NORMA TCNICA NTC

COLOMBIANA 4398


1998-05-20




GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE COBRE,
HIERRO Y NQUEL. MTODO DE ABSORCIN
ATMICA









E: ANIMAL AND VEGETABLE OILS AND FATS.
DETERMINATION OF COPPER, IRON AND NICKEL
CONTENTS. ATOMIC ABSORPTION METHOD.


CORRESPONDENCIA: esta norma es equivalente (EQV) a la
ISO 8294: 1994

DESCRIPTORES: grasas; alimentacin; producto
alimenticio; aceite comestible; grasa
vegetal












I.C.S.: 67.200.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435


Prohibida su reproduccin










PRLOGO



El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo nacional
de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.

El ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.

La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.

La NTC 4398 fue ratificada por el Consejo Directivo el 98-05-20

Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma que
pertenece al Comit Tcnico 311501 Aceites y grasas comestibles vegetales y animales, a travs
de su participacin en Consulta Pblica.

ACEGRASAS
ANDI
CARULLA
CENIPALMA
COMPAA NACIONAL DE CHOCOLATES
COMPAA NACIONAL DE LEVADURAS
FBRICA DE ACEITES Y MARGARINAS
DEL MAGDALENA
FBRICAS UNIDAS DE ACEITES Y
GRASA VEGETALES
GRASAS S. A.
IBLAB
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS NOEL-ZEN
INDUSTRIAS DEL MAZ
INVIMA
LLOREDA GRASAS
MINISTERIO DE SALUD
NESTL DE COLOMBIA
NUTRIANLISIS
SANTANDEREANA DE ACEITES
SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS
VEGETALES
UNILEVER ANDINA
UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO


El ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN



NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 4398

1






GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE COBRE, HIERRO
Y NQUEL. MTODO DE ABSORCIN ATMICA








1. OBJETO

Esta norma especifica un mtodo para la determinacin de trazas de cobre, hierro y nquel en
grasas y aceites animales y vegetales, a los que en adelante nos referiremos aqu como
grasas.


2. NORMAS QUE SE DEBEN CONSULTAR

Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante la referencia dentro de este
texto, constituyen disposiciones de esta norma. En el momento de su publicacin eran vlidas
las ediciones indicadas. Todas las normas estn sujetas a actualizacin; los participantes,
mediante acuerdos basados en esta norma, deben investigar la posibilidad de aplicar la ltima
versin de las normas mencionadas a continuacin.

ISO 661:1989, Animal and vegetable fats and oils - Preparation of test sample.

ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods.


3. PRINCIPIO

Vaporizacin de una porcin de ensayo de la grasa en un horno de grafito conectado a un
espectrmetro de absorcin atmica, calibrado previamente usando soluciones patrn de
compuestos orgnicos de los metales sometidos a ensayo. Clculo del contenido de metales a
partir de las absorbancias a longitudes de onda seleccionadas.


4. REACTIVOS

Se usarn slo reactivos de grado analtico reconocido y agua de acuerdo con el grado 2 de la
norma ISO 3696.

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4.1 XIDO DE ALUMINIO, grado analtico


Nota 1. La firma Merck, D-1600 Darmstadt, Germany, puede suministrar un xido de aluminio adecuado
(Calidad No. 1077).
1



4.2 ACEITE DE DILUCIN

Por ejemplo un aceite comestible refinado, lquido a temperatura ambiente.

Se almacena el aceite en un recipiente de polietileno o polipropileno libre de metal (vase el
numeral 5.1). Los contenidos de metales del aceite no deben ser mayores de:

Cu, 3 g/kg
Fe, 5 g/kg y
Ni, 5 g/kg


Nota 2. Mediante el siguiente procedimiento se puede obtener una muestra de aceite casi libre de metal.


Se disuelve el aceite en ter de petrleo (rango de ebullicin de 40
o
C a 60
o
C) en una
proporcin de 1 kg de aceite por tres litros de ter. Se prepara una columna de xido de
aluminio (relacin dimetro/ altura = 1/10) usando una masa de xido de aluminio (activado
mediante calentamiento a 150
o
C durante 14 h) correspondiente al doble de la masa del aceite
por purificar. Se agrega la solucin a la columna y se separa por elucin un volumen de ter de
petrleo liviano de 5 a 3 veces el volumen en el que se disolvi la muestra. Se evapora el ter
de petrleo a partir de lo obtenido en la elucin, en un bao de agua calentada usando una
corriente suave de nitrgeno (2 l/min a 5 l/min). Se retiran los trazas finales del ter de petrleo
empleando vaco.

