93125-01.

qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 1

CAPTULO

Terminologa, microscopia
y tcnica histolgica

1.1

Terminologa bsica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1

1.2
1.2.1
1.2.2
1.2.3

Microscopios . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Microscopia ptica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Microscopia electrnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Poder de resolucin y rdenes de magnitud . . . . . 3

1.3

Realizacin de preparados para la

microscopia ptica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Fijacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Inclusin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Corte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
Coloracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

1.3.1
1.3.2
1.3.3
1.3.4

1.1 Terminologa bsica

Citologa La citologa investiga todas las estructuras y las
funciones de la clula. Las estructuras de las clulas se estudian con microscopios y las funciones celulares por medio
de mtodos bioqumicos, biomoleculares, inmunohistoqumicos e histoqumicos. La citologa tambin se denomina
citobiologa y en la actualidad se conoce sobre todo como
biologa celular. Es una clave fundamental para la compresin de todas las funciones de los tejidos y los rganos.
Correlacin clnica El trmino citologa se utiliza en clnica para referirse al diagnstico de extendidos celulares u
otros preparados de clulas individuales.
Histologa En sentido estricto la histologa es el estudio de
los tejidos. Los tejidos corresponden a un plano intermedio
de organizacin del cuerpo y consisten en asociaciones de
clulas con diferenciacin semejante y sus derivados, las sustancias intercelulares (W. Bargmann, 1906-1976), que pueden clasificarse segn determinados criterios. En la actualidad se distinguen 4 tejidos bsicos: tejido epitelial, tejido
conjuntivo (incluidos los tejidos de sostn), tejido muscular
y tejido nervioso. Esta clasificacin se remonta a Albert
Klliker (1817-1905). Todos los rganos estn compuestos
por variantes especficas de los cuatro tejidos bsicos. Dados
los conocimientos citobiolgicos y ontognicos modernos
los lmites entre estos tejidos se desdibujan: los miofibroblastos, por ejemplo, poseen caractersticas especficas de los
fibroblastos y de las clulas musculares lisas, en algunos animales invertebrados las clulas musculares estriadas pueden
ser clulas epiteliales y el tejido nervioso exhibe coincidencias especficas con el tejido epitelial.
Anatoma microscpica La anatoma microscpica se
ocupa del estudio de cada una de las configuraciones espe-

1.3.5
1.3.6

Artefactos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
Preparados vivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

1.4

Realizacin de preparados para la

microscopia electrnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
Microscopia electrnica de transmisin . . . . . . . . . 8
Microscopia electrnica de barrido . . . . . . . . . . . . . . 9

1.4.1
1.4.2
1.5
1.5.1
1.5.2

Interpretacin de los cortes histolgicos . . . . . 9

Mensaje de los cortes histolgicos . . . . . . . . . . . . . . 9
Reglas bsicas para la realizacin
del diagnstico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

cficas que adoptan los grupos de clulas y tejidos en los

rganos individuales. En consecuencia tambin se conoce
como histologa de los rganos o histologa especial,
dado que requiere el conocimiento de la citologa y la histologa y lo aplica a los rganos. Consiste en la comprensin de las funciones de los rganos bajo la consideracin
concreta de las circunstancias morfolgicas microscpicas
pticas y electrnicas.

1.2 Microscopios
1.2.1 Microscopia ptica
El microscopio ptico se invent en el siglo XVII (Antoni
van Leeuwenhoek, 1632-1723) y desde entonces se ha perfeccionado en forma incesante. Permite una magnificacin
de hasta 1.000 veces y es el instrumento ms importante
para la enseanza de la histologa, para el diagnstico clnico y anatomopatolgico y para la investigacin en la biologa celular. Funciona con una fuente luminosa elctrica
cuyos rayos iluminan y atraviesan el preparado desde abajo
(microscopia de luz transmitida). En la enseanza tambin aparecen cada vez con ms frecuencia los preparados
digitalizados.
Estructura Un microscopio ptico en esencia est compuesto por una fuente luminosa incorporada en el pie del
microscopio (cuya luz atraviesa el preparado y el sistema
de lentes del microscopio), un sistema de lentes condensador, una platina (sobre la cual se coloca el preparado histolgico que se desea examinar), objetivos (los aumentos
corrientes son de 4, 10, 20 y 40 ) y un ocular (parte superior del microscopio a travs de la cual se mira; en la mayora de los casos el aumento es de 10 ) o mejor 2. Los sistemas de diafragmas aumentan la claridad del preparado.

