INTRODUCCION
El hipotiroidismo congnito
(HC)es una enfermedad heredo
metablica, reconocida como la causa ms frecuente de retraso mental
evitable en la infancia y se caracteriza por el dficit en la produccin o
utilizacin de las hormonas tiroideas, causada por la ausencia anatmica o funcional de la tiroides. El HC
presenta una incidencia mundial de
1 : 4 000,1-5 en nuestro pas es aproximadamente de 1 : 3 000.6,7
Los pacientes no tratados pueden
presentar retardo en el crecimiento
y en la maduracin sea, as como
una disminucin de la actividad
metablica basal de los neonatos.1 La
deteccin precoz y el inicio de una
terapia temprana con hormonas
tiroideas evita que se produzcan estas afectaciones, logrndose un desarrollo psicomotor normal en los
nios.8
La disponibilidad de ensayos
para la determinacin de las hormonas T4 y de estimulacin de la tiroides
ha permitido establecer programas
de pesquisa en varios pases para detectar los recin nacidos con T4 baja
o HET elevada. La mayora de estos
programas utilizan la HET como determinacin primaria en los de pesquisa neonatal, lo que ha permitido
que su relacin costo/beneficio se
vea favorecida al disminuir el nmero de falsos positivos.9
El UMELISA TSH NEONATAL
fue diseado para la determinacin
de las concentraciones de HET en
sangre de taln, utilizando discos de
119
120
Fueron empleados dos anticuerpos monoclonales que reconocen sitios diferentes de la cadena de la
HET. Estos anticuerpos se purificaron por cromatografa de afinidad en
protena A-Sepharose CL-4B.10 Las
placas de poliestireno de 96 posiciones con capacidad mxima de 30 L,
ambiente (20 a 25 C) en cmara hmeda. Posteriormente, se transfirieron 10 L del eluato hacia la placa
de inmunoreaccin y se incubaron
durante 2 h a 37 C en cmara hmeda. Se realizaron seis ciclos de lavado con disolucin D, para eliminar
los componentes no fijados. Se procedi al revelado de la reaccin
inmunoenzimtica mediante la incubacin del sustrato fluorescente 4metilumbeliferilfosfato durante
30 min a 23 C en cmara hmeda
con lo que se obtuvo el producto
fluorescente 4-metilumbeliferona.
La intensidad de la fluorescencia
emitida fue proporcional a la concentracin de HET presente en la muestra y fue medida en el lector de placas
fluormetrofotmetro PR-521.
Procedimiento de trabajo del ensayo modificado para discos de 3 mm
Procedimiento de elucin con
disolucin B. Fueron cortados discos
de 3 mm en las manchas de sangre
seca sobre papel de filtro. A cada disco se le adicionaron 40 L de la disolucin de elucin (dilucin 1 : 21 de
la disolucin B en otra de suero de carnero preparada al 5 % con disolucin D).
Procedimiento de elucin con
disolucin C. Fueron cortados discos
de 3 mm en las manchas de sangre
seca sobre papel de filtro. A cada disco se le adicionaron 40 L de la disolucin C.
En ambos procedimientos, las
placas de elucin se incubaron durante 30 min en cmara hmeda a
temperatura ambiente. A partir de
este paso, se sigui con el mismo
procedimiento de trabajo del ensayo que emplea discos de 5 mm .
Pruebas para la optimizacin del
ensayo
Para la determinacin de los coeficientes de variacin (CV) intra e
inter-ensayo y los porcentajes de recobrado, se evaluaron controles a los
que se aadieron cantidades conocidas de HET. Se evalu el paralelismo del ensayo mediante diluciones
seriadas, con sangre cuyas concentraciones de HET fueron inferiores
a 1 mUI/L, a tres muestras con elevados contenidos de HET. Cada muestra
se evalu en tres ensayos independientes. Las concentraciones obtenidas para cada dilucin se corrigieron
multiplicando por el factor de dilucin.
Para calcular el lmite de deteccin del ensayo se evalu el calibrador de concentracin 0 (n = 240). A
la fluorescencia media obtenida se
le adicionaron tres desviaciones
R=
g 100 (%)
Precisin y exactitud
Se evaluaron controles preparados a concentraciones de HET que
abarcaron un amplio intervalo de la
curva de calibracin del ensayo. Se
obtuvieron coeficientes de variacin
intra-ensayo inferiores al 8 % y coeficientes de variacin inter-ensayo
por debajo de 10,5 % (Tabla 1). Al evaluar los controles a los que se aadieron cantidades conocidas de HET, el
recobrado medio fue de (96,3 4,1) %
y los porcentajes individuales oscilaron entre 93 y 101 % (Tabla 2).
