PR CCI Bacteriología

PROCEDIMIENTO CONTROL
DE CALIDAD INTERNO
ANALITOS CUALITATIVOS
DEL AREA DE
BACTERIOLOGIA
Subdepto Microbiologa Clnica
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COPIA NO CONTROLADA.
1. OBJETIVO
Verificar el requisito de la calidad especificado, detectar y eliminar los errores para asegurar los
mtodos y procedimientos cualitativos del rea de bacteriologa.
2. ALCANCE/CAMPO DE APLICACIN
Este procedimiento se aplica en el proceso analtico a todos los anlisis bacteriolgicos que estn
sujetos a control de calidad.
3. FUNDAMENTO
No aplica.
4. REFERENCIA
4.1 Manual Control de Calidad, captulo Bacteriologa, Instituto de Salud Pblica, 1998. Autores:
Profesionales Seccin Bacteriologa, ISP.
4.2 CLSI M2 A9 Vol. 26 N1, January 2006: Performance Standard for Antimicrobial Disk
Susceptibility Test; Approved standard Ninth Edition.
4.3 Tablas Clinical and Laboratory Standard Institute, CLSI (vigentes del ao).
4.4 Varios autores. Quality Control and Quality Assurance Practices in Clinical Microbiology.
CUMITECH 3A (Mayo 1990) ASM, Washington, DC.
Elaborado por
Revisado por
Aprobado por
TM. Mara Soledad Prat.

Profesional Seccin Bacteriologa
TM. Marcelo Yez Vera
Profesional Seccin Inmunodiagnstico
TM Pedro Alarcn
Encargado Calidad
Seccin Bacteriologa
TM Aurora Maldonado
Jefe
Seccin Bacteriologa.
ESTE DOCUMENTO AL SER IMPRESO O ESTAR UBICADO FUERA DE LA INTRANET DEL INSTITUTO
DE SALUD PUBLICA SE CONSIDERA UNA COPIA NO CONTROLADA
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4. TERMINOLOGIA
Halo: zona de inhibicin de desarrollo bacteriano, visible a ojo desnudo.

Cepa: cultivo puro obtenido a partir de una colonia.
BLEE: Beta Lactamasas de Espectro Extendido.
Inoculacin: siembra de la cepa bacteriana en un agar determinado.
ATCC: American Type Culture Collection.
CLSI (NCCLS): Clinical and Laboratory Standard Institute.
Cut-off: lmite de corte del mtodo correspondiente.
5. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

6.1. MATERIALES
Mechero Bunsen.
Trulas estriles de madera con algodn hidrfilo.
6.2. REACTIVOS
Medios de cultivos enriquecidos, selectivos, diferenciales.
Sensidiscos.
Cepas ATCC.
Cepas de coleccin.
Paneles de susceptibilidad.
Reactivos de rutina para pruebas diferenciales.
Reactivos de tincin.
Estndar de turbidez.
Antisueros
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6.3. EQUIPOS
Estufa de Cultivo a 35C.
Congelador -20C.
Congelador -70C
pH metro.
Turbidmetro
Refrigerador
7. DESARROLLO
7.1. Control de tinciones
7.1.1. El control de tinciones permite evaluar la calidad de los reactivos, al operador y la calidad
del microscopio mediante el uso de cepas controles de afinidad tintorial, morfologa y
disposicin conocida.
7.1.2. Las tinciones ms frecuentes usadas en bacteriologa clnica son: Gram, Zielh-Nielsen y
tincin de flagelos.
7.1.3. Para el control:
7.1.3.1.Gram: requiere el uso de una cepa ATCC Gram positiva y una Gram negativa. Se hace
cada vez que se preparan los colorantes. La preparacin de colorantes es establecida por
cada laboratorio.
7.1.3.2.Zielh-Nielsen: se controla con cepa ATCC acido alcohol resistente positiva y negativa y
cada vez que se preparan nuevos colorantes. Este punto es especfico para los laboratorios
que realizan la deteccin de Mycobacterium tuberculosis.
7.1.3.3.Tincin de flagelos: se usa cepas ATCC de control. Se controla cada vez que se realiza la
tincin. La tincin est establecida en cada laboratorio.
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7.2. Control de medios de cultivo