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 2

1 Terminologa, microscopia y tcnica histolgica

Cuadro 1.1 Ejemplos de microscopios pticos especiales

Microscopio

Aplicacin

Fundamentos tcnicos

Microscopio
de contraste
de fase

Observacin de clulas (de cultivos,

protozoarios) vivas (con frecuencia sin
teir)

Intensifica el contraste de las estructuras celulares que

apenas son visibles en el microscopio de luz transmitida
corriente
El objeto (el preparado) mismo acta como divisor del rayo
luminoso para complementar trayectos de ondas luminosas
capaces de interferir

Microscopio
de interferencia
(de Nomarski)

Estudio de clulas vivas y tambin de

El haz luminoso se divide antes de atravesar el preparado
preparados inmunohistoqumicos en los
por la accin de un dispositivo optomecnico especfico
que slo estn teidas clulas aisladas
y su entorno carece de tincin

Microscopio
de fluorescencia

Anlisis de estructuras celulares auto- De una eficacia particular es la microscopia de

fluorescentes o estructuras a las que se
epifluorescencia, en la cual los rayos excitadores llegan al
les unen fluorocromos
objeto desde arriba
La imagen fluorescente puede desvanecerse con rapidez

Microscopio
de polarizacin

Deteccin y anlisis de estructuras muy En la luz polarizada las estructuras con un grado alto de
bien ordenadas, por ejemplo fibrillas
orden se comportan birrefringentes (anistropas); brillan
colgenas de distribucin paralela o
con claridad cuando transcurren diagonalmente entre dos
fascculos de filamentos de miosina
filtros de polarizacin cruzados
organizados en forma paralela en las
Los componentes estructurales con un orden irregular se
bandas A de la clula muscular esquecomportan monorrefringentes (istropos) y permanecen
ltica o cardaca
siempre oscuros en el microscopio de polarizacin

Videomicroscopio Estudio de clulas vivas (p. ej., puede

rastrearse la migracin de partculas
minsculas dentro de la clula)

Utiliza una videocmara de gran resolucin; en caso

necesario la imagen visible en una pantalla puede
manipularse electrnicamente
El procedimiento recibe el nombre de contraste de
interferencia diferencial videopotenciado (VE-Dic =
Video-enhanced differential interference contrast) y consiste
en la intensificacin de las manifestaciones (seales)
luminosas dbiles y de escasa magnitud.

Microscopio
confocal de
barrido lser

Un haz lser (en la mayor parte de los casos un lser de

criptn-argn) barre el preparado
La imagen obtenida se descompone en planos individuales
y se rearma en una imagen tridimensional

Anlisis de preparados gruesos,

determinacin de la distribucin
subcelular de las protenas y los
metabolitos, observaciones de fenmenos que transcurren en el tiempo
(p. ej., la reorganizacin dinmica del
citoesqueleto durante la fagocitosis)

Aumentos La imagen aumentada que producen los objetivos se aumenta todava ms por la accin del ocular. El
aumento total con el que puede observarse un preparado
se obtiene del producto entre el aumento del objetivo y el
aumento del ocular (p. ej., un objetivo 4 y un ocular
10 producen un aumento total de 40 ).
Tipos En la investigacin se utilizan microscopios especiales (Cuadro 1.1).

1.2.2 Microscopia electrnica

El microscopio electrnico comenz su desarrollo en la
dcada del 30 del siglo XX y trajo consigo un aumento considerable de la resolucin ptica.
Aumento En la prctica rutinaria permite obtener aumentos de bastante ms que 100.000 veces (100.000 ).
Tipos Se distinguen los siguientes tipos de microscopios
electrnicos:

En el microscopio electrnico de transmisin (MET)

en lugar de usarse la luz visible, con su longitud de onda
natural, se utilizan haces de electrones, cuya longitud de
onda es mucho menor. En los microscopios ptico y
electrnico el trayecto de los rayos en principio es semejante. En lugar de lentes de cristal en el MET se usan las
llamadas lentes electrnicas (bobinas electromagnticas). La fuente de electrones es un ctodo; el haz electrnico es acelerado por alta tensin y transcurre por un
tubo al gran vaco. La imagen se observa mediante una
lente de aumento binocular sobre una pantalla fluorescente. Con la ayuda del MET pueden analizarse cortes de
tejido pequeos (1-3 mm2), muy delgados (30-80 nm)
(cortes ultrafinos), preparados mediante una tcnica
costosa y, en la prctica, como continuacin de la
microscopia ptica. El MET tambin permite el anlisis
de las rplicas finsimas que se preparan en el mbito de
los mtodos de criofractura.
El microscopio electrnico de barrido (MEB) funciona
sin lentes formadoras de imgenes. Un preparado se
explora (barre) en lneas secuenciales con un haz de

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 3

1.3 Realizacin de preparados para la microscopia ptica

Cuadro 1.2 Ejemplos de rdenes de magnitud
de diferentes clulas y componentes celulares.
Clula/componente celular
vulo diferenciado

Tamao
250-300 m

Clula del epitelio intestinal

(altura)

20-25 m

Clula epitelial del hgado

(segn el estado funcional)

15-30 m

Linfocitos

8 m

Eritrocitos

7,6 m

Mitocondrias (longitud)

2-5 m

Microvellosidades
(intestino delgado)

