Objetivo: seleccionar para cada receptor los componentes sanguneos adecuados de forma que una vez transfundidos no produzcan una destruccin clnicamente significativa de las clulas del receptor y tengan una supervivencia ptima.
La parte ms importante del proceso es la correcta identificacin del paciente, tanto al extraer la muestra como al administrar el componente sanguneo.
Adems, se requiere la correcta realizacin de las pruebas de compatibilidad.
PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (Pcom)
Entre las medidas de seguridad transfusional estn aquellas encaminadas a evitar la reaccin hemoltica aguda, es decir, las que aseguran la compatibilidad entre donante-receptor.
Aunque comprenden tanto normas pre transfusionales como para la administracin de los CS en general, se definen como Pcom las pruebas analticas de laboratorio que se llevan a cabo para detectar posibles Ac en el receptor contra Ag en las clulas a transfundir. Estas incluyen diferentes estudios en el receptor, determinacin de grupo y Rh, AI y en concreto, las denominadas.
Pruebas Cruzadas, que se llevan a cabo en determinados casos entre suero del receptor y clulas del donante (hemates o plaquetas) e investigan la presencia de posibles Ac en suero mediante su reaccin en diferentes medios fsico-qumicos.
Por la importancia de la reaccin hemoltica en los casos de incompatibilidad eritrocitaria y la facilidad tcnica para realizar las Pcom con hemates, estas se llevan a cabo de manera rutinaria en los casos de transfusin de CH o ST.
En la transfusin de plaquetas, las Pcom slo se realizan de modo excepcional en casos de sospecha de Ac (refractariedad plaquetaria).
Compatibilidad de grupos sanguneos en Banco de Sangre:
Compatibilidad de grupos sanguneos en Banco de Sangre A fin de que la sangre y sus componentes sean asignados, distribuidos y transfundidos en los pacientes es necesario realizar una serie de pruebas para asegurar la compatibilidad inmunolgica entre el donador y el receptor.
LOS GRUPOS SANGUNEOS Es un mtodo para decirle cul es el tipo especfico de sangre que usted tiene. El tipo de sangre que usted tenga depende de si hay o no ciertas protenas, llamadas antgenos, en sus glbulos rojos. No todos los productos derivados de la sangre se pueden transfundir a cualquier destinatario. La compatibilidad entre la sangre del donante y la del paciente es fundamental. Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre en base a la presencia o ausencia de determinadas molculas, llamadas antgenos, en la superficie de los glbulos rojos. Existen muchos grupos sanguneos, pero entre todos ellos destacan por su importancia a la hora de la transfusin los grupos pertenecientes al sistema ABO y el factor Rh. El sistema ABO Es un mtodo para decirle cul es el tipo especfico de sangre que usted tiene. El tipo de sangre que usted tenga depende de si hay o no ciertas protenas, llamadas antgenos, en cada uno de ellos en sus glbulos rojos. En este caso la sustancia que determina el grupo sanguneo son los azcares, y segn su composicin que encontramos en la sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema de tipificacin ABO. Este mtodo separa los tipos de sangre en cuatro tipos: Tipo A :Tiene protena Tipo B :Tiene protena Tipo AB :Tiene ambas protenas Tipo O :No tiene ninguna (A o B) en la superficie del hemates El sistema Rh En el ao 1940, se detecta la existencia de un nuevo antgeno en la membrana de los hemates. Antgeno es llamado Rh o antgeno D, ya que las primeras investigaciones se llevaron a cabo experimentando con un simio del tipo Macaccus Rhesus. El Rh es otra protena que si est presente en la superficie del glbulo rojo ser Rh positivo y si est ausente, es Rh negativo. Estos son, entre otros, los siguiente enunciados de sistemas: Sistema ABO Sistema Rh (Rhesus) Compatibilidad Al combinar estos dos sistemas podemos llegar a una clasificacin ms detallada de los diferentes tipos de sangre: A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ y O-. Algunos de estos grupos sanguneos son ms raros que otros.