7.2.1. Los medios de cultivo comerciales no requieren pruebas de control de calidad adicional,
puesto que su calidad ya ha sido certificada por el fabricante. Sin embargo cada vez que
se abre una nueva serie es importante verificar sus caractersticas usando cepas control
especificas dependiendo del tipo de medio.
7.2.2. En los medios de cultivos se debe controlar:
7.2.2.1. La condicin de si es nutritivo,
7.2.2.2. Si es selectivo, o
7.2.2.3. Si es diferencial en cada serie. Para estos tres puntos ver anexo 5.
7.2.3. Medir el pH de cada lote preparado cada vez. Se realiza con papel pH o pH-metro. Rango
aceptable 7.2 7.4.
7.2.4. Control de esterilidad de cada lote. Cada vez que se prepara el medio de cultivo, incubar
el 100% de estos a 35C por 24 horas. Leer y volver a incubar, en estufa de cultivo, entre
un 5% y un 10% de estos mismos medios a 35C por 24 horas ms.
7.2.5. Los medios de cultivo preparados manualmente requieren control de calidad cada vez que
se preparen. Este control permite demostrar que:
7.2.5.1. El medio es estril antes de su inoculacin.
7.2.5.2. Se desarrollan o inhiben los microorganismos que deben desarrollarse o inhibirse.
7.2.5.3. Cumplen con criterios fsicos y qumicos de aceptacin dados por NCCLS (M22-T).
7.3. Control de reactivos y pruebas de identificacin
7.3.1. El control de reactivos permite evaluar la calidad de estos, la calidad en el procesamiento
de la tcnica, as como la interpretacin de los resultados, mediante controles de
comportamiento conocido y estandarizado.
7.3.1.1. Control de kits reactivos para pruebas de identificacin rpida: ej. Ltex.
7.3.1.2. Control de reactivos para pruebas de identificacin convencional. Algunos de los
reactivos sometidos a control son: Coagulasa, Catalasa, Indol, Optoquina, Bacitracina,
Novobiocina, Oxidasa, Cefinasa, PYR, LAP, Factores de Haemophilus e Hipurato,
BGLUR, Rojo Metilo, Voges Proskauer, Ureasa, nitratasa, etc.
7.3.1.3. Control de pruebas de identificacin automatizadas (equipos automatizados).
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7.3.1.3.1
El control de pruebas de identificacin demuestra que los microorganismos (gnero,

especie y subespecie) son reconocidos en forma correcta por los sistemas
automatizados de identificacin.
7.3.1.3.2
Debe utilizarse cepas ATCC de referencia para los controles peridicos, que pueden
ser semanales, quincenales o mensuales, dependiendo del uso que se le de al equipo
automatizado.
7.3.1.3.3
Deben estar todos los equipos bajo control: equipos para orinas, Hemocultivos,
Lquido Cefalorraqudeo, etc.
7.4. Control de pruebas de susceptibilidad automatizadas y no automatizadas

7.4.1. El control de pruebas de susceptibilidad permite demostrar que los microorganismos
(gnero y especie) son resistentes o susceptibles a distintos antibiticos dentro del
intervalo esperado. Realizar control de:
7.4.1.1. Medio de cultivo.
7.4.1.2. pH del medio.
7.4.1.3. Altura de las placas de agar.
7.4.1.4. Antimicrobianos (sensidiscos o drogas o paneles antimicrobianos). Segn Tabla N 3 de
control de calidad de la CLSI, vigente del ao.
7.4.1.5. Nmero de sensidiscos por placa.
7.4.1.6. Humedad.
7.4.1.7. Temperatura de incubacin.
7.4.1.8. Se requiere contar con los siguientes estndares:
Cepas ATCC.
Estndar Mac Farland.
Tablas CLSI vigentes.
7.4.1.9. Los controles de calidad internos deben realizarse en forma peridica semanal o
quincenalmente dependiendo si se est dentro de los rangos de acuerdo a las tablas CLSI,
con cada una de las cepas de control ATCC y para cada uno de los antibiticos utilizados
en la rutina.
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7.4.1.10. Las pruebas de susceptibilidad se separan en:
Susceptibilidad por Difusin en placas de agar. Ver IT-211.00-004
Susceptibilidad por Dilucin donde se determina la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM):

la dilucin del antimicrobiano puede ser en caldo o en agar. Seguir instrucciones del
fabricante.
Mtodo de Epsilometra: mtodo de difusin con concentracin de antimicrobianos en

gradientes que permite determinar CIM. Seguir instrucciones del fabricante.
7.5. Control de tcnicas serolgicas

7.5.1. Este control permite demostrar que las detecciones de anticuerpos o antgenos bacterianos
cumplen con los requisitos esperados.
7.5.2. Aplicar los siguientes mtodos serolgicos:
7.5.2.1. Determinar niveles de anticuerpos en el suero del paciente y que puede ser para la
deteccin de distintos microorganismos. Este control se realiza con material aportado por
el kit y corresponden a controles (+) altos y bajos, controles (-), calibradores y cercanos al
cut-off. Seguir instrucciones del mtodo respectivo segn fabricante.
7.5.2.2. Se debe incluir el control cada vez que se realiza la tcnica.
7.5.2.3. Detectar antgenos bacterianos somticos, capsulares o flagelares, mediante antisueros
comerciales absorbidos. IT 211.00-005
7.6. Medidas tomadas cuando el proceso est fuera de control (deteccin de No
Conformidades)
7.6.1. Para cada control de calidad se han definido las conductas a seguir frente a los valores
fuera de control (ver Instructivos correspondientes citados por cada laboratorio).
7.6.2. Utilizar lista de verificacin: que puede incluir revisin de cepas control, vigencia de
medios de cultivos, vigencia de reactivos, contaminacin, pH, indicadores, etc.
7.6.3. Dejar registro de No Conformidades.
7.6.4. Determinar medidas correctivas y preventivas
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8. REGISTROS
Identificacin del
Almacenamiento
Proteccin
registro
Registro de control Seccin
Acceso
de Tinciones.
Bacteriologa.
restringido,
slo personal
autorizado.
Acceso
de
Reactivos Bacteriologa.
restringido
(incluye antisueros)
Acceso
de
Medios
de Bacteriologa.
restringido
cultivo.
Encargado
Seccin
Bacteriologa
Encargado
Seccin
Bacteriologa
5 aos y se guarda en
bodega para archivos