Intra-ensayo
(n = 16)
Inter-ensayo
(n = 10)
DE
CV (%)
DE
CV (%)
20,2
1,6
7,9
2,1
10,4
62,9
4,4
7,0
5,8
9,2
94,7
7,1
7,5
8,7
9,2
donde:
FConj. (Tiempo estabilidad) Fluorescencia promedio de los lotes del conjugado
en estudio.
FConj. (Tiempo 0) Fluorescencia promedio
de los lotes de conjugado en
tiempo inicial del estudio.
Valor esperado
Valor obtenido
Recobrado
(mUI/L)
RESULTADOS
(%)
20,2
20,4
101,0
62,9
58,6
93,2
94,7
89,7
94,7
140
120
100
F lu ores c enc ia
Ensayo de paralelismo
Se realizaron diluciones seriadas
a muestras de sangre, con elevadas
concentraciones de HET, se dispensaron en tarjetas de papel de filtro
Scheicher and Schuell 903 y se evaluaron en el ensayo. Se obtuvieron
curvas paralelas al eje de las abscisas
(Fig. 2). Las concentraciones calculadas despus de la correccin con
el factor de dilucin fueron de 3,2 %
de la concentracin original en la
muestra pura.
80
60
40
20
0
0
10
25
50
100
200
Fig. 1. Curva de calibracin obtenida con el UMELISA TSH NEONATAL modificado para discos de 3 mm de sangre seca sobre papel de filtro.
121
120
100
Pruebas de estabilidad
80
Muestra 1
Muestra 2
60
Muestra 3
40
20
0
1
1:02
1:04
1:0 8
Dilucin de la muestra
Se comprob que los lotes de la disolucin de conjugado pre-diluido fueron estables durante 12 meses, pues
los porcentajes de recuperacin estuvieron por encima del 88 % (Fig. 5).
En el caso de la disolucin de conjugado listo para el uso, se observ que
a partir de los 8 meses de almacenamiento, se obtienen fluorescencias
inferiores en un 20 % a las obtenidas al inicio del estudio. Para los objetivos del trabajo, fue ms factible
emplear la disolucin de conjugado
pre-diluido por su mayor estabilidad
en el tiempo.
DISCUSION
12
y = 0,875x + 0,094
r = 0.9
Ensayo de 3 mm
10
8
6
4
2
0
0
10
12
120 0
Muestras
100 0
80 0
5 mm
60 0
3 mm
40 0
20 0
0
0 .5
1.5
2.5
3.5
4.5
5 .5
6.5
7 .5
13
122
Recuperacin (%)
140
Pre-diluido
120
Listo Uso
100
80
60
0
10
11
12
Fig. 5. Estudio de estabilidad a tiempo real de las disoluciones de conjugado pre-diluido y listo para el uso.
123
17.
18.
19.
20.
OZONEY est diseado para para desinfectar pequeos volmenes de agua para beber, lavar los alimentos que se ingieren crudos,
enjuagar la vajilla y los utensilios de cocina, as como para la higiene
bucal y otros usos.
OZONEY puede convertirse en un gran aliado para la salud, ya
que permite obtener agua de elevada calidad sin tener que hervir el
agua o adquirir agua embotellada, porque al emplearlo se dispone de
todas las ventajas que proporciona el ozono, entre las que se encuentra su elevado poder germicida. Su poder desinfectante es mayor que
el de todos los agentes de este tipo que se emplean hasta el momento.
OZONEY es ideal para oficinas, el hogar u otros lugares donde se
requieran pequeos volmenes de agua para consumo humano con
elevada calidad.
Las concentraciones de ozono disuelto que se alcanzan con l, aseguran una desinfeccin total del agua tratada.
Caractersticas tcnicas
Alimentacin: 110 V-CA+/- 10 %.
Frecuencia: 50 Hz .
Concentracin de ozono en el agua: 0,4 ppm
(mnimo).
Caudal de agua recomendado: 1,5 a 2 L/min .
Potencia: 10 VA (mximo).
Dimensiones: (195X285X185) mm .
Peso: 1,8 kg .
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Calle 230 y 15, No. 1313, Siboney, Playa, Apartado Postal 6412, Ciudad de La Habana, Cuba.
Telfonos: (53-7) 271-9264; 271-2089. Fax: (53-7) 271-0233. E-mail: ozono@infomed.sld.cu
http:www.ozono.cubaweb.cu