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Departamento de Biologa Molecular

PRACTICAS DE GENETICA HUMANA


Curso 2007-2008
Profesora responsable: Mara Victoria Mendiola

Alumno:
Grupo:

Las Prcticas de Gentica Humana son de realizacin obligatoria para todos


los alumnos de la asignatura. Se controlar la asistencia y se corregir el cuaderno
de prcticas. Por otra parte, los contenidos tericos de estas prcticas sern tambin
material de los exmenes tericos de Junio y Septiembre.

Se realizar un total de seis prcticas que tendrn una duracin de 5 das, con
el siguiente plan de trabajo:

Da 1.

Prctica 1.

Da 2.

Prctica 2.

Da 3.

Fin Prctica 2, Prctica 3 y Prctica 4.

Da 4.

Prctica 5 (1 parte).

Da 5.

Prctica 5 (2 parte) y Prctica 6.

Indice
Prctica 1. El cariotipo humano ............................................

Prctica 2. Transformacin bacteriana ....................................


Prctica 3. Estudio de rboles genealgicos ...........................
Prctica 4. Herencia polignica ............................................

p7

Prctica 5. Anlisis de polimorfismos ....................................


Prctica 6. Gentica de poblaciones ....................................

p 23

p 10
p

18

p 31

PRACTICA 1
EL CARIOTIPO HUMANO
Cariotipo normal y de individuos con alteraciones
cromosmicas
Objetivo y material
El objetivo de esta prctica es el estudio del cariotipo humano. Se pretende que el alumno
aprenda a elaborar cariogramas y a distinguir el cariotipo normal de cariotipos que reflejan
alteraciones cromosmicas, obtenidos de individuos que presenten diferentes sndromes.
Para ello se utilizar un programa de ordenador en el que se muestran los cromosomas
metafsicos teidos pertenecientes a diversos individuos. El alumno deber ordenar el cariograma
y determinar si existen anomalas cromosmicas en cada individuo.

Introduccin
El cariotipo es el complemento cromosmico particular de un individuo y viene definido
por el nmero y morfologa de los cromosomas en la metafase mittica. En la especie humana la
dotacin cromosmica es de 2n = 46 (22 pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales).
Utilizando tcnicas de tincin estndar los cromosomas aparecen uniformemente teidos en
metafase y se clasifican en 7 grupos de la A a la G atendiendo a su longitud relativa y a la posicin
del centrmero que define su morfologa. Los autosomas se numeran del 1 al 22 ordenados por
tamaos decrecientes y por la posicin del centrmero. Los cromosomas sexuales X e Y
constituyen un par aparte, independientemente del resto (por su tamao, el cromosoma X se
incluira en el grupo C, y el Y, en el grupo G). De esta forma el cariotipo humano queda
constituido as:
Grupo
A

Pares cromosmicos
1, 2 y 3

4y5

C
D
E

6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12
13, 14 y 15
16, 17 y 18

F
G
X, Y

19 y 20
21 y 22

Caractersticas
Cr. muy grandes casi metacntricos (1 y 3
metacntricos, pero 2 submetacntrico)
Cr. grandes y submetacntricos, con dos brazos
muy diferentes en tamao
Cr. medianos submetacntricos
Cr. medianos acrocntricos con satlites
Cr. pequeos, metacntrico el 16 y
submetacntricos 17, 18
Cr. pequeos y metacntricos
Cr. pequeos y acrocntricos, con satlites.
El cr. X es parecido al 6. El Y, al grupo G, pero
sin satlites.

(Todos los cromosomas autosmicos estn ordenados en orden decreciente de tamao, excepto el
cromosoma 21 que ahora se sabe que es ms pequeo que el 22)
Sin embargo, atendiendo solamente a estos parmetros no es posible identificar
inequvocamente cada par de cromosomas. Para ello es necesario utilizar diferentes tcnicas de
bandeo cromosmico. Los distintos patrones de bandas que se consiguen son constantes y
2

especficos de cada tcnica y determinan la distribucin de regiones cromosmicas que se revelan


positiva o negativamente segn el mtodo utilizado.

Clasificacin de los cromosomas

A
1

B
4

C
6

10

11

12

D
13

14

E
16

15

17

18
Crs.
sexuales

19

20

21

22

Citogentica clnica
En 1956, Tijo y Levan determinaran el complemento cromosmico diploide del hombre
(2n = 46). En 1959 Lejeune describi la primera cromosomopata o enfermedad originada por una
alteracin cromosmica, el sndrome de Down producido por una trisoma del cromosoma 21.
Desde entonces, la Citogentica Humana ha ido desarrollndose como una ciencia mdica.
Hay dos tipos fundamentales de cromosomopatas:
- Variaciones cromosmicas estructurales: afectan a la estructura del cromosoma en
cuanto a la ordenacin lineal de los genes. Aqu se incluyen deleciones, duplicaciones, inversiones
y translocaciones.
3

- Variaciones cromosmicas numricas: afectan al nmero de cromosomas. Incluyen las


poliploidas (triploida: 3n; tetraploida: 4n) y los diversos tipos de aneuploida (trisomas: 2n+1;
monosomas: 2n-1).
Por otra parte, las anomalas cromosmicas pueden afectar a los autosomas o a los
cromosomas sexuales.
Las alteraciones cromosmicas ms frecuentes en humanos son:
Anomalas autosmicas:
Sndrome de Down, por trisoma del cromosoma 21, translocacin 21/21 o translocacin 14/21.
Sndrome de Patau, por trisoma del par 13.
Sndrome de Edwards, por trisoma del par 18.
Sndrome Cri du Chat, por delecin parcial del brazo corto del cromosoma 5 (5p).
Sndrome de DiGeorge, por delecin parcial del brazo largo del cromosoma 22 (22q11).
Cromosoma Filadelfia, formado por una translocacin entre los cromosomas 9 y 22.
Anomalas de los cromosomas sexuales:
Sndrome de Klinefelter, por una constitucin XXY, XXXY, XXXXY.
Sndrome XYY, cromosoma Y extra en varones.
Sndrome de Turner, constitucin X0.
Sndrome XXX, cromosoma X extra en mujeres.
Actualmente se ha llegado a profundizar bastante en el conocimiento del cariotipo humano
y se sabe que es relativamente frecuente la aparicin de anomalas cromosmicas. Por ejemplo,
cerca de un 25% de los abortos ocurridos antes de la octava semana de gestacin tienen
cariotipos anormales y un 0,5% de los recin nacidos presentan aneuploidas.
Estas alteraciones no slo pueden producir anomalas en el propio individuo portador sino
que, por tratarse de anomalas genticas, pueden transmitirse a la descendencia en el caso de que
afecten a las clulas germinales. La deteccin anticipada de anomalas cromosmicas permite
dictaminar las posibilidades de que la descendencia de una pareja portadora de una de ellas pueda
presentarla o no. Para ello es preciso conocer el cariotipo de cada progenitor, lo que permite
emitir un diagnstico de su posible descendencia, con lo que el individuo ser consciente de sus
posibilidades.
El estudio del cariotipo tiene tambin su aplicacin en el diagnstico prenatal. Es posible
determinar la constitucin cromosmica del feto antes de su nacimiento pudiendo as observarse
si presenta alguna anomala cromosmica detectable. Hoy en da, el diagnstico prenatal se
practica a posteriori del inicio de la gestacin y los resultados positivos suelen plantear conflictos
ticos y emocionales. Si bien, en muchos casos este tipo de diagnstico es el nico posible, como
cuando la anomala cromosmica se produce en las clulas germinales de uno de los progenitores.