de Sensibilidad por Bacteriologa.
Discos .
Encargado
Seccin
Bacteriologa
9.
Encargado
Seccin
Bacteriologa.
Tiempo de retencin
y disposicin.
bodega para archivos.
TABLA DE MODIFICACIONES
Revisin N
10.
Acceso
restringido
Recuperacin
Pg.
Modificada
Motivo del cambio
Fecha Aprobacin
ANEXOS
ANEXO 1. Formulario control de calidad medios de cultivo.

ANEXO 2. Formulario control de calidad de reactivos.
ANEXO 3. Formulario control de calidad Antimicrobianos.
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ANEXO 4. Formulario control de calidad agar Meller Hinton.

ANEXO 5. Formulario Pauta control de calidad interno de medios de cultivo. Manual Control de
Calidad, captulo Bacteriologa, ISP 1998. Autores: Profesionales Seccin Bacteriologa, ISP
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ANEXO N 1
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REGISTRO
CONTROL DE CALIDAD
MEDIOS DE CULTIVO
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FOLIO:
SECCION
BACTERIOLOGIA
Nombre del Medio de Cultivo:

Cepa 1:
Cepa 4:
Cepa 2:
Cepa 5:
Cepa 3:
Fecha
Lote
Fecha
Control Fabricac. Vencimien.
pH
Test
Control de
Esterilida
d
1 2 3 4 5 24
hrs
100
%
48
hrs
Observacione
s
Ledo
por
Si: aprueba
No: rechaza
5-10%
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ANEXO N 2
REGISTRO
CONTROL DE CALIDAD
REACTIVOS
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FOLIO:
SECCION
BACTERIOLOGIA
Nombre del Reactivo: ..

Periodicidad del control:
Cepa control positiva:.
Cepa control negativa: .
Fecha
control
Fecha
de Fecha
preparacin expiracin
Resultado
Resultado
Cepa +
Cepa -
Observacione
s
Ledo
por
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ANEXO N 3
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REGISTRO
CONTROL DE CALIDAD
ANTIMICROBIANOS
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FOLIO:
SECCION
BACTERIOLOGIA
Cepa Control: .
Periodicidad del control: ..
Mtodo: Difusin..
Fecha Lote Ledo
control agar por
CIM.
E-Test
Nombre de antimicrobianos usados

Antim. lote
Halo
Antim. Lote
Halo.
Antim. Lote Halo.
Observaciones:
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Fecha control
Antimicrobiano
No conformidad
Nota: se debe contar con un formulario por cada una de las cepas ATCC de control y por
mtodo.
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ANEXO N 4
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REGISTRO
CONTROL DE CALIDAD
AGAR MELLER HINTON
Lote
Altura
placas mm
Fecha revisin:
FOLIO:
SECCION
BACTERIOLOGIA
Fecha
Control
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pH
Esterilidad
24 hrs.
Observacin
48 hrs.
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ANEXO N 5
PAUTA CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVOS
MANUAL CONTROL DE CALIDAD- ISP AO 1998
Cada partida de medio de cultivo preparado y/o de fuente comercial, debe ser controlado en el
laboratorio del usuario, para lo cual es necesario realizar:
Control de Esterilidad: Incubar 48 horas a 35 C y luego 48 horas a temperatura ambiente.
Seleccionar al azar, entre un 5 a un 10 % de las unidades preparadas. Escoger tubos del centro
del material esterilizado.
Control de Propiedades de los Medios de Cultivo: Las cepas controles a usar, dependen de
las caractersticas de los medios a controlar, los cuales pueden ser :
- Medios Nutritivos: se observa la capacidad de desarrollo de los microorganismos.
- Medios Selectivos: estimula el desarrollo de un grupo de bacterias, inhibiendo otras.
- Medios Diferenciales: se observa la respuesta a caractersticas bioqumicas.
Control de pH: de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
Control de Fecha de Expiracin: en general los medios de cultivo conservados en
refrigeracin duran 14 das, pudiendo mantenerse por perodos de hasta 2 meses en bolsas
selladas.
Gua para el Control de Calidad de Medios de Cultivo