1-1,5 m

Bacterias

1-2 m

Virus

10-100 nm

Partcula de glucgeno
(partcula )

20 nm

Filamento de queratina
(dimetro)

10 nm

electrones compacto. Para la formacin de la imagen sirven los electrones retrodispersados (electrones secundarios). El detector es un disquillo de centelleo. Las seales
luminosas de este disquillo son intensificadas por un
fotomultiplicador y retroconvertidas en seales elctricas. La imagen del MEB, que de nuevo se ve en una pantalla fluorescente, aparece sucedneamente a travs de
un barredor de lneas. Con el MEB se observan superficies naturales (o tambin artificiales) de objetos (epitelios, clulas, fibras extracelulares, sustancias duras, rganos, animales enteros, etc.). Antes de la observacin en el
MEB el objeto tiene que deshidratarse y cubrirse con
una pelcula delgada de metal noble (sombreado).
El microscopio electrnico de barrido de efecto tnel
permite el anlisis de superficies con una resolucin atmica. Aqu slo pueden examinarse superficies de barrido minsculas (de alrededor de 1 m2).

1.2.3 Poder de resolucin y rdenes de

magnitud
El lmite de resolucin del ojo desnudo es de alrededor de
0,08 mm, por lo cual puede identificar estructuras de no
menos de 100 m de dimetro. El microscopio ptico o
microscopio de luz tiene un lmite de resolucin de aproximadamente 0,3 m (en la prctica, un aumento de alrededor de 1.000 veces), con lo cual pueden identificarse
bien clulas y bacterias. Los rdenes de magnitud habituales de la microscopia ptica oscilan entre unos pocos
milmetros (mm) y algunos micrmetros (m, 1 mm =
1.000 m). El microscopio electrnico tiene un lmite de
resolucin de alrededor de 0,3 nm; esto permite el estudio
de virus y de la ultraestructura de las clulas y de las aglomeraciones proteicas grandes (filamentos citoplasmticos)
o los biopolmeros (p. ej., glucgeno). Los rdenes de magnitud de la microscopia electrnica de rutina en su mayor
parte oscilan entre varios micrmetros y unos pocos nanmetros.

El Cuadro 1.2 ofrece un panorama general sobre los rdenes de magnitud de diferentes clulas y componentes celulares.

1.3 Realizacin de preparados para la

microscopia ptica
Los mtodos reseados a continuacin se utilizan para realizar los preparados histolgicos habituales en la prctica
de la anatoma, la anatomopatologa y la investigacin clnica as como en los cursos de histologa (Fig. 1.1):
Fijacin
Inclusin
Realizacin de los cortes
Coloracin

1.3.1 Fijacin
Objetivo La fijacin debe:
Mantener en la medida de lo posible el tejido en su estado natural y evitar su desintegracin o su autlisis,
Endurecer el material y as conseguir una mejor capacidad de corte,
Eliminar las bacterias u otros agentes etiolgicos de
enfermedades que existan en la muestra para el examen.
Procedimiento Con frecuencia las muestras de tejido sencillamente se sumergen en las soluciones fijadoras (fijacin
por inmersin). Un resultado mejor se consigue con la
ayuda de la fijacin por perfusin, mediante la cual el
rgano que debe fijarse se infiltra con el medio de fijacin
a travs de su propio sistema vascular y as se fija.
Imagen de equivalencia Muchos medios de fijacin, por
ejemplo, la solucin de formaldehdo neutra al 5%, el cido
pcrico, el sublimado corrosivo y el alcohol, son precipitantes
de las protenas y formadores de redes proteicas. En consecuencia, con estos fijadores se produce una transformacin
ms o menos obvia de la estructura natural de la clula viva
y la imagen histolgica slo constituye un equivalente del
tejido vivo que no es idntico a l. Con la imagen de equivalencia puede trabajarse bien pero es imprescindible reunir
intelectualmente los resultados de muchos mtodos diferentes para hacerse una idea de la clula viva y su dinmica.
Nota Ni siquiera la mejor de las tcnicas de preparacin
de clulas y tejidos puede lograr jams una reproduccin perfecta de la clula viva. Por consiguiente, se habla
de una imagen de equivalencia.

