ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA AGROPECUARIA DE MANAB

MANUEL FLIX LPEZ

CARRERA DE MEDIO AMBIENTE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL

NOMBRE: Sarahy Fernanda Huiza Menndez
FECHA: 01/ SEP/ 2013

PARALELO: 3ero B
LABORATORIO No: ....1.......

MEDIOS DE CULTIVO
1. INTRODUCCIN.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms
de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. Se licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidifica pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

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Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo,
la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de
otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en
pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento
de la mayora de las bacterias Gram-positivas).
Tipos bsicos de medios de cultivo
Atendiendo a su estado fsico:
Lquidos, Semislidos y Slidos
Atendiendo a su utilidad prctica:
Medios para aislamientos primarios:
Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos
difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre,
suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento
de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que
inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el
crecimiento de otras. Variando las sustancias aadidas, se vara el tipo y grado de
selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina)
Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal
potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K).
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen
requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin
(Lowenstein).
Medios para identificacin:
Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades
fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias.
Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier
bacteria (Oxidacin-Fermentacin)

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PREPARACIN Y CONTROL
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de
los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos
se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.
Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que
suministren productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y
fisicoqumica adecuada
. Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o
desmineralizada.
Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se
deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.

2.

OBJETIVOS:

Conocer los medios de cultivos.

Reconocer cada uno de los agares que se utilizan en medios de
cultivos.

Aplicar las tcnicas para la preparacin de los medios de cultivo.

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3.

MATERIALES DE LA PRCTICA

Agar

Caldo nutriente

Probeta volumtrica

Fiola

Pipeta volumtrica

Pera succionadora

Vaso de precipitacin

Plancha de calentar

Esptula

Bala magntica

Caja petry

Gotero

NA OH

Gorro de ciruga

Guantes de ciruga

Cmara fotogrfica

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4.

METODOLOGA

PROCESO DE ESTERILIZACIN
Esterilizacin es la destruccin o eliminacin de todas las formas de microorganismos
patgenos.
Proceso de Esterilizacin Almacenamiento Pre-lavado y Distribucin CALIDAD de
lavado y descontaminacin.
Lavado con jabn lquido y abundante agua.
Enjuague con agua destilada.
Secar a la estufa a 30 40 C durante 30 minutos.
Empacar cada caja con papel aluminio o papel peridico blanco y con cinta de papel.
Llevar todo el material al autoclave.
Encender la autoclave con mucho cuidado y verificar que suba la temperatura y presin
esterilizar a (1210C) durante 15-20 minutos.
Dejar en tibiar para colocar en las placas el agar .
No cerrar las cajas hasta que enfri un poco y no se empae o gane gotas de vapor en la
tapa de la placa.
Tapar correctamente las placas
Llevar a la cmara y sembrar las muestras correspondientes.
MTODO AGAR TCBS
TCBS Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio
parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos
contaminados. Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o
como Agar Selectivo para Vibrios.
Suspender 12 g del polvo en un 125 ml de agua destilada. (86-43-22-12)

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Se lleva la preparacin a aforo con agua destilada

Calentar hasta ebullicin y hervir de 1 a 2 minutos, nicamente se agita la mezcla hasta
la completa disolucin de la misma.
Se mide pH 8,6.
EI agar TCBS es verde cuando se prepara. EI crecimiento de un da para otro (18 a 24
horas) de V. cholerae producir colonias grandes (2 a 4 mm de dimetro), ligeramente
aplanadas, amarillas, can el centro opaco y la periferia translucida (Figura IV-I). EI
color amarillo se debe a la fermentaci6n de la sacarosa en el media. Los
microorganismos que no fermentan la sacarosa, como es el caso de V. pamhaemolyticus,
producen colonias de color verde a azul verde. Las colonias sospechosas que se
sometern a pruebas ulteriores deben resembrarse en un medio no inhibitorio, como
agar gelatina, agar infusi6n de coraz6n (RIA) agar hierro de Kligler (KIA) o agar hierro
con tres azucares (TSI).
NO AUTOCLAVAR.
Distribuir en placas de Petri estriles, sin provocar burbujas en la placa
Medio preparado: verde azulado.
Durante 18-24 horas a 35-37C.

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5.

GLOSARIO.

Microorganismos.- Los microorganismos son aquellos seres vivos ms diminutos que

nicamente
pueden
ser
apreciados
a
travs
de
un
microscopio
Bacterias.- eres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los protistos
inferiores.
Agar.- Agar o agar-agar es una gelatina vegetal de origen marino.
PH.-, Es un indicador de acidez de una sustancia. Determinador por el numero iones de
hidrogeno en una sustancia. Cuanto ms se aleje el pH por encima o por debajo de 7,
ms bsica o cida ser la solucin, esto es un pH igual a 7 es neutro, menor que 7 es
cido y mayor que 7 es base.
UTENSILIOS: Herramienta o instrumento de un oficio o arte
TCBS Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae
Esterilizacin.- eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se
lleva a cabo generalmente por medios fsicos.
Caja Petri.- Es un recipiente de cristal o de plstico , que consta de una base circular, y
las paredes son de una altura baja aproximadamente de (1 cm) ; y una cubierta de la
misma forma pero algo ms grande de dimetro para que encaje como una tapa.

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6.

BIBLIOGRAFA

http://www.definicionabc.com/salud/microorganismos.php#ixzz2dVNBQUHu

http://es.wikipedia.org/wiki/Agar-agar

http://www.wordreference.com/definicion/utensilio

http://www.buenastareas.com/ensayos/Definicion-De-Potencial-DeHidrogeno/1420303.html

http://www.slideshare.net/leo-canis-lupus/mtodos-de-cultivo

http://clubensayos.com/Ciencia/Preparacion-De-Medios-De-Cultivo/18008.html

http://www.cdc.gov/cholera/pdf/es/Aislamiento-de-Vibrio-cholerae-a-partir-demuestras-fecales_cap%C3%ADtulo-4.pdf

http://www.monografias.com/trabajos/bacterias/bacterias.shtml

http://laboratorio-quimico.blogspot.com/2009/04/caja-petri.html

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7.

ANEXOS

Agar utilizado.

Gramos de agar utilizados

Agar disuelto en agua

destilada

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Estufa

Agar ya preparado
invertido en las cajas
petri

Medicin exacta
del PH.