Protocolo
En la pantalla se presentarn los cromosomas desordenados sobre la plantilla donde hay
que ordenar el cariograma. Pinchando con el ratn y arrastrndolos, se irn colocando sobre la
casilla correspondiente. Habr que ordenarlos por parejas segn su tamao, la posicin del
centrmero y las bandas, teniendo en cuenta las siguientes reglas:
- pinchando en align all, todos los cromosomas se colocarn en posicin vertical,
facilitando su ordenacin.
- el brazo largo de cada cromosoma se sita hacia abajo. Para dar la vuelta a un
cromosoma, pinchar dos veces sobre el mismo.
- los autosomas se disponen en orden decreciente de tamaos mientras que los
cromosomas sexuales deben ir por separado.
- hay en total 5 cariotipos distintos (5 muestras o samples). Se recomienda empezar por
la primera y hacer como mnimo las muestras 1, 2 y 3.
Siguiendo estas instrucciones generales, proceder de la siguiente manera:
1. Contar los cromosomas y apuntar el nmero.
2. Buscar y colocar los cromosomas ms pequeos y acrocntricos que corresponden al
grupo G y, cuando est presente, al cromosoma Y que ser el ms largo de los anteriores. En total
sern 5 si es XY o 4 si es XX.
3. Buscar otros 6 cromosomas acrocntricos pero ms grandes que los
anteriores y que constituyen el grupo D. Colocarlos emparejados.
4. Buscar los 4 cromosomas ms pequeos que nos quedan, que son
metacntricos. Colocarlos en el grupo F.
5. Buscar los cromosomas del grupo E que son 6, algo mayores que los F. Dos de las
parejas, la 17 y 18, son submetacntricos y la 16 metacntricos.
6. Buscar los 6 cromosomas del grupo A. Son los mayores. Los pares 1 y 3 son
metacntricos (el 1 mayor que el 3) y el 2 submetacntrico.
7. Buscar los 4 cromosomas del grupo B que son los submetacntricos de mayor tamao.
8. Buscar los 14 cromosomas del grupo C. Encontraremos ms de 14 cromosomas, ya
que el cromosoma X es idntico a los que constituyen el par 12. Para diferenciarlo hay que
recurrir al estudio de las bandas lo mismo que, en general, para numerar las parejas dentro de
cada grupo.
En el caso de que haya ms de 46 cromosomas, buscar a qu grupo pertenece el
sobrante, colocarlo all y sealar el sndrome a que da lugar esta anomala. En caso de que el
nmero de cromosomas sea inferior a 46 sealar el cromosoma que falta as como el sndrome a
que da lugar esta anomala.
Si el nmero de cromosomas es de 46, estudiar cada cromosoma para comprobar si hay
algn tipo de alteracin estructural (deleciones, translocaciones...).
Cuando hayamos terminado, pinchando en Verify el programa nos indicar si los
cromosomas estn colocados correctamente. Sobre los que no aparezca la marca roja, es que
estn mal colocados. A veces simplemente hay que colocar bien el cromosoma dentro de su
casilla, si no no se detecta.
Por ltimo, hay que hacer el diagnstico del cariotipo obtenido. Pinchando en diagnosis
saldrn varias opciones; se elegir la que se estime oportuna, y el programa nos dir si hemos
acertado. Si el diagnstico no es correcto, vuelve a observar el cariograma detenidamente. Si lo
es, puedes pasar a la siguiente muestra.

Preguntas de la prctica:
1.- Qu caractersticas permiten diferenciar, en general, unos cromosomas de
otros?
2.- Qu clulas del organismo llevan el cariotipo diploide completo?
3.- Qu mecanismos cromosmicos producen anomalas del cariotipo humano?
4.- Se manifiestan siempre las alteraciones cromosmicas en el fenotipo del
individuo que las transmite? Explica tu respuesta.

Respuestas:

PRACTICA 2
TRANSFORMACION BACTERIANA
Objetivo y material
Familiarizar al alumno con tcnicas de biologa molecular de uso general tanto en estudios
de gentica bsica como en aplicaciones tecnolgicas. Se observar la adquisicin de resistencia al
antibitico Ampicilina de una cepa de Escherichia coli inicialmente sensible al antibitico.

Introduccin
La transformacin es un proceso por el cual las clulas captan ADN libre presente en el
medio. Es un fenmeno que ocurre de forma natural en muchas bacterias, pero la eficacia con que
ocurre vara enormemente de unas especies a otras. Para que ocurra la transformacin, la bacteria
tiene que encontrarse en el llamado estado de competencia, que ocurre en determinadas
condiciones fisiolgicas; en este estado, la bacteria presenta alteraciones en su pared y membrana
celulares, que permiten la entrada de cidos nucleicos en la clula.
En el laboratorio se ha conseguido poner a punto tcnicas que inducen el estado de
competencia en bacterias que no lo presentan de forma natural, como es el caso de E. coli. Estas
tcnicas se basan en diversos tratamientos qumicos o fsicos que producen poros en la pared, lo
que permite una transformacin bastante eficiente. Algunos de estos mtodos son la
electroporacin, consistente en inducir la competencia mediante la aplicacin de un pulso
elctrico muy breve e intenso, o tratamientos qumicos con sustancias como el cloruro clcico o el
TSB. Hay que tener en cuenta sin embargo que tras estos tratamientos no todas las clulas del
cultivo se hacen competentes.
La transformacin en el laboratorio es una tcnica rutinaria de enorme utilidad, que nos
permite introducir prcticamente cualquier plsmido en su forma circular superenrollada en casi
cualquier tipo de bacteria. El mtodo que se describe a continuacin es, por su simplicidad, uno
de los ms utilizados para transformar E. coli. Para detectar la transformacin, el ADN
introducido llevar un marcador seleccionable.
Materiales
La bacteria a transformar ser una estirpe de E. coli de uso comn en el laboratorio, que
se denomina DH5. Estas bacterias son sensibles al antibitico Ampicilina, es decir, no son
capaces de crecer en un medio de cultivo que contenga dicho antibitico.
El ADN que introduciremos en estas bacterias ser un plsmido, denominado pUC18, que
contiene un gen cuyo producto confiere resistencia al antibitico Ampicilina.
Como medio de cultivo lquido utilizaremos LB (10 g/l triptona, 5 g/l extracto de
levadura, y 5 g/l de ClNa), un medio rico en nutrientes en el que las bacterias se multiplican con
rapidez. El medio de cultivo slido ser LA (LB con agar al 1.5%). Tanto LB como LA se tendrn
ya preparados y esterilizados, pero el medio slido habr que repartirlo en placas de Petri y aadir
en su caso el antibitico para conseguir un medio selectivo para los transformantes.
Para la induccin de la competencia y posterior transformacin usaremos el medio TSB,
que contiene, aparte de los componentes del LB, lo siguiente: 10% PEG, 5% DMSO, 10mM
MgCl2, 10 mM MgSO4. Tambin se utilizar TSB suplementado con 20mM de glucosa.