1.3.2 Inclusin
Objetivo Las muestras de tejido fijadas se colocan en un
disolvente adecuado para poder incluirlas en parafina lquida y luego cortarlas, una vez que la parafina se solidifica.
Procedimiento En primer lugar las muestras fijadas se
sumergen en un disolvente adecuado, una serie gradual de
alcoholes de concentracin creciente. En esta fase de la realizacin del preparado pueden surgir diversos artefactos,
como retracciones y desgarros del tejido. A continuacin
las muestras se incluyen en parafina o mejor en Paraplast.
En forma alternativa para la inclusin puede utilizarse una
resina sinttica (p. ej., metacrilato; en el texto que sigue y

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 4

1 Terminologa, microscopia y tcnica histolgica

Obtencin
de tejido fresco

1
Fragmento
del tejido obtenido
Cortes del
fragmento aptos
para la fijacin

Montaje del corte

coloreado en un medio de
montaje bajo un cubreobjetos
(preparado durable)
Serie alcohlica de
concentracin creciente

Coloracin de los cortes

Fijacin, por
ejemplo en formaldehdo

Serie alcohlica de
concentracin decreciente

Deshidratacin en serie
alcohlica de
concentracin creciente

Eliminacin de la parafina
con xileno

Inclusin, por ejemplo

en parafina o Paraplast

Colocacin y secado
del corte sobre
un portaobjetos

Bloque de
parafina listo

Corte en micrtomo con

cuchilla de acero

Fig. 1.1 Realizacin de preparados. Representacin de los pasos consecutivos que se requieren para obtener, a partir de
una muestra de tejido fresco, un corte histolgico coloreado (5-8 m de espesor) apto para el examen microscpico ptico.
(De [1])

en los epgrafes de las figuras, los preparados incluidos en

esta forma se identifican con la palabra plstico). Los
cortes de material incluido en plstico tienen un espesor de
slo 1-2 m y muestran las estructuras celulares e hsticas
ms claramente que los cortes de material incluido en
parafina, en los cuales muchas estructuras aparecen superpuestas. Otra posibilidad es la congelacin (criomicroscopia), en la cual se logra el endurecimiento de la muestra de
tejido mediante la colocacin de los fragmentos de rganos frescos en nitrgeno lquido. Luego se procede al corte
del material congelado en un micrtomo de congelacin
especial. Este procedimiento evita la extraccin del agua
(deshidratacin), que se asocia con el peligro de retraccin
del tejido, y los solventes orgnicos que disuelven los lpidos. As, muchos componentes moleculares de los tejidos
se mantienen en su configuracin natural y luego pueden
demostrarse con mtodos histoqumicos, por ejemplo, las
enzimas de la cadena respiratoria. La preparacin de cortes
por congelacin puede realizarse con mucha rapidez, de
modo que es posible, por ejemplo, efectuar un diagnstico
histolgico intraoperatorio.

1.3.3 Corte
Objetivo Se realizan cortes finos que luego puedan colorearse.
Procedimiento Para la microscopia ptica de rutina se
realizan cortes de unos 5-8 m de espesor; con inclusin
en resinas sintticas los cortes pueden ser de slo 1-2 m.
La realizacin de los cortes requiere instrumentos especiales (micrtomos). La criomicroscopia exige micrtomos
de congelacin especiales.

1.3.4 Coloracin
Objetivo Los diversos elementos celulares e hsticos captan
los colorantes con afinidad variable y as pueden distinguirse mejor.
Procedimiento Las soluciones colorantes habituales en su
mayora son soluciones acuosas. Por esta razn, el corte tiene
que desparafinarse y rehidratarse en pasos intermedios adicionales. Luego los diversos elementos celulares e hsticos

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 5

1.3 Realizacin de preparados para la microscopia ptica

captan los colorantes de modo diferente. Los componentes
con cargas elctricas negativas (componentes aninicos),
como el DNA, captan colorantes bsicos (catinicos), por
ejemplo, la hematoxilina, y se llaman basfilos (p. ej., el
ncleo celular, algunas mucinas, proteoglucanos extracelulares y las granulaciones de Nissl). Los componentes celulares
e hsticos con cargas elctricas positivas, o sea los componentes catinicos, captan los colorantes cidos (aninicos) y se
denominan acidfilos o eosinfilos, porque el colorante
cido de uso ms frecuente se llama eosina. Los colorantes
cidos tien, por ejemplo, los eritrocitos y el colgeno.
Nota
basfilo = aninico (cargas elctricas negativas),
capta colorantes bsicos (p. ej., cromatina nuclear,
algunas mucinas, proteoglucanos extracelulares y
granulaciones de Nissl)
eosinfilo = catinico (cargas elctricas positivas),
capta colorantes cidos (p. ej., eritrocitos, colgeno).

Coloracin de rutina
La coloracin de rutina tpica es la tincin con hematoxilina y eosina (H-E) (Fig. 1.2). Otras coloraciones de rutina
(Cuadro 1.3) son la tincin con Azn, la tricrmica de
Masson (Fig. 1.3) y la tricrmica de Goldner (Fig. 1.4), las
cuales permiten identificar particularmente bien la distribucin del colgeno. Las tinciones para elastina tornan
visible la elastina de las fibras elsticas (Fig. 1.5).