En la mayora de los casos, los paciente reciben sangre de su mismo grupo sanguneo, sin embargo, las personas del grupo O-, que no presentan los antgenos A, B D en la superficie de sus glbulos rojos, puede donar sangre a cualquier persona, son "donantes universales". Del mismo modo, los individuos AB+ se denominan "receptores universales, porque en la superficie de sus glbulos rojos estn simultneamente los antgenos A, B y D. En la siguiente tabla vemos resumida la compatibilidad de grupos: Grupo A quin puede donar De quin puede recibir A+ Puede donar a A+ y AB+ Puede recibir de A y O A- Puede donar a A y AB Puede recibir de A- y O- B+ Puede donar a B+ y AB+ Puede recibir de B y O B- Puede donar a B y AB Puede recibir de B- y O- AB+ Puede donar a AB+ Receptor universal AB- Puede donar a AB Puede recibir de A-, B-, AB- y O- O+ Puede donar a A+, B+, AB+ y O+ Puede recibir de O O- Donante universal Puede recibir de O-
Otros grupos sanguneos
Caractersticas del sistema ABO Las personas con sangre del tipo A con glbulos rojos expresan antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el plasma. Las personas con sangre del tipo B con glbulos rojos con antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el plasma. Las personas con sangre del tipo O no tienen los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos pero tienen anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. Esta clasificacin internacional, debida a Landsteiner, ha reemplazado a la de Moss, en la cual el grupo I corresponde al grupo AB de la precedente, el grupo 2 al grupo A, el grupo 3 al grupo B, y el grupo 4 al grupo O. Estos cuatro grupos sanguneos constituyen el sistema ABO. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede transfundir a cualquier persona con cualquier tipo y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO. La denominacin O y cero es confusa, y ambas estn muy extendidas.
El sistema Rh En 1940 se descubri otro grupo de antgenos (D) que se denominaron factores Rhesus (factores Rh) porque fueron descubiertos durante unos experimentos con simios del tipo Macaccus Rhesus. Segn este grupo sanguneo, las personas con factores Rhesus en su sangre se clasificaran como Rh positivos; mientras que aquellas sin los factores se clasificaran como Rh negativos, y slo podrn recibir sangre de donantes Rh negativos. Anticuerpos del Sistema AB0: Los anticuerpos son producidos de forma natural por individuos que carecen del Ag A y/o Ag B Predominantemente anticuerpos de tipo Ig M Ocasionalmente de tipo Ig G Anti A , Anti B Aparecen de 3-4 a 6 meses (nacimiento origen materno). QUPRUEBAS PODEMOS HACER?
1. Estudio de grupos sanguneos: antgenos (AG) y anticuerpos (AC) 2. Escrutinio de anticuerpos irregulares (EAI) 3. Pruebas cruzadas (PPCC
Se define la compatibilidad en transfusin como la falta de reaccin inmune entre antgenos (Ag) y anticuerpos (Ac) de donante y receptor. La compatibilidad no garantiza identidad entre ambos, solamente indica que, en ese momento, no habr disminucin de rendimiento transfusional por causa inmune. Lactinas: Son protenas unidas a azucares o glicoprotenas de origen no inmunolgico que producen aglutinacin en las clulas. Lectina Anti-A1 Dolichos biflorus Cellas A1 Lectina Anti-H Ulex europeus Cellas 0 Subgrupos de B: Son menos comunes que los del grupo A Difieren en la cantidad de sitios antignicos B3, Bm, Bx Anticuerpos del Sistema Rh: Producidos por estimulacin (transfusin y/o embrazo) Pueden causar reaccin transfusional y EHRN Son de tipo Ig G El Anti- D es el inmungeno ms potente seguido del c y E
