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I.

INTRODUCCION

Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o
al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible
de utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos
o semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia
moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias
presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos.
La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de
las personas que padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un
aumento en los niveles de resistencia antibitica.
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la
susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de
antibiticos. Es la principal prueba que determina el tratamiento especfico o
dirigido de las enfermedades de origen infeccioso.
El momento de empezar el tratamiento de un paciente que cursa una infeccin, se
inicia en base a los microorganismos ms frecuentes causantes de la patologa en
cuestin y la susceptibilidad a antibiticos previamente establecidos en estudios
previos, informacin presente en las guas de manejo de infecciones, este
tratamiento sin el aislamiento de germen causante del cuadro se denomina
tratamiento emprico.
Los antibiogramas son mtodos in vitro que determinan la susceptibilidad de los
microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de
laboratorio especfica y estandarizada. La meta principal del estudio de
susceptibilidad es proveer al clnico algunas recomendaciones sobre la terapia que
puede ser ms apropiada en pacientes con una infeccin especfica.

II. OBJETIVOS

Demostrar la sensibilidad in vitro de los microorganismos frente a los
antibiticos.
III. FUNDAMENTO TEORICO
El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una
cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a
uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los
requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El
antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones
teraputicas individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las
resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a
escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un
pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse
regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse
ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de
prevencin en los hospitales.
Sensibilidad bacteriana a los antibiticos
La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es la base de la
medida de la sensibilidad de una bacteria a un determinado antibitico. La CIM
se define como la menor concentracin de una gama de diluciones de
antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano
visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas.
Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina,
y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y mtodos
automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes mtodos de rutina
permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en funcin de su sensibilidad
frente al antibitico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia
(I) o Resistente (R) al antibitico.
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS:
Sensible, si existe una buena probabilidad de xito
teraputico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual.
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o
muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea
cual fuere el tipo de tratamiento.
Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se
puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones
(fuertes concentraciones locales o aumento de la posologa).
Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los
resultados (S, I, R) obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los
antibiticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo:
Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinas
de 1 generacin que no es necesario probar, ya que el resultado puede
deducirse del obtenido en la cefalotina).
Este hecho permite ensayar un nmero reducido de antibiticos, sin limitar por
ello las posibilidades teraputicas.
Resistencia bacteriana
Cada antibitico se caracteriza por un espectro natural de actividad
antibacteriana. Este espectro comprende las especies bacterianas que, en su
estado natural, sufren una inhibicin de su crecimiento por concentraciones de
su antibitico susceptibles de ser alcanzadas in vivo. A estas especies
bacterianas se les dice naturalmente sensibles a dicho antibitico. Las
especies bacterianas que no se encuentran incluidas dentro de dicho espectro
se denominan naturalmente resistentes.
El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes
eliminando las sensibles. Es lo que se conoce con el nombre de presin de
seleccin. El aumento de la frecuencia de las cepas resistentes va unido cas
siempre al uso intensivo del antibitico en cuestin.
La resistencia natural es un carcter constante de todas las cepas de una
misma especie bacteriana. El conocimiento de las resistencias naturales
permite prever la inactivdad de la molcula frente a bacterias identificadas
(despus del crecimiento) o sospechosas (en caso de antiboterapia emprica).
En ocasiones, constituye una ayuda para la identificacin, puesto que certas
especies se caracterizan por sus resistencias naturales. Ejemplos: Resistencia
natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la colistina. Resistencia
natural de la Klebsiella pneumoniae a las penicilinas (ampicilina, amoxicilina).
La resistencia adqurida es una caracterstica propia de ciertas cepas,
dentro de una especie bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio
gentico ha sido modificado por mutacin o adquisicin de genes.
Contrariamente a las resistencias naturales, las resistencias adquiridas son
evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la utilizacin de los
antibiticos. En el caso de numerosas especies bacterianas, y teniendo en
cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas, el espectro natural de
actividad no es ya suficente para guiar la eleccin de un tratamiento
antibitico. En ese caso, se hace indispensable el antibiograma.
Una resistencia cruzada es cuando se debe a un mismo mecanismo de
resistencia. En general, afecta a varios antibiticos dentro de una misma
familia (Ejemplo: La resistencia a la oxacilina en los estafilococos se cruza con
todas los -lactmicos). En ciertos casos, puede afectar a antibiticos de
familias diferentes (Ejemplo: La resistencia por impermeabilidad a las ciclinas
se cruza con la resistencia al coloranfenicol y al trimetoprima).
Un resistencia asociada es cuando afecta a varios antibiticos de familias
dferentes. En general, se debe a la. asociacin de varios mecanismos de
resistencia (Ejemplo: La resistencia de los estafiolococos a la oxacilina va
frecuentemente asociada a las quinolonas, aminoglicsidos, macrolidos y
ciclinas).
Con el fin de tener en cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas y, por
consiguiente, proporcionar a los mdicos datos tiles cuando deben proceder a
la eleccin emprica de una antibioterapia, la nocin de espectro clnico
completa la de espectro natural. Definido para cada antibitico, este espectro
clnico se incluye en el Resumen de las Caractersticas del Producto (RCP).
Este espectro integra no solamente datos bacteriolgicos (espectro natural,
frecuenca de las resistencias adquiridas), sino tambin datos farmacocinticos
y clnicos (las especies descritras en el espectro son aquellas para las que se
ha demostrado la actividad clnica del producto). El espectro clnico se revisa
regularmente para tener en cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas.



