado como referncia para
ensaios de fertilizantes orgnicos no Brasil. Para atender a grande e crescente demanda os
laboratrios tem, muitas vezes, que lanar mo de artifcios que acelerem os resultados e,
entre eles, esto os mtodos simplificados, que muito podem auxiliar nos processos de
anlise. Esses mtodos so bem mais rpidos e econmicos, mas exigem bastante ateno,
porque, sendo muito sensvel, qualquer variao pode resultar em erros.
O mtodo de extrao e fracionamento de substncias hmicas em solos apresentada
por BENITES et al. (2003) pode ser uma alternativa para se tornar referncia substituindo a
metodologia atual, alm de dar subsdios para o aperfeioamento do mtodo.
Juntamente com a dificuldade das metodologias disponveis, existe os fatores
associados ausncia de ensaios de proficincia e de material de referncia certificado para
substncias hmicas fatores esses importantes para avaliao de mtodos (INMETRO, 2010).
A participao dos laboratrios em atividades de ensaio de proficincia um dos mecanismos
de controle da qualidade dos resultados previstas na NBR ISO/IEC 17025 (ABNT, 2005).
Portanto a hiptese foi que modificaes do mtodo da IN n28 e BENITES et al.
(2003) implicam na obteno de resultados semelhantes aos originais para os teores de cido
20
hmico, cido flvico e extrato hmico total. O objetivo desse trabalho foi propor uma
alternativa simplificada, econmica e com menor gerao de resduos, considerando
princpios do mtodo proposto para amostras de solo conforme BENITES et al. (2003).

3 MATERIAL E MTODOS


Foram realizados ensaios com diferentes modificaes no mtodo de extrao e
fracionamento de substncias hmicas da IN n 28 e de BENITES et al. (2003) para
quantificao do teor de cido hmico (AH), cido flvico (AF) e extrato hmico total (EHT).
Os ensaios foram divididos em oito propostas diferentes, cada um com sete repeties,
segundo a Orientao sobre Validao de Mtodos Analticos - DOQ-CGCRE-8 (INMETRO,
2010) e executados em dias diferentes. As propostas de modificao foram relacionadas
massa (alquota) inicial da amostra para o procedimento analtico, soluo extratora, ao
tempo de exposio do extrator com a amostra e a tcnica de separao das fraes hmicas,
alm do mtodo original conforme BENITES et al. (2003) e como referncia o mtodo
conforme a IN n 28.

3.1 Caracterizao das Amostras e dos Ensaios

Nos ensaios foram utilizadas trs amostras de fertilizantes orgnicos contendo
substancias hmicas. Identificados como: SH1, SH2 e SH3. As amostras foram
adquiridas de produtos disponveis no comrcio que declaravam os teores de cido hmico e
cido flvico. A seleo das amostras representou uma faixa de possibilidade de teores de
substncias hmicas de acordo com a relao dos cidos hmicos e cidos flvicos conforme
tabela 4.
As amostras foram preparadas e armazenadas para uso nos ensaios. O preparo da
amostra slida consistiu em secar em estufa a 65 C e moer at passar na peneira de malha
0,5mm de abertura e armazenar em dessecador. As amostras fluidas foram apenas agitadas no
prprio frasco antes de tomar a alquota. O teor de Carbono Orgnico Total (COT) foi
determinado conforme IN n 28 para ser referncia na alquota inicial a ser pesada, e os
valores so mostrados na tabela 4.
Nos ensaios foram utilizados reagentes puros para anlise da marca Vetec: pirofosfato
de sdio com 99 % de pureza, hidrxido de sdio com mnimo de 99 % de pureza, cido
sulfrico entre 95 a 99 % de pureza, dicromato de potssio com 99 % de pureza, cido
21
fosfrico com 85 % de pureza, difenilamina mnimo de 98 % de pureza e sulfato ferroso
amoniacal mnimo de 98,5 % de pureza. A gua utilizada durante os ensaios foi ultrapura tipo
I pelo Ultrapurificador microprocessado Mster System da Gehaka. A centrfuga com
capacidade de 4 tubos de 50 mL foi utilizada a 2000 g por 15 minutos, para manter um padro
entre os ensaios.

Tabela 4 - Caractersticas das amostras

Caractersticas
Amostras
SH1 SH2 SH3
Natureza fsica Fluido Slido Fluido
COT (%) 10,25 33,95 13,32
Relao AH/AF Igual Maior AH Maior AF
AH: cido hmico; AF: cido flvico

A Fora Centrifuga Relativa foi calculada pela expresso FCR = 0,00001118 R N
onde R o raio de centrifugao em centmetros; N a velocidade de centrifugao em
rotaes por minuto e a unidade de medida da fora centrfuga relativa (FCR) o "g", sendo
1g equivalente acelerao da gravidade na superfcie da terra.
O extrato hmico total foi calculado pela soma das fraes determinadas em
porcentagem de COT equivalente a cidos hmicos e os cidos flvicos.

3.2 Execuo do Mtodo Conforme IN n 28

3.2.1 Extrao

a) Para amostra slida pesou-se o equivalente a 300 mg de carbono orgnico total aps
a amostra ser secada a 65C em estufa e moda at passar totalmente em peneira de 0,5 mm de
abertura. Na amostra fluida pesou-se o equivalente a 300 mg de carbono orgnico total aps
agitao manual dentro do prprio frasco;
b) Transferiu-se para um frasco de 250 mL;
c) Acrescentou-se 100 mL da soluo extratora de pirofosfato de sdio 0,1 mol L
-1

(Na
4
P
2
O
7
.10H
2
O) em NaOH 0,1 mol L
-1
,
recm preparada;
d) Tampou-se o frasco e agitou-se por 30 minutos em agitador Wagner a 40 rpm;
e) Transferiu-se o contedo do frasco para dois tubos de centrfuga de 50 ml;
22
f) Ajustou-se a velocidade da centrfuga para 2000 g e promoveu-se a centrifugao
por 15 minutos;
g) Transferiu-se a soluo sobrenadante para balo volumtrico de 1000 mL.
h) Repetiu-se a operao de centrifugao por at cinco vezes, adicionando-se
alquotas de 50 mL da soluo extratora em cada tubo, em funo da amostra, at que o
lquido de extrao ficou levemente corado;
i) Reuniu-se todos os extratos no balo volumtrico de 1000 mL, completou-se o
volume com gua destilada e homogeneizou-se e obtendo-se a soluo com o extrato hmico
total.