Tipificacion Rh: Expresin dbil del Antgeno D: Se llama as por sus reacciones dbiles o negativas con el anti D D-dbil: por efecto de posicin (trans con relacin al gen D) D-parcial: Falta una o ms partes del antgeno D-adquirido o hereditario: poseen el antgeno completo pero expresado dbilmente Deleccin de Rh : No poseen los antgenos dependientes de los loci C ni E (--D--) Rh Nulo: No expresa ninguno de los antgenos del sistema Rhesus Pruebas de Compatibilidad: Seleccionar el componente con el mas mnimo riesgo Buscamos anticuerpos libres en suero. Prueba Cruzada Mayor Suero del receptor (Acs libres en suero del paciente Eritrocitos del donador Pruebas de compatibilidad: Prueba Cruzada Menor Plasma del donador (Acs libres en suero del donador) Eritrocitos del receptor Autocontrol Suero plasma del receptor (Acs libres en suero del paciente) Eritrocitos del receptor. Prueba cruzada - Objetivo: Demostrar in vitro que una sangre no va a ser perjudicial in vivo para el pacienteSe realizaban en diferentes fases (salino, Coombs). * Estudios no han demostrado reacciones relevantes en caso de transfusin con EAI () y PPCC (+) a posteriori Recomendaciones de la AABB1 1. EAI positivo: PPCC con AGH 2. EAI negativo: Salino rpido o PC electrnica Pruebas de compatibilidad: En las pruebas de compatibilidad buscamos detectar anticuerpos considerados clnicamente significativos: Acortan la supervivencia de los eritrocitos. Han sido asociados a EHRN. Han sido asociados a reaccin hemoltica transfusional. Seguridad en la Transfusin Sangunea: Procedimiento % Seguridad Ninguno 65 Tipificacin ABO 99.4 Tipificacin Rh 99.8 Prueba cruzada 99.95 Autotransfusin 100 Polesky Safety in Transfusin prcticas CAP 1982 Seguridad en la Transfusin Sangunea Discrepancias en el grupo AB0/Rh: Aglutinacin inesperada Al anticuerpos Auto anticuerpos Autocontrol Auto anticuerpo Anticuerpos por recientes transfusiones Y ahora que paquete ser. Prueba directa dbil, prueba inversa dbil a negativa: Agamaglobulinemia congnita Hipogamaglobulinemias: recin nacido, ancianos, linfomas, terapia inmunosupresora Inmunodeficiencias: SIDA Quimerismo: transfusin reciente, exanguineotransfusion Anomalas del eritrocito: Bombay, Rh nulo Crioaglutininas Prueba directa dbil a negativa, prueba inversa generalmente normal: Subgrupos A y B Disminucin de la expresin de antgenos A y B: Leucemias, Linfoma Hodgkin Exceso de sustancias solubles de ABO: Cncer de estmago, de pncreas Antgenos adquiridos: Cncer de colon, recto, obstruccin intestinal Acetilacin o destilacin de CHOs de ABO: enzimas bacterianas Antgeno D dbil o D parcial Prueba directa e inversa todas positivas: Hipergamaglobulinemias: mieloma mltiple Expulsores de plasma Gelatina de Wharton Aglutininas frias Anticuerpos irregulares en el suero Diversos: Poli aglutinacin: Anticuerpos Anti A Anticuerpos Anti H Anticuerpos inmunes Drogas Genotipo AB cis Fetos severamente inmunizados Fetos transfundidos Conclusin: Fenotipificacin Rastreo de anticuerpos Pruebas de compatibilidad Conocer el diagnstico del paciente
Test de Coombs
FUNDAMENTO
La prueba de la anti globulina o prueba de Coombs, permite la deteccin e identificacin de globulinas ligadas inmunolgicamente a los hemates.
La adicin del reactivo anti globulina a los mismos ocasionar su aglutinacin.
Es una prueba que busca anticuerpos que puedan fijarse a los glbulos rojos y causar su destruccin prematura.
-El Coombs indirecto se realiza a pacientes poli transfundidos, embarazadas, multparas.