Mtodos automatizados
La mayora de estos novedosos mtodos utilizan sistemas de microdilucin en medio
lquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los
diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o
fluorescencia) o, en el caso de los sistemas ms sencillos, por simple lectura ptica del
tcnico a travs de un visor invertido de espejo.
Su manipulacin suele ser fcil y rpida, generalmente automatizada o semiautomatizada,
lo que los convierte en mtodos ideales para grandes volmenes de trabajo. Una de sus
grandes limitaciones es que slo ofrecen garanta para investigar microorganismos de
crecimiento rpido y que no tengan requerimientos especiales.
Antibiograma realizado por mtodo automtico
En esta fotografa se muestra un ejemplo de antibiograma realizado por un mtodo
automatizado.
En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una microplaca para
autoanalizador que incluye fase de identificacin y fase de antibiograma (panel microScan).
Las tres filas superiores de la microplaca son la zona de "identificacin" del
microorganismo, las cinco filas inferiores son el apartado "antibiograma".
La foto de la derecha, un plano ms cercano de la mitad inferior izquierda de la microplaca,
permite observar con ms detalle algunas filas de pocillos con diluciones seriadas de
algunos antibiticos. La dosificacin de cada antibitico aumenta, en cada fila, de izquierda
a derecha (obsrvese los rtulos bajo cada pocillo: 8-16 ... 1-2-8-16 ... 2-8-32). Los pocillos
que en la imagen muestran un color verde intenso tienen crecimiento bacteriano, o sea, el
antibitico en cuestin no impide el desarrollo del microorganismo a estudio. Los pocillos
transparentes marcaran los puntos de inhibicin de cada antibitico.
IV. MATERIALES

Cultivo de escherichia ecoli
Placas con agar Mueller- Hinton
Discos de sensibilidad
SSF
Pipetas
Hisopos
Regla
V. PROCEDIMIENTO

Preparar 2 placas Petri con agar Mueller Hinton.








A partir de un cultivo fresco de las bacterias que hay que ensayar (E.
coli, Staphilococcus), inocular un raspado de la muestra en un tubo con
solvente.

















Esterilizar la aza
bacteriolgica
a. Muestras frescas
de la bacteria.

b. solvente a
utilizar
a. Tomar un raspado de la muestra (E. coli;
staphylococcus).
b. Colocarlo en el frasco con solvente (S.S.F)
Placas Petri con Agar
Mueller - Hinton
Inocular la superficie de una placa de agar Mueller-Hinton con el hisopo
pasndolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones,
cubriendo as toda la superficie de las placas (1. E. coli; 2.
Staphylococcus).












Colocar el disco de antibitico (con pinzas estriles) sobre la superficie
del agar y apretarlo suavemente sobre la superficie del medio.













Hisopos
Finalmente, pasar el
hisopo por el reborde de
la placa.
Antibiticos a
utilizar en prctica
Esterilizar la
pinza
Tomar un disco
antibitico del frasco
(ATM, CRO, GM y IMA)
Colocarla sobre la
superficie del agar Mueller-
Hinton.
Colocar los 4 antibiticos sobre
ambas placas:
1. E. coli; 2. Staphylococcus.
Dejar secar 10 min con la tapa algo abierta (junto al mechero).
Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa
y a unos 20 mm uno de otro para que no se superpongan las zonas de
inhibicin. (No mover los discos una vez implantados).