A.-
Cepas Control:
1.- Seleccin de cepas control: se recomienda el uso de cepas ATCC, y es aceptable usar otras
cepas de la misma especie con similares caractersticas.
2.- Mantencin de cultivos stock:
- Cepa ATCC o similar debe ser propagada y alicuotada.
- Mantener congelada y/o liofilizada.
- Realizar el primer traspaso a medio slido para obtener semilla.
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- Suspender en leche al 20% ( 0.5 a 1.0 ml )

- Congelar a - 50 C , duracin 1 ao.
- Congelar a - 70 C , duracin indefinida.
- Cultivo liofilizado, duracin indefinida.
- Controlar viabilidad por lo menos una vez al ao.
3.- Propagacin de Cultivos Stock para su uso :
- Se recomienda realizar no ms de 4 sub-cultivos.
- Para trabajar viales congelados se colocan en agua tibia y se cultiva en medio apropiado .
- No recongelar
- Sembrar en tendidos y placas las que servirn como cultivo primario. Estos pueden ser
mantenidos por un perodo no superior a 4 semanas.
4.- Preparacin del inculo :el inculo vara dependiendo de la capacidad nutritiva o inhibitoria
del medio a probar y s las bacterias son ms o menos exigentes en sus requerimientos.
-Bacterias no Fastidiosas : se utiliza un caldo soya tripticasa con 4 a 5 horas de incubacin en
fase de crecimiento exponencial. Dejar a una concentracin equivalente 0.5 Mac Farland.
- Bacterias Fastidiosas : se utiliza un cultivo de 18 a 24 horas de incubacin en medio slido
apropiado. Se realiza una suspensin equivalente a 0.5 Mac Farland.
-Capacidad Nutritiva : el inculo standarizado 0.5 Mac Farland ( 107 a 108 UFC / ml ), se
diluye 1/100 con solucin salina 0.9 % . Se inocula las placas con 10 ul., lo que da una
concentracin final de 103 a 104 UFC / placa .
-Capacidad Inhibitoria : se utiliza una dilucin de 1/10 de la suspensin 0.5 Mac Farland de la
cual se inoculan 10 ul. obtenindose una concentracin de 104 a 10 5 UFC / placa.
-Medios en tubo : se inocula 10 ul de la suspensin 0.5 Mac Farland 105 a 106 UFC / tubo.
-Medios en profundidad : medios como TSI , LIA , MIO , OF se recomienda usar asa en punta
directo del cultivo original.
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B.-
Tablas de Referencia :
1.- Medios slidos :

1.1.-
Nutritivos :
Medio
Cepa control
Resultado
esperado
-Streptococcus grupo -Desarrollo
Agar Sangre
A*
-Desarrollo
-Streptococcus
pneumoniae*
-Haemophilus
Agar Chocolate
-Desarrollo
influenzae
-Desarrollo
-Neisseria
-Desarrollo
gonorrhoeae
-Streptococcus
pneumoniae
-Escherichia coli
Agar nutritivo:
-Desarrollo
-Staphylococcus
TSA;
-Desarrollo
Tfica;Conservacin aureus
-Desarrollo
Streptococcus -Desarrollo
de
Cepas;Mueller pneumoniae*
Hinton;Luria;
Cerebro
corazn; - Candida albicans *
Brucella
Incubacin
Aerobiosis
18-24 hrs.
35C
5-10% CO2
24 hrs.
35 C
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
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1.2 Diferenciales -selectivos :

Medio
Cepa control
Agar
Conkey
Agar S-S
Mac -Escherichia coli *

-Salmonella
Typhimurium
-Enterococcus
faecalis
-Salmonella
Typhimurium
-Shigella flexneri
-Escherichia coli *
Agar XLD
-Salmonella
Typhimurium
-Shigella flexneri
-Escherichia coli *
Agar Bismuto -Salmonella Typhi

-Salmonella
Sulfito
Typhimurium
-Escherichia coli *
Resultado esperado
Incubaci
n
-Colonias rojas (Lac+)

