Etapas de ovocitos / folículos de

El ovario multilobulado de una rana adulta contiene

el desarrollo de los ovocitos que pueden ser clasificadas en seis

etapas según el tamaño, el color y la histología.

Etapa I de ovocitos: etapa previtellogenic

Bajo el microscopio estereoscópico, la fase I de ovocitos

presenta un citoplasma transparente con un diámetro

que van 50-350 micras (Fig. 1A). El núcleo es

claramente visible a través del citoplasma y ocupa

una gran parte de los ovocitos. Al microscopio de luz

nivel, el citoplasma de la previtellogenic fase I

ovocito parece muy basófilo. Además,

También adquiere una membrana nuclear lisa y

nucleolos de diferentes tamaños (Fig. 1B). A finales de la fase I

oocito, el citoplasma de las manchas pálidas en comparación con

a la etapa inicial.

Etapa ovocito II: etapa previtellogenic

Esta etapa se desarrolla un anillo alrededor de su opaco

núcleo concéntrico. Sus rangos de tamaño 351-550

micras (Fig. 1A). Hacia el final de esta etapa, el

citoplasma es casi completamente opaca para que el

núcleo se vuelve insignificante en virtud de un microscopio estereoscópico.

Por lo tanto, la fase I de ovocitos translúcidos

puede ser fácilmente separada de la etapa oscura opaca

Ovocito II. Histológicamente, la presencia de un par de filas

de vacuolas de periféricos (alvéolos corticales) parece ser

 las características más predominantes de la etapa II

ovocito (Fig. 1B). Además, numerosos nucléolos

que varían en tamaño, se puede observar en cada celda.

Etapa ovocitos III: fase de vitelogénico

La opacidad es completa en el ovocito fase III como

aparece intensamente blanco. El diámetro de la fase III

ovocito es 560-900 micras (Fig. 1A). Histológicamente, la

número de vacuolas aumenta gradualmente, y que

se dispersan hacia la zona central (Fig. 1C).

Yema de plaquetas se forman rápidamente y sustituir el

vacuolas centrales. La dotación vitelina se convierte también en

visible en las células del folículo. Pigmentado

gránulos aparecen por primera vez en esta etapa y se encuentran en

de la periferia de los ovocitos. El núcleo de la fase de

Ovocito III posee una membrana nuclear complicado

y numerosos nucleolos.

Etapa ovocito IV: fase vitelogénico

La característica morfológica distintiva de la fase de
Ovocito IV es la pigmentación de la superficie como
lightbrown
a marrón. El ovocito es 910-1300 micras
de diámetro (Fig. 1A). Yema de plaquetas sustituir por
completo
de las vacuolas centrales, mientras que el resto de las
vacuolas
se encuentran en la periferia de los ovocitos (Fig. 1C).
El núcleo está rodeado por un muy complicado
de la membrana nuclear y contiene un gran número de
nucleolos.
Etapa V y VI de ovocitos: vitelogénico y plenamente
desarrollado
etapas
Distinto polaridad se produce en las dos últimas etapas, es
decir,
etapa V (1310-1500 micras) y la etapa VI (1510-1700
micras) (Fig. 1A). Esto se manifiesta por la diferencia
en la pigmentación de debajo de la oolemma de la
polo animal, en contraste con el polo de origen vegetal que
contiene las plaquetas yema gran lugar, el núcleo también
se desplaza hacia el polo animal (Fig. 1D). Las vacuolas se
disminuido en número, mientras que la acumulación de yema
aumenta. El polo de los animales en los ovocitos de la VI
etapa de
sólo tiene una fila de vacuolas en la periferia,
mientras que dos o tres filas de vacuolas están presentes en

el polo de origen vegetal (Fig. 1E, F).

Los estudios citoquímicos de los ovocitos se muestran
en la Tabla 1. Que pusieron de manifiesto que no hay lípidos

componente presente en las vacuolas. La mayoría de los

gotas de lípidos de color rojo y marrón se mezclan
entre las plaquetas y la yema de vacuolas. La distribución
de gotitas de lípidos en la periferia es más
concentrada que en la región interna de la tarde
ovocitos etapa. Vacuolas, teñidas positivamente con el 0,1%
azul de Alcian, los ovocitos se desarrollan en la etapa II,
y la
que se dispersan por todo el citoplasma en el
la fase III de ovocitos y, a continuación se acumulan en la
la periferia de la fase IV de ovocitos VI. Mallory
colorante tricrómico manchado la dotación vitelino en la
la fase II del ovocito y revelado como una capa fina. El
grosor de la envoltura vitelina gradualmente
aumenta en la etapa III y IV de ovocitos y, a continuación
llega a
su espesor máximo en la etapa de la V ovocito. En
Además, las plaquetas yema también manchada positivos de
esta
colorante y apareció por primera vez en la III etapa de
ovocitos tan brillante
grupos de rojo en la periferia de la célula.