3.2.2 Fracionamento

a) Tomou-se 100 mL da soluo do extrato hmico total e acrescentou-se cido
sulfrico a 20% (v/v), agitando-se lentamente at pH 1, verificado com o uso do pHmetro.
b) Deixou-se em repouso por um perodo mnimo de 8 horas, para separao dos
cidos hmicos.
c) Centrifugou-se a 2000 g por 15 minutos e comprovando-se visualmente a separao
do precipitado de cidos hmicos.
d) Transferiu-se o sobrenadante (frao cidos flvicos) para balo volumtrico de 100
mL e completou-se o volume com gua purificada.
e) Solubilizou-se o precipitado (frao cidos hmicos) com NaOH 0,1 mol L
-1

transferindo-se para um balo volumtrico de 100 mL e completou-se o volume com gua
purificada.

3.2.3 Determinao do teor de carbono orgnico total nas fraes

a) Transferiu-se 50 mL do extrato, medido com pipeta volumtrica, para um
erlenmeyer de 250 mL.
b) Evaporou-se at secura em estufa a 65 C.
c) Acrescentou-se 10 mL de K
2
Cr
2
O
7
0,20 mol L
-1
e, em seguida, 20 mL de H
2
SO
4
concentrado, agitando-se suavemente.
d) Transferiu-se o erlenmeyer tampado com funil e o vidro de relgio para bloco de
digesto individual e ferveu-se por 30 minutos.
e) Esperou-se esfriar, acrescentou-se 100 mL de gua purificada e 10 ml de H
3
PO
4;
f) Acrescentou-se 0,5 mL da soluo indicadora de difenilamina e titulou-se com a
soluo de sulfato ferroso amoniacal 0,5 mol L
-1
.
23
g) Conduziu-se, simultaneamente, duas provas em branco, omitindo-se a presena da
amostra.
h) Calculou-se o teor das fraes em equivalente a carbono orgnico total sendo:
COT (%) = 3CD(Vb-Va)/G , onde:
Coeficiente 3 resultado da multiplicao da massa atmica do carbono pela
premissa de que cada mol de K
2
Cr
2
O
7
consumido reage com 1,5 mol de carbono orgnico
dividido pela relao estequiomtrica entre Fe
2+
e. Cr
2
O
7
2-
.
C = concentrao da soluo de sulfato ferroso amoniacal padronizado
D = fator de diluio
Va = volume, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto na amostra.
Vb = volume mdio, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto nas
replicatas da prova em branco.
G = massa inicial da amostra, em grama

3.3 Execuo do Mtodo Conforme Benites et al. (2003)

3.3.1 Extrao

a) Para amostra slida pesou-se o equivalente a 30 mg de carbono orgnico total aps
a amostra ser secada a 65 C em estufa e moda at passar totalmente em peneira de 0,5 mm
de abertura. Na amostra fluda pesou-se o equivalente a 30 mg de carbono orgnico total aps
agitao manual dentro do prprio frasco;
b) Transferiu-se para tubo de centrfuga de 50 mL;
c) Adicionou-se 20 mL de NaOH 0,1 mol L
-1
;
d) Agitou-se manualmente e deixou-se em repouso por 24 h;
e) Centrifugou-se a 2000 g por 15 minutos;
f) Recolheu-se o sobrenadante em tubo de centrfuga de 50 mL e reservou-se;
g) Adicionou-se mais 20 mL de NaOH 0,1 mol L
-1
a cada amostra e agitou-se
manualmente at o desprendimento e suspenso do precipitado;
h) Deixou-se em repouso por 1 h;
i) Centrifugou-se novamente a 2000 g por 15 minutos;
j) Recolheu-se o sobrenadante junto ao previamente reservado obtendo a soluo de
extrato hmico total;

3.3.2 Fracionamento

24
a) Ajustou-se o pH do extrato alcalino (soluo de extrato hmico total) para pH 1,0
pela adio de gotas de soluo de H
2
SO
4
20% v/v;
b) Decantou-se por 18 h;
c) Filtrou-se o precipitado em filtro de membrana de 0,45 m sob vcuo;
d) Recolheu-se o filtrado e avolumou-se para 100 mL usando gua purificada (frao
cidos flvicos);
e) Adicionou-se NaOH 0,1 mol L
-1
sobre o precipitado at a lavagem completa do
filtro e avolumou-se para 100 mL usando gua purificada (frao cidos hmicos).

3.3.3 Determinao do teor de carbono orgnico total nas fraes

a) Transferiu-se uma alquota de 10 mL da soluo de cido hmico ou flvico
erlenmeyer de 250 mL.
b) Evaporou-se at secura em estufa a 65 C.
c) Adicionou-se 2 mL de K
2
Cr
2
O
7
0,042 mol L
-1
mais 2 mL de gua purificada em
seguida 5 mL de H
2
SO
4
concentrado a cada amostra;
d) Transferiu-se o erlenmeyer tampado com funil e o vidro de relgio para bloco de
digesto individual e ferveu-se por 30 minutos.
e) Acrescentou-se 3 gotas de H
3
PO
4
e 0,5 mL da soluo indicadora de difenilamina e
titulou-se com a soluo de sulfato ferroso amoniacal 0,05 mol L
-1
.
f) Conduziu-se, simultaneamente, duas provas em branco, omitindo-se a presena da
amostra.
g) Calculou-se o teor das fraes em equivalente a carbono orgnico total sendo:

COT (%) = 3CD(Vb-Va)/G , onde:
Coeficiente 3 resultado da multiplicao da massa atmica do carbono pela
premissa de que cada mol de K
2
Cr
2
O
7
consumido reage com 1,5 mol de carbono orgnico
dividido pela relao estequiomtrica entre Fe
2+
e Cr
2
O
7
2-
.
C = concentrao da soluo de sulfato ferroso amoniacal padronizado
D = fator de diluio
Va = volume, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto na amostra.
Vb = volume mdio, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto nas
replicatas da prova em branco.
G = massa inicial da amostra, em grama

25
3.4 Execuo das Modificaes

Os ensaios foram identificados por letras (A; B; C; D; E; F e G) e para no ocorrer
possveis favorecimentos de um ensaio em relao a outro, a ordem de incio do procedimento
analtico dos ensaios deu-se pela ordem crescente identificao dos ensaios devido
impossibilidade de realizar todos os ensaios simultaneamente. Os ensaios e suas modificaes
esto descritos na tabela 5, destacando-se o mtodo de referncia segundo a IN n 28 E e
suas modificaes D e F e o mtodo alternativo segundo BENITES et al. (2003) G e suas
modificaes A, B e C.

