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REACCIONES ANTGENO ANTICUERPO

TEMA 10
REACCIONES ANTGENO / ANTICUERPO Y SUS APLICACIONES.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Al finalizar el tema el estudiante podr:
1. Explicar el papel de la respuesta inmune en las enfermedades infecciosas.
2. Citar los factores que afectan la reaccin antgeno anticuerpo.
3. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de las
siguientes reacciones antgeno / anticuerpo.
Neutralizacin
Precipitacin
Aglutinacin
Inmunofluorescencia
4. Sealar las caractersticas y actividades biolgicas del complemento.
5. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de la
prueba de fijacin de complemento.
6. Elaborar un cuadro comparativo de las reacciones antgeno / anticuerpo, incluyendo:
Tipo de antgeno, clase de Anticuerpo involucrado, sensibilidad y aplicaciones.

REACCIONES ANTGENO-ANTICUERPO

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian ms fcilmente "in vitro" utilizando preparaciones de antgenos y antisueros.
El estudio de las reacciones antgeno-anticuerpo "in vitro" se denomina serologa y es de
especial importancia en la microbiologa diagnostica.
En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unin
del antgeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha
unin. La primera fase se realiza por la combinacin de reas pequeas tanto del antgeno
como del anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antignico y sitio activo,
que al unirse forman un complejo antgeno-anticuerpo. La reaccin es reversible, siguiendo,
por consiguiente, la ley de accin de masas y existen factores externos que pueden modificar dicha unin, como son: el pH, la temperatura y la fuerza inica.
Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reaccin se pueden observar diferentes tipos de reacciones serolgicas:
Neutralizacin
Mediante anticuerpos especficos se pueden neutralizar toxinas, virus o enzimas, Los anticuerpos neutralizantes requieren un solo tipo de combinacin con el antgeno para poder
actuar y as pueden ser univalentes, aunque anticuerpos bivalentes o multivalentes pueden
neutralizar tambin. Un antisuero que contiene anticuerpos neutralizantes contra una toxina
se denomina "antitoxina".

(a) Accin de una toxina (b) Neutralizacin

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Precipitacin
La reaccin de precipitacin ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos divalente, con un antgeno soluble y esto conlleva a la formacin de agregados que precipitan. Como las reacciones de precipitacin son fcilmente observables "in vitro", stas resultan pruebas serolgicas muy tiles, especialmente para medir concentraciones de anticuerpos. Para
que la precipitacin ocurra en forma mxima se necesita que tanto el antgeno como el anticuerpo estn en concentraciones ptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes estn en
exceso no se pueden formar grandes agregados antgeno-anticuerpo.

Reaccin de precipitacin

Aglutinacin
Cuando un antgeno particulado reacciona con su anticuerpo especfico (divalente por lo menos) se observa la formacin de grumos o agregados de estas partculas, esto se conoce
como aglutinacin. En estas reacciones el determinante antignico est sobre la superficie
de una partcula o de una clula.
Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin para detectar pequeas cantidades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden
unir efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno en grumos gruesos macroscpicamente visibles. Es por esto que cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reac-

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cin de un antgeno soluble con su anticuerpo especfico, se transforma el antgeno soluble

en particulado adsorbiendolo o unindolo qumicamente a estructuras particuladas tales como esferas de ltex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuerpos por reacciones de aglutinacin, estos ensayos se conocen como ensayos de AGLUTINACION PASIVA.
Tambin se pueden aglutinar glbulos rojos y este fenmeno se conoce como HEMAGLUTINACION. Los anticuerpos pueden reaccionar con antgenos de los glbulos rojos, u otros
antgenos que se pueden adsorber a los glbulos rojos y observarse hemaglutinacin cuando se una el anticuerpo especfico.

Apariencia de clulas bacterianas aglutinadas por anticuerpos contra (a) Antgenos somticos (b) Antgenos flagelares
Inmunofluorescencia
Es una tcnica donde las molculas de anticuerpos son convertidos en sustancias fluorescentes, unindoles qumicamente a compuestos orgnicos fluorescentes tales como isotiocianato de fluorescencia o rodamina B Esto no altera la especificidad del anticuerpo pero
hace posible su deteccin cuando est unido a clulas o tejidos usando un microscopio para
fluorescencia. Los anticuerpos fluorescentes son de considerable utilidad en microbiologa
diagnstica.

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Preparacin de anticuerpos fluorescentes acoplando el colorante fluorescente isotiocianato

de fluorescena al anticuerpo
Para demostrar la presencia de antgenos o clulas bacterianas utilizando anticuerpos fluorescentes, existen dos procedimientos: el mtodo directo y el indirecto.
En el mtodo directo, el anticuerpo marcado es especfico contra el antgeno .

Inmunofluorescencia. Mtodo directo

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En el mtodo indirecto, la presencia del anticuerpo especfico sobre la superficie de la clula

es detectado por el uso de otro anticuerpo fluorescente dirigido contra el anticuerpo especfico.

