3) FUNDAMENTO TERICO

a) Mtodo espectrofotomtrico ultravioleta

Se basa en la absorcin de radiacin electromagntica en las regiones visible y ultravioleta del
espectro, las que resultan en cambios en la estructura electrnica de iones y molculas (Fifield
y Kealey, 1995).
La absorcin de la radiacin en las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagntico resulta en transiciones elctricas entre los orbitales moleculares. Los
cambios de energa son relativamente largos, corresponde a una longitud de onda de 200 a
800 nm (Fifield y Kealey, 1995).
La principal limitante de esta tcnica es que sirve slo para aguas filtradas y con bajo
contenido de materia orgnica, en cursos naturales de agua sin contaminacin y en
suministros de agua potable, pues todo mtodo colorimtrico requiere una muestra
pticamente clara (Clesler et al., 2005).
La medicin de la absorcin UV a 220 nm permite una rpida determinacin de nitrato. La
materia orgnica disuelta tambin puede absorber a los 220 nm y el nitrato no puede absorber
a 275 nm, por lo que una segunda medicin a 275 nm corrige el valor de NO3 - (Clesler et al.,
2005).
Las principales interferencias son la materia orgnica disuelta, surfactantes, NO2- y Cr 6+.
Otros iones inorgnicos interfieren pero no se encuentran normalmente en aguas naturales,
como cloruros y cloratos (Clesler et al., 2005).

b) Espectrofotmetro de doble haz

En un espectrofotmetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de la muestra
y de la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta manera entra y sale
del paso de la luz. Cuando el cortador no desva el haz, la luz pasa a travs de la muestra, y el
detector mide la potencia radiante que llamamos P. Cuando el cortador desva el haz a travs
de la cubeta de referencia, el detector mide P0. El haz se corta varias veces por segundo, y el
circuito compara automticamente P y P0, dando as la transmitancia y la absorbancia. Este
procedimiento permite hacer una correccin automtica de las variaciones de intensidad de la
fuente, y de la respuesta del detector con el tiempo y la longitud de onda, porque se comparan
con mucha frecuencia la potencia que sale de las dos muestras. Los espectrofotmetros de
mayor calidad destinados a investigacin tambin permiten un barrido automtico de
longitudes de onda y un registro continuo de absorbancia. Cuando se registra un espectro de
absorbancia, es de rutina registrar primero el espectro de la lnea base con las disoluciones de
referencia (disolvente puro o blanco) en las dos cubetas. Despus se resta el espectro base de
la absorbancia medida de la muestra, para obtener as la verdadera absorbancia de la muestra
a las distintas longitudes de onda. En la figura 1 se muestra un espectrofotmetro visible de
doble haz. La luz blanca procede de una lmpara de halgeno de cuarzo (como la de luz larga
de un automvil), y la fuente ultravioleta es una lmpara de arco de deuterio, que emite en el
intervalo de 200-400 nm. En un momento dado slo se utiliza una de ellas. La red de difraccin

1 selecciona una banda estrecha de longitudes de onda, que entra en el monocromador, y ste
selecciona una banda an ms estrecha, que es la que pasa a travs de la muestra. Despus de
cortado el haz, y una vez que pasa por las cubetas de la muestra y referencia, la seal es
detectada por un tubo fotomultiplicador, que produce una corriente elctrica proporcional a la
potencia radiante que llega al detector.

Fig. 1 Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de doble haz

4) PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Fig. 2 Espectrofotmetro UV Visible, SHIMADZU 1700

b) MANEJO DE ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE SHIMADZU 1700

1. Retirar la slice, del compartimiento de porcelana del equipo.

2. Encender supresor de picos, estabilizador, el espectrofotmetro, levantar la
pantalla, completar la verificacin del instrumento
3. Encender la PC, monitor. Presionar en el espectrofotmetro PC control (F4) y
cerrar la pantalla.
4. Ingresar al software UV PROBE, modo SPECTRUM y presionar CONNECT
5. Ir a EDIT e introducir los datos en METODO SPECTRUM.
6. Seleccionar BASELINE (rango: 190-350nm), aparece SLEWING y STOP, no
manipular el equipo hasta que aparezca en pantalla max. 0.00 Abs.
7. En cada compartimiento colocar la ceda con el blanco, presionar AUTOZERO,
parpadea el icono y max. 0.00
8. Colocar en el compartimiento la muestra (adelante), la celda con patrn
intermedio.
9. Presionar OPERATION, PEACK PICK, aparece tabla, clic en celda DESCRIPTION a
la altura de mx. apropiado, click derecho, click en propiedades, en PEACKS,
activar description y down, cerrar.
10. Ir a FILE, SAVE AS, introducir datos solicitados y guardar.
11. Seleccionar PHOTOMETRIC. Crear mtodo presionando M. en nueva ventana,
seleccionar los parmetros del mtodo. Utilice max. Obtenido, luego CLOSE,
FILE, SAVE AS, completar datos y guardar.
12. Colocar en el compartimiento la muestra (adelante), la celda con el blanco. En
ESTNDAR TABLE (Active), registre los valores adecuados en las celdas SAMPE,
TYPE CONC.; y as con cada patrn analizar.
13. Colocar en el compartimiento la muestra (adelante), la celda con patrn 1, clic
en la celda correspondiente a P1, READ, STD, continuar igual con cada patrn y
luego colocar la celda con la muestra y marcar READ UNK.
14. Ir a GRAPH, introducir parmetros estadsticos, FILE, SAVE AS,
15. Presionar DISCONECT.
16. Retirar celdas, presionar MODE (espectrofotmetro), apagar equipo,
estabilizador, monitor, supresor de picos y colocar slice.