Tabela 5 - Distribuio das modificaes dos mtodos em comparao ao mtodo referncia

Modificaes
Mtodos
A B C D E
1
F G
Referncia
BENITES
et al.
(2003)
BENITES
et al.
(2003)
BENITES
et al.
(2003)
IN n 28 IN n 28 IN n 28
BENITES
et al.
(2003)
Massa
equivalente a
COT
30 mg 30 mg 30 mg 30 mg 300 mg 75 mg 30 mg
Extrator
Na
4
P
2
O
7
NaOH
NaOH NaOH
Na
4
P
2
O
7
NaOH
Na
4
P
2
O
7
NaOH
Na
4
P
2
O
7
NaOH
NaOH
Tempo de
exposio do
extrator com a
amostra
24 horas
30
minutos
24 horas
30
minutos
30
minutos
30
minutos
24 horas
Volume do
balo no final
da extrao
No
avoluma
No
avoluma
No
avoluma
No
avoluma
1000 ml 250 ml
No
avoluma
Separao das
fraes
Filtro:
membrana
de 0,45
m
Filtro:
membrana
de 0,45
m
Centrfuga
2000 g
por 15
minutos
Centrfuga
2000 g
por 15
minutos
Centrfuga
2000 g
por 15
minutos
Centrfuga
2000 g
por 15
minutos
Filtro:
membrana
de 0,45
m
Volume final
aps
fracionamento
100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml
1
mtodo de referncia

3.5 Anlise Estatstica

Os resultados (Anexo II) obtidos foram testados previamente para realizao da
anlise de varincia. No foi encontrado nenhum valor considerado disperso pelo teste de
GRUBBS ao nvel de significncia de 0,05 (BURKE, 2001) e os resultados apresentaram
distribuio normal conforme o teste de normalidade (RYAN & JONIER, 1976). Os
resultados foram submetidos anlise de varincia e as mdias analisadas segundo Scott-
Knott (Anexo III). Este teste foi aplicado por ser considerado mais adequado que os demais,
por apresentar de modo semelhante s distribuies normais e no normais dos resduos
26
(BORGES, 2003). A anlise de contraste de mdias tambm foi aplicada segundo COSTA
(2003) (tabela 13, Anexo III). A repetitividade e a reprodutibilidade foram estimadas pela
anlise de varincia considerando seis repeties divididas em dois ensaios (tabela 6)
(SOUZA, 2007).

Tabela 6 - Estimativa da repetitividade e a reprodutibilidade

Varincia Expresso
Repetitividade (s
2
r
) QM dentro de ensaios
Entre ensaios (s
2
entre ensaios) (QM entre ensaio QM dentro ensaios)/n
Reprodutibilidade parcial (s
2
R
) s
2
r
+ s
2
entre ensaios
QM: Quadrado mdio; n: nmero de ensaios

4 RESULTADOS E DISCUSSO


As amostras foram adquiridas de produtos disponveis no comrcio que declaravam os
teores de cido hmico e cido flvico. A seleo das amostras foi limitada a trs unidades de
forma que representasse uma faixa de possibilidade de teores de substncias hmicas de
acordo com a relao dos cidos hmicos e cidos flvicos e permitisse a explorao das
modificaes em sete repeties.
As modificaes foram definidas de acordo com estudo prvio e ensaios preliminares
dos mtodos em estudo de acordo com a diferena de solubilidade das substncias hmicas
em cido ou base (IN n 28 e BENITES et al. 2003), verificando possveis alteraes no
procedimento analtico a fim de simplific-lo sem prejuzo aos resultados. As alteraes
sugeridas, tendo referncia a IN n 28 (E), pressupe uma reduo do volume do balo
volumtrico na etapa de extrao das substncias hmicas (EHT), devido dificuldade
operacional de manusear e de manter bales volumtricos de 1000 mL, alm de consumir
grande quantidade de gua purificada e do reagente extrator. Outro inconveniente a
necessidade tubos de centrfuga considerados grandes (250 mL) que no so compatveis a
maioria das centrifugas disponveis. Considerando que BENITES et al. (2003) um mtodo
simplificado destinado amostras de solo e aceito por diversos autores (CANELLAS, 2005;
DOMINGUES, 2007; MELO, 2008) e que utiliza como massa inicial de amostra 30 mg de
carbono orgnico total, possivelmente pode ser adotado no mtodo da IN n 28, reduzindo
proporcionalmente os itens de procedimento chegando ao final da extrao sem a necessidade
27
de avolumar o EHT (D). A modificao intermediria seria a adoo de um balo
volumtrico de 250 mL, pois compatvel com rotina de outros elementos conforme IN n 28,
alm do tubo de centrfuga de 50 mL o qual adequado a esse procedimento (F).
As modificaes tendo como referncia BENITES et al. (2003) (G) sugerem
alternativas para flexibilizar o uso do mtodo sem prejudicar os resultados. A variao do
extrator (A) de hidrxido de sdio para pirofosfato de sdio em hidrxido de sdio reduz a
auto oxidao principalmente por um tempo de 24 horas de exposio do extrator com a
amostra (FRANCIOSO et al., 1998). O tempo de 24 horas de exposio do extrator com a
amostra pode alterar a estrutura das substncias hmicas, portanto o procedimento de reduo
do tempo de exposio eficiente na extrao de substncias hmicas (DICK et al., 1999
apud CANELLAS, (2005), alm da flexibilidade operacional (B). O procedimento de
separao das fraes cido hmico e cido flvico feito por filtrao em membrana de
celulose de 45 m e segundo a IN n 28 realizada por meio de centrifugao (C).
Os resultados dos teores mdios seguidos do desvio padro de AH, AF e EHT das
amostras utilizadas nos ensaios so mostrados na tabela 7, a anlise de contrastes na tabela 8 e
a estimativa da repetitividade e reprodutibilidade na tabela 9. Os resultados foram analisados
pelo de teste de F (P<0,01) obtendo resultados significativos para todos os mtodos e as
mdias foram compradas pelo teste de Scott-Knott. O mtodo de separao de mdias de
Scott-Knott possui a vantagem sobre outros os mtodos de separar as mdias em grupos
discretos, sem sobreposio entre os grupos. A principal desvantagem que esse mtodo
possui clculos mais complexos do que os outros mtodos. Com a utilizao de
computadores, o mtodo de Scott-Knott torna-se uma alternativa vivel aos pesquisadores que
na maioria das vezes preferem resultados mais diretos e mais fceis de serem interpretados
(CANTERI, 2001). As mdias das variveis analisadas (AH, AF e EHT) representam os
teores de carbono orgnico total extrado das fraes hmicas, portanto as maiores mdias
representam a eficincia da extrao das substancias hmicas.
A extrao terica esperada no EHT era de 10,25%; 33,95%; 13,32% para as amostras
SH1, SH2 e SH3 respectivamente, conforme determinao do teor de carbono orgnico total
nas amostras (tabela 4), porm nem todas as amostras obtiveram a extrao terica por
observar a presena da frao humina durante a execuo do procedimento de extrao aps
centrifugao da amostra com a soluo extratora em todas as amostras nos diferentes
mtodos. A humina a frao insolvel tanto no meio alcalino como no meio cido e
analisada na poro precipitada no fundo do tubo de centrfuga aps a extrao do EHT. Pode
ser calculada pela diferena entre o teor de carbono orgnico total da amostra e o teor de
28
carbono orgnico total do EHT. Resduos de amostra precipitado no fundo do tubo de
centrfuga das amostras foram observados, principalmente na amostra SH2 onde a diferena
entre o resultado esperado e o encontrado foi maior, pois a amostra foi solubilizada na sua
totalidade, porm com muito esforo, devido dificuldade da amostra entrar em contato com
a soluo extratora quando adere parede do tubo de centrfuga, subestimando o teor de EHT
conseqentemente de AH e AF.