Mtodos histoqumicos
Entre las tinciones especiales los mtodos histoqumicos
ocupan una posicin prioritaria; en el Cuadro 1.3 se resean las tinciones de uso frecuente. Con la ayuda de la histoqumica de sustrato y enzima puede demostrarse una
gran cantidad de las ms variadas sustancias qumicas definidas, como muchas enzimas, glucgeno, cidos ribonucleico y desoxirribonucleico, protenas, proteoglucanos,
lpidos, etctera, en el sitio de su ubicacin natural en clulas y tejidos, con lo cual se obtiene una buena idea de los
acontecimientos celulares dinmicos (Fig. 1.6).
Histoqumica de lectinas Con las lectinas disponibles en
el comercio pueden demostrarse componentes sacridos
especficos en las clulas y los tejidos, por ejemplo, en el
glucocliz y en el moco.
Inmunohistoqumica Con la ayuda de esta tcnica pueden
demostrarse enlaces qumicos especficos, sobre todo de
pptidos y protenas, por medio de una reaccin antgenoanticuerpo (Fig. 1.7). Lo fundamental es que el corte de
tejido en cual se desea demostrar un componente qumico
determinado (un antgeno) siempre se incuba con una
solucin que contiene un anticuerpo especfico contra el
antgeno buscado. El anticuerpo se une a los sitios de las
clulas o del espacio extracelular en los cuales est el antgeno. Esta reaccin puede visualizarse de modos diferentes; por ejemplo, el anticuerpo puede marcarse con una

Fig. 1.2 Tincin con hematoxilina y eosina (H-E). La

hematoxilina tie de azul oscuro o violeta los ncleos celulares y las regiones del citoplasma que poseen abundancia de
retculo endoplasmtico rugoso. La eosina tie de rojo otras
regiones del citoplasma, as como muchos componentes
extracelulares fibrosos. Glndulas cutneas de un antlope
(Aepyceros melampus): 1 glndulas odorferas (apocrinas);
2 glndulas sebceas (holocrinas); 3 tejido conjuntivo. 250 .

Fig. 1.3 Tincin tricrmica de Masson. Semejante a la

coloracin con azn (azocarmn + azul de anilina) (Fig.
1.8). Fibras colgenas del tejido conjuntivo (1) en azul
oscuro; componentes celulares en diversos tonos de rojo.
Glndulas cutneas de un antlope (Aepyceros melampus):
2 glndulas odorferas (apocrinas); 3 glndulas sebceas
(holocrinas). 250 .

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 6

1 Terminologa, microscopia y tcnica histolgica

2
3

4
1

Fig. 1.4 Tincin de Goldner, coloracin tricrmica de uso

corriente que tie las fibras colgenas del tejido conjuntivo
(1) de verde turquesa y las porciones celulares de rojo violeta a rojo pardo. Duodeno de un gato: 2 mucosa; 3 glndulas de Brunner en la submucosa. 200 .

Fig. 1.5 Tincin para elastina (orcena), deteccin selectiva de membranas y fibras elsticas (). Arteria muscular:
1 luz vascular; 2 membrana elstica interna, compuesta por
una lmina elstica gruesa de trayecto ondulado; 3 tnica
media; 4 tnica adventicia. Ser humano; 400 .

Fig. 1.6 Tincin con PAS (cido perydico-reactivo de

Schiff), identificacin de moco y glucoprotenas neutras,
as como glucgeno. Aqu el moco de las clulas mucosas
de la glndula submandibular est teido de prpura intenso; otras estructuras poseedoras de glucoprotenas, entre
ellas las membranas basales, aparecen ms tenues. Ser
humano; coloracin de contraste de los ncleos celulares
con hemalumbre (tono semejante al de la hematoxilina).
200 .

Fig. 1.7 Determinacin inmunohistoqumica de la citoqueratina 19 (CK19), un componente del citoesqueleto, en

un bronquio pequeo. Slo una parte de las clulas epiteliales muestra una reaccin positiva (coloracin parda); en
su mayora se trata de clulas basales o clulas en crecimiento. Ser humano; 250 .

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 7

1.3 Realizacin de preparados para la microscopia ptica

Cuadro 1.3 Tinciones histolgicas. (De [1])

Tincin

Ncleos

Citoplasma

Fibras colgenas

H-E (hematoxilina-eosina) (Fig. 1.2)

Azul violeta

Rojo; regiones con

abundancia de ribosomas
y RER azul violeta

Rojo; las fibras tipo I se

Sin tincin o rosa
tien con intensidad, las
fibras tipo III se tien en
forma tenue y delicada

Tricrmica de Masson
(Fig. 1.3)

Rojo brillante

Rosa plido a azul tenue

Azul

Sin tincin (slo si estn

presentes en grandes cantidades, como en las membranas elsticas o los ligamentos elsticos: rojo a azul
rojizo)

Azn (azocarmn/azul de
anilina/naranja G) (Figs.
3.1.2 a 3.1.9)

Semejante a la tincin tricrmica de Masson

Para elastina
(resorcina-fucsina u orcena) (Fig. 1.5)

Negro violeta (resorcina-fucsina); rojo pardo (orcena)

van Gieson (hematoxilina

frrica/cido pcrico/fucsina cida)

