Anda di halaman 1dari 3

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKOMPATIBILITAS

Nama : Tri desiana Kurniawati Hartono 021211131006


Jadwal praktikum : senin-29-09-2014

1. Apakah fungsi laminar flow pada uji biokompabilitas ?
Prinsip kerja Laminar flow yaitu membunuh dan menghilangkan bakteri yang
terbawa dari udara pada ruangan untuk membuat suasana ruangan menjadi steril.
Alat ini berfungsi untuk mensterilkan ruangan yang akan digunakan untuk
percobaan agar tidak ada kontaminasi bakteri yang terdapat di udara (Batchelor,
2002) dan agar tempat kerja bebas dari debu maupun spora yang mungkin jatuh
ke dalam media dengan cara meniupkan udara steril secara kontinue pada
persiapan bahan uji biokompabilitas yang dilengkapi dengan lampu fluorescent,
sinar UV dan kipas angin.


2. Bagaimana mekanisme reaksi jaringan terhadap penggunaan bahan
MTT?
MTT assay bekerja berdasarkan pada perubahan garam tetrazolium (MTT)
menjadi formazan dalam mitokondria sel fibroblas. Formazan adalah kompleks
substrat enzim yang dibentuk oleh MTT dan enzim suksinat dehidrogenase pada
mitokondria sel MTT berwarna kuning. MTT diabsorbsi ke dalam sel fibroblas.
Enzim mitokondrial suksinat dehidrogenase melalui reaksi reduksi dapat
memecah MTT. Enzim tersebut terdapat pada bagian matriks mitokondria dan
partikel kecil pada krista. Enzim mitokondrial suksinat dehidrogenase yang
bekerja mengkonversi MTT menjadi kristal formazan berwarna biru dan warna
biru menandai bahwa sel tersebut hidup. Terbentuknya warna biru karena
perubahan ikatan rangkap menjadi ikatan selang seling dari senyawa MTT
menjadi formazan. Ikatan selang seling ini disebut dengan gugus kromofor
(Siregar,2011)
Metode MTT assay digunakan untuk mendeteksi sel yang hidup karena
sinyal yang dihasilkan tergantung dari keaktifan sel oleh karena itu hasilnya
dapat dibaca untuk perhitungan sitotoksik proliferasi atau aktivasi. aktivasi
sitotoksik kini dievaluasi dengan metode kolorimetrik.Prinsip pengujian
berdasarkan kemampuan enzim reduktase mitokondria dehydrogenase pada sel
yang aktif untuk mengubah larutan garam tetrazolium menjadi suatu produk
formazan yang tidak larut air. Kristal violet formazan yang terbentuk terlebih
dahulu dilarutkan dengan DMSO sehingga membentuk larutan bewarna dapat
diukur intensitasnya menggunakan spektrofotometer UV pada 550 nm.

3. BagaimanakahcaramenghitungjumlahselhiduppadaujiMTT ?
Untuk mengetahui persentase jumlah sel hidup dilakukan dengan rumus :




Keterangan :
% selhidup : Persentase jumlah sel hidup setelah pengujian
Perlakuan : Nilai densitas optik formazan pada setiap sampel setelah pengujian
Media : Nilai densitas optik formazan pada kontrol media
Sel : Nilai densitas optik formazan pada kontrol sel

4. Jelaskan kapan suatu bahan dikatakan tidak toksik terhadap jaringan
sekitar dengan menggunak uji MTT?
Uji sitotoksik digunakan untuk menentukan parameter nilai IC50. Nilai
IC50 menunjukkan nilai konsentrasi yang menghasilkan hambatan proliferasi sel
sebesar 50% dan menunjukkan besar atau kecilnya toksisitas suatu senyawa
terhadap sel. Nilai ini digunakan sebagai dasar untuk melakukan uji pengamatan
kinetika sel. Nilai IC50 dapat menunjukkan potensi sitotoksik pada suatu
senyawa. Semakin besar harga IC50 maka senyawa tersebut semakin tidak
toksik. Akhir dari uji sitotoksisitas dapat memberikan informasi persen dari sel
yang mampu bertahan hidup (Meiyanto, 2003)
Cara Perhitungan IC50 (Dyaningtyas, 2012)
Melihat perbedaan absorbansi kontrol pelarut dengan kontrol sel.
Kontrol sel berisi media kultur + sel, sedangkan kontrol pelarut berisi media
kultur + sel + DMSO dengan konsentrasi terbesar pada seri konsentrasi) %
DMSO terbesar dilihat dari konsentrasi DMSO dalam seri konsentrasi sampel
yang paling pekat. Kontrol media berisi media kultur
o Jika absorbansi kontrol pelarut sama dengan kontrol sel maka hitung
prosentase sel hidup dengan rumus berikut :
Prosentase sel hidup = (Absorbansi perlakuan Absorbansi kontrol media) x 100%
(Absorbansi kontrol sel Absorbansi kontrol media)
Jika absorbansi kontrol pelarut lebih rendah dari absorbansi kontrol sel maka hitung prosentase
sel hidup dengan rumus berikut :
Prosentase sel hidup = (Absorbansi perlakuan Absorbansi kontrol media) x 100%
(Absorbansi kontrol pelarut Absorbansi kontrol media)
Nilai IC50 dapat menunjukan potensi suatu senyawa sebagai sitotoksik
kinetika sel. semakin besar harga IC50 maka senyawa tersebut semakin tidak
toksik. Kahir dari uji sitotoksik dapat memberikan informasi % sel yang
mampu bertahan hidup sedangkan pada organ target memberikan informasi
langsung tentang perubahan yang terjadi pasa fungsi sel secara spefisik.


DAFTAR PUSTAKA

Batchelor, G. (2000). Introduction to Fluid Mechanics.
Dyaningtyas. 2012. Cancer Chemoprevention Research Center Fakultas Farmasi UGM.
Meiyanto BS Sugiyanto, , AE Nugroho, UA Jenie. 2003. Aktivitas antikarsinogenik
senyawa yang berasal dari tumbuhan. Majalah Farmasi Indonesia 14 (4), 216-225
Siregar, Siti Nursani. 2011. Sitotoksisitas Ekstrak Lerak (Sapindus rarak DC) Terhadap
Sel Fibroblas Sebagai Bahan Irigasi Saluran Akar Secara In Vitro. USU
Repository
Meizarini, Asti perbedaan konsentrasi bahan pemutih gigi terhadap sitotoksitas
menggunakan essay MTT . J penelit Med. Eksata. 2009;8(1):8-15
Wahyuni, Lusianti, Almahdy, Dachriyanus.
IsolasiSenyawaSitotoksikTerhadapSelKankerPayudaradariKulitBatangGarcinia
Griffithii T. Anders.JurnalFarmasi Indonesia. 2009; 4(4):177 -187.