Ultraestructura de ovocitos en desarrollo

Todas las etapas de los ovocitos están cubiertos con tres
capas celulares (Fig. 2A). La capa más externa es un
superficie del epitelio escamoso simple. Debajo de esta
es una capa de fibroblastos que secretan suelo
sustancia y que las fibras de colágeno. El más interno
capa está formada por las células del folículo, que
proyectan sus
procesos citoplasmáticos en el espacio perivitelino.
Estas células están unidas por desmosomas.
Además, la capa de ovocitos consiste en un celular
la capa, la envoltura vitelina, cuyas fibras se disponen
en tres direcciones, interpuesta entre microvellosidades
que se extiende desde la superficie del ovocito (Fig. 2B).
La fase I ovocito contiene una gran cantidad de
ribosomas libres y agrupaciones de los lisosomas. Las
mitocondrias
están débilmente distribuidas por todo el citoplasma
(Fig. 2C, C1). En el espacio perivitelino, no
son cortas proyecciones citoplasmáticas tanto desde
folicular
folicular de células llamadas los procesos, y de los
ovocitos
de superficie, llamadas microvellosidades. El núcleo está
rodeado
por una membrana nuclear ondulado y contiene
eucromatina y de diferentes tamaños electrón-denso
nucleolos (Fig. 2D).
La etapa de ovocito II se caracteriza por la presencia de
de vacuolas o los alvéolos corticales en la periferia (Fig.
2E). Algunos alvéolos corticales son fusionados y algunos
están estrechamente relacionados con los lisosomas. El
aparato de Golgi
complejo está bien desarrollada. En esta etapa, la vitelina
dotación comienza a formarse como paquetes aislados de la
multa
filamentos en el espacio perivitelino. Tanto el
microvellosidades del ovocito y los procesos citoplasmáticos

de las células del folículo se hacen más largos. El número

de
alargados con forma esférica a la mitocondria es
mayor, y estos se distribuyen en todo el
núcleo (Fig. 2F).
Como se mencionó anteriormente, los dos principales
distintas
características de los ovocitos de la fase III son los
depósitos de
la yema de plaquetas y la formación de pigmento
gránulos. Alvéolos corticales se hacen más grandes en tamaño
(Fig.
3A). Grupos de la mitocondria se observan entre los
las plaquetas de la yema de los ovocitos vitelogénico, y
la actividad endocitosis en la superficie del ovocito es
iniciados (Fig. 3A1). De nueva síntesis plaquetas yema de
características bipartito exhibición: la más pálida central
cuerpo compacto que se dispone en una cristalina
celosía, y el electrón periférico porción densa
(Fig. 3A2). A pesar de la pigmentación empieza en el
presente
etapa, la mayoría de los ovocitos todavía contienen sólo
unos pocos membranebound
gránulos premelanosomas llamado melanina.
La etapa de ovocitos IV se caracteriza por la coloración
de la superficie que se debe a la presencia de la
de membrana envolvente gránulos de melanina (Fig. 3B).

Vesículas abundantes endocitosis se pudo observar

en el marco del oolemma. Un gran número de endosomas
figurar junto a los lisosomas y algunos se fusionan con
estos lisosomas que contienen electrones denso
material (Fig. 3C). Más de electrones yema principal densa
órganos se observaron, además de la recién
plaquetas yema formado. Grupos de la mitocondria y
gotas de lípidos se entremezclan entre la yema de plaquetas
(Fig. 3D). Más tarde, hay un aumento en el número
de las plaquetas de la yema en el citoplasma perinuclear,
mientras que
microvellosidades aumentan en longitud y el número. Un
muy plegado resultados de la membrana nuclear en un
saculado esquema nuclear (Fig3E).
En la fase de ovocitos V, la mayoría de los gránulos de pigmento

