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Tema 10: Ingeniería Genética y

Biotecnología

Tema 10: Ingeniería Genética y Biotecnología Yolanda Loarce Tejada Conceptos de: Ingeniería Genética, enzimas de restricción,
Yolanda Loarce Tejada
Yolanda Loarce Tejada

Conceptos de: Ingeniería Genética, enzimas de restricción, clonación de genes y vectores de clonación.

Microorganismos utilizados.

Aplicaciones de la Ingeniería Genética:

Médicina, Agricultura y Ganadería

Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
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¿Qué es la Ingeniería Genética?

Es el conjunto de técnicas derivadas de la Biología Molecular, que permiten manipular el genoma de los seres vivos

Aplicación de los conocimientos de la Ingeniería Genética

¿Qué es la Ingeniería Genética? Es el conjunto de técnicas derivadas de la Biología Molecular, que

Biotecnología

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La Ingeniería Genética es posible porque: Adenina Apareamiento: G:C Bases A:T Citosina nitrogenadas El ADN de
La Ingeniería Genética es
posible porque:
Adenina
Apareamiento:
G:C
Bases
A:T
Citosina
nitrogenadas
El ADN de todos los
organismos tiene la
misma composición
y estructura
Timina
Guanina
Esqueleto
Azúcar- Fosfato
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Arber descubre las enzimas de restricción (1968)

Arber descubre las enzimas de restricción (1968)

Son las “tijeras moleculares”

que cortan el ADN por sitios específicos

Arber descubre las enzimas de restricción (1968) Son las “tijeras moleculares” que cortan el ADN por
T2 E. coli
T2
E. coli

Las bacterias las utilizan como

defensa frente a la infección vírica

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5’

3’

5’ 3’ EcoRI 5’ 3’
5’
3’
EcoRI
5’
3’
5’ 3’ 5’ 3’ EcoRI 5’ 3’ Extremos 5’ 3’ cohesivos Universidad de Alcalá Patrimonio de

Extremos

5’ 3’ 5’ 3’ EcoRI 5’ 3’ Extremos 5’ 3’ cohesivos Universidad de Alcalá Patrimonio de

5’

3’

cohesivos Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
cohesivos
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ADN 1

ADN 2

ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad

ligasa

ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
ADN 1 ADN 2 ligasa ADN recombinante Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad

ADN

recombinante

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La tecnología del ADN recombinante permite la

CLONACIÓN de fragmentos de ADN

La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las

ADN

recombinante

La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las

CLONACIÓN

La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las
La tecnología del ADN recombinante permite la CLONACIÓN de fragmentos de ADN ADN recombinante CLONACIÓN Las

Las bacterias son las encargadas de multiplicar los ADNs que se quieren clonar

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Para clonar un fragmento de ADN precisamos la ayuda de las BACTERIAS

Para clonar un fragmento de ADN precisamos la ayuda de las BACTERIAS Escherichia coli plásmido Genoma
Para clonar un fragmento de ADN precisamos la ayuda de las BACTERIAS Escherichia coli plásmido Genoma

Escherichia coli

plásmido

Genoma

bacteriano

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Los plásmidos se utilizan como

VECTORES DE CLONACIÓN

Los plásmidos se utilizan como VECTORES DE CLONACIÓN ligasa ADN recombinante Crecimiento en medio de cultivo
Los plásmidos se utilizan como VECTORES DE CLONACIÓN ligasa ADN recombinante Crecimiento en medio de cultivo

ligasa

Los plásmidos se utilizan como VECTORES DE CLONACIÓN ligasa ADN recombinante Crecimiento en medio de cultivo

ADN recombinante

Crecimiento en medio de cultivo
Crecimiento
en medio de
cultivo

Microorganismos

transgénicos

¿Cómo se introduce el ADN recombinante en

el interior de la bacteria?

¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa

2

¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa

1

¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa
¿Cómo se introduce el ADN recombinante en el interior de la bacteria? 2 1 La tasa

La tasa de entrada o “TRANSFORMACIÓN” espontánea es

muy baja. Para aumentar el rendimiento se recurre a

tratamientos químicos y físicos

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Los virus también se utilizan para introducir ADN en el interior de las células

T2 E. coli
T2
E. coli
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Extremos cos del fago

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

ADN vírico

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del
Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del
Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

Gen para

clonar

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

DNA recombinante

Proteínas de la cubierta del

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

fago

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

Construcción de fagos in vitro

Extremos cos del fago ADN vírico Gen para clonar DNA recombinante Proteínas de la cubierta del

Fagos con el gen insertado

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Formas replicativas de los cósmidos Los cósmidos son vectores de clonación como los plásmidos, con fragmentos

Formas replicativas de los cósmidos

Los cósmidos son vectores de clonación como

los plásmidos, con fragmentos (cos) que permiten

su empaquetamiento en el interior de los fagos

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¿Cómo sabemos qué bacteria ha incorporado la

molécula recombinante?

Los vectores de clonación llevan genes chivatos o delatores
Los vectores de
clonación llevan
genes chivatos
o delatores
¿Cómo sabemos qué bacteria ha incorporado la molécula recombinante? Los vectores de clonación llevan genes chivatos

Amp

¿Cómo sabemos qué bacteria ha incorporado la molécula recombinante? Los vectores de clonación llevan genes chivatos

Medio SIN ampicilina

Medio CON ampicilina

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Bacillus Bordetella Clostridium Escherichia Spirulina Staphylococcus Streptococcus Salmonella Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
Bacillus
Bordetella
Clostridium
Escherichia
Spirulina
Staphylococcus
Streptococcus
Salmonella
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Aplicaciones de los microorganismos

transgénicos

Medicina : producción de Insulina humana, hormona del crecimiento, vacunas y anticuerpos ....

