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Introduccin a la Microbiologa Industrial

1.- Introduccin.
A la hora de desarrollar un proceso industrial destinado a la produccin de un
metabolito secundario o de una enzima de origen microbiano, hay que considerar
varios aspectos: (1) el aislamiento del microorganismos de inters, la deteccin
de los metabolitos secundarios deseados y la conservacin del microorganismo
aislado para la produccin industrial estable, (2)el diseo del proceso de
fermentacin, y (3) la mejora de las cepas aisladas para incrementar el
rendimiento.
Todos los organismos producen metabolitos primarios (aquellos que intervienen
en las rutas centrales del metabolismo y que son esenciales para la supervivencia
y, en general, idnticos en todo tipo de organismos) y secundarios. Estos ltimos
son especficos de cada tipo de organismo y estn involucrados en el
establecimiento de las relaciones ecolgicas del organismo productor.
2.- Aislamiento y manipulacin de cultivos de inters.
2.1.- Aislamiento de cultivos
El primer paso en el proceso industrial es el aislamiento de un microorganismo
que produzca un metabolito secundario con inters industrial. La tarea de
aislamiento de microorganismos hay que plantearla considerando las
caractersticas del producto y del proceso que se va a realizar y las caractersticas
ecolgicas de la muestra que se toma. Lo primero nos indicar dnde tomar las
muestras y lo segundo cmo disear los medios de aislamiento para los
microorganismos presentes en dichas muestras.
El estudio ecolgico de las caractersticas del microorganismo de inters permitir
hacer una bsqueda sistemtica en los diferentes nichos de un ecosistema, lo que
proporcionar un gran nmero de microorganismos de salida para el proceso de
deteccin.
Un esquema de estudio ecolgico previo a la toma de muestras comprendera los
siguientes pasos: (1) lista de grupos de microorganismos que van a ser aislados
(los medios y tcnicas de cultivo son diferentes para bacterias y hongos, por
ejemplo); (2) descripcin del ecosistema o hbitat en el que se van a tomar las
muestras, (3) agrupacin de las muestras segn el material de origen (suelo y
horizontes del suelo, agua, material vegetal, etc.); (4) lista de los parmetros
ambientales a considerar (pH, salinidad, potencial redox, temperatura,
etc.); (5)lista de los substratos naturales disponibles por los microorganismos
autctonos en su ambiente natural, (6) diseo de las tcnicas de aislamiento
usando la informacin de los puntos anteriores, (7) evaluacin de las tcnicas de
aislamiento usando patrones internos como control, y (9) utilizacin de
procedimientos de enriquecimiento para los microorganismos que puedan ser de
inters.
1.2.- Deteccin de metabolitos secundarios:
Una vez recogidas las muestras hay que desarrollar el procedimiento de bsqueda
y deteccin (screening en ingls) del metabolito secundario de inters.
Histricamente la bsqueda se ha dirigido hacia la produccin de antibiticos; pero
actualmente se ha ampliado el campo a otros productos teraputicos y, en
general, puede desarrollarse cualquier bsqueda para la que se disponga de un
sistema de deteccin suficientemente correcto.
En cualquier caso, haz que considerar dos cualidades importantes a la hora de
disear un proceso de deteccin: (1) la selectividad: se ha de poder detectar un
compuesto de inters mezclado con un nmero muy elevado de compuestos que
no son interesantes; y, (2), la sensibilidad: la concentracin del metabolito
secundario de inters puede ser extremadamente baja.
La bsqueda puede hacerse en cultivos slidos o en cultivos lquidos. Sin
embargo, puesto que la produccin ha de realizarse en cultivos lquidos y puesto
que los metabolitos secundarios de cultivos slidos son diferentes de los de
cultivos lquidos, es conveniente realizar la deteccin, siempre que sea posible, en
medios de cultivo lquido.
Las pruebas de actividad se pueden realzar sobre diferentes tipos de organismos
(animales vivos, plantas, bacterias, hongos), sobre cultivos celulares o sobre
preparaciones subcelulares. Para cada tipo de bsqueda hay que disear un
procedimiento de deteccin adecuado.
1.3.- Desarrollo del inculo:
Tanto en la primera produccin industrial como en las siguientes es necesario
utilizar grandes volmenes de cultivo por lo que la preparacin de un inculo
adecuado es una tarea de importancia capital. En un proceso industrial puede ser
necesario realizar incubaciones de gran volumen (>160.000 litros) para las que
son necesarios tambin grandes inculos (>1.000 litros).
Para repetir rutinariamente la operacin de produccin es necesario utilizar
cultivos almacenados del microorganismo de inters (cultivos stock) y a partir de
ellos hay que desarrollar el inculo intentando: (1) minimizar la prdida de
viabilidad durante el proceso de recuperacin del microorganismo, (2) obtener
una copia genticamente idntica a la que se haba almacenado (esto es: evitar
mutaciones y contaminaciones), (3) incrementar la biomasa del cultivo
y (4) cultivar el microorganismo hasta un estado fisiolgico adecuado para lograr
la mayor eficiencia en la fase final de produccin.
Al desarrollar un inculo es necesario conseguir una alta velocidad de crecimiento
y de concentracin de biomasa al inicio del proceso de fermentacin.
1.4.- Mejora de las tcnicas de cultivo:
Desde las primeras etapas del desarrollo de un proceso industriales hace
necesario mejorar el medio de cultivo del microorganismo para conseguir un
mayor rendimiento en la produccin del metabolito de inters, reducir la presencia
de otros productos que puedan dificultar el aislamiento del compuesto deseado y
reducir los costes de produccin. Puesto que el nmero de variables qumicas y
fsicas independientes que afectan el crecimiento del microorganismo es muy alto,
su optimizacin mediante el anlisis sistemtico de cada una de ellas se hace
rpidamente imposible. Para realizar el estudio cuando hay ms de cinco variables
independientes se recomienda utilizar una aproximacin de anlisis multivariable
(mtodo de Packett-Burman) que consiste en agrupar varias variables para decidir
sobre el incremento en rendimiento debido al cambio de un grupo de ellas.
1.5.- Conservacin de los microorganismos importantes:
La conservacin de microorganismo de inters industrial es una tcnica bsica en
todo el proceso. La conservacin ha de estar encaminada al mantenimiento de las
cepas altamente productivas durante largos periodos de tiempo sin que se
produzcan cambios fenotpicos, especialmente en las caractersticas relacionadas
con la produccin de los metabolitos secundarios de inters.
Se han desarrollado varias tcnicas de conservacin; (1) el subcultivo de clulas
activas, (2) la desecacin de cultivos, (3) la liofilizacin, (4) la congelacin
mecnica (-20 -80C) y (5) la ultracongelacin en vapor de nitrgeno lquido (-
156C) o en nitrgeno lquido (-196C). Generalmente, las tasas de supervivencia
son ms elevadas despus de la conservacin en nitrgeno lquido que tras
cualquiera de los otros mtodos. En los casos de conservacin por congelacin,
es necesario aadir a los cultivos agentes crioprotectores (glicerol, Di-Metil-
SulfOxido, DMSO).