Protocolo
7

Durante todo el proceso, y para evitar la contaminacin del cultivo bacteriano, habr que
trabajar en condiciones de esterilidad.
Da 0
1.
Inocular las bacterias en 10 ml de LB e incubar a 37C con agitacin toda la noche.
Da 1
1.
Dilur 1/10 el cultivo bacteriano (1 ml del cultivo en 10 ml de medio de cultivo LB
fresco)
2.
Incubar una hora a 37C con agitacin.
3.
Durante el tiempo de incubacin, aprovecharemos para comprobar que la estufa
est a 37C y descongelar reactivos. Tambin prepararemos el medio slido. El bote de LA ya
preparado, esterilizado y solidificado, lo introduciremos en el microondas para que se funda.
Despus se deja enfriar hasta unos 50C (que se pueda coger el bote sin quemarse) y se aade, en
su caso, el antibitico Ampicilina. Utilizaremos un stock de Ampicilina disuelta en agua destilada y
estril a una concentracin de 100 mg/ml. Queremos alcanzar una concentracin final de
antibitico en el medio de cultivo de 100 g/ml. Se mezcla suavemente y se vierte sobre placas de
Petri (unos 25 ml por placa). Se deja sobre una superficie plana hasta que solidifique. Todo esto
se debe realizar en condiciones de esterilidad.
4.
Medir la D.O. (densidad ptica, o absorbancia) a 600 nm de 1ml del cultivo.
Queremos que las bacterias se encuentren en fase exponencial, por lo que la D.O. debe estar entre
0.3 y 0.9. Una D.O. de 0.5 se corresponde aproximadamente con una concentracin de 10 8
bacterias/ml.
5.
Centrifugar las clulas, 10 minutos a 4000 rpm. Mientras se centrifuga, coger hielo
picado de la mquina para el paso siguiente.
6.
Tirar el sobrenadante. Resuspender el precipitado de bacterias en 1/10 del volumen
inicial (1ml) de TSB fro y dejar en hielo 10 minutos. Durante este tiempo, las bacterias van
adquiriendo el estado de competencia.
7.
Poner dos tubos eppendorf estriles en hielo. Marcarlos como A y B. Poner en
cada uno 100 l de clulas.
8.
Al tubo A, aadirle 2 l (0,5 g) del ADN plasmdico.
9.
Incubar 5 minutos ms en hielo.
10.
Sacar los tubos del hielo. Aadir a cada uno 900 l de TSB con glucosa.
11.
Incubar 15 minutos a 37C para dar tiempo a que se expresen los genes recin
introducidos en la clula.
12.
Sembrar 100 l de cada tubo en una placa de LB+ampicilina. Sembrar tambin 100
l en una placa de LB sin antibitico.
13.
Dejar las placas en la estufa de 37C hasta el da siguiente.
Da 2
1.
Observar el crecimiento en las placas. Contar las colonias que hayan crecido en las
placas de LB+Ampicilina. Una incubacin excesivamente larga de estas placas, o un nmero muy
elevado de colonias, podran dar lugar a la aparicin de "colonias satlite" de pequeo tamao
alrededor de las colonias grandes; estas pequeas colonias no se contabilizan, pues no representan
bacterias que hayan adquirido el gen de resistencia, sino ms bien bacterias que consiguen crecer
gracias a que las bacterias resistentes degradan el antibitico a su alrededor.

Preguntas de la prctica
8

1.
Calcular el nmero de transformantes por g de ADN aadido, con la
frmula: (n de colonias / g ADN aadidos) x10 (porque hemos sembrado slo la
dcima parte de la transformacin)
2.
Calcular la frecuencia de transformacin utilizando la frmula
Frec. transf =

n transformantes / g ADN

________________________
n clulas totales

Para calcular el nmero de clulas habr que partir de la D.O. del cultivo
inicial y de ah calcular, primero, cuntas clulas haba en el cultivo de partida, y
segundo, cuntas en el tubo A.
3.
En la placa de LB+Ampicilina sembrada con 100 l del tubo B no debera
haber colonias. Sabras explicar por qu? Para qu se realiza este control?
4.
Describe qu observas en la placa de LB sin Ampicilina, y explcalo.

Respuestas

PRACTICA 3
ESTUDIO GENEALOGICO EN GENETICA HUMANA
Objetivo y material
El objetivo de esta prctica es que el alumno aprenda a confeccionar y esquematizar
rboles genealgicos; a determinar, en la medida de los posible, el genotipo de los individuos que
lo componen, y a conocer la transmisin de algunos caracteres sencillos y de fcil observacin.
El material biolgico de esta prctica sern los propios alumnos y sus familiares para la
observacin de algunos caracteres genticos. Con sus datos se elaborarn las genealogas.

Introduccin
El hombre presenta ciertas caractersticas especiales que lo califican como un material
difcil para el estudio gentico. De hecho, estas caractersticas son:
1. Hay una gran diversidad gentica de individuos, y tambin la estructura gentica de las
poblaciones humanas vara continuamente debido a las migraciones, la mezcla de razas, etc.
2. Por motivos ticos y morales no se practican cruzamientos experimentales, de los que
por otra parte no se obtendra gran informacin, ya que:
a) de cada parto suele nacer un solo individuo
b) las gestaciones son largas
c) entre una generacin y la siguiente transcurre mucho tiempo
d) el tamao de las familias es pequeo.
En cambio, otros organismos que se utilizan frecuentemente en la investigacin gentica
presentan caractersticas mucho ms ventajosas. Por ejemplo en los ratones, ocurre una
generacin cada dos meses y los descendientes de cada pareja pueden contarse por decenas. En
Drosophila, la generacin dura 20 das y se cuentan los descendientes por centenares.
As, en estos organismos y otros de caractersticas similares, los cruzamientos
experimentales constituyen uno de los mejores mtodos para el conocimiento de los caracteres
hereditarios.
Por lo tanto, la gentica humana tiene que recurrir para su desarrollo a mtodos indirectos
tales como el uso de pedigrs o rboles genealgicos, anlisis de poblaciones, etc.
A pesar de todas estas dificultades, desde principios de siglo y mediante el uso de tcnicas
genealgicas, se ha ido acumulando el conocimiento de nuevos caracteres determinados
genticamente y de los genes que los controlan, hasta llegar a varios millares. Posteriormente, las
tcnicas citogenticas y moleculares han permitido identificar nuevos genes y determinar su
localizacin cromosmica.