4.3 SOLUCIONES PATRN MADRE

Mediante dilucin apropiada de patrones organometlicos con el aceite de dilucin (vase el
numeral 4.2), se preparan soluciones patrn madre que contengan respectivamente:

Cu, 2 mg/kg
Fe, 10 mg/kg y
Ni, 10 mg/kg


Nota 3. Se pueden obtener patrones adecuados de las firmas Continental Oil Company, Ponca City, Oklahoma, USA
(Conostan, 5 000 mg/kg), o Merck, D-1600 Darmstadt, Germany (1 000 mg/kg).
1



1
Esta informacin se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye un aval en
relacin con este producto.

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3
4.4 SOLUCIONES PATRN DE TRABAJO

Segn se requiera en el da de utilizacin, se preparan soluciones de trabajo con las siguientes
concentraciones, diluyendo las soluciones madre (vase el numeral 4.3) con el aceite de
dilucin (vase el numeral 4.2):

Cu, 0,05 mg/kg; 0,1 mg/kg; 0,2 mg/kg
Fe, 0,25 mg/kg; 0,5 mg/kg; 1,0 mg/kg
Ni, 0,25 mg/kg; 0,5 mg/kg; 1,0 mg/kg

4.5 SOLUCIN DE NIOBIO

(Nb(NO
3
)
5
), que contenga 1000 mg de niobio por litro; solucin patrn AAS en matriz acuosa.


Nota 4. Se puede obtener una solucin adecuada de la firma Alfa Division, 152 Andover Street, Danvers, MA 01923,
USA (Cdigo 88083).
1



4.6 n-Heptano, grado analtico

4.7 Argn, pureza mnima del 99,99 %


Nota 5. Si no se dispone de argn, se puede usar nitrgeno como gas de purga. A temperaturas por encima de
2 300
o
C, el nitrgeno forma el gas txico cianuro de hidrgeno, por lo tanto es necesaria la ventilacin continua del
rea del horno.


5. APARATOS

Aparatos usuales de laboratorio y en particular lo siguiente.

5.1 Botellas y tapas, hechas de polietileno o polipropileno, libres de metal, de 20 ml y 50 ml
de capacidad.


Nota 6. Si es necesario, las botellas y las tapas se pueden liberar del metal, limpindolas cuidadosamente con solucin
de cido ntrico caliente (c(HNO3) = 1 mol/l), enjuagando con agua y despus secando en un horno aproximadamente a
80
o
C.


5.2 Micropipetas, con capacidad de 20 l y 100 l.

5.3 Boquillas de pipeta

5.4 Horno elctrico, con capacidad de mantener una temperatura de 150
o
C 2
o
C.

5.5 ESPECTRMETRO DE ABSORCIN ATMICA

Equipado bien sea con modo e impresora de altura pico, o modo y registrador de aguja
continuo (respuesta de escala completa en 0,2 s), junto con tubo catdico de orificio
apropiado o lmpara de descarga sin electrodos y corrector de fondo de deutorio.

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5.6 ATOMIZADOR DEL HORNO DE GRAFITO

Colocado en el espectrmetro de absorcin atmica (vase el numeral 5.5), equipado con una
unidad de control para programacin de la temperatura y un tubo de grafito.

5.7 TUBO DE GRAFITO

Sin recubrimiento para atomizacin.


6. MUESTREO

Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea verdaderamente representativa y
que no se haya deteriorado o modificado durante el transporte y el almacenamiento.

El muestreo no es parte del mtodo especificado en esta norma. En la norma NTC 217 se da
un mtodo de muestreo recomendado.


7. PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

Se prepara la muestra de ensayo de acuerdo con la norma ISO 661.

La muestra de ensayo no se debe filtrar.


8. PROCEDIMIENTO

Se determina cada contenido de metal uno despus del otro.


Nota 7. Si se requiere verificar si se cumple el requisito de repetibilidad, se efectan dos determinaciones sencillas en
condiciones de repetibilidad.


8.1 PREPARACIN DEL APARATO

8.1.1 Se enciende el espectrmetro de absorcin atmica (vase el numeral 5.5) y el
corrector de fondo de deuterio.

8.1.2 De acuerdo con las instrucciones del fabricante, se ajusta la intensidad de la lmpara, la
hendidura, la longitud de onda y la amplificacin.

Las longitudes de onda apropiadas para cada metal son como sigue:


- cobre: 327,7 nm

- hierro: 302, 1 nm

- nquel: 232,0 nm

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8.1.3 Se optimiza la posicin del atomizador del horno de grafito (vase el numeral 5.6) en el
espectrmetro de absorcin atmica (vase el numeral 5.5) y se ajusta el programa requerido
en la unidad de control del horno, de acuerdo con la Tabla 1.