1.- Introduccin
La Microbiologa Industrial trata de utilizar microorganismos para que
produzcan compuestos o realicen funciones que sean tiles desde un punto de
vista aplicado. Comprende el cultivo de microorganismos para su propia
produccin como alimento y para la produccin y transformacin de frmacos,
alimentos, disolventes orgnicos, etc.
Para poder utilizar microorganismos en procesos aplicados debemos conocer
los principios bsicos del funcionamiento celular y del cultivo controlado de
microorganismos. Para cada producto o transformacin concreta ser necesario,
adems, determinar qu microorganismo es el ms adecuado para llevarlo a cabo.
En este captulo revisaremos algunos aspectos bsicos para el estudio de los
procesos de produccin que estudiaremos en captulos siguientes.
2.- Tipos de organizacin celular
Los seres vivos pueden agruparse en tres grandes grupos que se separaron en
pocas evolutivas muy antiguas: bacterias, arqueas y eucarias. Bacterias y
arqueas presentan un tipo de organizacin celular conocida como procaritica
porque en ellas el material gentico no est separado del resto del citoplasma por
una membrana nuclear (son clulas sin ncleo), mientras que los organismos
pertenecientes al grupo de eucaria presentan un ncleo diferenciado del resto de
la clula y, por tanto, su organizacin celular se denomina eucaritica.
La teora evolutiva establece que todos los seres vivos (procariticos y
eucariticos) derivan de un antepasado comn cuyos descendientes fueron
divergiendo a lo largo de la evolucin. Mediante tcnicas de biologa molecular ha
sido posible ir estableciendo las relaciones familiares entre los diferentes grupos
de organismos de forma que pueden representarse en esquemas que relacionan
los grupos entre s. Estos esquemas se conocen generalmente con el nombre
de rboles universales de la vida.
Los organismos ms relevantes desde el punto de vista industrial y aplicado
pertenecen al grupo de bacterias y eucarias. Dentro de las bacterias se
encuentran la mayora de los organismos patgenos, un gran nmero de
productores de substancias de inters aplicado (antibiticos, por ejemplo) y
productores y agentes alterantes de alimentos. Dentro de los eucarias nos
encontramos los animales, plantas y hongos (las levaduras unicelulares y los
hongos filamentosos). Hay algunas arqueas que participan en procesos de inters
aplicado (organismos metangenos, por ejemplo). Aunque su nmero es reducido,
probablemente se ir incrementando en el futuro conforme se profundice en el
estudio de este tipo de microorganismos.
En esta presentacin hemos dejado de un lado los virus por ser estructuras
acelulares que slo desarrollan actividad biolgica cuando se encuentran en el
interior de una clula a la que infectan y por su escasa relevancia en microbiologa
industrial (dejando a un lado su efecto negativo sobre ciertos cultivos industriales).
El estudio de la organizacin interna de las clulas procariticas y eucariticas
cae fuera de las posibilidades de este curso y los conceptos bsicos deben ser
repasados por los alumnos.
3.- Estructura de la pared celular
La estructura de la pared celular de las bacterias permite distinguir dos grandes
grupos: las bacterias Grampositivas (cuya pared celular contiene una sola
membrana, una gruesa capa de peptidoglicano y cidos teicoicos, Fig. 1A) y las
bacterias Gram-negativas (cuya pared celular tiene dos membranas ligeramente
diferentes que delimitan un espacio periplsmico en el que se encuentra una
delgada capa de peptidoglicano, y que presentan lipopolisacridos en el exterior,
Fig. 1B)