-Colonias
incoloras
(Lac-)
-Escaso
o
nulo
desarrollo
-Col. incolora centro
negro
(Lac-,H2S +)
-Col. incolora (Lac,H2S -)
-Col.
roja
(Lac+)
escaso desarrollo
-Colonias rojas centro
negro
(Xil-,Sac-,Lac-,H2S+)
-Colonia roja
(Xil-,Sac-,Lac-, H2S-)
-Colonia
amarilla
(Lac+, H2S-)
-Colonia negra con
halo caf
-Colonia negra brillo
metlico
-Colonia verde
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
Aerobiosis
48 hrs.
35C
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Agar T C B S
Agar
telurito
-Vibrio cholerae
-Vibrio
parahaemolyticus
-Escherichia coli
sangre -Corynebacterium
dyphtheriae
-Escherichia coli
Agar
Mac -Enterococcus
Conkey
- faecalis
-Escherichia coli
Sorbitol
-Proteus mirabilis
Agar
Manitol -Staphylococcus
aureus
Sal
-Staphylococcus
epidermidis
-Escherichia coli
* Cepa ATCC
-Colonia
amarilla
(Sacarosa +)
-Colonia
verde
(Sacarosa -)
-Sin desarrollo
-Desarrollo colonias
negras
-Sin desarrollo
-Sin desarrollo
-Col.roja (Sorbitol +)
-Incoloro (Sorbitol -)
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
Aerobiosis
18-24 hrs
35 C
-Col. amarilla (Manita Aerobiosis

+)
72 hrs.
-Col.roja (Manita -)
35C
-Sin desarrollo
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1.3.- Medios Selectivos :

Medio
Agar
Martin
Cepa Control
Thayer -Neisseria
gonorrhoeae
-Staphylococcus
aureus
-Escherichia coli
Medio Selectivo -Campylobacter
yeyuni
para
-Staphylococcus
Campylobacter
epidermidis
-Escherichia coli
Medio Selectivo -Bordetella
pertussis
para Bordetella
-Staphylococcus
aureus
Medio Selectivo -Legionella
pneumophila
para Legionella
-Staphylococcus
BCYE
aureus
-Escherichia coli
Medio Selectivo -Mycoplasma
para Mycoplasma pneumoniae
pneumoniae
SP4
Resultado
Esperado
-Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Sin
Desarrollo
-Desarrollo
Incubacin
5-10 % CO2
24-48 hrs
35 C
Microaerofilia 5-10 %
CO2
10% H2 y 80% N
48 hrs.
35 C
Aerobiosis
;Cmara
hmeda
7 das
35 C
CO2 5-10 % ;Cmara
hmeda
7-14 das
35 C
Aerobiosis
Microaerofilia
Hasta 30 das
35 C
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Medio
difsico -Mycoplasma
pneumoniae
para
Mycoplasma
pneumoniae
Medio Selectivo
para
Mycoplasma
hominis
Ureaplasma
urealyticum
A7
-Mycoplasma
hominis
-Ureaplasma
urealyticum
Cambio
de
pH
+:
verde
manzana
- : verde
botella o
caf
Desarrollo de
colonias
al
observar al
microscopio
Aerobiosis
Hasta 30 das
35 C
Aerobiosis
Microaerofilia
3-5 das
35 C
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1.4 .- Medios de Transporte : Incubacin en Aerobiosis a 35 C .

Medio
Cepa control
Resultado Esperado
Stuart
-Corynebacterium
diphtheriae
-Haemophilus influenzae
-Neisseria gonorrhoeae
-Shigella flexneri
-Streptococcus
pneumoniae *
-Neisseria gonorrhoeae
-Shigella flexneri
Streptococcus
pneumoniae *
Desarrollo entre las 24 a

48 hrs.
en subcultivo .
Amies
( con charcoal )
Amies
( sin charcoal )
Cary - Blair
-Shigella flexneri
-Campylobacter sp.
Desarrollo entre las 24 a

48 hrs.
en subcultivo .
Desarrollo entre las 24 A
48 hrs.
en subcultivo .
-Desarrollo entre las 18 a
24 hrs.
-Desarrollo a las 48 hrs
en los subcultivos .
* Cepa ATCC
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1.5.-
MEDIOS DIFERENCIALES : INCUBACIN EN AEROBIOSIS, 18-24 HRS. A

35C.
Medio
Cepas Control
Reaccin Esperada
King A
-Pseudomonas
aeruginosa
-Escherichia coli
-Pseudomonas
aeruginosa
-Escherichia coli
-Streptococcus
pyogenes *
-Streptococcus
pneumoniae *
-Escherichia coli
-Pigmento verde
-Sin pigmento
King B
Agar sangre blando
TSI
-Proteus vulgaris
-Shigella flexneri
-Pseudomonas
aeruginosa
-Pigmento fluorescente con Luz Ultra