migran hacia el polo animal (Fig. 4A), dejando

sólo unos pocos de ellos en el polo de origen vegetal y
perinuclear
zona (Fig. 4B). Durante esta etapa, los alvéolos corticales
con su contenido translúcidos son visibles
por debajo de la oolemma. Algunos actividad endocitosis
todavía se podía observar (Fig. 4C). Aunque el
general de ultraestructuras de los ovocitos de la fase VI
muy similar a la etapa de la V de ovocitos, la pigmentación
gránulos están completamente ausentes en el polo vegetal,
pero la actividad de endocitosis podría ser rara vez se observa
(Fig.
4D).
Desarrollo del folículo ovárico / ovario
Un ovario definitiva también se puede observar en el
de un mes de la rana de edad. Aparece como un órgano pequeño
óvalo
y consta de un gran número de gérmenes primodial
las células que sufren una división mitótica intensa. Mayoría
de la región central está ocupada por mesenquimales
células denominadas germinales de la cavidad principal. Esto
después, se desarrolla en la cavidad germinal secundaria
(Fig. 5A, B). La presencia de algunos de los ovocitos en estadio
I
entre los oogonios, primodial las células germinales y del
estroma
Las células se observó. Lobulación del ovario aparece
en el segundo mes de desarrollo que se deriva
en los ovarios multilobulado. El número de ovocitos en estadio I

aumentos en el ovario de dos ranas meses de edad (Fig.

5D). N oogonios se observaron en el ovario de la
de cuatro meses de la rana de edad (Fig. 5E). Etapa II, III y IV

ovocitos se hacen evidentes en el quinto, séptimo y

undécimo mes del desarrollo, respectivamente (Fig.
5F, G, H), mientras que las dos últimas fases (V y VI) aparecen
cuando las ranas llegan a la edad de 12 meses.
Los histogramas en la figura 6 se presenta el
 porcentajes de las distintas etapas de ovocitos durante la
el desarrollo, correspondiente a la histológica
apariciones como se describió anteriormente. Sólo hay
la fase I ovocitos en los ovarios de las ranas entre uno
y cuatro meses de edad. En el quinto, séptimo y
undécimo mes, las proporciones de la fase II, III y
Ovocitos IV son de 1,5, 0,7, y 10,1%, respectivamente

los ovarios de doce meses de edad ranas contienen fase V

y ovocitos VI. Las proporciones de la etapa VI de ovocitos
son notablemente mayor cuando son trece las ranas
(30,4%) y catorce (37,5%) meses de edad.
La variación estacional de los ovarios
Los histogramas de la Figura 7 revelan que durante la
De noviembre y febrero la mayoría de los ovocitos fueron
en la etapa I (> 40%), mientras que algunos estaban en las
etapas II
y III. Se observó que los ovocitos en estadio I y II
(ovocitos previtellogenic) apareció durante todo el año.
Etapa VI ovocitos estaban presentes sólo de marzo a
De octubre, donde los porcentajes de estos ovocitos fueron
35.5, 37.2, 38.1, 37.1, y 36.1 en marzo, abril, mayo,
Junio y julio, respectivamente. En agosto y septiembre,
el porcentaje de ovocitos etapa VI fue de 20% y el
disminuyó a 11,2% en octubre. Ovocitos degenerados
aparecido a lo largo del año y se incrementaron en
el número de octubre a febrero.