Las diferencias estructurales entre
las paredes celulares de bacterias
Gram-positivas y Gram-negativas son
responsables de diferente sensibilidad
a antibiticos y de diferencias en su
capacidad de exportar protenas al
exterior de la clula.
Las bacterias entricas son
ejemplos de Gram-negativas mientras
que las bacterias lcticas son
ejemplos de Gram-positivas
Las clulas eucariticas pueden tener pared que recubra su membrana. Esto
ocurre en los hongos y en las plantas. Sin embargo, la estructura de esta pared es
diferente a la de las bacterias. Una diferencia esencial es que los eucariontes no
tienen peptidoglicano en su pared celular. Las enzimas que sintetizan el
peptidoglicano son dianas especficas para antibiticos activos frente a bacterias
pero son inactivos frente a eucarias (por ejemplo, las penicilinas y cefalosporinas).
4.- Membranas biolgicas
Las membranas biolgicas son unas estructuras esenciales para el
mantenimiento de la integridad celular y para el correcto funcionamiento de los
procesos biolgicos. Desempean dos fuciones esenciales: (1) son barreras de
permeabilidad que separan diferentes compartimentos celulares, y (2) son un
soporte que permite mantener ordenados los componentes celulares para que
puedan funcionar correctamente.
Las membranas biolgicas son impermeables al agua, compuestos polares y
compuestos cargados. Para que este tipo de compuestos entre o salga de la
clula o de los compartimentos intracelulares son necesarios canales de paso
especficos. Las molculas apolares, sin embargo, s pueden atravesar las
membranas biolgicas.
Las barreras de permeabilidad permiten mantener concentraciones diferentes
de iones o molculas a ambos lados de una membrana biolgica. Esta diferencia
de concentraciones (que se suele denominargradiente de concentracin) da lugar
a la existencia de una energa potencial que puede ser transformada en la energa
qumica necesaria para el funcionamiento de los procesos biolgicos.
Por tanto, los agentes qumicos que destruyen las membranas biolgicas son
letales para las clulas ya que destruyen los gradientes que son la base de
muchos procesos biolgicos y desordenan los componentes celulares al destruir el
soporte en el que se encuentran
2.1.- El microorganismo: Saccharomyces cerevisiae. Los hongos
La levadura Saccharomyces cerevisiae es un hongo ascomiceto unicelular. Los
hongos son organismos eucariticos (sus clulas tienen una organizacin interna
en orgnulos membranosos) quimiohetertrofos. A continuacin vamos a explicar
el concepto de quimiohetertrofo y a describir los principales grupos de hongos.
Los organismos necesitan carbono y energa para poder crecer. En la
naturaleza las fuentes de energa pueden ser qumicas (energa presente en los
enlaces de compuestos qumicos) o lumnica (energa de la luz que se transforma
en energa qumica). Por otra parte, las reaccines de xido-reduccin que tienen
lugar en los seres vivos requieren donadores de electrones que pueden ser
orgnicos o inorgnicos. Por ltimo, el carbono puede encontrarse de dos formas,
como carbono orgnico y como carbono inorgnico (CO2). La combinacin de
estas posibilidades da lugar a las diferentes categoras de microorganismos en
funcin de su nutricin:
Tipo de nutricin
Fuente
de
energa
Fuente de
electrones
Fuente de
carbono
Ejemplo
quimiotrofos qumica - - -
fototrofo luz - - -
organotrofo - comp.orgnico - -
litotrofo -
comp.
inorgnico
- -
autotrofo - - inorgnico -
heterotrofo - - orgnico -
quimioorgano(hetro)trofo qumica comp.orgnico orgnico
bacterias,
hongos,
animales
quimioliot(auto)trofo qumica
comp.
inorgnico
inorgnico
algunas
bacterias
fotolito(auto)trofo luz
comp.
inorgnico