Violeta
-Sin pigmento fluorescente
- Hemlisis
- Hemlisis
-Tendido: acidifica (amarillo)
Columna: acidifica (amarillo)
Gas : positivo (ruptura del agar)
H2 S : negativo
-Tendido: acidifica (amarillo)
Columna: acidifica (amarillo)
Gas:positivo (ruptura del agar)
H2 S : positivo (ennegrecimiento del agar)
-Tendido : alcaliniza (rojo)
Columna : acidifica (amarillo)
Gas : negativo
H2 S: negativo
-Tendido : alcaliniza (rojo)
Columna : alcaliniza (rojo)
Gas : negativo
H2 S: negativo
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-Escherichia coli
LIA
-Proteus vulgaris
-Shigella flexneri
- Escherichia coli
M IO
-Klebsiella
pneumoniae
Urea de Christensen
Citrato de Simmons
-Proteus vulgaris
-Klebsiella
pneumoniae
-Escherichia coli
-Klebsiella
pneumoniae
-Escherichia coli
-Columna: prpura (decarboxilacin de la

lisina positiva)
H2 S: negativo
-Columna :amarilla
Tendido : rojo ( deaminacin de la lisina
positiva )
H2 S:positivo (ennegrecimiento del agar)
-Columna : amarilla ( decarboxilacin
lisina negativa)
Gas : negativo
H2 S: negativo
Movilidad:positiva (columna turbia)
Indol : positivo ( anillo rojo, superficie )
Ornitina : positiva (columna prpura)
Movilidad : negativa (desarrollo en la
picada)
Indol : negativo ( anillo amarillo
,superficie)
Ornitina : negativa (columna amarilla)
-Columna y tendido : rojo
-Tendido : rojo
-no vira
-Vira a azul
-no vira
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O F (Hugh Leifson)
-Escherichia coli
-Acinetobacter
baumanii
Movilidad Nitrato
-Escherichia coli
-Acinetobacter sp.
Bilis Esculina
-Enterococcus
faecalis
-Streptococcus grupo
viridans
-Pseudomonas
Gelatina (Bouvet )
( reactivo de Frazier ) fluorescens
-Escherichia coli
-Proteus vulgaris
Medio H2 S
-Escherichia coli
-Enterobacter
CTA
aerogenes
( con azucares )
-Branhamella
catarrhalis
-Serratia sp.
D N A sa
(indicador azul de -Escherichia coli
toluidina )
-Salmonella
G I Movilidad
Typhimurium
-Shigella sp.
-Aerobiosis: columna amarilla (oxidacin

+)
Anaerobiosis:
columna
amarilla
(fermentacin +)
-Aerobiosis: columna amarilla (oxidacin
+)
Anaerobiosis: no vira (fermentacin -)
-Columna : enturbiamiento (movilidad + )
Anillo superficie : rojo ( nitrato + )
-Columna : desarrollo en la picada
Anillo superficie : no vira
-ennegrecimiento del medio
-no vira
- reaccin positiva : halo alrededor de la
colonia
- reaccin negativa : sin halo
-ennegrecimiento del medio
-no vira
-Columna : amarillo ( reaccin positiva )
-No vira
- Halo rosado alrededor de la colonia (
reaccin positiva)
- no vira
-Columna : enturbiamiento
( movilidad positiva )
-Columna : desarrollo en la picada
( movilidad negativa )
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Agar Esculina
FLN
Aeromonas
hydrophila
Pseudomonas
aeruginosa
-Pseudomonas
aeruginosa
-Acinetobacter
baumanii
- Reaccin positiva : caf oscuro

-Reaccin negativa : no vira
-Fluorescencia : positiva con Luz Ultra

Violeta
Oxidacin Lactosa: negativa (no vira )
Denitrificacin: positiva (burbujas de gas)
- Fluorescencia : negativa
Oxidacin Lactosa :positiva (tendido
amarillo)
Denitrificacin : negativa
* Cepa ATCC
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2.- Medios en Caldo :
2.1.- Caldos nutritivos :

Medio
Cepas Control
Caldo Hemocultivo
Aerobio
(Infuso Cerebro Corazn,
Caldo Brucella, Caldo
Columbia,Caldo
Soya
Tripticasa)
Caldo Nutritivo
(
Mueller
Hinton,
Peptonado,
Soya
Tripticasa,Triptosa
Fosfato)
Caldo Tood Hewit
(para Streptococcus )
Reaccin Esperada
Incubacin
Streptococcus -Desarrollo.
pneumoniae*
-Desarrollo.
-Pseudomonas
-Desarrollo
aeruginosa
-Candida albicans
18 a 24 hrs. a
35 C
Staphylococcus - Desarrollo.
aureus
- Desarrollo
-Escherichia coli
18 a 24 hrs. a
35 C
-Streptococcus
pyogenes *
-Streptococcus
pneumoniae *
-Desarrollo
-Desarrollo
18 a 24 hrs. a
35 C
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2.2 .- Caldos Diferenciales :