Azul negro

Amarillo a pardusco claro

Rojo

Sin tincin especial (slo si

estn en aglomeraciones
gruesas, como en las membranas elsticas o los ligamentos elsticos: amarillo)

Tricrmica de Goldner
(hematoxilina
frrica/azofloxina/verde
luz) (Fig. 1.4)

Pardo negro

Rojo ladrillo

Verde

A menudo sin tincin especial (en parte, verdoso a

rojo claro)

Hematoxilina frrica de
Heidenhain

Heterocromatina y
nuclolo
azul negro

Algunos componentes, por Sin tincin especial

ejemplo centrolos, haces o gris amarillento
de filamentos intermedios
y estriaciones transversales en los msculos cardaco y esqueltico, aparecen de color negro profundo

Gris tenue

Mtodo de impregnacin
argntica de Gomori para
fibras reticulares (impregnacin con sales de
plata)

En varios tonos de gris

Fibras reticulares (de

colgeno tipo III) de
color negro; fibras colgenas tpicas (de colgeno tipo I) de color pardo

Fibras elsticas

Tinciones histoqumicas
Reaccin de PAS
(cido perydicoreactivo de Schiff)

Azul alciano

Tinciones para lpidos

(p. ej., Sudn III; Sudn
negro; aceite rojo O)
Tincin de Feulgen
para DNA
Azul de toluidina
(basofilia selectiva)

Tincin rojo violeta

El cido perydico forma grupos aldehdo en las molculas con muchos residuos sacridos (p. ej., glucgeno, mucinas y glucoprotenas); el reactivo de Schiff los tie de rojo violeta
Dan una reaccin positiva, por ejemplo, el glucgeno, el moco intracelular y extracelular y las lminas basales
Tincin azul.
Diversos componentes con carga elctrica negativa (polianiones), por ejemplo moco sulfatado, glucosaminoglucanos, hialuronano
Segn el colorante, por ejemplo naranja-rojo o pardo
Lpidos, por ejemplo triacilgliceroles o lpidos de las vainas de mielina
Tincin prpura
El HCl forma grupos aldehdo en la desoxirribosa, la pentosa del DNA. Los grupos aldehdo reaccionan
con el reactivo de Schiff, el cual tie selectivamente de prpura la cromatina que contiene DNA
Tincin azul
El azul de toluidina, un colorante bsico, se une selectivamente a los grupos fosfatos de carga negativa del DNA y del RNA
En consecuencia, se tien la cromatina (DNA), el nuclolo y los ribosomas (RNA)

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 8

1 Terminologa, microscopia y tcnica histolgica

sustancia fluorescente o puede demostrarse, en un segundo paso, en una reaccin con otro anticuerpo marcado con
una enzima (a menudo peroxidasa). Luego se realiza la
determinacin de la enzima con mtodos enzimohistoqumicos clsicos.
Hibridacin in situ Con la hibridacin in situ pueden
localizarse cidos nucleicos en el corte histolgico mediante sondas complementarias (oligonucletidos de DNA o
RNA marcados radiactivamente o no radiactivamente).
Las sondas permiten demostrar en el corte secuencias de
DNA o RNA especficas. El mtodo tambin puede practicarse en cromosomas, en extendidos celulares o en preparados de cuerpo entero de animales pequeos.

1.3.5 Artefactos
Los artefactos son de causa tcnica y surgen, por ejemplo, por mala fijacin o una fijacin demorada, soluciones colorantes viejas, mellas en la cuchilla del micrtomo o una deshidratacin agresiva. Las consecuencias frecuentes son las grietas pequeas o grandes en el lmite
entre tejidos de consistencia diferente, por ejemplo entre
el cartlago y el pericondrio. Tambin aparecen con frecuencia hendiduras de retraccin entre tejidos de estructuras diferentes, por ejemplo, entre el tejido epitelial y el
tejido conjuntivo (Fig. 1.8). Otras causas posibles son las
contusiones o los desgarros hsticos (Fig. 1.9). El conocimiento de estos artefactos es muy importante en el examen de un preparado.

1.3.6 Preparados vivos

Con el microscopio tambin pueden estudiarse clulas y
tejidos vivos: la microscopia de contraste de fase y la
microscopia de interferencia intensifican el contraste de las
estructuras celulares vivas (Fig. 1.10), el cual en el microscopio de luz transmitida corriente es muy dbil. Mediante
el uso de sustancias coloreadas o marcadas con colorantes
fluorescentes es posible, entre otras cosas, seguir la dinmica de los procesos de endocitosis o la reestructuracin de
las prolongaciones celulares. Las variantes de la microscopia vital son, por ejemplo, la aplicacin de la luz ultravioleta, la microscopia de polarizacin y la microscopia de
campo oscuro.