Tabela 7 - Mdia e desvio padro dos teores de cido hmico (AH), cido flvico (AF) e
extrato hmico total (EHT) nas amostras.


Em geral o coeficiente de variao (CV) dos diferentes mtodos adotados com suas
modificaes ficou abaixo de 10% com exceo do teor do teor de cido flvico na amostra
SH1** SH2** SH3**
ensaio AH
1
s AH
1
s AH
1
S
A 6,55 a 0,55 28,00 a 0,40 3,12 a 0,12
B 6,29 a 0,23 24,93 b 0,76 3,30 a 0,10
C 4,96 c 0,25 25,09 b 0,66 2,76 b 0,04
D 5,57 b 0,20 25,47 b 0,76 2,73 b 0,06
E 2,51 d 0,81 24,16 b 2,18 1,33 d 0,21
F 5,18 c 0,27 23,33 b 2,95 2,02 c 0,13
G 5,03 c 0,45 24,64 b 1,69 2,88 b 0,41
CV(%) 8,61 6,40 7,47

SH1** SH2** SH3**
ensaio AF
1
s AF
1
s AF
1
S
A 3,80 c 0,44 1,05 a 0,29 9,59 a 0,05
B 3,85 c 0,21 0,63 b 0,27 7,91 d 0,59
C 4,92 b 0,50 0,51 b 0,19 9,42 b 0,30
D 3,95 c 0,16 0,46 b 0,17 9,27 b 0,26
E 7,12 a 0,94 0,40 b 0,12 9,84 a 0,20
F 4,49 b 0,25 0,44 b 0,07 9,07 b 0,37
G 3,98 c 0,33 0,20 b 0,11 8,56 c 0,40
CV(%) 10,33 36,06 3,81

SH1** SH2** SH3**
ensaio EHT
1
s EHT
1
s EHT
1
S
A 10,35 a 0,41 29,05 a 0,58 12,71 a 0,12
B 10,13 a 0,23 25,56 b 0,82 11,21 c 0,63
C 9,88 a 0,34 25,59 b 0,57 12,19 b 0,30
D 9,53 b 0,07 25,94 b 0,77 12,01 b 0,28
E 9,63 b 0,45 24,56 b 2,26 11,17 c 0,31
F 9,67 b 0,27 23,77 b 3,02 11,09 c 0,39
G 9,01 c 0,51 24,84 b 1,72 11,45 c 0,46
CV(%) 3,64 6,44 3,30
1
%COT; ** significativo teste F (P<99%); letras iguais na mesma coluna no diferem estatisticamente pelo teste
de ScottKnott.
29
SH2 que registrou um coeficiente de variao de 36,06% destoando o comportamento das
demais amostras (tabela 7). BENITES et al. (2003) analisando amostras de solos encontrou
um coeficiente de variao de 15%. O valor alto deve-se ao baixo teor de cido flvico
encontrado na amostra resultando maiores erros analticos durante o procedimento de
determinao do carbono orgnico total uma vez que necessita de alquotas maiores para sua
determinao. Na determinao de carbono orgnico total precisa-se de uma quantidade
representativa do elemento de acordo o mtodo adotado, valores baixos podem ser
considerados prximo do limite de deteco mnimo do mtodo e geralmente ocorrem
maiores erros de preciso.
O EHT representa a extrao das fraes cido hmico e cido flvico e foi obtido
pela somas de ambas as fraes (AH e AF). Considerando que no momento do fracionamento,
a separao das fraes AH e AF pode ocorrer erros analticos, pois pelo procedimento
analtico as fraes so concorrentes. Se a separao seja por centrifugao ou filtrao no
ocorrer adequadamente ou no momento da transferncia da suspenso (AF) passar o precitado
(AH), as fraes sero subestimadas ou superestimadas, uma vez que a determinao de
carbono orgnico total no seletiva a ponto de identificar as fraes. Na filtrao o erro
menos comum, porm pode ter sobrado resduo de acido hmico da amostra anterior
passando, portanto a compor a soluo de cido flvico. Essa situao foi observada
principalmente no resultado de cido flvico da amostra SH1 no mtodo E que inverte a
relao cido hmico com cido flvico, sendo que essa amostra deveria ter quantidades
semelhantes de ambas as fraes. Nos resultados da anlise de mdias por contrates (tabela 8)
tambm foi observado esse comportamento quando comparado ao mtodo E com suas
modificaes D e F na amostra SH1. Portanto a melhor maneira de se observar os
resultados iniciando pelo EHT que expressa a quantidade total de substancias hmicas
extradas.
O mtodo de referncia E segundo o IN n 28 teve seu desempenho semelhante s
modificaes propostas para a simplificao do prprio mtodo: D e F em todas as
amostras analisadas. Foi observado que mtodo de referncia E possui o mesmo efeito
quando se inicia o procedimento com 75 mg ou 30 mg de carbono orgnico total, mantendo as
propores de diluio. Isto significa que se pode economizar tempo e custo por eliminar a
utilizao de bales volumtricos de 1000 ml e ainda de 250 ml. No mtodo D no
necessrio avolumar o extrato hmico total, pois a precipitao do cido hmico ocorre em
seqncia extrao no havendo diluio. A gerao de resduos e consumo de reagentes
reduzida significativamente, passando de aproximadamente 1000 ml para 250 ml ou
30
praticamente desprezvel pelo menos na etapa de extrao. Fica evidente que no necessrio
trabalhar com grandes quantidades de alquota das amostras, como no mtodo de referncia
E que tem uma alquota inicial de 300 mg de carbono orgnico total equivalente.
O mtodo conforme BENITES et al. (2003) G, para EHT teve seu desempenho
semelhante ao mtodo referncia E nas amostras analisadas diferindo apenas na amostra
SH1 com resultado inferior. Pela ferramenta estatstica de comparao por contraste (tabela 8)
verifica-se que no houve efeito significativo entre os dois mtodos. Os resultados confirmam
os dizeres de ALLISON, (1965) que os mtodos aplicados a fertilizantes so adaptaes ou
aplicaes diretas de metodologias estabelecidas para analise de solo. Entretanto os mtodos
podem ser simplificados, melhorados ou adaptados em vista da diferena encontrada na
amostra SH1 para o EHT.