Medio
Cepa Control
Reaccin Esperada
Incubacin
Caldo Base Fermentacin

Azcares
( Arabinosa 10 % )
Decarboxilasa
Base
Mueller
( Lisina - Arginina Ornitina )
-Escherichia coli
-Enterococcus
faecalis
-Salmonella
Typhimurium
- Acidifica
- No vira
18-24 hrs. a 35
C
-Decarboxilacin
positiva de :
Lisina :color prpura
Arginina
:
color
prpura
-Proteus vulgaris
Ornitina
:
color
prpura
-Decarboxilacin
negativa de :
Lisina : color amarillo
Arginina
:
color
amarillo
Ornitina :
color
amarillo
Klebsiella -Reaccin positiva :
Caldo Malonato de Sodio pneumoniae
color azul
- Escherichia coli
-Reaccin negativa :
no vira
-Enterococcus
Caldo NaCl 6,5 %
-Desarrollo y vira a
(con glucosa e indicador faecalis
amarillo
-Streptococcus
prpura bromocresol )
- Sin desarrollo
grupo viridans
Hasta 4 das a
35 C
(
en
anaerobiosis
relativa )
18-24 hrs. a 35
C
18-24 hrs. a 35
C
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Caldo Urea
( con fenolftaleina )
-Proteus vulgaris
-Escherichia coli
Caldo Nitrato
-Escherichia coli
- Acinetobacter sp.
2.3.-
Medio
-Reaccin
color rojo
-Reaccin
no vira
-Reaccin
anillo rojo
-Reaccin
no vira
positiva : 18-24 hrs.a 35

C
negativa :
positiva : 18-24 hrs.a 35
C
negativa :
CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO
Cepa Control
Reaccin Esperada
Agua
Peptonada -Vibrio cholerae -Desarrollo
en
Alcalina
no O1
subcultivo
-Escherichia coli -Inhibicin parcial
subcultivo
Caldo Selenito F
-Salmonella
-Desarrollo
Typhimurium
subcultivo
-Shigella sonnei
-Inhibicin parcial
-Escherichia coli subcultivo
-Inhibicin parcial
subcultivo
* Cepa ATCC
Incubacin
el 4 - 6 hrs. a 35 C
en
en 12 hrs. a 35 C
en
en
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3.- Otras Pruebas

Prueba
Cepa control
Oxidasa
-Pseudomonas aeruginosa -Reaccin positiva :color azul

-Escherichia coli
violeta
Catalasa
-Staphylococcus aureus
-Streptococcus sp.
-Reaccin positiva : produccin

de burbujas
-Reaccin negativa : sin
burbujas
Coagulasa
- Staphylococcus aureus
-Staphylococcus
epidermidis
-Reaccin positiva : formacin

de coagulo
-Reaccin negativa : sin cambio
Novobiocina
-Staphylococcus
saprophyticus *
Staphylococcus
epidermidis
-Streptococcus
pneumoniae *
Optoquina
Bacitracina
Resultado Esperado
-Resistente : zona inhibicin <

= a 15mm.
-Sensible : zona inhibicin >
= a 16 mm.
-Zona de inhibicin > = 14
mm. ( de
acuerdo al
fabricante)
grupo -Sin inhibicin
-Streptococcus
viridans
- Streptococcus pyogenes ( -Zona de inhibicin
grupo A )
- Sin zona de inhibicin
-Streptococcus agalactiae (
grupo B )
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ONPG
-Citrobacter freundii
-Salmonella Typhimurium
Hipurato
de -Streptococcus agalactiae
(grupo B)*
Sodio
( con Fe Cl3 )
--Streptococcus pyogenes
(grupo A)*
-Escherichia coli
Rojo Metilo
-Klebsiella pneumoniae
VogesProskauer
-Escherichia coli
Reaccin Indol
--Escherichia coli
-Reaccin positiva : color

amarillo
-Reaccin positiva : precipitado
amarillo anaranjado en 10
minutos
-Reaccin negativa : Sin
precipitado
-Reaccin positiva : color rojo
-Reaccin negativa : color
anaranjado
-Reaccin positiva : color rojo
-Reaccin positiva : anillo rojo
-Reaccin negativa : anillo
incoloro
-Reaccin positiva : color verde
Deaminacin de -Proteus sp.

-Escherichia coli
Fenilalanina
( Fe Cl3 )
-Staphylococcus aureus * -Reaccin positiva : cambio de
Lactamasa
-Haemophilus influenzae * color
Factores X - V -Haemophilus influenzae * -Crecimiento alrededor de los
discos
Porfirina
-Haemophilus
parainfluenzae
-Reaccin
rosado
positiva
color
fluorescente
-Reaccin negativa : sin
fluorescencia
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Test de Camp
-Streptococcus agalactiae ( -Reaccin positiva : hemlisis