DISSCUSSION
Ovogénesis en los ovarios de las especies Rana ha sido
estudiado por muchos investigadores. Los criterios para la
dividiendo ovocitos en muchas etapas se basan principalmente
en
sobre el tamaño, la cantidad y la distribución de
yema de huevo y pigmentos, 2,3,6 y la morfología de la
chromosomes.21 En el presente estudio, hemos utilizado
varias
los criterios para la caracterización de los ovocitos en
desarrollo de
Tigerina R.. Estos incluyen el tamaño, color, así como
la morfología interna, de conformidad con la
clasificación de los ovocitos en las otras especies Rana
y X. laevis como ya se ha described.1-5
La capa externa de los ovocitos de R. tigerina es
compuesta de epitelio superficial, un tejido conectivo
de capa y una capa de células foliculares, así como una capa
de
vitelino fibras dispuestas en tres direcciones (llamada
la dotación vitelino o abrigo). Esta característica es
común en la mayoría de las especies de anuros. La formación
de la dotación vitelino en R. tigerina puede ser la primera
detectado como paquetes aislados de finos filamentos en la
de la fase II de ovocitos similares a los encontrados en los
ovocitos de los
X. laevis5. Sin embargo, los estudios que emplean
IgGconjugated TEM
oro coloidal reveló que vitelino
antígenos de envoltura se distribuyeron en todo el
citoplasma y todo comenzó a depositar en todo el
la superficie de la fase I oocyte.22 Este estudio indicó
que el citoplasma del óvulo ya la fase I
componentes que contiene reactivos con anti-vitelino
abrigo antibodies22, lo que sugiere que el ovocito
puede desempeñar un papel importante en la síntesis de su
propia vitelino
sobre.
En X. laevis, 10 de las microvellosidades se extiende desde
la
superficie de los ovocitos aumentar gradualmente en número y
en
de longitud en particular en la etapa III y IV de los
ovocitos. Estos
los cambios de las microvellosidades son similares a los
observados
en el oocito de tigerina R. en el presente estudio. En
Además, el presente estudio reveló que el pleno
de espesor de la dotación vitelina se observó en la
estadio V de ovocitos. El aumento del número y la duración
de la
microvellosidades podría ser necesaria para aumentar la
superficie
área de ovocitos durante el desarrollo. Dado que los
anfibios
ovocitos deben almacenar los materiales de nutrientes en la
forma de
yema de plaquetas, que necesitan una superficie
relativamente grande
superficie para la absorción de las sustancias nutritivas
que
son necesarios para la formación de la yema.
Correspondientes
a esta demanda, durante la etapa III y IV de ovocitos R.
actividades tigerina pinocitosis, hay extensas,
que puede reflejar el mecanismo por el cual los materiales
entrar en el citoplasma a través de la endocitosis
vía como se informó en X. laevis.10 Dumont23 (1978)
ha sugerido que este mecanismo está implicado en
la captación de vitelogenina que se une a lo específico
receptores en la superficie de ovocitos en preformados
sitios de membrana conocidos como pozos recubiertos que
luego
dar lugar a vesículas con cubierta pelicular. La evidencia
que apoya
la captación de vitelogenina in vitro se ha demostrado
por la inyección de 1% tripán colorante vital azul en la
saco linfático dorsal de anurans.24 mujer-27 Estos estudios
de
mostró que la absorción de azul tripán comenzó en la etapa
Ovocitos III y alcanzó el nivel máximo en la etapa
Ovocitos IV, a continuación, la actividad disminuyó en los
dos últimos
etapas. Estos resultados son similares a los reportados por
Wallace28 (1970) mediante un estudio in vitro, y también son

compatible con el aumento de las vesículas de pinocitosis

en los ovocitos de Estado III, y su disminución en la fase V

y VI ovocitos como se observa en el presente estudio.

Se ha informado de que la vitelogenina o yema de
la proteína es la precursora de las plaquetas en la yema de
vitellogenesis.29 vitelogénesis El término significa el
proceso de síntesis de las plaquetas e incluye la yema de
la formación de la vitelogenina de la liver.30 Follett y
Redshaw30 (1967) utiliza lipophosphoprotein suero
(SLPP) para sustituir a vitelogenina. SLPP es
transportados a través de la circulación sanguínea en los
ovarios, la
donde es tomada por los oocitos bajo la influencia
hormones.31 de gonadotropinas Después de transporte en
los ovocitos, SLPP se disocia en dos componentes,
phosvitin y lipovitellin, y estos son finalmente
reconstituido para formar las plaquetas de la yema. El
presente
estudio ha demostrado que la formación de la yema de
comienza en la fase III, como en X. laevis.5 Tal vez esto
ocurre
a través del receptor mayor endocitosis mediada por
como se comentó anteriormente, ya que un gran número de
endosomas y lisosomas electrón-denso podría ser
observados en la etapa IV ovocitos.

Grupos mitocondrial observada en vitelogénico

ovocitos en este estudio se observan comúnmente en
muchos anurans.32 Esto puede ser debido a la necesidad de un

el suministro de energía importante para la síntesis de

macromoléculas de nuevo
y para el montaje de las diversas estructuras
en los ovocitos. El aumento de las mitocondrias
números durante la vitelogénesis puede ser debido a su
la rápida proliferación, como se ha sugerido que las
del total de 16-17 rondas de ADN mitocondrial
de replicación durante la ovogénesis, 12 rounds tendrá lugar