Tabela 8 - Resultado dos contrastes para cido hmico (AH), cido
flvico (AF) e extrato hmico total (EHT) nas amostras.

SH1 SH2 SH3
Contraste AH

AH

AH


C G -0,07 ns 0,44 ns -0,12 ns
B G 1,26 * 0,28 ns 0,41 *
A G 1,52 * 3,36 * 0,24 ns
E F -2,67 * 0,82 ns -0,70 *
E D -3,06 * -1,32 ns -1,40 ns
E G -2,52 * -0,49 ns -1,56 ns

SH1 SH2 SH3
Contraste AF

AF AF


C G 0,94 ns 0,30 ns 0,86 *
B G -0,12 ns 0,43 * -0,65 ns
A G -0,17 ns 0,85 * 1,02 *
E F 2,63 * -0,03 ns 0,77 *
E D 3,17 * -0,06 ns 0,57 ns
E G 3,14 * 0,20 ns 1,28 *

SH1 SH2 SH3
Contraste EHT

EHT

EHT


C G 0,87 * 0,75 ns 0,74 ns
B G 1,13 * 0,72 ns -0,24 ns
A G 1,35 * 4,21 * 1,26 *
E F -0,04 ns 0,79 ns 0,07 ns
E D 0,10 ns -1,38 ns -0,84 *
E G 0,62 ns -0,28 ns -0,28 ns
* significativo teste F (P<0,05) ; ns: no significativo

31
As modificaes do mtodo G em geral melhoram o desempenho em extrair e
fracionar substncias hmicas nas amostras analisadas. Dentre os ensaios o mtodo A
obteve os maiores teores extravel de substancias hmicas quando comparadas aos outros
ensaios em todas as amostras (tabela 8). Esse efeito pode ser explicado por se esperar um
resultado maior e pela caracterstica do extrator pirofosfato de sdio (Na
4
P
2
O
7
) que garante
maior estabilidade das caractersticas hmicas, no a degradando-as durante sua exposio o
que pode ocorrer com o extrator NaOH (FRANCIOSO et al., 1998). Relacionando os ensaios
dos mtodos D, E e F que tambm utilizaram pirofosfato de sdio como extrator, existe o
diferencial da quantidade de extrator em relao quantidade de amostra a ser analisada. No
mtodo D utiliza 30 mg de carbono orgnico total, quantidade inferior aos 75 mg e 300 mg
de carbono orgnico total do mtodo F e E respectivamente, o seu desvio padro menor
do que os desses, nas trs amostras utilizadas. As maiores quantidades de amostra para
extrao podem permitir maiores erros e a possibilidade de no extrair totalmente as
substncias hmicas. Isso pode ser observado pelo desvio padro que so em geral maiores.
Os mtodos B e C tambm se destacaram como modificaes do mtodo G
conforme BENITES et al. (2003) dando alternativas para se utilizar o mtodo com mais
flexibilidade uma vez que pode ser sugerido a reduo do tempo de exposio da soluo
extratora (hidrxido de sdio) na amostra para extrao de substncias hmicas. O tempo de
exposio utilizado para garantir o efeito do extrator, solubilizando toda a amostra que ser
extrada na centrifugao, considerando-se a natureza de solubilidade das amostras no seria
necessrio um longo tempo, o que no seria observado na amostra slida (CANELLAS,
2005). Assim como a utilizao da centrifuga para separar as fraes de cido hmico e cido
flvico em alternativa filtrao com membrana de 0,45m. Os resultados dos contrastes
entre as modificaes B e C em relao a G (tabela 8) confirmam que as modificaes
foram semelhantes quando no melhoraram os resultados para AH, AF e EHT em todas as
amostras. No mesmo sentido o mtodo D tem como caractersticas similares aos mtodos
B e C por apresentar baixa exposio do extrator (pirofosfato) amostra e por utilizar a
centrifuga para separar as fraes hmicas e flvicas.
A anlise dos resultados por contraste confirma que o mtodo A se destacou sobre os
demais em todas as amostras seguido dos mtodos B e C quanto ao teor extrado de AH,
AF e EHT (tabela 8). Quando no tiveram mais eficincia em extrair as substancias hmicas e
suas fraes, foram semelhantes ao mtodo G que por sua vez teve caractersticas
semelhantes ao mtodo de referncia E da IN n 28 considerando o EHT. Apesar da
diferena estatstica encontrada entre a referncia E e os diferentes mtodos propostos tem-
32
se que destacam a complexidade de se analisar fertilizantes orgnicos devido grande
diversidade de materiais que se classificam como tal (RODELLA & ALCARDE, 1994),
podendo ser desde os naturais at os resduos industriais ou tratamento de esgotos urbanos
(BRASIL, 2005).
Se observado a tabela 9, verifica-se que a maioria dos valores estimados para
repetitividade e reprodutibilidade so inferiores a 1,5 % de carbono orgnico total permitindo
dizer que a os mtodos possuem preciso apropriada para a finalidade desejada com exceo
dos mtodos E, F e G, considerando-se a tolerncia permitida de 15% at duas unidades
para o teor de cido flvico, cido hmico e extrato hmico total (BRASIL, 2005). Em
destaque os mtodos A, B e C apresentaram valores bem abaixo da tolerncia,
registrando valores de repetitividade entre 0,08 a 0,61 para extrato hmico total.