Protocolo
La prctica en s consiste, en primer lugar, en el reconocimiento de las variaciones
fenotpicas para cada uno de los caracteres monognicos que se describen a continuacin, de
donde el alumno deducir su genotipo en cada caso. Los datos se tomarn en una hoja como la
que se indica al final de esta prctica. Se usar una hoja de datos para cada persona.
Descripcin de los caracteres
10

1) Disposicin del lbulo de la oreja. Lbulo separado de la mejilla o pegado lateralmente a la


mejilla.
2) Lnea frontal del pelo. Puede ser continua o tener un saliente frontal en el centro denominado
"pico de viuda". Obviamente las personas calvas no se pueden contabilizar.
3) Capacidad de enrollar la lengua. Ser o no capaces de enrollar la lengua en forma de U fuera de
la boca.
4) Pigmentacin del iris. Ojos azules frente a ojos ms oscuros, sean stos verdes o marrones. Lo
que se compara es la ausencia total o no de pigmentacin en la superficie del ojo. En ausencia de
sta, se observa la lmina interna azul del iris, y los ojos sern totalmente azules. La presencia de
pigmento en las capas superiores del iris enmascara en mayor o menor grado el color azul del
fondo. Otros genes determinan el color exacto y su intensidad para ojos verdes, marrones, etc.,
pero en esto no nos fijaremos.
5) Hiperextensibilidad del dedo pulgar. Capacidad o incapacidad de doblar hacia atrs la ltima
falange del pulgar en un ngulo de casi 90 respecto a la anterior ("dedo del autoestopista"). Esta
capacidad puede manifestarse slo en una de las manos, y la expresividad del rasgo es variable.
6) Dedo meique doblado. El meique puede estar recto, o bien con la ltima falange doblada
hacia el dedo anular. Se colocan ambas manos relajadas sobre una mesa y se observa si los dedos
estn paralelos o si los meiques se doblan hacia dentro.
7) Longitud relativa del dedo ndice. Dedo ndice ms o menos largo que el anular. Se realiza la
observacin como en el caso anterior. Se trata de un carcter de expresin influenciada por el
sexo.
8) Hoyuelos faciales a ambos lados de la boca. Presencia o ausencia de hoyuelos en las mejillas.
9) Presencia de pelo en las segundas falanges de los dedos. Aunque slo haya algo de pelo en
alguna de las diez falanges, se considera como fenotipo positivo.
10) Dedo gordo del pie corto. El dedo gordo del pie puede ser ms corto o ms largo que el
ndice adyacente.
11) Capacidad de detectar la feniltiocarbamida (PTC). Hay individuos que detectan un sabor
amargo y otras que no notan nada. Introducir primero en la boca el papel control, ensalivar, y
sacar de la boca. Introducir a continuacin el papel impregnado en PTC y ensalivar.

11

Una vez realizada la observacin, proceder de la siguiente manera:


1. Tomar los datos del fenotipo propio
2. Anotar todos los fenotipos en el lugar correspondiente de la hoja de datos.
3. Tomar los datos de tantos parientes (padres, hermanos, abuelos, tos) como sea posible.
4. Anotar los datos de cada persona en una hoja de datos diferente.
5. Confeccionar el rbol genealgico indicando el fenotipo de cada persona para, al
menos, dos de los caracteres analizados.
6. Determinar si es posible el tipo de herencia de los caracteres analizados.
7. En base al tipo de herencia, nombrar los alelos adjudicados a cada carcter en la hoja de
datos, usando una letra distinta para cada carcter, en maysculas/minsculas para
dominante/recesivo.
8. Por ltimo, indicar cuando sea posible los genotipos de todos los miembros para cada
carcter.
Como ejemplo de rbol genealgico se seguir un esquema como el que se indica a
continuacin:
I
1

II
1

III
3

En la genealoga se indica el orden de las generaciones con nmero romano. La primera


generacin (I) corresponde a la primera persona de la que se posean datos, por ejemplo la de los
abuelos del alumno; la segunda (II) correspondera a la de los padres y tos, y la tercera (III), a la
generacin del alumno.
Los varones se representan con cuadrados, las mujeres con crculos, y por rombos los
individuos de los que no se conocen los datos (II.9). Las parejas se unen por una lnea horizontal.
Los descendientes se disponen bajo una lnea horizontal desde la que parte una lnea vertical por
individuo, excepto en el caso de mellizos (III.4 y 5) o gemelos fraternos (II.4 y 5), que se indican
por lneas convergentes (ver figura). Los individuos que muestran el fenotipo en estudio se
indican rellenando el smbolo.

12

HOJA DE DATOS 1
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 2
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 3
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

recto
..... largo
13

Deteccin PTC:

. SI

. NO

_____________________________________________________________________________

14

HOJA DE DATOS 4
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 5
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 6
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

recto
..... largo
15

Deteccin PTC:

. SI

. NO

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 7
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 8
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 9
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

recto
Pigmentacin del iris .... presente

16

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Deteccin PTC:

. NO

. SI

Dedo gordo del pie

..... corto

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 10
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 11
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

recto

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
HOJA DE DATOS 12
_____________________________________________________________________________
Parentesco
_____________________________________________________________________________
Fenotipo
Lbulo de la oreja

..... separado ..... unido

Fenotipo
Dedo autoestopista

..... presente..... ausente

Pico de viuda

..... presente

.... ausente

Longitud del ndice

..... corto

..... largo

Lengua en U

..... capaz

..... incapaz

Dedo meique

..... curvado

.....

recto
17

Pigmentacin del iris .... presente

..... ausente

Hoyuelos faciales

.... presentes... ausentes

Pelo en 2 falanges .... presente

..... ausente

Dedo gordo del pie

..... corto

Deteccin PTC:

. NO

. SI

..... largo

_____________________________________________________________________________
ARBOLES GENEALOGICOS

18

PRACTICA 4
ESTUDIO DE LA HERENCIA POLIGNICA
Recuento de las lneas de las huellas dactilares
Objetivo y material
1.- Recogida de un juego completo de huellas dactilares propias.
2.- Clasificar las huellas de acuerdo a su morfologa.
3.- Determinar el recuento total de lneas (TRC) de un juego completo de huellas.
4.- Construr un histograma de la distribucin de frecuencias con los datos obtenidos del grupo de
prcticas.
5.- Discutir las caractersticas de la herencia polignica y el por qu de su difcil anlisis.

Introduccin
La herencia polignica no se puede analizar empleando pedigres ni estudiando los
cromosomas (de no ser que se estudie una aberracin cromosmica en concreto). Un rasgo
polignico es el fenotipo resultante de la accin de dos o ms genes. Estos tienen unas
caractersticas comunes:
1.- los rasgos se cuantifican midindose,
2.-los rasgos son controlados por 2 o ms genes resultando en un efecto aditivo,
3.- los rasgos son controlados por efecto de alelos mltiples,
4.- los fenotipos de los rasgos polignicos y multifactoriales varan de expresin
por efecto de los factores ambientales.
Existen numerosos ejemplos de este tipo de herencia por ejemplo la estatura, el peso, la
inteligencia, el color de la piel, etc.
Demostrar y estudiar la herencia de los rasgos polignicos no es fcil. El ejemplo que a
continuacin te proponemos estudiar explorar cmo los rasgos de la herencia de las huellas
dactilares son modelos de herencia polignicas. Recogeris las huellas dactilares vuestras y
prepararis un perfil de las mismas.
En 1890, Francis Galton sugiri que las huellas dactilares seran una buena manera de
identificacin para humanos. Durante los ltimos aos de hecho, tanto los dibujos de las huellas
dactilares (de las manos y pies) y de las huellas de las palmas de las manos y pies han sido de gran
inters para numerosos estudios especializados. Un ejemplo de su utilidad es el estudio de la
huella del recin nacido para el diagnstico precoz de anormalidades cromosmicas.
La herencia de las huellas dactilares, al igual que los dems caracteres de herencia
polignica, tambin se ve influda por factores ambientales aunque, debido a la precocidad y
rapidez del desarrollo de stas, el fenotipo no cambiar tras el nacimiento. Las huellas dactilares
se pueden detectar a partir de la 6 semana de desarrollo fetal, llegando a su mayor desarrollo
hacia la semana 12-13. Posteriormente regresarn hasta adquirir la morfologa final que ya no se
ver alterada durante el restante desarrollo prenatal y postnatal.