Medicina: producción de Insulina humana, hormona del crecimiento, vacunas y anticuerpos ....

Medio Ambiente : desarrollo de microorganismos capaces de degradar compuestos tóxicos o peligrosos…

Medio Ambiente: desarrollo de microorganismos capaces de degradar compuestos tóxicos o peligrosos…

Industria alimentaria : producción de edulcorante artificiales, compuestos que se utilizan en panaderías, producción de queso

Industria alimentaria: producción de edulcorante artificiales, compuestos que se utilizan en panaderías, producción de queso y cerveza ....

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¿Cómo se obtienen las plantas transgénicas?

¿Cómo se obtienen las plantas transgénicas? Mediante el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens Se sustituye la
¿Cómo se obtienen las plantas transgénicas? Mediante el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens Se sustituye la
Mediante el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens
Mediante el
plásmido Ti de
Agrobacterium
tumefaciens
¿Cómo se obtienen las plantas transgénicas? Mediante el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens Se sustituye la
¿Cómo se obtienen las plantas transgénicas? Mediante el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens Se sustituye la

Se sustituye la región del plásmido que produce el tumor o agalla de la corona por el gen de interés. Este plásmido recombinante se introduce en la bacteria.

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Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de

Planta sensible

Partes de la planta se ponen en contacto con las

bacterias en medio de cultivo

Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de
Planta sensible Partes de la planta se ponen en contacto con las bacterias en medio de

Las células que incorporan el plásmido crecen en un medio

especial o selectivo

Planta resistente

A partir de las células transformadas

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se obtienen plantas adultas

Para transformar plantas que no son atacadas por Agrobacterium se recurre a la pistola o cañón de genes

Plásmido

recombinante

Para transformar plantas que no son atacadas por Agrobacterium se recurre a la pistola o cañón
Para transformar plantas que no son atacadas por Agrobacterium se recurre a la pistola o cañón

Partícula

de oro

Para transformar plantas que no son atacadas por Agrobacterium se recurre a la pistola o cañón

Pistola de

genes

Para transformar plantas que no son atacadas por Agrobacterium se recurre a la pistola o cañón
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Aplicaciones de la Biotecnología vegetal

  • Resistencia a herbicidas

  • Resistencia a plagas y a enfermedades

  • Mejoras de las propiedades nutritivas

  • Resistencia a sequía y frío (estrés abiótico)

  • Otras aplicaciones: producción de variedades coloreadas, plantas transgénicas productoras de vacunas, etc ...

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Genes cry de Bacillus thurigiensis y su aplicación en la

obtención de plantas resistentes a insectos

  • Bacillus thurigiensis es una bacteria Gram-positiva del suelo, que en el momento de la esporulación, forma un cristal (cuerpo paraesporal) que puede llegar a alcanzar el 40% del peso seco de la célula.

  • Las proteínas

que

componen

el

cristal se denominan proteínas Cry,

codificadas por los genes cry que

se encuentran

en

plásmidos

de

gran tamaño (se conocen unos 130

genes y alrededor de 150 variedades alélicas).

Genes cry de Bacillus thurigiensis y su aplicación en la obtención de plantas resistentes a insectos
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Modo de acción de las toxinas cry en las larvas de insectos

Activación Ingestión Solubilización Bacillus Thurigiensis Cristal endotoxina Algodón Bt Caderina Septicemia Muerte de la larva APN
Activación
Ingestión
Solubilización
Bacillus Thurigiensis
Cristal
endotoxina
Algodón Bt
Caderina
Septicemia
Muerte de la larva
APN
Células
intestino medio
AMP
ATP-Mg2+
Formación poros
membrana
Muerte celular
GDP GTP-Mg2+
Señalización celular Universidad de Alcalá Patrimonio de la Humanidad
Señalización
celular
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¿Qué entendemos por CLONACIÓN animal?

clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una

célula o núcleo de otro individuo, de modo que los individuos clonados son idénticos o casi idénticos al original.

¿Qué entendemos por CLONACIÓN animal? clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una
¿Qué entendemos por CLONACIÓN animal? clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una
¿Qué entendemos por CLONACIÓN animal? clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una

Individuos idénticos

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Transgénesis y clonación en animales

Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio

Oveja que se quiere clonar

Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio
Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio
Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio

Oveja donadora de célula huevo

Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio
  • Medio de cultivo de embriones

Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio
Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio
Transgénesis y clonación en animales Oveja que se quiere clonar Oveja donadora de célula huevo Medio

Oveja

descendiente

clónica

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Oveja en cuyo útero se desarrollará el embrión

Aplicaciones de la clonación animal

La eficiencia de clonación a partir de un animal adulto es muy baja, lo que limita su aplicación en la industria agropecuaria.

  • Mejoramiento genético

  • Conservación de especies silvestres en peligro de extinción

  • Producción de animales transgénicos:

Productores de fármacos por sangre leche u orina(Ej. factor de coagulación IX humano)

Producción de órganos de cerdo para xenotransplantes Producción de animales resistentes a enfermedades

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