Tabela 9 - Repetitividade e reprodutibilidade dos mtodos

AH SH1 SH2 SH3
ensaio repe
1
repro
1
repe
1
repro
1
repe
1
repro
1

A 0,45 0,60 0,40 0,46 0,11 0,13
B 0,16 0,30 0,40 0,57 0,10 0,10
C 0,18 0,27 0,71 0,71 0,04 0,05
D 0,21 0,21 0,68 0,90 0,02 0,08
E 0,53 0,87 1,46 1,46 0,23 0,23
F 0,28 0,28 3,28 3,28 0,07 0,08
G 0,34 0,45 2,05 2,05 0,46 0,46
1
%COT
AF SH1 SH2 SH3
ensaio repe
1
repro
1
repe
1
repro
1
repe
1
repro
1

A 0,49 0,49 0,30 0,30 0,05 0,05
B 0,16 0,26 0,16 0,33 0,56 0,65
C 0,48 0,56 0,23 0,23 0,13 0,31
D 0,19 0,19 0,14 0,21 0,23 0,23
E 0,90 1,02 0,13 0,13 0,17 0,19
F 0,30 0,30 0,08 0,08 0,44 0,44
G 0,40 0,40 0,08 0,14 0,39 0,41
1
%COT
EHT SH1 SH2 SH3
ensaio repe
1
repro
1
repe
1
repro
1
repe
1
repro
1

A 0,41 0,41 0,57 0,65 0,08 0,14
B 0,28 0,28 0,38 0,83 0,61 0,66
C 0,39 0,39 0,61 0,61 0,15 0,29
D 0,07 0,07 0,80 0,84 0,23 0,27
E 0,53 0,53 1,54 1,54 0,35 0,35
F 0,20 0,28 3,35 3,35 0,46 0,46
G 0,48 0,55 2,09 2,09 0,31 0,35
1
%COT
33

5 CONSIDERAES GERAIS


A extrao com pirofosfato de sdio com hidrxido de sdio por 24 horas em alquota
referente a 30 mg de COT e fracionamento sob membrana de celulose de 45 m (mtodo A)
recomendado para quantificao de EHT, AH e AF, portanto foi proposto um protocolo para
extrao e fracionamento de substncias hmicas em fertilizantes orgnicos sugerido para
atualizao da IN n 28 (Anexo I). O mtodo permite a otimizao da rotina analtica em
virtude do menor uso de insumos e do uso de vidraria e equipamentos mais simples.
Oportunamente o mtodo para quantificao de EHT, AH e AF pode ter como alternativa a
reduo do tempo de contato com a amostra e a utilizao de centrifugao no fracionamento,
porm h a necessidade de novos estudos para esta afirmao.

6 CONCLUSO


O ensaio recomendado para quantificao de EHT, o mtodo A que consiste na
extrao com pirofosfato de sdio com hidrxido de sdio por 24 horas em uma alquota
referente a 30 mg de COT e fracionamento sob membrana de celulose de 45 m.
34

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35
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produo e do comrcio de fertilizantes, corretivos, inoculantes, estimulantes ou
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40

ANEXO I


Protocolo para extrao e fracionamento de substncias hmicas em fertilizantes
orgnicos sugerido para atualizao da IN n 28

1 Extrao

a) Para amostra slida pesar o equivalente a 30 mg de carbono orgnico total aps a
amostra ser secada a 65C em estufa e moda at passar totalmente em peneira de 0,5 mm de
abertura. Para amostra fluda pesar o equivalente a 30 mg de carbono orgnico total aps
agitao dentro do prprio frasco;
b) Transferir para tubo de centrfuga de 50 mL;
c) Adicionar 20 mL de NaOH 0,1 mol L
-1
;
d) Agitar manualmente e deixar em repouso por at 24 h;
e) Centrifugar a 2000 g por 15 minutos (se for necessrio utilizar maior rotao ou
maior tempo);
f) Recolher o sobrenadante em tubo de centrifuga de 50 mL e reservar;
g) Adicionar mais 20 mL de NaOH 0,1 mol L
-1
a cada amostra e agitar manualmente
at o desprendimento e suspenso do precipitado;
h) Deixar em repouso por 1 h;
i) Centrifugar novamente a 2000 g por 15 minutos (se for necessrio utilizar maior
rotao ou maior tempo);
j) Recolher o sobrenadante junto ao previamente reservado obtendo a soluo de
extrato hmico total;

2 Fracionamento

a) Ajustar o pH do extrato alcalino (soluo de extrato hmico total) para pH 1 pela
adio de gotas de soluo de H
2
SO
4
20%;
b) Decantar por 18 h;
c) Filtrar o precipitado em filtro de membrana de 0,45 m sob vcuo.
Alternativamente pode centrifugar a 2000 g por 15 minutos (se for necessrio utilizar maior
rotao ou maior tempo);
d) Recolher o filtrado e avolumar para 100 mL usando gua destilada (frao cidos
flvicos);
e) Adicionar NaOH 0,1 mol L
-1
sobre o precipitado at a lavagem completa do filtro e
avolumar para 100 mL usando gua destilada (frao cidos hmicos).