El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes poli transfundidos, pacientes con antecedentes de reaccin post transfusional hemoltica y a multparas para escoger sangre compatible. Forma en que se realiza el examen Se necesita una muestra de sangre. Preparacin para el examen No se requiere preparacin especial para este examen. Lo que se siente durante el examen Cuando se introduce la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado; otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil o un hematoma leve, los cuales pronto desaparecen. Razones por las que se realiza el examen Hay dos formas de realizar la prueba de Coombs: APLICACIONES Prueba de Coombs Indirecto - Deteccin de anticuerpos irregulares - Pruebas de compatibilidad - Determinacin de fenotipos - Identificacin y titulacin de anticuerpos Prueba de Coombs Directo - Enfermedad hemoltica del recin nacido - Anemia hemoltica autoinmune - Reaccin hemoltica post-transfusional Equipamiento, locales, materiales y reactivos Centrfuga para tubos de mesa Neveras de conservacin de sangre 4-6C Aglutinoscopio. Tubos de ensayo de13x100 Gradillas para tubos de ensayo Jeringuillas de 10 o 20 mL Agujas 20 o 21 Torundas Ligaduras Aplicadores de madera. Anticoagulante EDTA o heparina Alcohol al 70% o hibitane alcohlico Suero de Coombs poli especfico Suero de Coombs mono especfico anti IgG y anti C3d. Solucin salina Operaciones preliminares Prepare el rea de trabajo con el material y reactivos que van a ser utilizados. Tome muestra de sangre del paciente compuesta de un tubo anti coagulado (con EDTA o heparina) y un tubo seco debidamente identificado y que no exceda las 72 horas de extrada. Procedimiento Coombs directo Lave tres veces los hemates del paciente con solucin salina fisiolgica. Haga una suspensin de hemates lavados al 2-5 %. Aada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensin. Aada dos gotas de Suero de Coombs poliespecfico. Centrifugue un minuto a 1000 rpm. Lea desprendiendo suavemente el botn sobre la lmpara aglutinoscopio. Coombs indirecto y cruzado Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y decntelo en un tubo debidamente identificado. Prepare una suspensin al 2-5 % con la mezcla de hemates O y en el caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensin. En un tubo debidamente rotulado aada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensin y mezcle bien. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y aada en l dos gotas de la suspensin de hemates O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien Incube ambos tubos en un Bao de Mara a 37C por 30 minutos Lave tres veces con solucin salina escurriendo totalmente el sobrenadante del ltimo lavado. Aada dos gotas de suero de Coombs poli especfico a cada tubo. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm. Lea desprendiendo suavemente el botn en la lmpara aglutinoscopio. Interpretacin de los resultados Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinacin esto indica presencia de anticuerpos y /o complemento unidos a los hemates in vivo, repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecficos anti-IgG y anti-C3d. Interpretacin -Reaccin positiva: La aglutinacin de los hemates problema es indicativa de la presencia de anticuerpos, teniendo en cuenta las limitaciones del procedimiento. - Reaccin negativa: La ausencia de aglutinacin de los hemates problema es indicativa de un resultado negativo, teniendo en cuenta las limitaciones del procedimiento, y confirma la ausencia anticuerpos en los hemates ensayados. Patrones de reaccin Reactivos monoespecficos 1 2 3 4 _______________________________________ Anti Ig G + + - - Anti C3 - + + - __________________________________ Si en la prueba de Coombs indirecto se observa aglutinacin significa que estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor por lo que debe proceder al estudio e identificacin de l o los anticuerpos adquiridos. Si en la prueba de Coombs cruzado se observa aglutinacin indica que estamos en presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor por lo que las unidades de sangre estudiadas que presenten este resultado no deben ser transfundidas al paciente en estudio. Controles El jefe tcnico controlar que en todos los casos se trabaje con muestra extrada con no ms de 72 horas para lo que mantendr la nevera donde se almacenan las mismas libre de muestras vencidas. El jefe tcnico controlar que no ocurra en ningn caso omisin alguna de los pasos descritos anteriormente. El tcnico que realiza el proceder debe verificar que el tubo control que se monta en paralelo muestre aglutinacin lo cual garantiza que el reactivo de Coombs empleado mantiene su actividad biolgica. Significado de los resultados anormales Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actan contra sus glbulos rojos, lo cual puede deberse a: Anemia hemoltica Leucemia linfoctica crnica u otro trastorno similar Eritroblastosis fetal (enfermedad hemoltica del recin nacido) Mononucleosis infecciosa Infeccin por micoplasma Sfilis Lupus eritematoso sistmico Reaccin a transfusin como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia Riesgos Las venas y las arterias varan en tamao de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro; por esta razn, puede ser ms difcil obtener una muestra de sangre de algunas personas que de otras. Otros riesgos asociados con la extraccin de sangre son leves, pero pueden ser: Sangrado excesivo Desmayo o sensacin de mareo Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel) Infeccin (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel) Nombres alternativos Prueba de anti globulina directa; Prueba de anti globulina indirecta