19

ARCOS

LAZOS

ESPIRALES

Clasificacin de las huellas


Los patrones de los dibujos de las huellas se pueden clasificas en tres grupos
principalmente: arcos, lazos y espirales. El arco es el patrn ms simple y menos frecuente. En las
huellas donde aparecen lazos, las lneas aparecen en tres direcciones, encontrndose en un punto
intermedio (el trirradio) con ngulos de unos 120 grados. En el centro del punto de encuentro se
forma un tringulo. Los lazos pueden denominarse radiales o cubitales, dependiendo de hacia
dnde estn inclinados; por ejemplo, un dedo meique presentar un lazo radial si su trirradio se
abre hacia el pulgar de su misma mano. Un lazo cubital ser aquel que del pulgar se abra hacia el
meique de la misma mano. El patrn espiral presenta dos trirradios (formndose dos tringulos).
Las frecuencias de estros tres patrones en la poblacin son de 5,0% para el arco, 5,4% para el
lazo radial, 63,5% para el lazo cubital, y 26,1% para el espiral.
Estudio de las huellas dactilares: recuento de las lneas
El objetivo de este estudio ser el estudio del total de las lneas de la huella (en ingls:
total ridge count o TRC). Holt en 1968 determin que para varones la media es de 145 y para
mujeres de 126.
Las lneas se han de contar desde el triradio al centro de la huella (ver la lnea blanca de las
imgenes de las huellas de arriba), es decir, las huellas que presentan el patrn del arco tienen un
recuento de cero (no hay triradio). En los espirales el recuento ha de efectuarse desde cada
triradio al centro de la huella. Una vez contadas todas las lneas de todas las huella por persona se
sumarn para obtener el TRC. A continuacin se examinar cmo el TRC apoya el modelo de
herencia polignica.
Caractersticas de algunos sndromes comunes:
- Trisoma 21: dedos con lazos cubitales generalmente, lazos radiales en dedos 4 y 5.
- Trisoma 18: lneas poco desarrolladas, gran frecuencia de arcos (media de 7-8 con al menos un
arco). En los pulgares sin arcos, con lazos radiales, recuentos TRC bajos.
- Sndrome de Turner (45,X): alto recuento TRC sin aumento de espirales.
Relacin entre la media de TRC y el nmero de cromosomas X e Y
45, X
46, XY
46, XX
47, XXY

165
145
126
114

47, XYY
48, XXYY
48, XYYY
49, XXXXX

103
88
83
17

20

Recogida de datos individuales


(pegar aqu la cinta adhesiva con las huellas en cada casilla)
pulgar derecho (I)

ndice derecho (II)

corazn dcho (III)

anular derecho (VI)

meique dcho(V)

pulgar izquierdo (I)

ndice izquierdo (II)

corazn izdo (III)

anular izdo (IV)

meique izdo (V)

mano derecha
patrn
obtenido:
recuento
parcial:

pulgar

ndice

corazn

anular

meique

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

recuento total = ____________


mano dcha _

mano izquierda
patrn
obtenido:
recuento
parcial:

pulgar

ndice

corazn

anular

meique

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

____________

recuento total = ____________


_
mano izda

Recuento total dos manos:

TRC= ___________

21

Recogida de datos del grupo de prcticas


estudiante
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24

sexo
V/M

TRC

% del total:
media del
TRC:
media TRC
mujeres:
media TRC
varones:

lazos*

espirales*

arcos*

______

______

______

________
________
________

(*) poner el nmero de dedos

22

Histograma de la distribucin de
frecuencias
10

n alumnos

valores del TRC

Preguntas de la prctica:
1.- Cul es la media TRC para la clase? Existen diferencias en las TRC medias
para los varones y mujeres?
2.- Cul puede ser la causa de esta diferencia? Razona tu respuesta.
3.- Compara tu TRC con la media total y con la de tu sexo.
4.- Resume y razona los resultados obtenidos en el histograma.
5.- De haber recogido datos de una poblacin mucho mayor crees que el grfico
presentara otro aspecto? Razona tu respuesta.

Respuestas:

23

PRACTICA 5
ESTUDIO DE POLIMORFISMOS
Anlisis del grupo sanguneo y de un VNTR
Objetivo y material
1.- Anlisis de un polimorfismo fenotpico: determinacin del grupo sanguneo.
2.- Anlisis de un polimorfismo silencioso de ADN tipo VNTR.
3.- Evaluar la utilidad de ambos para diversas aplicaciones mdicas y legales.
En ambos casos, el material de partida ser la sangre de los propios alumnos, y en su caso,
muestras de sangre de familiares de stos, previamente recogidas.

Introduccin
Los polimorfismos son el reflejo de la diversidad gentica de la especie. Se dice que existe
un polimorfismo en un determinado locus cuando hay ms de un alelo presente en la poblacin
con una frecuencia superior al 1%. Aunque un individuo slo puede presentar como mximo dos
alelos distintos para un locus, un estudio poblacional puede revelar la presencia de mltiples alelos
para ese locus, especialmente en ciertos loci que son altamente polimrficos.
Una pequea proporcin de los polimorfismos en el ADN dar lugar a diferencias a nivel
de los aminocidos codificados, produciendo por tanto un polimorfismo de protenas. Pero la
mayora de los polimorfismos en las secuencias de ADN ocurren en ADN no codificante, y no
tienen por tanto efecto fenotpico (se denominan silenciosos). La causa de que la mayor parte de
polimorfismos sean silenciosos es, por una parte, que la gran mayora del genoma humano
consiste en ADN no codificante; y por otra, que este ADN est sometido a menores presiones
selectivas.
El anlisis de polimorfismos en el ADN se aplica a estudios poblacionales y al estudio de la
evolucin del genoma humano. Otra aplicacin que ha cobrado gran importancia consiste en
detectar polimorfismos asociados a ciertas patologas, lo que permite en muchos casos localizar el
gen responsable, y permite tambin a veces realizar el diagnstico de la enfermedad. Por ltimo,
el estudio de polimorfismos tiene un creciente inters en el mbito de la Medicina Legal; el
anlisis gentico de la diversidad humana permite resolver ciertos problemas judiciales, utilizando
la "huella del ADN" a modo de huellas dactilares. El anlisis conjunto de varios polimorfismos
(tanto fenotpicos como silenciosos) permite identificar individuos con unos mrgenes de error
despreciables. Por otra parte, la ventaja sobre otros sistemas de identificacin, como las huellas
dactilares, es que se trata de caracteres genticos que se heredan de manera mendeliana. Esto
permite su uso en pruebas de paternidad.
En esta prctica abordaremos el estudio de polimorfismos humanos de dos maneras muy
distintas. En primer lugar se estudiar el polimorfismo del locus AB0 que determina el grupo
sanguneo. Puesto que es ste un polimorfismo fenotpico, y adems la penetrancia es del 100%,
el anlisis se har directamente sobre el producto gnico. En segundo lugar estudiaremos un
polimorfismo de ADN silencioso. Para ello amplificaremos por PCR una regin de ADN
genmico que incluye un VNTR. Finalmente analizaremos los datos obtenidos por todo el grupo.