3 Determinao do teor de carbono orgnico total nas fraes

a) Transferir uma alquota de 10 mL da soluo de cido hmico ou flvico para
erlenmeyer de 250 mL.
b) Evaporar at secura em estufa a 65 5 C.
c) Adicionar 2 mL de K
2
Cr
2
O
7
0,042 mol L
-1
mais 2 mL de gua destilada em seguida
5 mL de H
2
SO
4
concentrado a cada amostra;
d) Transferir o erlenmeyer tampado com funil e o vidro de relgio para bloco de
digesto individual e ferver por 30 minutos.
41
e) Acrescentar 3 gotas de H
3
PO
4
concentrado, 0,5 mL da soluo indicadora de
difenilamina e titular com a soluo de sulfato ferroso amoniacal 0,05 mol l
-1
.
f) Conduzir, simultaneamente, duas provas em branco, omitindo-se a presena da
amostra.
g) Calcular o teor das fraes em equivalente a carbono orgnico total sendo:

COT (%) = 3CD(Vb-Va)/G , onde:

C = concentrao da soluo de sulfato ferroso amoniacal padronizado
D = fator de diluio
Va = volume, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto na amostra.
Vb = volume mdio, em mL, da soluo de sulfato ferroso amoniacal gasto nas
replicatas da prova em branco.
G = massa inicial da amostra, em grama
Observao: O extrato hmico total calculado pela soma das fraes hmica e flvica.
42

ANEXO II


1 Dados Originais e Mdias dos Tratamentos e Amostras

Tabela 10 - Dados originais de AH, AF e EHT em % de COT
Amostra Mtodo Repetio
AH AF EHT
% COT
SH1 A 1 7,50 3,08 10,58
SH1 A 2 6,93 4,17 11,10
SH1 A 3 6,47 3,60 10,07
SH1 A 4 6,55 3,99 10,54
SH1 A 5 5,87 4,34 10,21
SH1 A 6 6,50 3,50 10,00
SH1 A 7 6,02 3,95 9,97
SH1 B 1 6,23 4,04 10,27
SH1 B 2 5,90 4,03 9,93
SH1 B 3 6,11 4,01 10,12
SH1 B 4 6,37 3,60 9,96
SH1 B 5 6,40 3,57 9,96
SH1 B 6 6,62 3,96 10,58
SH1 B 7 6,37 3,75 10,12
SH1 C 1 4,48 5,58 10,06
SH1 C 2 4,81 5,71 10,52
SH1 C 3 4,96 4,46 9,42
SH1 C 4 5,12 4,69 9,81
SH1 C 5 5,07 4,73 9,80
SH1 C 6 5,03 4,65 9,68
SH1 C 7 5,22 4,62 9,84
SH1 D 1 5,82 3,71 9,53
SH1 D 2 5,67 4,00 9,67
SH1 D 3 5,49 4,01 9,51
SH1 D 4 5,82 3,74 9,56
SH1 D 5 5,33 4,15 9,48
SH1 D 6 5,50 3,99 9,49
SH1 D 7 5,38 4,06 9,44
SH1 E 1 3,42 6,63 10,05
SH1 E 2 2,64 7,57 10,20
SH1 E 3 3,55 5,30 8,86
SH1 E 4 2,41 7,37 9,78
SH1 E 5 1,49 8,11 9,60
SH1 E 6 2,53 7,02 9,55
SH1 E 7 1,54 7,82 9,36
SH1 F 1 5,45 4,17 9,62
SH1 F 2 4,98 4,17 9,15
SH1 F 3 4,73 4,88 9,61
SH1 F 4 5,17 4,52 9,69
SH1 F 5 5,36 4,51 9,87
43
Amostra Mtodo Repetio
AH AF EHT
% COT
SH1 F 6 5,12 4,64 9,76
SH1 F 7 5,47 4,54 10,01
SH1 G 1 5,25 4,62 9,87
SH1 G 2 5,11 3,69 8,80
SH1 G 3 5,21 3,76 8,98
SH1 G 4 5,22 3,78 9,00
SH1 G 5 4,54 4,21 8,75
SH1 G 6 4,30 3,96 8,26
SH1 G 7 5,57 3,81 9,39
SH2 A 1 28,20 0,77 28,97
SH2 A 2 27,99 1,17 29,16
SH2 A 3 28,54 1,61 30,15
SH2 A 4 27,51 0,93 28,44
SH2 A 5 28,34 1,01 29,35
SH2 A 6 27,47 1,09 28,56
SH2 A 7 27,96 0,77 28,72
SH2 B 1 25,40 0,32 25,72
SH2 B 2 24,73 0,31 25,04
SH2 B 3 24,35 0,53 24,88
SH2 B 4 25,24 0,75 25,99
SH2 B 5 25,63 0,68 26,31
SH2 B 6 25,57 1,04 26,60
SH2 B 7 23,57 0,81 24,38
SH2 C 1 25,00 0,63 25,63
SH2 C 2 24,54 0,73 25,26
SH2 C 3 24,74 0,26 25,00
SH2 C 4 24,45 0,75 25,19
SH2 C 5 26,35 0,34 26,69
SH2 C 6 25,05 0,42 25,47
SH2 C 7 25,48 0,42 25,89
SH2 D 1 24,81 0,57 25,38
SH2 D 2 25,74 0,66 26,40
SH2 D 3 24,24 0,49 24,74
SH2 D 4 25,26 0,14 25,40
SH2 D 5 26,16 0,34 26,50
SH2 D 6 26,38 0,49 26,87
SH2 D 7 25,72 0,55 26,27
SH2 E 1 26,59 0,51 27,09
SH2 E 2 25,90 0,57 26,48
SH2 E 3 23,53 0,30 23,83
SH2 E 4 25,50 0,31 25,81
SH2 E 5 22,93 0,31 23,24
SH2 E 6 24,46 0,51 24,97
SH2 E 7 20,19 0,31 20,50
SH2 F 1 22,23 0,35 22,58
SH2 F 2 23,41 0,49 23,90
SH2 F 3 26,43 0,52 26,94
SH2 F 4 27,19 0,51 27,70
44
Amostra Mtodo Repetio
AH AF EHT
% COT
SH2 F 5 24,39 0,45 24,84
SH2 F 6 19,11 0,37 19,48
SH2 F 7 20,57 0,37 20,94
SH2 G 1 27,45 0,36 27,81
SH2 G 2 22,51 0,22 22,72
SH2 G 3 23,59 0,28 23,87
SH2 G 4 23,99 0,21 24,20
SH2 G 5 23,72 0,06 23,78
SH2 G 6 26,11 0,07 26,17
SH2 G 7 25,13 0,22 25,35
SH3 A 1 3,20 9,61 12,81
SH3 A 2 3,26 9,56 12,83
SH3 A 3 3,08 9,62 12,70
SH3 A 4 3,11 9,49 12,60
SH3 A 5 3,12 9,57 12,69
SH3 A 6 2,90 9,61 12,51
SH3 A 7 3,18 9,64 12,82
SH3 B 1 3,37 7,93 11,29
SH3 B 2 3,33 8,92 12,25
SH3 B 3 3,19 8,09 11,28
SH3 B 4 3,45 8,20 11,65
SH3 B 5 3,27 7,73 11,00
SH3 B 6 3,30 7,03 10,33
SH3 B 7 3,18 7,50 10,68
SH3 C 1 2,74 9,59 12,33
SH3 C 2 2,75 9,71 12,46
SH3 C 3 2,70 9,39 12,10
SH3 C 4 2,74 9,22 11,96
SH3 C 5 2,83 9,17 12,00
SH3 C 6 2,78 9,05 11,83
SH3 C 7 2,81 9,84 12,65
SH3 D 1 2,68 9,27 11,95
SH3 D 2 2,69 8,89 11,58
SH3 D 3 2,66 9,24 11,91
SH3 D 4 2,81 9,40 12,21
SH3 D 5 2,77 9,02 11,79
SH3 D 6 2,79 9,45 12,25
SH3 D 7 2,72 9,65 12,36
SH3 E 1 1,53 9,74 11,26
SH3 E 2 1,64 9,97 11,61
SH3 E 3 1,14 9,65 10,79
SH3 E 4 1,04 9,99 11,03
SH3 E 5 1,25 9,80 11,05
SH3 E 6 1,41 10,13 11,54
SH3 E 7 1,29 9,60 10,88
SH3 F 1 2,20 8,95 11,15
SH3 F 2 2,12 9,72 11,84
SH3 F 3 2,01 8,61 10,62
45
Amostra Mtodo Repetio
AH AF EHT
% COT
SH3 F 4 2,01 8,99 11,00
SH3 F 5 2,05 8,77 10,82
SH3 F 6 2,01 9,25 11,26
SH3 F 7 1,77 9,20 10,97
SH3 G 1 2,30 8,79 11,09
SH3 G 2 3,07 8,03 11,10
SH3 G 3 3,09 8,16 11,25
SH3 G 4 2,83 8,28 11,12
SH3 G 5 2,34 9,05 11,38
SH3 G 6 3,27 8,69 11,96
SH3 G 7 3,29 8,94 12,23