1.4 Realizacin de preparados para la

microscopia electrnica
1.4.1 Microscopia electrnica de transmisin
Fijacin En la microscopia electrnica de transmisin
(MET) se necesitan procedimientos de fijacin particularmente cuidadosos para obtener una imagen lo ms fiel
posible al original de la estructura de las clulas vivas. El
tejido debe colocarse rpidamente en la solucin fijadora,
en lo posible de inmediato o al menos a los pocos minutos
de la extraccin o la muerte. Si se trabaja con animales de
experimentacin, lo ptimo es la fijacin por perfusin del
animal anestesiado. La solucin fijadora es el glutaraldeh-

Fig. 1.9 Defecto

de corte.

Fig. 1.8 Hendidura por retraccin () entre la base del

epitelio y el zcalo de tejido conjuntivo de las vellosidades
intestinales, el denominado espacio de Grnhagen. Yeyuno,
ser humano. Azn; 270 .

Fig. 1.10 Fibroblastos vivos en un cultivo celular,

microscopia de contraste de fase. Adems del ncleo,
algunos orgnulos granulares y el lmite celular general, los
detalles de la estructura de estas clulas apenas pueden
distinguirse. 450 .

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 9

1.5 Interpretacin de los cortes histolgicos

do amortiguado y a la fijacin le sigue una posfijacin con
tetrxido de osmio. El metal pesado osmio se une a los
lpidos y aumenta, por ejemplo, el contraste de las membranas biolgicas.
Inclusin, corte Luego de la deshidratacin se realiza la
inclusin en resinas sintticas como Araldita o Epon. Con
ultramicrtomos se realizan cortes de 30 a 80 nm de espesor.
Tincin Estos cortes son tan finos que las estructuras celulares que contienen deben contrastarse (teirse) (Fig.
1.11) con acetato de uranilo, citrato de plomo y en ciertos
casos cido fosfotngstico.
Acoplamiento metlico En la investigacin experimental
pueden utilizarse sustancias acopladas a metales (oro, hierro, cobre). Los metales en los preparados para el MET
poseen un gran contraste y, en consecuencia, se identifican
bien. As, por ejemplo, puede seguirse el trayecto de una
glucoprotena, en s misma invisible, desde su captacin en
la clula hasta su degradacin y pueden localizarse en
forma precisa proteoglucanos o glucosaminoglucanos.
Inmunoelectromicroscopia En la inmunoelectromicroscopia pueden demostrarse in situ, por ejemplo, protenas
mediante el uso de anticuerpos marcados con oro.
Contraste negativo En un procedimiento especial, la
generacin de contraste negativo, pueden colocarse sobre
una pelcula transparente finsima partculas celulares,
bacterias o virus. Los objetos se rodean de precipitados de
metales pesados, con lo cual aparecen claros en un entorno oscuro.
Criofractura En el mtodo de la criofractura las superficies
liberadas de pequeas muestras hsticas congeladas a muy
baja temperatura se cubren con una pelcula metlica finsima. La rplica obtenida de ese modo se observa con el
MET. Las membranas celulares se parten a lo largo de su
centro hidrfobo, de modo que las caras interiores de las
hojuelas externa e interna de la membrana quedan libres y
pueden analizarse.

1.4.2 Microscopia electrnica de barrido

La microscopia electrnica de barrido tiene su fundamento en principios propios y permite el anlisis de superficies
celulares y epiteliales genuinas (Fig. 1.12).

1.5 Interpretacin de los cortes

histolgicos
1.5.1 Mensaje de los cortes histolgicos
El mensaje y el valor diagnstico de los cortes histolgicos
siempre deben evaluarse en forma crtica:
El corte histolgico siempre provee slo una instantnea de un todo vivo en cambio continuo.
La gran mayora de los cortes representan slo una rodaja finsima de una parte casi siempre pequea de un
rgano tal vez muy grande, por ejemplo, el hgado. En
los rganos grandes las estructuras pueden estar distri-

buidas en forma irregular y no es obligatorio que se

encuentren en cada corte.
El corte histolgico genera una imagen bidimensional
de las clulas y los tejidos siempre tridimensionales. Las
tres dimensiones se infieren, por ejemplo, recin cuando
se utilizan cortes gruesos que se transenfocan o cuando se realizan cortes seriados.
No obstante, las conclusiones inmediatas sobre la forma
real de los elementos estructurales de las clulas y los tejidos en el corte individual slo son posibles en casos excepcionales: si un huevo cocido (duro) se corta en sentido
transversal en la regin de uno de sus dos polos en el corte
no estar contenida la yema central, lo cual no niega su
existencia. Un corte tangencial, es decir un corte plano a
travs de la superficie de una estructura, da como resultado una imagen completamente diferente a la de un corte
transversal, o sea un corte por el centro de la misma estructura. Por otra parte, el corte transversal puede atravesar
estructuras totalmente distintas a las de un corte longitudinal: un tubo curvo seccionado en sentido transversal se
ve completamente diferente al mismo tubo en un corte
longitudinal (Fig. 1.13). La aparicin de 2 cortes nucleares
en una clula no constituye una demostracin de binuclearidad, sino que casi siempre tiene su origen en un
ncleo contorneado que se ha cortado en dos sitios.