24

Prctica 5a -Anlisis de un polimorfismo fenotpico: el grupo sanguneo AB0.


Objetivo y material
El objetivo de esta primera parte de la prctica es analizar un polimorfismo evidente
fenotpicamente, como es el de los grupos sanguneos. Se pretende dar a conocer la base gentica
de los grupos sanguneos ms importantes. Se determinarn los grupos sanguneos de cada
alumno mediante la extraccin de unas gotas de sangre por puncin del cuarto dedo de una mano
con una lanceta estril. La determinacin del grupo sanguneo se realizar mediante reacciones de
aglutinacin con anticuerpos especficos. Estos datos se analizarn respecto a los fenotipos
parentales y se emplearn en estudios posteriores.
Introduccin
La sangre de cada persona es tan caracterstica que puede servir como medio de
identificacin casi tan preciso como las huellas dactilares. Slo los gemelos idnticos poseen
caractersticas sanguneas iguales. Por otra parte, la herencia de los caracteres sanguneos est tan
bien definida que puede seguirse con facilidad. Adems, la expresin de estos caracteres, en
general, no est influda por el ambiente; por lo que puede decirse que su penetrancia es del
100%. Por todo ello, la fenotipacin de individuos en base a la determinacin de los grupos
sanguneos es particularmente conveniente en los estudios genticos en poblaciones humanas.
Tambin existen importantes implicaciones en medicina, como: la prctica de las transfusiones
sanguneas, la relativamente frecuente aparicin de enfermedades hemolticas en fetos y recin
nacidos, las aplicaciones mdico-legales y su conexin con otros genes cuya repercusin ms
inmediata puede estar en los transplantes de rganos.
Sistema AB0
El primer sistema descubierto, en 1900, fue el AB0, por ser la principal causa de la
incompatibilidad entre las sangres de distintos individuos en las transfusiones de sangre. Dicha
incompatibilidad se basa en una reaccin de carcter inmunolgico altamente especfica,
consistente en la unin qumica de antgenos extraos contenidos en los eritrocitos del donante y
las aglutininas o anticuerpos especficos presentes en el plasma sanguneo del receptor.
El grupo sanguneo AB0 lo determina un locus situado en el extremo del brazo largo del
cromosoma 9. Constituye un caso de alelismo mltiple basado en la existencia de tres alelos:
IA que da lugar a la produccin de antgenos A.
IB que da lugar a la produccin de antgenos B.
i que determina no produccin de antgenos.
Los alelos IA e IB son codominantes, y el alelo i es recesivo frente a ambos. Estas
caractersticas determinan la existencia de cuatro fenotipos. El sistema AB0 puede resumirse en el
siguiente cuadro:

Fenotipos Genotipos Antgenos en los eritrocitos Anticuerpos en


suero
A

IAIA IAi

anti-B

IBIB IBi

anti-A

ii

AB

IAIB

ninguno
Ay B

anti-A y anti-B
ninguno

Las personas que poseen en sus eritrocitos un tipo de antgeno carecen del anticuerpo
respectivo, pero este ltimo est presente en el suero de las personas que carecen de dicho
25

antgeno. Por lo tanto, en una transfusin se producir reaccin de aglutinacin antgenoanticuerpo o no segn los casos, tal como se indica en el siguiente cuadro:
Origen del suero (receptor)

AB

AB

Origen de los eritrocitos (donante)

Sistema MN
En 1927 se descubri el sistema MN, mediante experimentos con conejos. Los grupos
MN dependen de un par de alelos codominantes M y N, responsables de tres genotipos: MM,
MN y NN y sus respectivos fenotipos M, MN y N. Este sistema es de escasa importancia en la
transfusin sangunea o en la incompatibilidad materno fetal. Su significacin principal en la
gentica mdica deriva del hecho de que sus frecuencias relativas y su herencia codominante los
hacen especialmente tiles para resolver problemas de identificacin, paternidad etc.
Sistema Rhesus
Un tercer sistema de antgenos de superficie de los eritrocitos es el sistema Rhesus
descubierto por Landsteiner, Wienes y Levine en 1940. En un primer anlisis y para simplificar se
consideran dos grupos en este sistema:
- Rh+, individuos que poseen antgenos Rh.
- Rh-, indviduos que no poseen antgenos Rh.
Los anticuerpos anti-Rh no son anticuerpos naturales, no existen normalmente en la
sangre, pero aparecen en individuos Rh- que han recibido antgenos Rh como consecuencia de
una transfusin de un donante Rh+ o despus de un embarazo. La madre Rh- se sensibiliza por los
eritrocitos Rh+ del primer hijo, produciendo anticuerpos anti-Rh. El segundo embarazo de un
nio Rh+ produce un aumento masivo de anticuerpos, que pasan a travs de la placenta y
aglutinan los glbulos rojos del nio.
Este sistema revel la explicacin de una enfermedad hemoltica que se produce en el
recin nacido, la eritroblastosis fetal, adems de las reacciones de aglutinacin que ocurran en
transfusiones de sangre entre personas del mismo tipo respecto al sistema AB0.
Las bases genticas del sistema Rh son complejas, al estar constituido por un gran nmero
de antgenos eritrocitarios distintos. Este sistema est codificado por tres loci muy prximos entre
s (C, D, E y sus recesivos respectivos c, d, y e) en el brazo corto del cromosoma 1. Cada uno de
los alelos produce un antgeno y los anticuerpos correspondientes aparecen para todos menos
para el d.
El alelo D, es de un inters primordial al ser el responsable de la codificacin del antgeno
D que es muy antignico y provoca la sensibilizacin. Es por esto que para fines prcticos las
personas se consideran Rh+ si poseen el antgeno D y Rh- si carecen del antgeno D segn la
siguiente tabla:
26