inorgnico
bacterias,
plantas, algas
fotoorgano(hetero)trofo luz comp.orgnico orgnico
algunas
bacterias,
algas
Como puede verse, las bacterias presentan una gran versatilidad metablica.
Mucho mayor que la que presentan plantas, animales u hongos. En cualquier
caso, los principales microorganismos de inters aplicado industrial pertenecen al
grupo de los quimiohetertrofos.
El microorganismo responsable de la fermentacin alcohlica de la produccin
del vino es la levadura S. cerevisiae. Las levaduras son hongos unicelulares, a
diferencia de otro tipo de hongos a los que conocemos como filamentosos. Sin
embargo, biolgicamente, ambos tipos de hongos (unicelulares o filamentosos)
son similares. Las levaduras se multiplican en los medios de cultivo como clulas
aisladas individuales que se dividen y, de esta forma, aumentan su nmero. En el
caso de los hongos filamentoso, sin embargo, las clulas se encuentran
contenidas dentro de unos tubos formados por la pared celular. Estos tubos se
denominan hifas y van creciendo por sus puntoas (crecimiento apical) y
ramificndose para formar la colonia que denominamos micelio. Por consiguiente,
los hongos filamentosos tienen un crecimiento micelial, mientras que las levaduras
no.
Es importante tener en cuenta que en el crecimiento micelial, slo el borde de la
colonia (las puntas de las hifas) crece. La parte central de una colonia micelial est
formada por clulas viejas mientras que el borde de la colonia est formado por
clulas jvenes. Las clulas jvenes se encuentran en trofofase (fase de
alimentacin y crecimiento), mientras que las clulas viejas se encuentran en
idiofase (fase de diferenciacin). Cuando observamos una colonia micelial (por
ejemplo una colonia de moho sobre una naranja), el crecimiento de la colonia se
produce slo por el borde de la parte mohosa y en la parte central de la colonia se
produce la diferenciacin que dar lugar a la formacin de las esporas y a la
aparicin del color verdoso caracterstico.
Las clulas jvenes desarrollan la mayora de la actividad metablica del hongo,
liberando enzimas al medio y abosorbiendo los nutrientes. La zona central, por
otra parte, tiene clulas en las que se acumulan las substancias de reserva que
pueden ser necesarias para que el micelio colonice nuevas zonas pobres en
nutrientes (por ejemplo, cuando el moho de una fruta comienza a extenderse por
la fuente de plstico en la que se encuentra) o cuando el hongo se diferencia (por
ejemplo, cuando produce esporas o cuerpos fructferos).
El crecimiento de un hongo como levadura o como hongo filamentoso est, en
algunas ocasiones, regulado por condiciones ambientales, de forma que un mismo
hongo puede crecer en ciertas situaciones como levadura y en otras como hongo
filamentoso (por ejemplo, los hongos patgenos ustilago maydis y Candida
albicans).
Otro aspecto importante a tener en cuenta es que la pared celular de los
hongos (levaduras y filamentosos) es diferente de la de las bacterias y de la de las
plantas. La pared celular de bacterias est formada por peptidoglicano, mientras
que la de hongos por quitina y polisacridos (glcanos) y la de las plantas por
celulosa.
Por ltimo hay que recordar que como organismos eucariticos que son, los
hongos tienen su ncleo diferenciado en el interior de la clula, tienen varios
cromosomas, la divisin celular se produce por mitosis (proceso que no ocurre en
bacterias) y la produccin de clulas sexuales por meiosis.
La clasificacin de los hongos es muy compleja y aqu vamos a ver slo lo ms
simple para poder seguir el curso. La clasificacin se basa en dos criterios: (1) si
las hifas estn tabicadas (divididas en clulas) o no y (2) dentro de los hongos con