Nota 8. Si el aparato disponible no se puede regular de acuerdo con la Tabla 1, se usa un programa comparable
adecuado para el aparato. Si en este caso no se puede lograr una correccin de fondo satisfactoria, se diluye el blanco,
las soluciones de trabajo patrn, (vase el numeral 4.4) y las muestras de ensayo con un solvente de grasa orgnica
(por ejemplo n-heptano) para un mximo de 1:2 (m/m) y se efectan las mediciones espectromtricas a temperatura
ambiente.


Para la determinacin del contenido de cobre y nquel, se usa un tubo de grafito no recubierto
(vase el numeral 5.7). Para la determinacin del contenido de hierro, se usa un tubo
recubierto por dentro con niobio para asegurarse de que se determina la cantidad total de
hierro.


Nota 9. Con un tubo no recubierto los resultados variarn de acuerdo con el tipo de compuesto de hierro presente en la
grasa. Un procedimiento de recubrimiento adecuado es el siguiente.


Se inyecta 100 l de solucin de niobio (vase el numeral 4.5) en el horno. Se comienza el
programa de temperatura para secar a 100
o
C durante 60 s y despus se atomiza a 2700
o
C
durante 5 s. Se repite este procedimiento hasta que se haya inyectado 300 l de niobio. Se
atomiza a 2700
o
C hasta que haya una absorbancia constante (para eliminar cualquier
contaminacin de hierro).

8.1.4 Antes de cada inyeccin de una muestra, se somete a pretratamiento la boquilla de la
pipeta (vase el numeral 5.3) tomando y eliminando posteriormente 20 l de n-heptano.


Nota 10. La pelcula de n-heptano remanente sobre la pared de la boquilla, facilita una transferencia reproducible de la
muestra.


8.2 PRETRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS DE ENSAYO Y SOLUCIONES
PREPARADAS

8.2.1 Se colocan todas las muestras de ensayo, el aceite de dilucin (vase el numeral 4.2) y
las soluciones de trabajo patrn (vase el numeral 4.4) en el horno (vase el numeral 5.4), se
fija en 60
o
C, durante al menos 15 min antes de la determinacin.

8.2.2 Si se sabe que el contenido de metal de la grasa cruda est por fuera del rango dado en
el numeral 4.4, se diluye con el aceite de dilucin (vase el numeral 4.2).

8.2.3 Antes del anlisis, se agitan vigorosamente todas las muestras de ensayo y las
soluciones.

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8.3 DETERMINACIN

8.3.1 Blanco del tubo de grafito

Se registra la absorbancia, si la hay, del tubo de grafito y se ajusta el aparato de tal modo que
esta lectura corresponda a la absorbancia cero.

8.3.2 Blanco del aceite de dilucin

Se inyecta 20 l de del aceite de dilucin (vase el numeral 4.2) en el horno de grafito, se inicia
el programa de temperatura y se registra la absorbancia.

8.3.3 Patronamiento del equipo

Se inyecta 20 l de una de las tres soluciones de trabajo patrn del metal sometido a
investigacin (vase el numeral 4.4) en el horno de grafito y se registra la absorbancia. Se
repite este procedimiento con las otras dos soluciones de trabajo patrn.

8.3.4 Anlisis de las muestras de ensayo

8.3.4.1 Muestras lquidas a 40
o
C. Se inyecta 20 l de la muestra de ensayo sometida a
pretratamiento (vase el numeral 8.2) en el horno de grafito, se inicia el programa de
temperatura y se registra la absorbancia.


Tabla 1. Programas para el atomizador del horno de grafito

Determinacin Paso Temperatura
(o
C)
Tiempo de
rampa (s)
Tiempo de retencin
(s)
Flujo interno de
gas (ml/min)
Para Cu 1
2
900
2 700
50
1
30
5
300
50
Para Fe, Ni 1
2
1 200
2 700
50
1
30
5
300
50


8.3.4.2 Muestras slidas a 40
o
C. Adems de los pasos 1 y 2, se introduce el siguiente paso
extra en el programa en la unidad de control: tiempo de retencin, 20 s; temperatura, 60
o
C;
flujo de gas interno, 0 ml/min. Se inicia el programa. Durante el paso 1 del programa, se inyecta
20 l de la muestra de ensayo sometida a tratamiento previo (vase el numeral 8.1) en el horno
de grafito, dejando que la boquilla permanezca en la apertura de inyeccin para licuar la grasa
y despus inyectar. Se registra la absorbancia.