Genotipo

Antgeno

Rh

DD

Dd

dd

Posteriormente se han descrito otros grupos sanguneos tales como los sistemas Kell,
Diego, Kidd, P de herencia autosmica y el Xg ligado al cromosoma X. Estos sistemas no son de
gran importancia en las reacciones de aglutinacin postransfusin pero pueden ser utilizados
como marcadores genticos tiles para la exclusin de posible paternidad, determinacin del
grado de histocompatibilidad etc.
Protocolo
Sistema AB0
La determinacin de grupos del sistema AB0 se efecta enfrentando los hemates problema
con antisueros de especificidad conocida: anti-A, anti-B y anti A,B (grupo 0). La aglutinacin o
no aglutinacin de los hemates ensayados frente a cada uno de los antisueros es indicativa de la
presencia o ausencia de los correspondientes antgenos en los mismos.
1.- Dividir un porta en cuadrados. Rotular las divisiones: anti-A, anti-B y anti-AB.
2.- Con una lanceta estril realizar una puncin en el cuarto dedo de una mano.
3.- Depositar en cada cuadrado una gota muy pequea de la sangre a ensayar.
4.- Aadir 1 gota de cada antisuero en su respectivo cuadrado.
5.- Mezclar bien la sangre con el reactivo empleando palillos distintos para cada ensayo.
6.- Mover la placa lentamente por rotacin a temperatura ambiente. Examinar
macroscpicamente la aparicin de aglutinacin a los 2 minutos.
Sistema Rh (anti-D)
La presencia del antgeno D se determina enfrentando los hemates problema, en un medio
proteico alto, con suero anti-D. La aglutinacin o no aglutinacin de los hemates ensayados es
indicativa de la presencia o ausencia del correspondiente antgeno en los mismos.
1.- Depositar una gota de suero anti-D sobre un porta rotulado.
2.- Sobre otro porta depositar una gota de Autocontrol Rh-hr CROMATEST.
3.- Aadir a cada porta 2 gotas de sangre de un tamao aproximado a la gota de suero en l
depositada.
4.- Con palillos distintos mezclar reactivo y sangre de forma que cubran una extensin de unos
2 cm cuadrados.
5.- Colocar los portas sobre la lmpara visualizadora precalentada (45).
6.- Mover la lmpara lentamente con movimientos pendulares durante 2 minutos, observando
macroscpicamente la aparicin de cualquier signo de aglutinacin .

Lectura
Reaccin negativa: ausencia de aglutinacin al cabo de los 2 minutos.
Reaccin positiva: aglutinacin visible a los dos minutos y ausencia de aglutinacin con el
autocontrol. La reaccin positiva indicar cul es el antgeno presente en los eritrocitos (por ej. si
sale aglutinacin en la casilla A el grupo sanguneo ser A).
27

Si los hemates presentasen aglutinacin en el Autocontrol, dar el resultado como no vlido.

Preguntas:
1.- Anotar los resultados obtenidos y deducir el genotipo genotipos posibles.
2.- Por qu se tiene en cuenta el grupo sanguneo de las series AB0 y Rh en las
transfusiones y no la serie MN?
3.- Por qu el antgeno D define bsicamente al grupo Rh?
4.- Por qu el anlisis de los grupos sanguneos slo sirve en algunos casos
para exclur la paternidad y no para asignarla?
5.- En qu casos la eritroblastosis fetal puede manifestarse en el primer
embarazo asumiendo incompatibilidad Rh?

Respuestas:

28

Prctica 5b - Anlisis de un polimorfismo de ADN silencioso tipo VNTR.


Objetivo y material
En esta segunda parte de la prctica analizaremos las variaciones existentes entre los
individuos a nivel de un locus genmico no codificante, es decir, un polimorfismo silencioso.
Partiendo de sangre de los propios alumnos (y de muestras recogidas previamente de parientes de
stos, en su caso), amplificaremos por PCR la regin de ADN a estudiar y compararemos los
resultados de cada individuo. De este modo se espera observar la utilidad de este tipo de
polimorfismos tanto para la identificacin de individuos como para estudiar su transmisin, bien
con fines mdicos o legales.
Introduccin
El anlisis de polimorfismos en el ADN se ha convertido en una tcnica de enorme utilidad
en Medicina, por lo que el nmero de polimorfismos silenciosos que se conocen en el genoma
humano no deja de crecer. Los polimorfismos se determinan en base a su deteccin mediante
tcnicas de biologa molecular, bien porque las variaciones en la secuencia de ADN crean o
destruyen dianas para enzimas de restriccin (los llamados RFLPs), o porque implican un cambio
en la longitud de ADN (inserciones o deleciones).
De especial inters en nuestro caso es el ADN repetitivo en tndem, como el ADN
minisatlite y microsatlite, consistente en un nmero variable de copias en tndem de una corta
secuencia de ADN (VNTR, "variable number of tandem repeats"). Los individuos nos
diferenciamos por el nmero de repeticiones que presentamos en cada locus, nmero adems que
transmitiremos a la descendencia de manera mendeliana.
El polimorfismo que analizaremos en esta prctica es el que se localiza en el locus D1S80,
en el extremo distal del cromosoma 1p. Este locus contiene un VNTR. La secuencia que se repite
en tndem tiene una longitud de 16 bp, y el nmero de repeticiones en cada alelo vara entre 14 y
41. La regin VNTR est flanqueada por secuencias de ADN muy conservadas, lo que permite
utilizar unos cebadores complementarios a dichas secuencias para realizar una reaccin de PCR
que nos amplifique dicha regin. El tamao de la regin amplificada depender del nmero de
repeticiones, de modo que cada alelo podr distinguirse por su tamao. Esto se observar
sometiendo el producto amplificado por PCR a una electroforesis en gel de agarosa y tiendo el
ADN con bromuro de etidio.
Se han encontrado hasta la fecha 29 alelos distintos en este locus, lo que permite un poder
de discriminacin de entre 0.95 y 0.98. Se trata pues de un polimorfismo que se incluye
habitualmente en los anlisis con fines forenses. Sin embargo, para distinguir todos los alelos (que
se pueden diferenciar unos de otros en tan solo 16 bp de longitud) se requieren tcnicas
sofisticadas de electroforesis. En la presente prctica realizaremos una electroforesis de menor
resolucin, lo que no nos permitir distinguir todos los alelos con exactitud, pero s observar la
aparicin de los dos alelos de cada individuo y la diversidad existente en la poblacin.
El anlisis se realizar sobre el ADN de los propios alumnos. El ADN ser obtenido de una
mnima cantidad de sangre, para mostrar cmo pueden obtenerse muestras analizables a partir de
restos como una mancha de sangre en la escena de un crimen. A partir de esa muestra, se seguir
un sencillo protocolo que bsicamente rompe las clulas y utiliza una resina que elimina todo lo
que pudiera interferir con la amplificacin posterior del ADN, que permanece en el sobrenadante.
A continuacin, ese sobrenadante con el ADN se aade a una mezcla de reaccin con los
elementos necesarios para amplificar por PCR la regin genmica que queremos estudiar. Esto
pondr de manifiesto la enorme fuerza de la tcnica, que permite obtener cantidades de ADN
visibles en una electroforesis partiendo de pocos nanogramos de ADN total.
Al final de la prctica se analizarn los resultados conjuntos y se discutirn sus
aplicaciones.
Protocolo
29