hifas tabicadas, en la organizacin de las esporas sexuales.
Los hongos con hifas no tabicadas se denominan Ficomicetos (esta
nomenclatura y clsificacin, repito, puede encontrarse de forma diferente en
distintos libros). Los ficomiecots son hongos inferiores (en algunos casos se
discute si son hongos o no) y viven en ambientes acuosos. Destacan los
gneros Mucor que participa en la produccin de algunos tipos de alimentos
y Phytophthora alguno de cuyos miembros son patgenos vegetales (P.
infestans, por ejemplo).
Los hongos superiores se pueden agrupar en tres clases
o Ascomicetos. En ellos las esporas sexuales (ascosporas) se
encuentran en el interior de una bolsa o asca. Son ejemplos de
ascomicetos la levadura S. cerevissiae, los hongos
filamentososNeurospora, y hongos comestibles como las trufas. Son
el grupo de hongos ms abundante.
o Basidiomicetos. En ellos las esporas sexuales (basidiosporas) se
encuentran en el exterior de unas estructuras com forma de maza
denominadas basidios. Pertenecen a este grupo levaduras como el
patgeno humano Cryptococcus neoformans que produce meningitis
en pacientes inmunodeprimidos, el patgeno vegetal Ustilago
maydis que produce tumores en los granos del maz, hongos
superiores con cuerpos fructiferos complejos (setas) tales como el
champin (Agaricus bisporus) y la seta de chopo (Pleurotus
ostreatus), etc.
o Deuteromicetos. Tradicionalmente se conocan como hongos
imperfectos porque en ellos no se haba podido encontrar la forma
sexual y, por consiguiente, no se sabe si producen ascosporas o
basidiosporas. Actualmente y mediante el uso de tcnicas de anlisi
del ADN se ha podido determinar que la mayora de ellos pertenecen
al grupo de los ascomicetos y, por alguna razn, han perdido la
posibilidad de realizar la reproduccin sexual. Alguno de los hongos
ms importantes en microbiologa industrial son
deuteromicetos: Penicillium productor de la
penicilina,Aspergillus productor de cido ctrico y de lovastatina;
tambin se encuentran en este grupo hongos patgenos vegetales
como Trichoderma y Verticillium, y hongos patgenos oportunistas
animales tales como Candida albicans
2.2.- Crecimiento celular
En este apartado vamos a revisar el estudio de la cintica del
crecimiento de microorganismos que crecen aislados. Esta es la forma de
crecimiento de la levadura (hongo unicelular) y de las bacterias.
Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos
microbianos porque es necesario poder predecir cmo va a evolucionar un
cultivo, cmo va a ir consumindose el substrato y cmo se va a ir
acumulando el producto de una fermentacin. Sin conocer estos factores es
muy imprudente iniciar el cultivo en un fermentador de 10.000 litros, por
ejemplo, con el coste que ello supone, puesto que no podemos predecir
qu va a pasar, cundo va a completarse el crecimiento, cmo se va a
acumular el producto, etc.
Las clulas aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo
apropiado van utilizando los nutrientes que tienen disponibles con la mayor
eficiencia y rapidez que pueden, sintetizando sus propios componentes
celulares y dividindose en cuanto han podido duplicar su masa y su
material gentico. El tiempo que tarda una clula en hacer todo lo anterior
es lo que conocemos como tiempo de generacin y puede variar desde
unos 20 minutos en condiciones ptimas hasta varios meses en
condiciones del suelo.Cada vez que transcurre un tiempo de generacin, el
nmero de clulas se duplica, siguiendo, por tanto, un incremento
exponencial.
Si llamamos N0 al nmero de
clulas inicial, y g al nmero de
generaciones transcurridas, el
nmero de clulas final (N) ser:

Llamando T al tiempo de generacin
y t al tiempo de cultivo transcurrido,
la ecuacin anterior puede
transformarse en la siguiente:

Las ecuaciones exponenciales son muy difciles de manejar grficamente,
por ello es mejor transformarlas en algo ms simple, como puede ser una
recta.
Para transformar las
ecuaciones anteriores en
una recta, tomamos
logaritmos en los dos
trminos y resulta:

Esto es: el logaritmo del nmero de clulas crece linealmente con el tiempo
a razn de una constante igual a ln2/T. Si el tiempo de generacin T es muy
grande, el crecimiento tendr poca pendiente (ser lento) y si T es pequeo
el crecimiento ser rpido.
En un crecimiento equilibrado, todos los parmetros de crecimiento
evolucionan en paralelo. Esto es: el incremento en el nmero de clulas, en
la biomasa de cultivo y en la acumulacin de metabolitos primarios,
protenas, cidos nucleicos etc., es paralelo. Por tanto, en la ecuacin
anterior N puede representar cualquiera de estos factores.
Otra forma de representar la cintica es
considerando el incremento en el
nmero de clulas (dN) en un intervalo
corto de tiempo (dt). En este caso, la
ecuacin que describe la cintica es la
siguiente:

esto es: el incremento del nmero de clulas (dN) por unidad de tiempo (dt)
es proporcional al nmero de clulas presentes en el cultivo (N). A la
constante de proporcionalidad () se le denomina tasa de crecimiento y
puede considerarse algo as como la probabilidad de que una clula se
divida en un tiempo determinado.
Integrando la ecuacin anterior
durante el tiempo de cultivo, se
transforma en la siguiente
funcin exponencial:

la transformacin de esta
ecuacin en una recta
(tomando logaritmos) rinde lo
siguiente:

esto es: el incremento del logaritmo del nmero de clulas aumenta
linealmente con el tiempo siendo la constante de proporcionalidad .
Comparando esta ecuacin con la similar presentada ms arriba, podemos
concluir que = ln2/T y, por consiguiente, que T = ln2/. Es decir, que hay
una correlacin inversa entre el valor de la tasa de crecimiento () y el
tiempo de generacin.
Estas ecuaciones nos permiten predecir cul ser el nmero de clulas,
masa celular, etc. despus de un cierto tiempo de cultivo (t) si conocemos
; o bien, poder calcular la tasa de crecimiento a partir de medidas
experimentales del incremento en el nmero de clulas, biomasa, etc.

El grfico representa la variacin de la biomasa (o nmero de clulas, etc.) de un
cultivo (lnea roja) a lo largo del tiempo. En este cultivo, se va consumiendo un
substrato cuya concentracin (lnea azul) decrece de forma proporcional al
crecimiento de la biomasa. Esta relacin de proporcionalidad puede expresarse de
la forma siguiente:


donde dS indica la variacin de la concentracin del substrato. Al valor Ys lo
denominamos rendimiento de utilizacin del substrato, ya que mide la cantidad de
biomasa que puede producirse por unidad de substrato consumido:

El rendimiento de utilizacin de diferentes substratos puede ser diferente
(hay substratos, o alimentos, que "engordan" ms que otros), vara entre
diferentes microorganismos (en un smil antropomrfico: hay personas que
engordan ms que otras comiendo lo mismo) y vara tambin en funcin de
otras condiciones ambientales o fisiolgicas (no engorda lo mismo uno al
comer algo si est sano o enfermo o si est en verano o en invierno).
Tambin vara el rendimiento en funcin de que el metabolismo sea
oxidativo o fermentativo (estos conceptos sern revisados ms adelante).
Podemos calcular el rendimiento de la utilizacin del substrato en
funcin de la cantidad de substrato aadido al cultivo, o en funcin de la
cantidad de carbono presente en ese substrato (por ejemplo). Asimismo,
podemos calcular la cantidad de biomasa total 8gramos de clulas, por
ejemplo) o de carbono presente en las clulas (aproximadamente el 505 de
la masa celular corresponde a carbono).
Haciendo las transformaciones que
se indican a la derecha sobre la
frmula que relaciona la variacin
de biomasa con la de substrato,
llegamos a la definicin de un
nuevo
concepto qs denominado tasa
especfica de consumo de
substrato por el organismo.

La tasa especfica de consumo de substrato la podemos considerar la
"velocidad" con la que el organismo consume el substrato. Evidentemente,
cuanto mayor sea la tasa de consumo mayor ser la velocidad de
crecimiento (). Asimismo, cuanto mayor sea el rendimiento del substrato
consumido, tambin mayor ser la tasa de crecimiento.
Sin embargo, hay una cierta compensacin entre la tasa de consumo del
substrato y el rendimiento de forma que los microorganismos que tienen
altas tasas de consumo de substrato tienen rendimiento ms bajos (o
cuando se dan las condiciones para una alta tasa, el rendimiento
disminuye). A esta correlacin inversa se le conoce con el nombre de efecto
Pasteur.
Por ltimo, nos falta relacionar la tasa de crecimiento () con la
concentracin de substrato (S). En condiciones de substrato abundante, la
concentracin de este no afecta al valor de ; pero cuando el substrato se
hace limitante, s existe ese efecto. La expresin matemtica que relaciona
ambos parmetros se conoce con el nombre de ecuacin de Monod y es la
siguiente:

En esta ecuacin la tasa de crecimiento ()
depende de la mxima que puede alcanzar
el microorganismo, de la concentracin de
substrato y de un valor Ks que representa la
concentracin de substrato a la que se
alcanza una tasa de crecimiento igual a la
mitad de la mxima.
La ecuacin de Monod tendr mucha importancia al tratar de cultivos
continuos. Para que se cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser
independiente de la concentracin de substrato.

http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article
&id=181&Itemid=226