VI. RESULTADOS










VII. DISCUSIONES

1. No basta con ver si las bacterias han crecido o no alrededor del antibitico
para saber si son o no sensibles. Hay que saber cuanto no han crecido.
Solo si el halo de inhibicin es suficientemente grande, usando el
antibitico a la concentracin teraputica la que el antibitico puede
alcanzar en el lugar de la infeccin sin que se produzcan efectos txicos o
secundarios, se dice que la bacteria es sensible al antibitico. Por eso se
mide el efecto y se consultan las tablas.
2. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y
colocados los distintos discos impregnados de antibitico y una vez
colocada a incubacin en la estufa durante unas horas, se procede a la
lectura de los resultados, que puede hacerse a intervalos peridicos,
basada en la medicin del halo de inhibicin. Segn la amplitud de este
halo los grmenes se clasifican en:
-RESISTENTES
-SENSIBLES
-MUY SENSIBLES
Debe tenerse presente que el dimetro del halo de inhibicin depende
tambin de la difusibilidad del antibitico y, por tanto, no es una medida
absoluta de la eficacia.






VIII. CONCLUSIONES

1. El antibiograma es la mnima concentracin de un antimicrobiano que
inhibe la multiplicacin y crecimiento visible de una cepa bacteriana en un
medio de cultivo.
2. Mediante un antibiograma podemos establecer que tratamiento ser el ms
adecuado para el paciente afectado por una infeccin por la bacteria que
estemos estudiando.
3. Gracias a esta prctica aprendimos a realizar todo elprocedimiento para co
nocer la sensibilidad de un microorganismo a algn medicamento
determinado, realizando los procedimientos para encontrar la CMI y la CMB
mediante los mtodos de dilucin.
4. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su
aplicacin no es tan sencilla. Para la prescripcin correcta de los
antibiticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso
infeccioso, el mecanismo de accin del antibitico, la toxicidad, las posibles
sensibilizaciones del paciente, la va de administracin, etc.

5. El antibiograma permite determinar in vitro la susceptibilidad de una cepa
bacteriana a varios antimicrobianos que son opciones de tratamiento para
ese agente infeccioso.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Sham D. The role of clinical microbiology in the control and surveillance
of antimicrobial resistance. ASM News. 1996;62:25-9.
Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance standards
for antimicrobial susceptibility testing; eighteenth informational
supplement. CLSI document M100-S19. Wayne, PA: CLSI; 2009.
http://www.danival.org/microclin/antibiot/_madre_antibiot.html


X. CUESTIONARIO

1. Qu opinara usted, si dentro de un ntido halo de observacin
desarrollan varias colonias?
Si aparece alguna colonia dentro de los halos, esto se debe a mutaciones
espontneas que hacen a algunas bacterias resistentes.
Cuando aparecen colonias dentro del halo, puede tratarse de mutantes
resistentes, contaminaciones, poblaciones heterogneas o cultivos mixtos y
conviene volver a identificarlas y realizar otra vez el ensayo de sensibilidad
antimicrobiana. Como regla general, no debe considerarse aquellas colonias
diminutas que aparecen en el halo de inhibicin y que han sido visualizadas
mediante luz transmitida o con ayuda de una lupa, a excepcin de
estafilococos resistentes a oxacilina o enterococos resistentes a vancomicina.

2. Qu factor tomara en cuenta para elegir un antibitico, adems del
resultado del antibiograma?
Factores microbiolgicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos de
resistencia descritos previamente en su especie.
Factores farmacolgicos: Tipo de antimicrobiano y parmetros de absorcin,
distribucin y eliminacin.
Factores del paciente: Tipo de infeccin. Factores de riesgo y estado general
de salud. Situacin inmunolgica e hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia antibitica ms
habituales para cada especie.

3. Qu opinara si los discos antibiticos pertenecientes a un lote
producen efecto frente a un germen y discos del mismo antibitico de
otro lote no producen efecto alguno?

Se dira que es resistente se refiere a aquellos microorganismos que no se
inhiben por las concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos
del correspondiente antimicrobiano, o a aquellos microorganismos en los que
existen
mecanismos de resistencias especficos para el agente estudiado en los que
no ha habido una adecuada respuesta clnica cuando se ha usado como
tratamiento el correspondiente antimicrobiano y con respecto al otro lote
diramos que es trmino sensible indica que la infeccin ocasionada por la
cepa para la que se ha determinado la CMI o su correspondiente halo de
inhibicin puede tratarse de forma adecuada empleando las dosis habituales
de antimicrobiano, en funcin del tipo de infeccin y de la especie considerada.