Dasar Teori 1. Kromatografi Kromatografi adalah prinsip pemisahan campuran senyawa atas komponen-komponen berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi masing-masing komponen di antara dua fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Perbedaan kecepatan perpindahan tersebut dapat disebabkan oleh perbedaan kemampuan masing-masing komponen untuk diserap (adsorpsi) atau perbedaan distribusi di antara dua fasa yang tidak bercampur (partisi). Dari beberapa jenis kromatografi, satu di antaranya adalah Kromatografi Lapis Tipis (KLT), kromatografi jenis ini membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik (Susilo, 2005). Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan Schraiber pada tahun 1938. Pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya berupa lapisan yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, pelat aluminium, atau pelat plastik. Meskipun demikian, kromatografi ini dapat dikatakan sebagai bentuk terbuka dari kromatografi kolom (Mulya dan Suherman, 1995). Dalam
proses
kromatografi
selalu
terdapat
salah
satu
kecenderungan sebagai berikut; (a) kecenderungan molekul-molekul
komponen untuk melarut dalam cairan; (b) kecenderungan molekulmolekul komponen untuk melekat pada permukaan padatan halus (adsorpsi=penyerapan);
(c)
kecenderungan
molekul-molekul
komponen untuk bereaksi secara kimia (penukar ion). Komponen yang
dipisahkan harus larut dalam fasa gerak dan harus mempunyai kemampuan untuk berinteraksi dengan fasa diam dengan cara melarut di dalamnya, teradsorpsi, atau bereaksi secara kimia (penukar ion). Pemisahan terjadi berdasarkan perbedaan migrasi zat-zat yang menyusun suatu sampel. Hasil pemisahan dapat digunakan untuk keperluan identifikasi (analisis kualitatif), penetapan kadar (analisis kuantitatif), dan pemurnian suatu senyawa.
2. Pembagian kromatografi Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada
pengelompokannya.
pemisahannya, adsorbsi,
kromaografi
kromatografi
kromatografi
penukar
Berdasarkan dibedakan
partisi, ion
pada
mekanisme
menjadi:
kromatografi
kromatografi
kromatografi
pasangan
eksklusi
ukuran
ion, dan
kromatografi afinitas. (Ibnu gholib dan abdul rohman, 2007).
Bedasarkan pada alat yang digunakan, kromatografi dapat dibagi atas: 1) Kromatografi kertas 2) Kromatografi lapis tipis 3) Kromatografi cair kinerja tinggi 4) Kromatografi gas 3. Kromatografi lapis tipis Kromatografi lapis tipis dikembangkan oleh Izmailoff dan Scraiber pada tahun 1938. KLT merupakan bentuk dari kromatografi planar, selain kromatografi kertas dan elektroforesis. Kromatografi lapis tipis lebih mudah dalam pelaksanaannya dan lebih murah dibanding dengan kromatografi kolom. Beberapa keuntungan lain kromatografi planar adalah: 1) KLT banyak digunakan untuk tujuan analiis 2) Identifikaasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan sinar ultra violet. 3) Dapat dilakukan elusi secara mekanik (ascending), menurun
(descending), atau dengan cara elusi 2 dimensi.
3.1.Fase diam KLT Fese diam KLT yang digunakan merupakan penjerap berukuran kecil. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensinya dan resolusinya. (Ibnu gholib dan abdul rohman, 2007). Penjerap yang paling sering digunakan adaah silika dan serbuk selulosa, sementara meknisme sorpsi yang utama pada KLT adalah partisi dan adsorpsi. Lapisan tipis yang digunakan juga dapat dimodifikasi, resin penukar ion, gel eksklusi, dan siklodekstrin yang
digunakan untuk pemisahan kiral. (Ibnu gholib dan abdul rohman,
2007). 3.2.Fase gerak KLT Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana adalah sistem 2 pelarut organik, karena daya elusi campuran kedia pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut beberapa petunjuk dalam memilih fase gerak: 1) Harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi 2) Daya elusi diatur sedemikian rupa sehingga nilai Rf terletak anatara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan. 3) Solut-solut ionik dan solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan metanol dengan perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam etanoat atau amonia masing-masing akan meningkatkan solut-solut yang bersifat basa dan asam. 4. Penggunaan KLT KLT digunakan secara luas untuk analisis solut organik terutama dalam bidang biokimia, farmasi, klinis, forensik, baik untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif. 4.1. Analisis Kualitatif KLT dapat digunakan untuk uji identifikasi senyawa baku. Parameter yang digunak untuk identifikasi adalah nilai Rf. Dua senyawa dikatak identik jika mempunyai nilai Rf yang sama jika diukur pada kondisi KLT yang sama. Untuk meyakinkan identifikasi dapat dilakukan dengan menggunakan lebih dari 1 fase gerak dan jenis pereaksi semprot. 4.2. Analisis Kuantitatif Ada 2 cara yang digunakan untuk analisis kuantitatif dengan KLT. Pertama, bercak diukur langsung pada lempeng dengan menggunakan ukuran luas atau dengan teknik densitometri. Cara kedua adalah dengan mengerok bercak lalu menetapkan kadar senyawa yang terdapat dalam bercak dengan metode analisis yang lain misalnya metode spektrofotometri. (Ibnu gholib dan abdul rohman, 2007).