antes del inicio de vitellogenesis.33

El presente estudio también puso de manifiesto la abundancia

de ribosomas libres en el citoplasma de todas las etapas de

ovocitos, especialmente alrededor del núcleo, mientras que
sólo un
poco retículo endoplasmático rugoso se observó.
Esto se cree que es una característica básica de anuros
ovocitos, 33 desde ribosomas libres son el sitio donde
diversas proteínas se sinteticen para su uso dentro de los
celular. Durante la vitelogénesis, las moléculas de ARNm se
activamente sintetizados pero son sobre todo almacenados en
una forma inactiva. Cuando la síntesis de los grandes
deja de ARNm de la población, la producción de rRNA
comienza y continúa durante la ovogénesis conjunto.
Si estos cambios en los patrones de síntesis de ARN
se debe directamente a la captación de vitelogenina o de
de la aparición de las plaquetas de la yema es todavía
unknown.33
Durante el desarrollo de los ovocitos de tigerina R., el
cambios envoltura nuclear de tener un buen
de contorno en las primeras etapas de ser más alta
doblado en etapas posteriores. Este cambio puede ser en
respuesta
a la necesidad de una gran superficie para el transporte de
de las diversas clases de ARN al citoplasma, y
el transporte inverso de proteínas en el núcleo de
a través de la membrana nuclear a través de pores.33 nuclear
de
Nuestro estudio citoquímico utilizando Alcian-azul
tinción de acuerdo con los resultados de TEM que las
vacuolas
aparecen por primera vez en la fase de ovocitos II, y su
número
se aumenta en la etapa III y IV de los ovocitos. Sin
embargo,
que se reducen a una o dos capas en la periferia
del ovocito totalmente crecido. Estas vacuolas son similares

a los alvéolos corticales de ovocitos teleósteos como se

informó
por Selman et al.34, 35 Aparecen vacío en la rutina
secciones histológicas, debido a la extracción de sus
contenido durante la preparación del tejido. Alcian-azul
tinción de vacuolas de estos indica la presencia de
contenido de mucopolisacáridos. En X. laevis, se
encontró que el N-acetil-β-D-actividad glucosaminidasa
se asoció con similares corticales granules.36 un
autorradiográfica estudio también demostró la
la incorporación de [3H] glucosa en el contenido de
alvéolos corticales de teleósteos oocytes.34 Además,
encontró que desaparecen en el óvulo fertilizado
(datos no publicados).
Observaciones histológicas de desarrollo de los ovarios
en este estudio reveló que las estructuras de un mes-el
de ovario de edad son muy variables, ya que cada rana
con la misma edad que tiene una tasa de crecimiento
diferentes, y la
esto afecta el desarrollo ovárico. Todos oogonios había
diferenciado en la etapa I ovocitos en el momento de la
ranas alcanzaron cuatro meses. Estos ovocitos en estadio I
cesar el desarrollo en la etapa de diploténico de la primera

Etapa VI meiosis.33 ovocitos que se producen en 12 --

mes de ranas de edad podrán representar a la mujer de edad
que
ranas alcanzan la madurez. Esto está en contraste con Bufo
bufo
en Europa, que alcanzan la madurez después de la edad de 3-4

years.37, 38 Este hallazgo implica que la tasa de

crecimiento
de los anuros que viven en las zonas tropicales es mucho más
rápido que
los que viven en un clima frío.
Una de las características más notables de
los anfibios es el cambio de la ciclicidad ovárica en
la correlación con la variación en el medio ambiente o la
condiciones de la temporada, 39,40 en especial la temporada
ciclo climático de la temperatura y la precipitación. En
los países tropicales, donde no se pronuncia húmedo
y la estación seca, la cría y no reproductores
períodos están claramente separados. En la India (en
Dharwad),
la temporada de cría de ranas principal coincide con la
de pico de lluvias del monzón de junio a August.41 El
clima en Tailandia es similar, y la cría
temporada de tigerina R. coincide con el período de
la lluvia del monzón, que generalmente se extiende de mayo a

De septiembre. La aparición de la etapa I y II o

ovocitos previtellogenic durante todo el año como en el
otros anuros, 42 sugiere que siempre hay una
piscina reservada de los ovocitos. El descenso en su número
de
se asocia con la contratación de los ovocitos de
este grupo a final de ovocitos vitelogénico como ocurre en
R.
tigrina entre abril-June.43 Este estudio reveló que
los ovocitos degenerado también aparecen durante todo el año

y el aumento de octubre a febrero, que

se correlaciona con la disminución de la etapa VI ovocitos.
Esto
sugiere que la atresia durante ese período se debe a la
la degeneración de los ovocitos fase VI, que podría
ser debido a la reducción del nivel de gonadotropins.44, 45
En el presente estudio, se constató que el maturestage
Ovocitos VI sólo se observan en marzo de
De octubre. La presencia de la etapa VI ovocitos ligeramente

precede a la aparición de la temporada de lluvias, pero su

terminación
está cerca del final de la temporada. Por lo tanto, este
período es
conocido como la época de reproducción, mientras que el
período de
durante noviembre a febrero se conoce como la
temporada no reproductiva. Además, la presencia de la etapa
VI ovocitos durante marzo a octubre se correlaciona con
de la gran cantidad de espermatozoides en el testículo en el
hombre
frogs46 y abundancia de los basófilos, que producen
gonadotropinas en la pars distalis de R. tigerina.47