Complemento
Adems de las reacciones antgeno-anticuerpo ya descritas, existen otros tipos de reacciones de gran importancia en inmunidad donde participa el Complemento.
El complemento acta junto con los anticuerpos especficos para llevar a cabo varios tipos
de reacciones antgeno-anticuerpo que de otra manera no podran ocurrir, tales como: lisis
de clulas bacterianas, muerte de clulas bacterianas, hemlisis, etc.
El complemento no es un anticuerpo (por lo tanto no aumenta con la inmunizacin), sino una
serie de enzimas que se encuentran en el suero normal y que atacan a las clulas bacterianas u otros agentes extraos. Estas enzimas, que se encuentran an en individuos no
inmunizados, son normalmente inactivas, pero se activan cuando ocurre una reaccin antgeno-anticuerpo.Una de las principales funciones del anticuerpo es reconocer las clulas
invasoras y activar el sistema del complemento para que acte. Ciertos componentes del
complemento son muy termolbiles, se destruyen por calentamiento a 56C por 30 minutos,
por otra parte los anticuerpos son termoestables.
Acciones del complemento
Entre las principales acciones del complemento tenemos:
Lisis de los glbulos rojos (hemlisis)
Si un antisuero contra glbulos rojos se mezcla con una suspensin de glbulos rojos y se le
aade suero normal como fuente de complemento ocurre la lisis a los 30 minutos de incubacin a 37C. La hemlisis se usa a menudo como prueba de la presencia de complemento
en sueros desconocidos o para medir la fijacin de complemento.

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Lisis bacteriana
Especialmente de bacterias Gram negativas, cuando los anticuerpos especficos se combinan con el antgeno de la superficie bacteriana en presencia de complemento.
Muerte microbiana
En ausencia de lisis ocurre la muerte microbiana cuando los anticuerpos especficos se
combinan con los antgenos de la superficie bacteriana en presencia de complemento.
Promocin de la accin fagocitaria:
Cuando se combinan bacterias capsuladas con el anticuerpo especfico en presencia de
complemento se promueve la accin fagocitaria Este proceso en el cual los anticuerpos especficos ms complemento hacen una clula susceptible a la fagocitosis se llama OPSONIZACION.
Prueba de fijacin de Complemento
Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son enzimticamente alterados durante la reaccin, de modo que no reaccionarn en una nueva secuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones
antgeno-anticuerpo esto es llamado FIJACION DE COMPLEMENTO y ocurre cuando un
anticuerpo de tipo IgG o IgM reacciona con el antgeno en presencia de complemento, an
cuando ste no sea requerido en la reaccin.
La prueba de fijacin de complemento se lleva a cabo en dos fases. En la fase primera se
mezclan el suero del paciente (previamente calentado a 56C) y el antgeno en presencia de
una cantidad determinada de complemento; esta mezcla es generalmente incubada durante
30 minutos a 37C. Si se forman los complejos antgeno-anticuerpo, el complemento es fijado. En la segunda fase se aade el sistema indicador que consiste en glbulos rojos de
carnero y anticuerpos contra glbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemlisis indica
que el complemento no fue utilizado por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reaccin Ag-Ac especfica. En cambio, la ausencia de hemlisis, indica que el complemento ha
sido fijado y por lo tanto que en la fase 1
se ha producido una reaccin Ag-Ac, en este caso se considera una reaccin de fijacin del
complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la reaccin de
fijacin de complemento. (Fig. 11.16). Utilizando un antgeno conocido, esta tcnica puede
ser empleada para detectar y medir anticuerpos presentes en sueros. Al ocurrir la reaccin
del antgeno con los anticuerpos del suero, sta reaccin Ag-Ac se puede poner de manifiesto mediante una prueba de fijacin de complemento.

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Fijacin de complemento positiva

Incubacin

37C x 30

No hay hemlisis

Fijacin de complemento negativa

37C x 30

Incubacin

Hay hemlisis

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BIBLIOGRAFA
Harmful
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Editorialnodes
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Lymph
Mast cell
Magaly Pedrique de Aulacio
Norma
Platelet De Castro.
Universidad Central de Venezuela
Facultad
de Farmacia
Skin
Departamento de Microbiologa y Parasitologa
Marzo
Spleen 2000
Revisin 2008
Tissues
ACTIVIDADES ADICIONALES
Tonsil
Qu se conoce como mtodo ELISA?. Seal dos aplicaciones.
Qu se conoce como anticuerpos monoclonales? Cite algunas aplicaciones.
Haga un esquema donde seale la ubicacin del timo, bazo, y principales ganglios linfticos.
Busque en un diccionario de ingls tcnico la traduccin al espaol de las siguientes palabras:
Abscess
Agranulocyte
Attack
Barrier
Blood vessel
Burns
Chemotaxis
Cytokine
Damaged cells
Erytrocite

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