1.5.2 Reglas bsicas para la realizacin del

diagnstico
La identificacin y el diagnstico diferencial de un preparado histolgico desconocido con frecuencia pueden realizarse con el aumento menor o, a lo sumo, con un aumento mediano.
Observacin a simple vista Ciertos rganos pueden diagnosticarse a simple vista por la orientacin tpica del corte,
por ejemplo un corte sagital de la hipfisis, un corte transversal de la suprarrenal o un corte longitudinal del intestino delgado.
Examen con el objetivo ms dbil Con el objetivo ms
dbil del microscopio se buscan principios organizativos
concretos: hay una zona interna y una zona externa
(correspondientes a mdula y corteza)?, se encuentra una
superficie natural (cubierta por epitelio) o una cpsula?,
hay regiones con propiedades tintoriales completamente
diferentes?, aparece alguna luz?, hay elevaciones regulares
de la superficie, por ejemplo, pliegues?
Adems, con el objetivo ms dbil se examinan (todos!)
los bordes libres para verificar si hay algn epitelio. En
caso afirmativo el epitelio puede brindar los mejores indicios para el diagnstico diferencial. Si se encuentra un
epitelio simple cilndrico tericamente habra que pensar
en un corte de una parte del tubo digestivo, de la trompa
uterina o del tero. La organizacin en capas tpica del
tubo digestivo clasifica el preparado como perteneciente al
tubo gastrointestinal. La falta de estas capas pero la presencia de cilios son caractersticas de la trompa uterina y de la
mucosa del tero en determinadas fases del ciclo; los pliegues muy ramificados son prueba de que el preparado
corresponde a la trompa uterina mientras que la invaginacin del epitelio para formar tbulos glandulares indica
que corresponde a la mucosa del tero. Si no hay cinocilios

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

10

4:04 PM

Page 10

1 Terminologa, microscopia y tcnica histolgica

3
5

Fig. 1.11 Ultraestructura celular en el microscopio electrnico de transmisin. Clula epitelial del hgado de la rata
con un ncleo grande (1) y los orgnulos tpicos; 2 retculo endoplasmtico rugoso; 3 retculo endoplasmtico liso; 4 aparato de Golgi; 5 mitocondrias; 6 lisosomas. Estas clulas contienen mucho glucgeno (7) en forma de inclusiones. En la
superficie que forma los canalculos biliares (8) la clula posee microvellosidades. Nuclolo. 12.000 .

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana

93125-01.qxd

5/10/13

4:04 PM

Page 11

1.5 Interpretacin de los cortes histolgicos

ni glndulas tubulares pero en la superficie aparecen pliegues delgados cubiertos de epitelio simple cilndrico, debe
considerarse el diagnstico diferencial de vescula biliar.
Ejemplo glndulas serosas En el diagnstico diferencial
de las glndulas serosas, tambin debe incluirse en las consideraciones el pncreas. El pncreas contiene islotes de
Langerhans y clulas centroacinosas abundantes, pero

Fig. 1.12 Microfotografa electrnica de barrido de polen

de avellano levemente deshidratado. 1.700 .

11

carece de conductos estriados y de clulas mioepiteliales en

los cinos. Sin embargo, dado que los islotes de Langerhans
son poco frecuentes y faltan por completo en algunos cortes, hay que pensar en las clulas centroacinosas. Para identificar estas clulas se necesita una resolucin relativamente alta y tambin algo de experiencia con poca resolucin
es mucho ms fcil verificar la ausencia total de conductos
estriados.
Nota Diagnstico de un preparado histolgico
Primero mrese el preparado a simple vista y determnese si es de un rgano macizo o hueco, si los
bordes del corte son artificiales (rectos) o corresponden a superficie naturales.
Luego mrese en el microscopio con el aumento
menor y determnese si hay una organizacin definida, por ejemplo, en corteza/mdula, en lobulillos
o configuraciones luminales determinadas y qu
epitelios se encuentran en las superficies naturales.
Examnese minuciosamente de todo el corte con
los aumentos menor y mediano. Procdase a un
diagnstico hstico especfico cuidadoso y a la
identificacin de los cortes tangenciales y de los
artefactos.
Slo utilcese gran aumento para los detalles celulares, por ejemplo, para la diferenciacin entre
cinocilios y borde en cepillo.

Fig. 1.13 Interpretacin de las imgenes de los cortes. Los cortes transversal y longitudinal de un tubo curvo (a) o
recto (b), de un huevo de gallina (c) pueden permitir tomados por s solos la deduccin tanto de la forma espacial como
de la composicin de cada una de las imgenes en cuestin. (De [6])

Welsch: Sobotta. Histologa. 3 EDICIN 2014 Editorial Mdica Panamericana