Nota 11. El lmite de deteccin se puede disminuir bien sea mediante expansin de la escala o por inyeccin repetida
de la muestra al final del paso 1, y dejando despus que el programa prosiga hasta la terminacin. Si el contenido de
metal es demasiado alto (es decir, si excede el rango de la curva de calibracin) conviene diluir la muestra de ensayo
(vase el numeral 8.2) con el aceite de dilucin (vase el numeral 4.2) (vase el numeral 8.2.2).


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8.3.5 Representacin de la grfica de calibracin

Se traza una curva de calibracin para cada uno de los metales representando la absorbancia
de cada solucin de trabajo patrn (vase el numeral 8.3.3), corregida para el blanco (vase el
numeral 8.3.2) contra el contenido de metal respectivo (en miligramos por kilogramo).


Nota 12. Se puede usar algn aparato ms complejo con autocalibracin.


9. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

9.1 Para cada muestra, se mide la altura pico en el grfico registrado o se efectan las
lecturas en la pantalla de visualizacin o en la impresora.

9.2 Usando el grfico de calibracin apropiado, se determina el contenido de metal de cada
muestra, teniendo en cuenta cualquier dilucin de la muestra.

Se expresan los resultados en miligramos por kilogramo.


10. PRECISIN

La precisin del mtodo se estableci mediante un ensayo internacional entre laboratorios
organizado por la Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (IUPAC) en 1984 y
efectuado de acuerdo con la norma ISO 5725.

En este ensayo participaron 32 laboratorios y se investigaron muestras de aceite de soya,
aceite de man y manteca de cacao. El cobre y el hierro se determinaron en muestras tanto
lquidas como slidas. El nquel no se determin en la manteca de cacao pues es poco
probable que se presente en ella.

En relacin con los valores obtenidos para los lmites de repetibilidad y reproducibilidad, se
mantiene un nivel de probabilidad del 95 %

10.1 REPETIBILIDAD

La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayo individuales, obtenidos usando el mismo
mtodo en material de ensayo idntico en el mismo laboratorio por el mismo operador usando
el mismo equipo dentro de un intervalo de tiempo corto, no debera ser mayor del valor de r
dado en la Tabla 2.

Ambos resultados se rechazan si la diferencia es mayor del valor calculado de r, y entonces se
efectan dos nuevas determinaciones individuales.

10.2 REPRODUCIBILIDAD

La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayo individuales, obtenidos usando el mismo
mtodo en material de ensayo idntico en diferentes laboratorios con diferentes operadores
usando equipo diferente, no debera ser mayor del valor de R dado en la Tabla 3.

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11. INFORME DE ENSAYO

El informe de ensayo debe especificar:


- el mtodo de acuerdo con el cual se efectu el muestreo (si se conoce)

- el mtodo usado

- los resultados de ensayo obtenidos, y

- si se ha verificado la repetibilidad, el resultado final citado que se haya obtenido.


El informe tambin debe mencionar todos los detalles de operacin no especificados en esta
norma, o considerados como opcionales, junto con los detalles de cualesquier incidentes que
puedan haber influido en los resultados.

El informe de ensayo debe incluir toda la informacin necesaria para la identificacin completa
de la muestra.


Tabla 2. Lmites de repetibilidad, r

Valores en miligramos por kilogramo
Elemento Contenido de metal, w Muestra r
Cu wCu < 0,2 Aceite
Grasa
0,010 + 0,14 Cu W
0,008 + 0,11 Cu W
Fe wFe < 1,0 Aceite
Grasa
0,077 + 0,08 Fe W
0,026 + 0,20 Fe W
Ni wNi < 1,0 Aceite
0,056 + 0,13 Ni W

Nota. W es el promedio de ambos resultados, en miligramos por kilogramo.



Tabla 3. Lmite de reproducibilidad, R
Valores en miligramos por kilogramo
Elemento Contenido de metal, w Muestra R
Cu wCu < 0,2 Aceite
Grasa
0,008 + 0,36 Cu W
0,003 + 0,49 Cu W
Fe wFe < 1,0 Aceite
Grasa
0,040 + 0,48 Fe W
0,031 + 0,54 Fe W
Ni wNi < 1,0 Aceite
0,027 + 0,44 Ni W

Nota. W es el promedio de ambos resultados, en miligramos por kilogramo.


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DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Animal and vegetable fats and
oils - Determination of copper, iron and nickel contents - Graphite furnace atomic absorption
method. Geneva: ISO, 1994, 6 pp. (ISO 8294: 1994 (E).