Tabela 11 - Mdia de AH, AF e EHT nos mtodos
Mtodo
AH AF EHT
COT (%)
A 12,56 4,81 17,37
B 11,50 4,13 15,64
C 10,94 4,95 15,89
D 11,26 4,56 15,82
E 9,33 5,79 15,12
F 10,18 4,67 14,85
G 10,85 4,25 15,10


Tabela 12 - Mdia de AH, AF e EHT nas amostras
Amostra
AH AF EHT
COT (%)
SH1 5,16 4,59 9,74
SH2 25,09 0,53 25,62
SH3 2,59 9,10 11,69
46

ANEXO III


1 Resultados dos testes estatsticos

Amostra SH1 Varivel analisada: EHT

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 8.045478 1.340913 10.682 0.0000
erro 42 5.272229 0.125529
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 13.317706
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 3.64
Mdia geral: 9.7424490 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH1 Varivel analisada: AF

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 59.172743 9.862124 43.962 0.0000
erro 42 9.422057 0.224335
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 68.594800
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 10.33
Mdia geral: 4.5871429 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH1 Varivel analisada: AH

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 73.080739 12.180123 61.892 0.0000
erro 42 8.265486 0.196797
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 81.346224
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 8.61
Mdia geral: 5.1551020 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH2 Varivel analisada: EHT

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 119.176241 19.862707 7.294 0.0000
erro 42 114.376371 2.723247
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 233.552612
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 6.44
Mdia geral: 25.6155102 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------



47
Amostra SH2 Varivel analisada: AF

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 2.926649 0.487775 13.449 0.0000
erro 42 1.523286 0.036269
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 4.449935
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 36.06
Mdia geral: 0.5281633 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH2 Varivel analisada: AH

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 89.650584 14.941764 5.789 0.0002
erro 42 108.398143 2.580908
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 198.048727
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 6.40
Mdia geral: 25.0887755 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH3 Varivel analisada: EHT

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 16.140767 2.690128 18.051 0.0000
erro 42 6.259200 0.149029
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 22.399967
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 3.30
Mdia geral: 11.6891837 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH3 Varivel analisada: AF

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 18.299955 3.049993 25.343 0.0000
erro 42 5.054629 0.120348
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 23.354584
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 3.81
Mdia geral: 9.0959184 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------

Amostra SH3 Varivel analisada: AH

TABELA DE ANLISE DE VARINCIA
--------------------------------------------------------------------------------
FV GL SQ QM Fc Pr>Fc
--------------------------------------------------------------------------------
METODO 6 19.828420 3.304737 88.090 0.0000
erro 42 1.575657 0.037516
--------------------------------------------------------------------------------
Total corrigido 48 21.404078
--------------------------------------------------------------------------------
CV (%) = 7.47
Mdia geral: 2.5932653 Nmero de observaes: 49
--------------------------------------------------------------------------------
48
Tabela 13 Resultados de contrastes mdias (Y)
Contraste
AH AF EHT
SH1 SH2 SH3 SH1 SH2 SH3 SH1 SH2 SH3
C-G -0,07 0,44 -0,12 0,94 0,30 0,86 0,87 0,75 0,74
B-G 1,26 0,28 0,41 -0,12 0,43 -0,65 1,13 0,72 -0,24
A-G 1,52 3,36 0,24 -0,17 0,85 1,02 1,35 4,21 1,26
E-F -2,67 0,82 -0,70 2,63 -0,03 0,77 -0,04 0,79 0,07
E-D -3,06 -1,32 -1,40 3,17 -0,06 0,57 0,10 -1,38 -0,84
QM erro 0,20 2,58 0,04 0,22 0,04 0,12 0,13 2,72 0,15
s 0,885 3,204 0,384 0,944 0,378 0,691 0,705 3,291 0,770
- se o mdulo de Y> s conclui-se que o contraste de mdias diferente de zero;
- se o mdulo deY< s conclui-se que o contraste de mdias no diferente de zero.