grupo B )
en punta de
flecha
-Streptococcus pyogenes ( -Reaccin negativa : hemlisis
grupo A )
sin punta de
flecha
-Coloracin violeta
Tincin de gram -Staphylococcus aureus
-Escherichia coli _
-Coloracin rosada
* Cepa ATCC
5.- Perodos recomendables para la mantencin de medios de cultivo
5.1.-
Placas con medios de cultivo :
Medio
Refrigerador 4C
sin bolsa plstica
Refrigerador 4C
con bolsa plstica
Agar Sangre
15 das
50 das
Agar Chocolate
15 das
60 das
Agar
Mac 15 das
Conkey
Agar Saboureaud 21 das
70 das
Agar Manita Sal
21 das
60 das
Agar S- S
6 das
10 das
90 das
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5.2.-
Caldos de cultivo :
Medio
Tapn
hermtico
no Tapn
hermtico
4C
no Tapn
hermtico
bolsa plstica
Temperatura
Temperatura
ambiente
ambiente
Sello
seguridad
N de semanas
N de meses
N de meses
de
Temperatura
ambiente
N de semanas
Mueller
Hinton
Infuso
Cerebro
Corazn
Soya
Tripticasa
Peptonado
3-4
1-2
2-4
3-6
3-4
1-2
2-4
3-6
3-4
1-2
2-4
3-6
3-4
1-2
2-4
3-6
Nitrato
3-4
1-2
2-4
3-6
Selenito
3-4
1-2
2-4
3-6
Azcares al 3-4
1%
1-2
2-4
3-6
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5.3 .- Tubos con Agar :
Medio
Tapn
hermtico
no Tapn
hermtico
no Tapn
hermtico
bolsa plstica
4 C
Temperatura
Temperatura
N de semanas ambiente
ambiente
N de semanas N de meses
3-4
1-2
2-4
Agar
Tendido
Agar Bilis 3-4
Esculina
Agar
3-4
Fenilalanin
a
Agar LIA 3-4
Sello
seguridad
de
Temperatura
ambiente
N de meses
3-6
1-2
2-4
3-6
1-2
2-4
3-6
1-2
2-4
3-6
Agar TSI
3-4
1-2
2-4
3-6
Agar MIO
3-4
2-4
3-6
Agar
Meller
Hinton
Agar
Nutritivo
Agar O- F
3-4
1-2
2-4
3-6
3-4
1-2
2-4
3-6
3-4
1-2
2-4
3-6
Agar Urea 3-4

de
Christensen
1-2
2-4
3-6

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PROCEDIMIENTO CONTROL

TM. Mara Soledad Prat.

Halo: zona de inhibicin de desarrollo bacteriano, visible a ojo desnudo.

5. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Trulas estriles de madera con algodn hidrfilo.

Medios de cultivos enriquecidos, selectivos, diferenciales.

Reactivos de rutina para pruebas diferenciales.

Estufa de Cultivo a 35C.

7.2. Control de medios de cultivo

El control de pruebas de identificacin demuestra que los microorganismos (gnero,

7.4. Control de pruebas de susceptibilidad automatizadas y no automatizadas

Estndar Mac Farland.

Tablas CLSI vigentes.

7.4.1.10. Las pruebas de susceptibilidad se separan en:

Susceptibilidad por Difusin en placas de agar. Ver IT-211.00-004

Susceptibilidad por Dilucin donde se determina la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM):

Mtodo de Epsilometra: mtodo de difusin con concentracin de antimicrobianos en

7.5. Control de tcnicas serolgicas

Registro de control Seccin

Motivo del cambio

ANEXO 1. Formulario control de calidad medios de cultivo.

ANEXO 4. Formulario control de calidad agar Meller Hinton.

Nombre del Medio de Cultivo:

Control Fabricac. Vencimien.

Nombre del Reactivo: ..

Nombre de antimicrobianos usados

Antim. Lote Halo.

Gua para el Control de Calidad de Medios de Cultivo

- Suspender en leche al 20% ( 0.5 a 1.0 ml )

1.- Medios slidos :

1.2 Diferenciales -selectivos :

Mac -Escherichia coli *

Agar Bismuto -Salmonella Typhi

-Colonias rojas (Lac+)

-Col. amarilla (Manita Aerobiosis

1.3.- Medios Selectivos :

1.4 .- Medios de Transporte : Incubacin en Aerobiosis a 35 C .

Desarrollo entre las 24 a

Desarrollo entre las 24 a

MEDIOS DIFERENCIALES : INCUBACIN EN AEROBIOSIS, 18-24 HRS. A

-Pigmento fluorescente con Luz Ultra

-Columna: prpura (decarboxilacin de la

-Aerobiosis: columna amarilla (oxidacin

- Reaccin positiva : caf oscuro

-Fluorescencia : positiva con Luz Ultra

2.- Medios en Caldo :

2.1.- Caldos nutritivos :

2.2 .- Caldos Diferenciales :

Caldo Base Fermentacin

positiva : 18-24 hrs.a 35

3.- Otras Pruebas

-Pseudomonas aeruginosa -Reaccin positiva :color azul

-Reaccin positiva : produccin

-Reaccin positiva : formacin

-Resistente : zona inhibicin <

-Reaccin positiva : color

Deaminacin de -Proteus sp.

-Streptococcus agalactiae ( -Reaccin positiva : hemlisis

Placas con medios de cultivo :

Agar Manita Sal

5.3 .- Tubos con Agar :

Agar Urea 3-4

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