Puesto que la tcnica de PCR es muy sensible a la contaminacin con cualquier otro ADN,
durante todo el proceso tendremos especial cuidado en tocar todo con pinzas o guantes y no
poner en contacto muestras distintas.
Da 1
a) obtencin del ADN genmico total
1. - Utilizando un punzn estril, pinchar el dedo anular hasta que sangre. Con una pipeta,
recoger cuidadosamente la sangre; con 5 l es suficiente, si sale ms, mejor. Pasarla a un tubo
eppendorf.
2. - Aadir 1 ml de agua destilada. Mezclar bien, invirtiendo el tubo varias veces.
3. Centrifugar 1 minuto en la microcentrfuga. Recoger el sobrenadante con una pipeta y
desechar. ATENCION: el precipitado apenas ser visible. Hay que recoger con una pipeta de 1 ml
aproximadamente 960 l del sobrenadante, sin tocar ni remover el fondo del tubo.
4. Aadir 100 l de resina InstaGene. La resina estar en agitacin constante y
cogeremos el volumen indicado utilizando una punta de boca ancha (azul). Mezclar.
5. Incubar a 56C 15 minutos.
6. Agitar el tubo en vortex a mxima potencia durante 10 segundos.
7. Incubar en bao hirviendo durante 8 minutos.
8. - Repetir la agitacin en vortex otros 10 segundos.
9. Centrifugar 2 minutos.
10.- Recoger 20 l del sobrenandate con cuidado de no coger la resina, que queda al
fondo del tubo. Los pasaremos a otro tubo eppendorf de 0.2 ml en hielo que contiene 30 l de la
mezcla de PCR.
b) amplificacin de la regin de ADN que contiene el polimorfismo
1. - Tendremos en un tubo en hielo: 20 l del sobrenadante con el ADN, y 30 l de
mezcla de PCR. La mezcla de PCR contiene todo lo necesario para la amplificacin de la regin
concreta del genoma que queremos estudiar, excepto el enzima:
- cebadores especficos que se unirn a ambos lados de la regin VNTR.
- tampn, magnesio y sal adecuados para que funcione la polimerasa.
- deoxinucletidos (dATP, dCTP, dGTP y dTTP), precursores del ADN de nueva sntesis.
2. - Aadir al tubo 0,5 l de la termopolimerasa, el enzima que llevar a cabo la sntesis del
ADN a partir de los cebadores y tomando como molde el ADN del alumno.
3. - Meter la muestra en el termociclador debidamente programado para realizar 29 ciclos
de desnaturalizacin del ADN (95C), renaturalizacin para que se unan los cebadores (65C), y
polimerizacin del nuevo ADN (72C).
Da 2
1. - Recoger los tubos con las muestras amplificadas.
2. - Preparar un gel de agarosa al 1.5% en tampn TBE con bromuro de etidio. NOTA: el
bromuro de etidio es un potente mutgeno. Manipular en todo momento con guantes.
3. - cargar en el gel 15-25 l de la muestra con 3-5 l de tampn de carga. Inclur en otros
pocillos del mismo gel los controles de tamao adecuados.
4. - Realizar la electroforesis a 120V durante 90 minutos.
5. - Llevar el gel al transiluminador y obtener la imagen de los fragmentos de ADN.
6. - Analizar los datos obtenidos por todo el grupo.

Preguntas:
30

1. Analiza la imagen obtenida tras la electroforesis. Qu refleja el distinto


tamao de las bandas de ADN que se observan en cada muestra?
2. Por qu se ven dos bandas? Si hay alguna muestra donde slo se vea una,
explcalo.
3. En base a las diferencias observadas, comentar la utilidad de este
polimorfismo para la identificacin de individuos, y sus aplicaciones mdicas y
legales.

Respuestas:

31

PRACTICA 6
GENTICA DE POBLACIONES
Aplicacin de la ley de Hardy-Weinberg en la gentica de los
grupos sanguneos (alelos mltiples)
Objetivo y material
1.- Calcular las frecuencias de los fenotipos de grupos sanguneos obtenidos en la prctica.
2.- Calcular las frecuencias allicas y genotpicas basndose en la ley de Hardy-Weinberg.
3.- Determinar si la poblacin est o no en equilibrio, y por qu.
El material utilizado sern los resultados obtenidos en la prctica 5(a).

Introduccin
G.H. Hardy y W. Weinberg definieron los principios bsicos de la herencia polignica y
demostraron que en poblaciones en equilibrio las frecuencias (p y q) de los diferentes alelos de
un gen (A y a respectivamente) permanecen constantes generacin tras generacin, siempre y
cuando no se produzcan fenmenos de mutacin, seleccin, deriva gentica, migracin o deriva
meitica. En el caso de dos alelos (A y a) si p es igual a la frecuencia del alelo A, y q la frecuencia
del alelo a; entonces:

p+q=1
(o lo que es lo mismo en porcentajes: el % p + el % q = 100%)
En poblaciones donde la fecundacin ocurre de forma aleatoria, las frecuencias para los
distintos genotipos sern:

(vulo) p (A)
(vulo) q (a)

(espermatozoide)
p (A)
p2 (AA)
qp (aA)

(espermatozoide)
q (a)
pq (Aa)
q2 (aa)

Es decir, que la distribucin de los genotipos de la generacin ser:

p2 + q2 + 2pq = 1
Esta frmula tambin se puede usar para calcular las frecuencias de los alelos A o a en la
poblacin. En el caso de los grupos sanguneos AB0 existen 3 alelos del locus de la isoaglutinina
(I). En este sistema A y B son codominantes, y ambos son dominantes respectos a 0. Este sistema
tiene seis combinaciones genotpicas posibles: AA, A0, BB, B0, AB, 00.
Los individuos homocigticos AA y heterocigticos A0 son fenotpicamente iguales, lo
mismo que los individuos BB y B0. Esto dar lugar a 4 combinaciones fenotpicas conocidas
32

como A, B, AB y 0. La Ley de Hardy-Weinberg tambin se puede emplear en este caso para los
tres alelos:
p (A) + q (B) + r (0) = 1
y las combinaciones genotpicas pueden calcularse por la siguiente ecuacin:
p2 (AA) + q2 (BB) + 2pq (AB) + 2qr (B0) + 2pr (A0) + r2 (00) = 1
La ley de Hardy-Weinberg se cumplir slo en poblaciones que se encuentren en
equilibrio. Uno de los requisitos para que esto ocurra es que el tamao de la poblacin sea
suficientemente grande. Nosotros vamos a considerar al grupo de prcticas como una poblacin,
y partiendo de los datos fenotpicos que hemos recogido para el grupo sanguneo AB0,
calcularemos las frecuencias allicas suponiendo equilibrio Hardy-Weinberg. Sin embargo, lo ms
probable es que el grupo de prcticas no represente una poblacin en equilibrio, dado su limitado
tamao. Tras calcular las frecuencias allicas, estimaremos las frecuencias genotpicas y
fenotpicas esperadas y cotejaremos esos datos con los obtenidos. Si no concuerdan, se puede
deducir que la poblacin grupo de prcticas no est en equilibrio Hardy-Weinberg. Se
comparar esta situacin con otros datos provenientes de poblaciones de mayor tamao que s
estn en equilibrio.

Recogida de datos del grupo de prcticas (fenotipos sanguneos)


fenotipo
sanguneo

antgenos
Anticuerpos
presentes en presentados
eritrocitos
en la sangre

genotipos
posibles

n de
estudiantes del
tipo

% del total del


grupo prcticas

frecuencia fenotpica
que representa

A
B
AB
O

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Preguntas de la prctica:

1.- Calcular las frecuencias de los alelos A (p), B (q) y 0 (r) empleando la
Ley de Hardy-Weinberg.
2.- Calcular las frecuencias genotpicas y fenotpicas esperadas, y
compararlas con los datos obtenidos.
3.- Discutir si la poblacin est o no en equilibrio H-W, y por qu.

Respuestas:

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